Radioprotective Effect of Lyophyllum Decastes and the Effect on Immunological Functions in Irradiated Mice

In this study, to explore the radiation protection effects of Lyophyllum Decastes Sing （LDS）, a hot distilled-water extract of LDS was orally administered at a dosage of 250mg/kg every other day for a period of 2 weeks in irradiated mice. An automatic blood cell counter was used to measure white blood cells （lymphocytes, monocyte, and granulocytes） one day before X-ray irradiation, and 3 hours, 12 hours, 24 hours, 3 days, 7 days, 15 days and 30 days after irradiation. The Dunnett test was used to examine statistical significance of differences. The peripheral blood cell counts in the Lyophyllum-administered non-irradiation group revealed an increase in the numbers of ieukocytes, lymphocytes and monocytes. For 2 Gy whole body radiation, a significant statistical difference was found between the X-ray group and the Lyophyllum plus X-ray group in the numbers of leukocytes, lymphocytes and monocytes. The results suggest that Lyophyllum restrains blood cell-count falling after irradiation, which is probably mediated at least in part by hemopoietic function, and NK and LAK activities seems to play a role in preventing secondary irffections associated with irradiation.

瓶栽鹿茸菇自动采收装置设计与试验

针对瓶栽鹿茸菇工厂化采收装备缺失的问题,提出了一种“输-定-切-夹”采收工艺,并设计了相应的自动采收装置,阐述了装置总体结构及工作原理,确定了整机作业流程。通过对栽培筐输送过程运动学与力学分析,确定了导流条安装角及输送辊筒参数;基于ANSYS LS-DYNA对切割过程进行了仿真分析,以切割速度、进给速度、带锯条前角及齿距为试验因素,以切割反作用力为响应指标,通过响应面法进行了切割性能建模和优化。结合物理试验确定了最优参数组合:切割速度为6.49 m/min、进给速度为0.12 m/min、前角为25°、齿距为7 mm;采用ABAQUS软件对柔性手指弯曲过程进行了仿真,结合物理试验确定了柔性手指最优结构参数为:气腔厚度2 mm、气腔7个、气压25 kPa、限制层厚度3 mm。整机试验表明,装置运行平稳,采收作业效果良好,平均采净率、平均损失率和平均损伤率分别为98.18%、3.66%和2.75%,满足瓶栽鹿茸菇实际采收要求。

近烟色离褶伞生物学特性及驯化

自云南省曲靖市采集近烟色离褶伞(Lyophyllum pallidofumosum)子实体,通过组织分离获得菌株YAASM6292,研究其最适碳源、氮源、无机盐、温度和pH,并驯化,测定子实体重金属含量。结果表明:在实验范围内,菌株YAASM6292的最适碳源、氮源、pH分别为麦芽糖、蛋白胨、5.0,培养基中添加硫酸镁在24、26℃培养时菌丝生长速度较快。通过覆土栽培首次获得近烟色离褶伞子实体,其重金属含量均低于食品安全国家标准规定的食品中污染物限量。研究结果可为离褶伞属物种栽培和新资源利用提供参考。

鹿茸菇菌包后熟指标与出菇产量间的相关性

【目的】探究鹿茸菇菌包后熟指标与出菇产量间的相关性,为鹿茸菇工厂化生产提供参考。【方法】设置菌包后熟培养的温度与时间,分析后熟阶段菌包的理化指标与酶活力,得到菌包各种指标与出菇产量之间的相关性。【结果】菌包后熟阶段,24℃下培养20 d,产量达到(612.23±2.65)g·袋^(-1)。在pH 6.64±0.10、含水率69.63%±0.42%、还原糖质量浓度(514.58±37.46)μg·mL^(-1)、可溶性蛋白质量浓度(246.75±14.82)μg·mL^(-1)、羧甲基纤维素酶活力(41.48±3.25)U·mL^(-1)、木聚糖酶活力(70.08±2.91)U·mL^(-1)、淀粉酶活力(157.34±16.25)U·mL^(-1)、漆酶活力(203.27±14.39)U·mL^(-1)的条件下菌包成熟。pH值、还原糖含量、纤维素酶活力、聚糖酶活力和淀粉酶活力5个指标与出菇产量呈正相关,其中木聚糖酶活力与出菇产量的相关性达到0.90。【结论】菌包后熟阶段木聚糖酶活力为(70.08±2.91)U·mL^(-1)时,菌包成熟,可以出菇。

