LPS诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响

目的 研究脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导巨噬细胞M1型极化对肿瘤生长的影响。方法 将Balb/c雌性小鼠随机分为对照组和实验组。Renca细胞皮下建模,待肿瘤体积生长至50mm3时瘤旁注射生理盐水(100μl/只,1次/2d)或LPS(100μg/只,1次/2d),采用流式细胞术检测肿瘤相关巨噬细胞M1型极化水平。将小鼠肿瘤细胞系(ML-1、MC38、Renca)分成三组:空白组(完全培养基加入50%DMEM基础培养基)、对照组(完全培养基加入50%巨噬细胞培养基上清液)和实验组(完全培养基加入50%LPS预处理的巨噬细胞培养基上清液)。采用细胞计数试剂-8(cellcountingkit-8,CCK-8)实验检测肿瘤细胞增殖情况;采用流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡情况。结果 经LPS处理后肿瘤相关巨噬细胞M1型比例增多(P<0.001),从而增强其抗肿瘤功能;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可显著抑制肿瘤细胞的增殖(Renca:P=0.023;ML-1:P=0.045);LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞周期G0/G1(MC38:P=0.011;ML-1:P=0.022)或S期(Renca:P=0.022)阻滞,进而抑制细胞分裂;LPS诱导巨噬细胞M1型极化可引起肿瘤细胞凋亡(Renca:P=0.04;ML-1:P=0.007)。结论 LPS可通过诱导巨噬细胞M1型极化发挥抗肿瘤功能。

山药多糖促进小鼠巨噬细胞向M1型极化

目的考察山药多糖对小鼠巨噬细胞极化的影响。方法在体外实验中,将RAW264.7细胞与山药多糖共孵育24 h,采用MTT法检测细胞活性;利用Griess试剂盒检测NO分泌水平;采用CBA法检测细胞因子分泌水平;采用流式细胞术检测细胞表面MHC-Ⅱ类分子表达水平。在动物实验中,将Balb/c小鼠随机分为正常组、模型组、山药多糖低剂量组（50 mg/kg）和高剂量组（200 mg/kg）,每天灌胃给药1次连续15 d;第11~15天除正常组外,其余小鼠腹腔注射氢化可的松。末次给药第2天取脾和胸腺称质量,计算免疫器官指数;利用流式细胞术检测腹腔巨噬细胞MHC-Ⅱ类分子表达水平。结果山药多糖剂量低于500μg/ml时对RAW264.7细胞活性无显著影响,但可以促进细胞分泌NO和细胞因子IL-6、TNF-α、MCP-1,提高细胞表达MHC-Ⅱ类分子的水平。动物实验结果显示山药多糖可以恢复免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞MHC-Ⅱ类分子表达水平。结论研究表明山药多糖可以促进巨噬细胞向M1型极化。

七氟醚可抑制氧化型低密度脂蛋白诱导巨噬细胞M1型极化

目的探究七氟醚通过JAK3/STAT5信号通路对氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein,Ox-LDL)诱导巨噬细胞M1型极化的影响。方法酶联免疫法检测细胞培养液上清中肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)、转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)和白细胞介素-10(interleukin-10,IL^(-1)0)的水平,Westernblot检测诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,iNOS)和精氨酸酶1(Arginase 1,Arg1)的表达。结果与对照组相比,Ox-LDL组巨噬细胞中i NOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平增加(P<0.05),而细胞中Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平降低(P<0.05),p-JAK3/JAK3和p-STAT5/STAT5的比值增加(P<0.05);与Ox-LDL组相比,Ox-LDL+Sevoflurane组的巨噬细胞中iNOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平降低(P<0.05),Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平升高(P<0.05),p-JAK3/JAK3和p-STAT5/STAT的比值降低(P<0.05);与Ox-LDL组相比,Ox-LDL+HY-P1061组巨噬细胞中iNOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平升高(P<0.05),Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平降低(P<0.05);与Ox-LDL+Sevoflurane组相比,Ox-LDL+Sevoflurane+HY-P1061组巨噬细胞中i NOS蛋白的表达和培养液上清中TNF-α和IL-6的水平升高(P<0.05),而细胞中Arg1蛋白的表达水平和培养液上清中TGF-β和IL^(-1)0的水平降低(P<0.05)。结论七氟醚抑制Ox-LDL诱导的巨噬细胞M1型极化,其机制可能与JAK3/STAT5信号通路的失活相关。

Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用研究

目的:探讨Pyrin在巨噬细胞M1型极化中的作用。方法:培养人单核细胞株THP-1细胞,提取人外周血单核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)、小鼠骨髓来源巨噬细胞(bone marrow-derived macrophage,BMDM)。随机分为对照组和实验组,实验组用脂多糖(lipopolysaccharide,LPS,100 ng/m L)复合干扰素-γ(interferon-γ,IFN-γ,20 ng/m L)干预(THP-1 18 h,PBMC、BMDM 24 h)构建巨噬细胞M1型极化模型。q RT-PCR、Western blot和流式细胞术检测2组M1型极化相关标志物,同时利用q RT-PCR和Western blot检测MEFV基因和Pyrin蛋白表达水平。结果:与对照组相比,实验组在LPS+IFN-γ刺激后,q RTPCR检测THP-1细胞M1型极化标志物:肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)(t=-4.360,P=0.007)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)(t=-8.329,P=0.000)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)(t=-2.924,P=0.033)、CD14(t=-2.858,P=0.035)、CD80(t=-3.433,P=0.019),PBMC细胞M1型极化标志物:TNF-α(t=-2.893,P=0.034)、IL-1β(t=-3.606,P=0.015)、IL-6(t=-2.895,P=0.034)、CD14(t=-2.645,P=0.046)、CD80(t=-3.648,P=0.015),BMDM细胞M1型极化标志物:TNF-α(t=-6.123,P=0.002)、IL-1β(t=-2.697,P=0.043)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)(t=-4.335,P=0.007)、诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)(t=-3.607,P=0.015)均明显增加,Western blot检测THP-1细胞M1型极化标志物:TNF-α(t=-3.827,P=0.031)、IL-1β(t=-4.189,P=0.025)、IL-6(t=-5.345,P=0.002)均明显增加,流式细胞术检测THP-1细胞M1型极化标志物HLA-DR(t=-3.270,P=0.017)、BMDM细胞M1型极化标志物F4/80+CD11c+(t=-3.833,P=0.009)均明显增加,提示M1型极化模型构建成功;在构建成功的M1型极化模型中,q RT-PCR检测THP-1细胞、PBMC细胞和BMDM细胞MEFV基因表达水平较对照组明显增加(t=-3.226,P=0.023;t=-2.989,P=0.030;t=-2.891,P=0.034),Western blot检测THP-1细胞Pyrin蛋白表达水平较对照组明显增加(t=-8.591,P=0.000)。结论:巨噬细胞M1型极化中Pyrin表达增加,Pyrin可能与巨噬细胞M1型极化相关。

贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对THP-1源性巨噬细胞M1型极化的调节作用

目的利用体外诱导巨噬细胞向M1型极化的模式,初探贝壳杉烷型二萜类化合物PV006对M1型极化的影响。方法用佛波酯(PMA)联合脂多糖(LPS)及重组人干扰素-γ(rh IFN-γ)刺激人单核细胞株THP-1细胞,促使其向M1型巨噬细胞分化。通过显微镜观察细胞形态学变化,qRT-PCR法检测诱导后的细胞内IL-1β、TNF-α、IL-6以及IL-8 mRNA表达水平,Western blot法检测核转录因子-κB磷酸化P65蛋白(NF-κB p-P65)和磷酸化信号转导与转录激活物1(p-STAT1)蛋白的表达,确认THP-1细胞向M1型极化,同时检测PV006处理后对上述指标的影响。结果经PMA联合LPS及rh IFN-γ诱导后,THP-1细胞形态由圆形转变为特征的长梭形或纺锤形,IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达升高,NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达增强。不同浓度PV006同步处理后,作M1型极化诱导的THP-1细胞未出现特征性的长梭形或纺锤形,大部分细胞仍为圆形。IL-1β、TNF-α、IL-6、IL-8 mRNA表达水平下调(P<0.05),NF-κB p-P65和p-STAT1蛋白表达减弱。结论 PMA联合LPS及rh IFN-γ可诱导THP-1源性巨噬细胞向M1型极化,PV006有抑制巨噬细胞向M1型分化的作用。