不同预处理对荷叶离褶伞水提残渣多糖理化性质及免疫活性的影响

以常规粉碎为对照,分别采用挤压膨化和蒸汽爆破对荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes)子实体沸水提取剩余残渣进行预处理后提取多糖,并进行理化性质和免疫活性分析。结果表明:挤压膨化处理所得粗多糖(LCJ)得率和多糖含量分别为7.17%和60.73%,是常规粉碎组(LCW)的1.13和1.08倍;蒸汽爆破处理后提取的粗多糖(LCQ)得率和多糖含量可达15.42%和88.66%,分别是LCW的2.44倍和1.58倍。红外光谱分析3种方式提取所得残渣的粗多糖均具有多糖的特征吸收峰;LCW和LCJ中多糖组分的分子质量分布特征相似,均主要含有4个峰,LCQ多糖组分的分子质量分布变化较大,主要含有3个峰且低分子质量组分(P3)占比增加。三种粗多糖均由葡萄糖、岩藻糖、半乳糖和甘露糖组成,其中以葡萄糖为主,单糖的相对摩尔百分比有差异,LCQ中葡萄糖占比最高(76.22%)。三种处理所得残渣粗多糖均具有较好的增强免疫活性,10μg·mL^(-1)LCQ活性优于LCW和LCJ。

挤压膨化鹿茸菇-大麦复合粉的理化特性、胃肠消化和酵解特性

通过挤压膨化制备大麦粉(BF)、鹿茸菇-大麦复合粉(DLR)、鹿茸菇副产物-大麦复合粉(DBY),分析添加鹿茸菇组分对产品理化特性和营养功能的影响。结果表明,DLR和DBY的淀粉糊化程度明显降低。采用标准化INFOGEST 2.0方法模拟胃肠消化发现,DBY组因鹿茸菇副产物富含可溶性膳食纤维,其抗氧化能力显著高于BF和DLR组(P<0.05)。模拟结肠酵解发现,在0~24 h,BF、DLR和DBY组促进乙酸生成,显著降低pH值(P<0.05);在24~48 h,3组的丁酸含量均显著增加;在72 h,DBY组乙酸、丙酸和丁酸含量高于DLR组。肠道菌群分析表明,DLR和DBY的菌群调节作用主要受到个体差异影响,但均能显著促进Dorea和Anaerostipes生长;相关性分析表明DBY通过作用Bifidobacterium增加乙酸和丙酸含量(r>0.5,P<0.05)。综上,添加鹿茸菇组分有效改善复合大麦粉产品品质和功能特性,且DBY具有更好的抗氧化活性和肠道菌群调节作用,研究结果可为开发鹿茸菇-大麦膨化产品提供理论支持。

转录组分析揭示荷叶离褶伞菌多糖LDS-1抗小鼠S180肿瘤的分子机制

以荷叶离褶伞菌多糖LDS-1、甘露聚糖肽和空白对照作用下的小鼠S180肿瘤细胞为研究材料,运用RNA-Seq测序技术进行生物信息学分析,结果显示LDS-1组、甘露聚糖肽组和空白对照组分别获得8.27、 8.35和8.97 G的分析数据.高表达基因(FPKM>2 200)分析显示LDS-1主要通过下调Rplp1基因调控细胞分裂,将S180细胞停滞在G1期以抑制其分裂.差异基因分析结果显示LDS-1主要通过上调Alb、 Timp4、 Apoa1基因调节蛋白表达或者细胞黏连性,抑制S180肿瘤细胞迁移.KEGG(京都基因与基因组百科全书)通路富集结果显示, LDS-1抑制S180肿瘤生长的关键基因主要富集在过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路中,上游Fabp3基因下调,激活下游Apoa1、Slc27a2和Adipoq等多个基因上调,调控S180细胞的脂质代谢和胆固醇代谢. LDS-1能够通过调控高表达关键基因Rplp1,差异表达关键基因Alb、 Timp4、 Apoa1,以及PPAR信号通路抑制S180肿瘤细胞的增殖分裂、能量获取和迁移侵袭.