基于TGR5介导的NLRP3炎症小体探讨芪参汤抑制巨噬细胞M1型极化改善非酒精性脂肪性肝炎的机制

目的:观察芪参汤对TGR5介导的NLRP3炎症小体的影响,从而明确其抑制巨噬细胞M1型极化改善非酒精性脂肪性肝炎的分子机制。方法:小鼠巨噬细胞RAW264.7随机分为空白组、模型组、芪参汤组、TGR5激动剂组和芪参汤+TGR5激动剂组。除空白组外,余下各组通过棕榈酸诱导构建巨噬细胞NLRP3活化模型,并给予相应的药物进行干预。分别采用酶联免疫吸附试验检测巨噬细胞上清中TNF-α、IL-6、IL-1β和CXCL2的含量,流式细胞术检测巨噬细胞极化标记分子CD86和iNOS的表达水平,Western blot检测TGR5/STAT1/STAT6信号通路和NLRP3炎症小体蛋白的表达丰度。结果:与空白组相比,模型组巨噬细胞TNF-α、IL-6、IL-1β、CXCL2的含量和CD86、iNOS阳性表达的巨噬细胞比例均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芪参汤组TNF-α、IL-6、IL-1β、CXCL2的含量和CD86、iNOS阳性表达的巨噬细胞比例均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。此外,与空白组相比,模型组巨噬细胞裂解液中NLRP3、Pro-IL-1β蛋白的表达和细胞上清液中Caspase-1 p10、p20及IL-1βp17蛋白的表达均显著增加,差异均具有统计学意义(P<0.01)。与模型组比较,芪参汤组巨噬细胞裂解液中NLRP3、Pro-IL-1β蛋白的表达和细胞上清液中Caspase-1 p10、p20及IL-1βp17蛋白的表达均显著降低,差异均具有统计学意义(P<0.01)。结论:参汤能够通过抑制TGR5/STAT1/STAT6信号通路抑制巨噬细胞NLRP3炎症小体的活化,从而抑制巨噬细胞M1型极化,改善炎症反应。

黄芩苷通过抑制HMGB-1减少U937巨噬细胞的M1型极化和减轻小鼠的急性肺损伤

目的:验证黄芩苷减轻急性肺损伤的作用和机制。方法:用脂多糖(LPS)处理人巨噬细胞系U937模拟急性肺损伤的炎症环境,加入黄芩苷,检测细胞内高迁移率族盒蛋白1(HMGB-1)的蛋白表达和巨噬细胞M1表型标志物水平,并使用HMGB-1中和抗体进行验证。再用LPS给与小鼠腹腔注射造成炎症模型,给予黄芩苷灌胃,检测其肺湿干重比及肺泡灌洗液中HMGB-1和巨噬细胞M1表型标志物蛋白浓度来验证黄芩苷的在体作用。结果:黄芩苷可以抑制LPS引起的U937巨噬细胞向M1表型极化,并减少LPS导致的HMGB-1蛋白高表达。在炎症模型下巨噬细胞的活力下降,而加入黄芩苷可以逆转这一效果。使用HMGB-1中和抗体可以达到与黄芩苷类似的效果。动物实验中,黄芩苷灌胃的小鼠的肺泡灌洗液中HMGB-1和M1型巨噬细胞标志物白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)相对于模型组显著减少,肺湿干重比显著小于模型组。结论:黄芩苷通过抑制HMGB-1减少U937巨噬细胞的M1型极化和减轻小鼠的急性肺损伤.

鸭坦布苏病毒感染诱导禽巨噬细胞M1型极化

鸭坦布苏病毒(DTMUV)自2010年4月暴发以来,给全球养鸭业带来了巨大的经济损失。巨噬细胞作为关键的免疫细胞,其不同功能的极化表型对宿主的免疫反应和抗微生物感染非常重要。禽巨噬细胞作为DTMUV感染的关键靶细胞,本研究通过荧光定量PCR、亚硝酸盐实验等对DTMUV感染禽巨噬细胞HD11后的极化表型进行分析。结果表明,DTMUV感染后能显著诱导HD11细胞发生M1型极化,刺激产生大量的促炎细胞因子。

Cl-amidine通过JAK3-STAT5抑制巨噬细胞M1型极化在强直性脊柱炎中的作用

目的 探究Cl-amidine对巨噬细胞M1型极化的影响以及其对强直性脊柱炎(AS)的临床指导意义。方法 选择60例AS患者,根据疾病活动度评分将患者分为低AS疾病组和高AS疾病组,同期纳入30例健康受试者作为对照组。EILSA检测三组人群血清PAD4、iNOS和骨形成指标BGP水平,皮尔逊相关系数分析肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)、一氧化氮合酶(iNOS)和骨钙素(BGP)的相关性;流式细胞术检测3组人群外周血M1型巨噬细胞(CD68^(+)CD86^(+))比例。培养THP-1单核细胞系,体外诱导为M1型巨噬细胞,期间加入Cl-amidine共孵育,分组为:M0组、M1组、M1+Cl-amidine组,Western blot检测各组细胞PAD4和iNOS蛋白表达水平。RNA-seq检测M1组、M1+Cl-amidine组细胞差异表达基因并进行KEGG分析,Western blot检测JAK3、p-JAK3、STAT5、p-STAT5蛋白表达水平。结果 与对照组相比,低AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高;与低AS疾病组相比,高AS疾病组PAD4、iNOS水平升高,BGP水平降低,M1型巨噬细胞比例升高。PAD4水平与iNOS水平呈正相关,PAD4、iNOS水平与BGP水平呈负相关。与M0组相比,M1组PAD4和iNOS蛋白表达升高;与M1组相比,M1+Cl-amidine组有163个基因表达上调,272个基因表达下调。上调基因主要参与JAK-STAT信号通路。与M1组相比,M1+Cl-amidine组iNOS、p-JAK3/JAK3、p-STAT5/STAT5蛋白表达降低。结论 PAD4和M1型巨噬细胞水平与AS疾病程度呈正相关。PAD4抑制剂Cl-amidine可能通过JAK3-STAT5信号通路抑制巨噬细胞向M1极化,该作用机制有助于AS临床治疗的研究。

罗汉果苷V调控高糖状态巨噬细胞M1极化促进骨髓间充质干细胞的成骨分化

背景:糖尿病微环境会造成巨噬细胞过度M1极化,这种高糖炎症状态会抑制骨髓间充质干细胞的成骨分化,从而影响糖尿病骨缺损的愈合。研究表明罗汉果苷Ⅴ具有抗炎、抗氧化、降血糖的作用,但其能否调节高糖炎症状态下巨噬细胞M1极化及骨髓间充质干细胞的成骨分化尚不清楚。目的:探讨罗汉果苷Ⅴ在高糖炎症状态下调节巨噬细胞M1型极化对骨髓间充质干细胞成骨分化的影响。方法:构建糖尿病C57BL/6小鼠模型,从正常和糖尿病小鼠分离骨髓来源巨噬细胞,分别培养于低糖和高糖培养基。使用脂多糖和干扰素γ作为炎症刺激诱导骨髓来源巨噬细胞的M1型极化,同时以160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,用流式细胞术检测F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例,qRT-PCR检测诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素1β、白细胞介素6的mRNA表达水平,ELISA检测骨髓来源巨噬细胞上清液中肿瘤坏死因子α水平。分离C57BL/6小鼠骨髓间充质干细胞,分别使用低糖或高糖成骨诱导液诱导成骨分化,添加M1型巨噬细胞条件培养基作为炎症刺激,以及320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预,成骨诱导14 d后采用qRT-PCR检测碱性磷酸酶、Runt相关因子2、骨钙素、骨桥蛋白的mRNA表达水平,成骨诱导21 d后进行茜素红染色及定量分析。结果与结论:①流式细胞术结果显示320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的F4/80^(+)CD86^(+)细胞比例明显低于高糖炎症对照组(P<0.05);②qRT-PCR结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的诱导型一氧化氮合酶、白细胞介素6的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05),320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组白细胞介素1β的mRNA相对表达量较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);③ELISA结果显示160,320,640μmol/L罗汉果苷Ⅴ组的肿瘤坏死因子α分泌水平较高糖炎症对照组显著降低(P<0.05);④320μmol/L罗汉果苷Ⅴ干预后,高糖炎症状态下骨髓间充质干细胞的钙盐沉积增加(P<0.05),且碱性磷酸酶、Runt相关因子2和骨桥蛋白的mRNA相对表达量增加(P<0.05)。结果表明,罗汉果苷Ⅴ可通过抑制高糖炎症状态下骨髓来源巨噬细胞的M1型极化及炎症因子表达,促进骨髓间充质干细胞的成骨分化。