不同干燥方式对鹿茸菇品质的影响

为探究不同干燥方式对鹿茸菇品质的影响,以新鲜鹿茸菇为原料,分别采用热风干燥、微波干燥及真空冷冻干燥3种方式,对处理后的鹿茸菇外观、营养成分质量分数、抗氧化活性和复水特性进行检测。结果表明:不同干燥方式对鹿茸菇外观及营养成分质量分数的影响不同,真空冷冻干燥能较好地保持样品外观,热风干燥次之,微波干燥对鹿茸菇外观影响最大;3种干燥方式中,真空冷冻干燥鹿茸菇的多糖与蛋白质质量分数高于其他两种干燥方式,而热风干燥鹿茸菇的粗纤维和脂肪质量分数较高,微波干燥鹿茸菇菌盖的总酚和总黄酮质量分数最高,分别为4.95,7.96 mg·g^(-1);干燥后鹿茸菇酚类物质具有较强的清除DPPH自由基和ABTS自由基的能力,各处理组间的复水比呈现显著差异;真空冷冻干燥鹿茸菇干品的各项指标最佳,为较优干燥方式。

富硒荷叶离褶伞菌丝体中蛋白质提取工艺优化及氨基酸组成分析

以20 L生物发酵罐培养的富硒荷叶离褶伞菌丝体为原料,对菌丝体中蛋白提取工艺进行优化,并分析硒的富集对荷叶离褶伞菌丝体中氨基酸种类和含量的影响。利用单因素实验和Box-Benhnken中心组合响应面试验法,优化了荷叶离褶伞菌丝体中硒蛋白提取工艺,采用3,3'-二氨基联苯胺分光光度法测定蛋白质中硒的含量,并通过氨基酸测定仪分析测定富硒前后的菌丝体蛋白中氨基酸量的变化。结果表明,荷叶离褶伞菌丝体中硒蛋白的最适提取条件为:提取温度64℃、提取时间60 min、液料比200:1 mL/g、提取次数2次,经过验证性试验,测得蛋白提取率为75.13%,菌丝体中富硒量达到63.87μg/g。采用氨基酸测定仪分析氨基酸的组成,并通过氨基酸评分(AAS)、化学评分(CS)指标对富硒荷叶离褶伞菌丝体蛋白质进行初步营养价值评价。富硒荷叶离褶伞菌丝体中蛋白质中氨基酸种类齐全,人体必需氨基酸含量为17.20 g/100 g,较未富硒的高出19.75%,必需氨基酸/非必需氨基酸(EAA/NEAA)为0.51,接近WHO提出的推荐值,AAS和CS的值接近于模式蛋白。说明经过工艺优化可以提高蛋白质提取率,在富硒菌丝体蛋白质中含有硒,硒促进了氨基酸含量的增加,富硒菌丝体中蛋白质的营养价值较未富硒菌丝更高,富硒菌丝体具有潜在的食用和应用价值。

鹿茸菇富硒工艺及营养成分分析

为探究硒处理对鹿茸菇产量和品质的影响,以亚硒酸钠、纳米硒及硒代氨基酸为硒源,将不同浓度的硒源添加到培养基中进行鹿茸菇富硒栽培,测定不同硒源及硒浓度处理下鹿茸菇的生长状况、产量、总硒含量、有机硒占比以及主要营养成分含量。结果表明:低浓度(0.5~4.0 mg/kg)硒处理,鹿茸菇生长良好且产量提高;而高浓度(8.0~64.0 mg/kg)硒处理会抑制鹿茸菇的生长,产量降低。另外,采用在培养基中添加硒代氨基酸(2.0~4.0 mg/kg)的方式,可获得硒含量和有机硒占比高的鹿茸菇。采用硒处理可提高鹿茸菇中的蛋白质含量和16种氨基酸总量,但是对脂肪、粗纤维、总糖和碳水化合物含量没有显著影响。试验结果为富硒鹿茸菇的深入研究以及大规模生产提供了理论依据和数据支撑。

鹿茸菇液体菌种培养过程中生理指标的变化规律

鹿茸菇菌丝采用液体摇瓶培养,分别测定菌丝生物量、菌丝球数量、菌丝球直径、发酵液pH值、还原糖和氨基氮质量浓度,淀粉酶酶活性、纤维素酶酶活性、漆酶酶活性等生理指标。结果表明:鹿茸菇培养过程中菌丝生物量和菌丝球数量在第10天达到最大值,分别为2.33,106 CFU·mL^(-1),菌丝球直径随培养时间延长而持续变大;还原糖与氨基氮质量浓度先增加而后逐渐降低;淀粉酶及纤维素酶酶活性最大值分别为0.17,0.10 nkat,漆酶胞外酶活性呈现明显上升趋势;摇瓶培养第8~10天的液体菌种生物量达到最大(0.42 mg·mL^(-1)),液体菌种培养终点应控制在第8~10天,此时菌种活力最高,可用于发酵罐扩繁培养。

鹿茸菇母种培养基条件优化及其菌丝显微观察

为进一步了解鹿茸菇的生物学特性,筛选其适宜的母种培养基配方,设置了不同碳源、氮源、pH和温度条件的筛选试验,观测鹿茸菇菌丝生长情况和菌丝显微结构。结果表明:鹿茸菇母种培养基菌丝生长最适碳源为淀粉,最适氮源为硝酸钠,最适pH值为7.0,最适菌丝生长温度为25℃,鹿茸菇菌丝为双核细胞,有锁状联合,其细胞较长,不同生长时期隔膜明显度不同。

超声处理对鹿茸菇贮藏品质的影响

为探究超声处理对鹿茸菇贮藏品质的影响,本实验以新鲜鹿茸菇为试材,经超声(35 kHz、300 W)处理10 min后,测定鹿茸菇感官品质及能量代谢相关酶等相关指标。结果表明,超声处理相较于对照组可以维持鹿茸菇较高的亮度,并保持较高的总蛋白、抗坏血酸、谷胱甘肽含量,提高总超氧化物歧化酶活力,明显降低褐变程度。与对照组相比,贮藏期间超声处理组ATP、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)、氧化型NADPH(oxidized NADPH,NADP^(+))含量处于较高水平,6-磷酸葡萄糖脱氢酶、H^(+)K^(+)-ATPase、Na+K+-ATPase、Ca^(2+)Mg^(2+)-ATPase活力较高,表明超声处理延缓了鹿茸菇品质劣变现象。因此,超声保鲜可以为采后食用菌保鲜提供参考。

响应面法优化鹿茸菇液体菌种发酵配方

【目的】以提高鹿茸菇液体菌种菌丝生物量为目的,通过优化液体菌种发酵配方,制备优良液体菌种,推动鹿茸菇工厂化生产快速发展。【方法】以鹿茸菇为研究材料,采用摇瓶培养方式,通过单因素设计分析6种碳源、8种氮源、10种金属离子对鹿茸菇菌丝生长的影响。采用Box-Behnken响应面法进一步优化单因素筛选出的碳源、氮源与金属离子,比较分析液体菌种与固体菌种应用于鹿茸菇生产的优劣性。【结果】适合鹿茸菇生长的营养要素分别为全麦粉、花生饼粉、KH2PO4与MgSO4·7H2O,营养要素间的最优配方为全麦粉47 g·L^(-1)、花生饼粉22g·L^(-1)、KH2PO42.00 g·L^(-1)、MgSO4·7H2O 2.00 g·L^(-1),当发酵培养至第8 d时,菌丝生物量达到最大值(32.81±1.10g·L^(-1)),以优化配方制备的鹿茸菇液体菌种菌丝生物量较初始配方提高了7.34倍。在生产试验中液体菌种较固体菌种,制种时间缩短48 d,菌丝萌发时间缩短2 d,单袋产量提高15.47%。【结论】本研究研发的液体菌种发酵配方可获得高质量的生产用种,以液体发酵方式制备鹿茸菇生产用种适合鹿茸菇工厂化生产。