巨噬细胞M1/M2型极化对糖尿病视网膜病变进程的影响及相关性分析

目的分析巨噬细胞(Mø)M1/M2型极化对糖尿病视网膜病变(DR)进程的影响,为临床治疗提供参考。方法选取2020年6月至2022年7月南华大学附属第二医院收治的97例DR患者(研究组)及同期105例单纯糖尿病(DM)患者(对照组)为研究对象,比较两组患者临床资料,分析Mø表型检测的诊断价值,以及M1/M2型Mø与炎症因子、血糖水平、氧化应激反应标志物、DR进程的关系。结果研究组患者M1型、M1/M2型Mø占比均大于对照组,M2型Mø占比小于对照组(均P<0.05);M1/M2型Mø>7.275时诊断DM患者发生DR的灵敏度为83.51%,特异度为77.14%,曲线下面积(AUC)为0.8655(P<0.05);研究组患者白细胞介素-4(IL-4)、转化生长因子-β(TGF-β)、超氧化物歧化酶(SOD)水平均低于对照组,肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、丙二醛(MDA)水平均高于对照组(P<0.05);研究组患者M1/M2型Mø与IL-4、TGF-β、SOD水平均呈负相关,与TNF-α、iNOS、空腹血糖(FBP)、餐后2 h血糖(2 hBP)、MDA水平呈正相关(均P<0.05)。结论DR患者Mø由M2型向M1型极化过程中炎性反应与氧化应激反应加重,升高血糖水平,加速DR的恶性病理发展。

趋化因子CCL19诱导巨噬细胞M1极化对小鼠慢性胰腺炎的促进作用及其机制

目的:探讨趋化因子C-C基序配体19(CCL19)诱导巨噬细胞M1极化对小鼠慢性胰腺炎的促进作用,并阐明其相关机制。方法:选取10只雄性C57BL/6N小鼠,提取小鼠胰腺腺泡细胞和腹腔巨噬细胞,构建巨噬细胞-腺泡细胞共培养体系,共培养体系细胞分为对照组、模型组和小干扰RNA CCL19(si-CCL19)组,显微镜下观察各组腺泡细胞形态表现。随机选取40只小鼠,分为正常组和慢性胰腺炎组,每组20只。HE染色观察2组小鼠胰腺组织病理形态表现,免疫荧光染色法观察2组小鼠胰腺组织中角质蛋白19(CK19)、淀粉酶、M1型巨噬细胞相关标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和F4/80表达情况及各组共培养体系细胞中腺泡细胞形态表现及CK19和淀粉酶表达情况,酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测2组小鼠血清和各组共培养体系细胞中肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素(IL)-6和IL-1β水平,免疫组织化学法观察2组小鼠胰腺组织中CCL19蛋白表达情况,Western blotting法检测2组小鼠胰腺组织和各组共培养体系细胞中CCL19蛋白和关键蛋白核因子κB(NF-κB)信号通路相关蛋白P65、磷酸化P65(p-P65)、κB抑制物激酶α/β(IKKα/β)、磷酸化IKKα/β(p-IKKα/β)、IκBα和磷酸化IκBα(p-IκBα)表达水平。结果:HE染色,正常组小鼠胰腺组织腺泡细胞的紧密排列;与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织腺泡细胞产生了明显的空泡化,即腺泡细胞导管化,小鼠胰腺炎模型制备成功。免疫荧光染色法,与对照组比较,模型组腺泡细胞严重的空泡化明显,CK19表达明显增加,淀粉酶表达明显减少;与模型组比较,si-CCL19组中腺泡细胞导管化程度降低,CK19表达明显减少,淀粉酶表达明显增加;与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织中淀粉酶表达明显减少,CK19和M1型巨噬细胞标志物iNOS及F4/80表达均明显增加。ELISA法,与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠血清中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显升高(P<0.05);与对照组比较,模型组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,si-CCL19组细胞中TNF-α、IL-6和IL-1β水平均明显降低(P<0.05)。免疫组织化学法,与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织中CCL19蛋白表达明显增加。Western blotting法,与正常组比较,慢性胰腺炎组小鼠胰腺组织中CCL19蛋白表达水平和NF-κB信号通路相关蛋白p-IKKα/β、p-P65及p-IκBα蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。与对照组比较,模型组细胞中CCL19、p-IKKα/β、p-P65和p-IκBα蛋白表达水平均明显升高(P<0.05);与模型组比较,si-CCL19组细胞中CCL19、p-IKKα/β、p-P65和p-IκBα蛋白表达水平均明显降低(P<0.05)。结论:CCL19通过NF-κB信号通路促进巨噬细胞M1型极化,诱导炎症微环境的产生,促进胰腺炎的发生发展。