榆干离褶伞溶栓酶对高脂血症大鼠血管内皮的保护作用

研究榆干离褶伞溶栓酶(Lyophyllum ulmarium fibrinolytic enzyme,LUFE)对高脂血症大鼠血管内皮损伤的保护作用。将SD大鼠分为正常对照组、模型组、阳性对照组、LUFE组,正常对照组喂养普通饲料,其余组给予高脂饲料,其中LUFE组同时灌胃LUFE(400 mg·kg^(-1)·d^(-1)),阳性对照组于饮食诱导第5周开始灌胃阿托伐他汀钙片(5 mg·kg^(-1)·d^(-1)),分别于诱导4、8周后进行指标检测。采用苏木精-伊红染色观察主动脉组织病理学形态变化,油红O染色观察主动脉内膜脂质斑块的分布情况。检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LD L-C)、过氧化氢酶(CAT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、内皮素-1(ET-1)、6-酮前列腺素F1α(6-keta-PGF1α)水平,并计算动脉粥样硬化指数。采用Western blot法检测主动脉核因子E2相关因子2(Nrf2)、沉默信息调节因子3(Sirt3)、乙酰化超氧化物歧化酶2(Ac-SOD2)、血红素加氧酶-1(HO-1)的表达水平。结果表明:LUFE可减轻高脂血症大鼠主动脉病理性损伤,减少主动脉内膜脂质斑块分布的相对面积,降低血浆TC、TG、LD L-C、ET-1、MDA水平,增加6-keta-PGF1α、CAT和SOD2的水平,上调主动脉组织Nrf2、HO-1、Sirt3蛋白表达,降低主动脉组织Ac-SOD2的相对蛋白表达。研究结果证实,LUFE可减轻高脂血症所致的大鼠血管内皮损伤,其机制可能与降低血脂、减轻氧化应激损伤有关。

Box-Behnken响应面法优化荷叶离褶伞液体发酵培养基

为了优化菌丝培养基以期提高菌丝生物量和氨基酸产量,以荷叶离褶伞菌丝体为试验材料,以生物量和氨基酸含量为指标,利用Box-Behnken响应面法优化液体发酵培养基。试验结果表明:液体发酵最优培养基配方为马铃薯200 g/L、葡萄糖25 g/L、麸皮7.75 g/L、KH 2PO 41.5 g/L、MgSO 41.62 g/L;每100 mL液体培养基可得菌丝体生物量为1.096±0.025 g,菌球大小均匀、菌球浓密,且优化后的菌丝体总氨基酸含量提高了23.9%,子实体总氨基酸含量高达17.06%。优化培养基可用于荷叶离褶伞液体发酵工厂化生产。

臭氧处理对鹿茸菇储藏期防腐保鲜效果的影响

以新鲜鹿茸菇为试材,以不同臭氧浓度处理鹿茸菇子实体,研究鹿茸菇菌落总数、霉菌、酵母菌、大肠杆菌的指标变化及子实体腐败程度.结果表明:经浓度5.59 mg/L臭氧处理过的鹿茸菇子实体,在4℃环境贮藏到第12天时,其腐败程度及菌落总数、酵母菌、大肠杆菌等指标最低,分别为1.6×10^(4)、1.8×10^(4)和7.1×10^(3)CFU/g,霉菌指标相对较低,为1.2×10^(4)CFU/g,防腐保鲜效果明显.说明采用5.59 mg/L臭氧浓度处理鹿茸菇能显著降低因微生物引起的鹿茸菇腐烂,为新鲜鹿茸菇的长期保鲜提供了参考.

鹿茸菇高产菌种选育

试验选用来自不同地区的3个鹿茸菇菌株,根据拮抗试验结果,选择性状互补、亲缘关系较远的昆山“鹿茸菇K”和连云港“鹿茸菇L”为亲本,采用单孢分离技术分离2个菌株的单孢子,得到“鹿茸菇K”单核体18个,“鹿茸菇L”单核体21个。选择生长较快的两亲本单核菌丝进行杂交配对,得到杂交组合64个,根据是否具有锁状联合进一步确定融合子。采用拮抗、子实体诱导、出菇等方法对融合子进行进一步的鉴定和评价分析。结果表明,经镜检、拮抗、子实体诱导及出菇验证,64个杂交组合中,41个菌株有锁状联合现象且生长较快,其中的29个杂交菌株和亲本的拮抗线明显,确定为新菌株;有15个菌株具有结实能力,出菇验证初步得到具有优良生产性状的杂交菌株3个。