芍药甘草汤通过调节NDUFS1表达抑制巨噬细胞向M1极化缓解小鼠溃疡性结肠炎

目的本研究旨在探索并阐明芍药甘草汤(Shakuyakukanzoto,SKT)通过调节巨噬细胞的能量代谢和极化来改善小鼠溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)的可能作用机制。方法通过给予3%葡聚糖硫酸钠盐(dextran sulfate sodium salt,DSS)构建小鼠UC模型并通过灌胃SKT进行治疗。首先,对两个数据集GSE21157和GSE210415进行单细胞测序分析和代谢通路富集。其次,对UC小鼠腹腔巨噬细胞的提取和代谢组学验证。然后,根据标准逆方差加权两样本的单变量孟德尔随机化分析差异代谢物富集的通路和UC风险相关性。接着,分析在GSE128682和GSE102746数据集转录水平差异。最后,使用定量反转录PCR(qRT-PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)和流式细胞术验证结果。结果苏木精-伊红(HE)染色结果显示,SKT可以显著缓解DSS引起的结肠损伤。单细胞测序分析在肠壁中发现了巨噬细胞、NK细胞、T细胞等10多种不同类型的细胞。在疾病组中,通过比较这两组数据发现,有49条主要涉及能量代谢的巨噬细胞代谢途径的活性显著上调。能量代谢组学中,治疗组与模型组,模型组与空白组分别鉴定了10种和18种显著上调和下调的差异表达代谢物,这些差异表达的代谢物主要与糖酵解和氧化磷酸化有关。根据标准逆方差加权两样本的单变量孟德尔随机化分析,预测糖酵解和氧化磷酸化相关基因泛醌NADH脱氢酶Fe-S蛋白1(recombinant NADH dehydrogenase ubiquinone Fe-S protein 1,NDUFS1)(OR:0.56,95%CI:0.48~0.98,P=0.000068)与UC风险降低相关。通过对两组数据集转录水平差异分析,与正常组相比,UC中NDUFS1的转录水平降低。qRT-PCR、Western blot和流式细胞术验证结果显示,SKT可以促进NDUFS1蛋白的表达,抑制巨噬细胞向M1型极化。此外,敲低/过表达NDUFS1可以影响SKT对巨噬细胞M1型极化的影响。结论SKT通过调节NDUFS1蛋白水平,抑制巨噬细胞向M1型极化,从而缓解小鼠UC。这些发现不仅揭示了SKT对UC的治疗机制,也为临床应用提供了新的理论基础。

黄芪甲苷对马兜铃酸诱导的巨噬细胞M1型极化的作用及机制研究

目的:探讨黄芪甲苷对马兜铃酸诱导的RAW264.7细胞向M1型极化的影响,并初步探索其可能的作用机制。方法:分别采用马兜铃酸和脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞24 h,伴或不伴黄芪甲苷进行药物干预处理。采用细胞计数检测试剂盒-8(CCK 8)检测细胞活性变化,流式细胞仪检测巨噬细胞分型,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清液中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的分泌量。反转录实时定量PCR(RT-qPCR)技术检测RAW264.7细胞IL-6、TNF-αmRNA表达。蛋白免疫印迹法(Western blot)检测RAW264.7细胞p-p38和p38 MAPK蛋白表达水平。结果:CCK8结果提示黄芪甲苷在5~50μg/mL浓度范围对RAW264.7巨噬细胞无明显毒性,本研究选取10μg/mL作为实验干预浓度。黄芪甲苷能够显著改善马兜铃酸诱导的巨噬细胞活性(P<0.05),同时减少IL-6和TNF-α的分泌水平和mRNA表达水平(均P<0.05),抑制马兜铃酸和LPS诱导的M1/M2巨噬细胞比例(P<0.05)。黄芪甲苷可部分抑制马兜铃酸诱导的巨噬细胞p38 MAPK磷酸化水平(P<0.05)。结论:黄芪甲苷可减少巨噬细胞M1型极化,降低炎症因子IL-6和TNF-α水平,减少巨噬细胞的活性,从而起到减缓马兜铃酸肾损害的作用,其作用机制可能与部分抑制p38 MAPK信号活性有关。

慢性应激下脑内高糖诱导小鼠海马小胶质细胞M1型极化

目的 观察慢性应激下脑内葡萄糖含量对小鼠海马小胶质细胞极化类型的影响,探讨慢性应激致神经炎症的可能机制。方法 采用慢性不可预见温和应激(chronic unpredictable mild stress,CUMS)建立慢性应激小鼠模型,并随机分为对照组、应激组。采用葡萄糖检测试剂盒检测小鼠海马及血浆中葡萄糖含量,RT-PCR和ELISA技术检测海马肿瘤坏死因子-α (TNF-α)、白细胞介素-1β (IL-1β)、白细胞介素-6 (IL-6)含量。采用免疫荧光技术检测海马小胶质细胞极化类型。细胞水平采用20μmol/L糖皮质激素(glucocorticoid,GC)和20 mmol/L葡萄糖干预小鼠小胶质细胞系BV2模拟慢性应激及高糖后检测炎性因子IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。结果 应激组小鼠海马及血浆中葡萄糖含量均升高;应激组小鼠海马区M1型小胶质细胞标志物CD68表达增加,且TNF-α、IL-1β、IL-6含量均升高;20μmol/L的GC、20mmol/L的葡萄糖干预BV2细胞后IL-6、IL-1β、TNF-α水平均升高,且GC复合葡萄糖与GC组、葡萄糖组比较,IL-6、IL-1β、TNF-α水平均升高。结论 慢性应激诱导脑内高糖,进而促进小鼠海马小胶质细胞M1型极化。[营养学报,2022,44(1):45-51]

酸枣叶醇提物对小鼠巨噬细胞M1和M2型极化的影响

为探究酸枣叶醇提物(jujube leaves alcohol extract,JLE)对RAW264.7细胞M1和M2型极化的影响。本研究分别采用LPS和IL-4将RAW264.7细胞诱导极化为M1和M2型巨噬细胞,CCK8方法检测细胞存活率,Griess法检测药物对M1型细胞释放NO的影响,RT-PCR法检测药物对M1和M2型细胞标志基因表达的影响,划痕实验和RT-PCR法检测经药物处理的M2型巨噬细胞上清对4T1细胞迁移的影响。结果显示,酸枣叶醇提物可抑制NO的释放,下调M1型IL-12p40、IL-1β、COX-2和M2型Arg1、CD206的表达。并通过M2型巨噬细胞降低4T1细胞中MMP-2、MMP-9和NF-κBp65的mRNA水平,抑制4T1细胞的迁移。综上说明酸枣叶醇提物可抑制巨噬细胞M1和M2型极化,并通过NF-κB通路抑制4T1细胞迁移。