荷叶离褶伞遗传差异性分析及菌丝形态鉴定

【目的】比较荷叶离褶伞(Lyophyllum decastes,Lyd)外地引进菌株与本地栽培菌株的遗传差异性和菌丝形态特征,为荷叶离褶伞选育提供参考。【方法】以真菌18S rRNA(V4)和ITS(ITS1–ITS4)(18S rRNA-ITS)序列对外地引进和本地栽培的荷叶离褶伞进行序列同源性分析、多重序列比对和构建系统发育进化树,通过分析碱基序列突变和遗传距离远近明确荷叶离褶伞菌株间的亲缘关系,并通过菌丝体生长及形态变化确定荷叶离褶伞的遗传学差异。【结果】18S rRNA-ITS序列比对结果显示,外地荷叶离褶伞菌株(Lyd-LR1、Lyd-LR6、Lyd-LR10、LydLR15和Lyd-LR17)发生较高比例的碱基缺失和碱基替换突变,且ITS序列同源性下降至80.09%~89.72%;LydLR1和Lyd-LR6菌株的碱基突变比例高于Lyd-LR10、Lyd-LR15和Lyd-LR17以及福建本地栽培菌株(Lyd-LRX和LydLRY)。进化树分析结果进一步显示,Lyd-LR1和Lyd-LR6与Lyd-LR10、 Lyd-LR15、 Lyd-LR17、 Lyd-LRX、 LydLRY以及NCBI已经登录的部分荷叶离褶伞或离褶伞(Lyophyllum,Ly)菌株有较远的遗传距离和亲缘关系。LydLR1梭子状菌丝生长较慢且不规则生长,菌丝体呈松散放射状;Lyd-LR6凹陷状菌丝生长较快且明显聚合生长,菌丝体呈平铺状且边缘厚度较高。Lyd-LR1和Lyd-LR6菌株的菌丝体生长速度和菌丝形态均不同于Lyd-LR10、LydLR15、Lyd-LR17、Lyd-LRX、Lyd-LRY菌株圆柱形饱满的菌丝和厚度高生长快的突起状菌丝体。而与Lyd-LR1菌株相比,Lyd-LR6菌株的碱基序列突变位置、碱基突变比例和菌丝形态发生的变化更明显。【结论】外地荷叶离褶伞菌株Lyd-LR6的基因序列碱基突变位置(碱基替换和碱基缺失)、18S rRNA-ITS序列同源性和种属亲缘关系明显区别于其他外地及本地的荷叶离褶伞菌株。高比例的基因序列碱基突变造成Lyd-LR6菌株的菌丝体生长速度和菌丝形态发生明显改变,可作为选育荷叶离褶伞新菌株的材料。

鹿茸菇子实体新纤溶酶的高效分离纯化

采用层析分离法从食药兼用真菌鹿茸菇(Lyophyllum decastes)的子实体中纯化得到了一种新纤溶酶,采用Edman降解法测定了该酶N-端氨基酸序列。结果显示,鹿茸菇子实体经干燥、粉碎、浸提后获得的含纤溶酶的粗酶液,依次经过盐析、Octyl-Sepharose Fast Flow疏水相互作用层析、SP-Sepharose High Performance离子交换层析和Source 15PHE疏水相互作用层析分离后获得单一组分的纤溶酶,酶比活力达到了4105.78 U/mg,纯化倍数为206.09,酶活力回收率为30.91%。Native-PAGE电泳和SDS-PAGE电泳检测结果均表明,该纤溶酶纯度达到了电泳纯,相对分子量为30.9 kDa。Edman降解法测定纤溶酶的N-端氨基酸序列为:Gly-Ala-Val-Thr-Gln-Cys-Asn-Ala-Pro-Trp-Gly-Leu,经过NCBI数据库比对,该纤溶酶为一种新纤溶酶。本文的研究为纤溶酶的研发提供了新的思路和方法。