艾拉莫德(T-614)对巨噬细胞M1型极化的影响

[目的]研究艾拉莫德(T-614)对小鼠巨噬细胞(RAW264.7)M1型极化的影响。[方法]细胞毒性实验观察3个浓度(400 g/L,800 g/L,1 200 g/L)的T-614对RAW264.7的影响,使用LPS/IFN-γ诱导RAW264.7发生M1型分化,同时进行T-614干预。流式细胞术检测RAW264.7表面F4/80+CD86+与MHCⅡ+的比例,ELISA检测细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量,RT-PCR检测细胞中IL-1β、IL-6、TNF-α、MCP-1、CD86和iNOS基因的表达,Western Blot检测细胞中MCP-1、CD86和iNOS蛋白表达水平。[结果]3个浓度T-614对未分化的巨噬细胞没有毒性;高浓度T-614降低M1巨噬细胞表面的F4/80+CD86+与MHCⅡ+比例(P<0.05),降低MCP-1、CD86和iNOS的基因表达水平与蛋白表达水平(P<0.05),降低IL-1β、IL-6、TNF-α基因表达与减少IL-1β、IL-6、TNF-α的含量(P<0.05)。[结论]T-614能抑制RAW264.7进行M1型极化,抑制MCP-1、CD86和iNOS的表达,减少IL-1β、IL-6、TNF-α的形成与分泌。

替米沙坦对小鼠巨噬细胞M1/M2亚型极化的影响

目的探讨替米沙坦对小鼠巨噬细胞M1/M2亚型极化的影响。方法分别用脂多糖(LPS)联合干扰素-γ(IFN-γ)和白介素-4(IL-4)诱导小鼠巨噬细胞M1/M2型极化,用免疫荧光法检测极化结果。在M1型巨噬细胞中分别加入0.1、1、10μmol/L替米沙坦,同时设立空白对照组及溶剂对照组,Western blot法检测各组巨噬细胞亚型标志物诱导性一氧化氮合酶(iN OS)和精氨酸酶Ⅰ(ArgⅠ)的表达情况,ELISA法检测各组培养液上清中IL-6、IL-10表达情况。结果在LPS+IFN-γ诱导的小鼠巨噬细胞中M1型巨噬细胞标志物iN OS、IL-6的表达水平明显升高,替米沙坦干预后,各干预组M1型巨噬细胞标志物iN OS、IL-6的表达水平下降(P<0.05),随着替米沙坦浓度的增加而降低,而代表M2型巨噬细胞标志物的ArgⅠ和IL-10表达水平上升(P<0.05)。结论替米沙坦可以抑制LPS+IFN-γ诱导的小鼠巨噬细胞M1型极化,促进M1型巨噬细胞向M2型巨噬细胞转化。

ZNF667对LPS+IFN诱导下M1型巨噬细胞极化的作用及其机制

目的观察ZNF667对LPS和IFN-γ联合刺激下M1型巨噬细胞极化的影响。方法倒置显微镜下观察细胞分化程度。Western Blot、RT-PCR法检测M1型巨噬细胞标志物的表达水平。细胞外流量分析仪观察ZNF667对M1型巨噬细胞能量代谢的影响。结果巨噬细胞在LPS和IFN-γ联合刺激下极易分化为M1型巨噬细胞。ZNF667上调能够明显抑制M1型巨噬细胞中标志物的表达水平。过表达ZNF667能够明显减弱LPS和IFN-γ引起的巨噬细胞糖酵解水平的增加。结论ZNF667能明显抑制M1型巨噬细胞极化,并减弱巨噬细胞糖酵解水平。

RA滑膜成纤维样细胞外泌体促进巨噬细胞向M1极化

目的 探讨类风湿关节炎滑膜成纤维样细胞(rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes, RA-FLS)外泌体在调控巨噬细胞(macrophage, M■)极化中的作用。方法 收集6例骨关节炎(osteoarthritis, OA)患者和6例类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者关节液和滑膜组织,流式微珠阵列(CBA)法检测关节液中M1和M2型细胞因子的表达;免疫组织化学法检测滑膜中外泌体标志物CD9的表达;分离培养原代RA-FLS和OA-FLS并提取上清液外泌体,使用Western印迹法和粒径分析(nanoparticle tracking analysis, NTA)鉴定;实时荧光定量PCR(RT-PCR)和CBA法分别检测OA-FLS和RA-FLS外泌体对M1和M2型极化分子mRNA水平及细胞因子分泌的影响。结果 RA关节液中M1型细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8及M2型细胞因子IL-10水平均显著高于OA组;RA滑膜中CD9高表达;RA-FLS分泌的外泌体较OA-FLS明显增多;RA-FLS外泌体刺激M■后,细胞M1型极化分子mRNA表达和细胞因子分泌均增加。结论 RA-FLS外泌体促进M■向M1极化。