嗜酸粒细胞型哮喘患儿外周血单个核细胞肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2 mRNA和M2巨噬细胞检测及意义

目的:检测嗜酸粒细胞型哮喘(EA)患儿外周血单个核细胞(PBMC)肿瘤坏死因子α诱导蛋白8样分子2(TIPE2)mRNA和M2巨噬细胞,并分析其意义。方法:回顾性收集EA患儿100例,根据糖皮质激素(ICS)治疗后2周内症状缓解情况,分为完全缓解组(78例)和部分缓解组(22例)。另选取体检健康儿童52例,设为对照组。比较三组临床资料[肺功能、血常规、呼出气一氧化氮(FeNO)]、TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞占比、治疗前后免疫细胞[辅助性T细胞1(Th1)、辅助性T细胞2(Th2)]以及细胞因子[白细胞介素-2(IL-2)、γ-干扰素(IFN-γ)、IL-4、IL-13、精氨酸酶1(Arg-1)]。分析EA患儿预后的影响因素,并进行相关性分析。结果:完全缓解组和部分缓解组用力肺活量(FVC)、呼吸流量峰值(PEF)、第1秒用力呼气容积(FEV1)、嗜酸性粒细胞(EOS)、淋巴细胞(LYM)、白细胞(WBC)、FeNO与对照组比较差异有统计学意义(均P<0.05),但两组间上述指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。治疗前,完全缓解组与部分缓解组TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞占比、M2/M1、IL-4、IL-13、IL-2、Arg-1高于对照组,Th1、Th1/Th2、IFN-γ低于对照组,且完全缓解组TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞、Th1、IL-4、IL-13、Arg-1与部分缓解组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。治疗后,完全缓解组和部分缓解组TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞占比、M2/M1、IL-4、IL-13、IL-2、Arg-1降低,Th1、Th1/Th2、IFN-γ升高,且完全缓解组与部分缓解组比较差异有统计学意义(均P<0.05)。Logistic回归分析结果显示,TIPE2 mRNA、M2巨噬细胞、IL-4、IL-13、Arg-1为EA患儿预后的影响因素(均P<0.05)。Pearson分析结果显示,M2巨噬细胞与IL-4、IL-13呈负相关,与TIPE2 mRNA、Arg-1呈正相关;TIPE2 mRNA与IL-4、IL-13的水平呈负相关(均P<0.05)。结论:EA患儿PBMC中TIPE2 mRNA与M2巨噬细胞呈高表达,均为影响预后的因素。

M2巨噬细胞特征基因风险评分能准确预测HBV相关肝细胞癌患者的预后

目的探讨在乙型肝炎病毒(HBV)相关肝细胞癌(HCC)中M2巨噬细胞特征基因(MRG)对患者预后的评估价值及潜在的分子机制。方法从TCGA数据库获取73例HBV相关肝HCC患者的转录组数据,通过WGCNA识别M2巨噬细胞相关基因模块,利用LASSO鉴定出关键MRG并构建风险评分,并在外部数据集中验证风险评分的预测性能。应用CIBERSORT和R.pRRophetic分析风险评分与免疫细胞浸润、药物敏感性的关系。通过GSVA和GSEA对高风险组和低风险组的差异基因进行通路富集分析。R.Seurat验证在HCC中表达MRG的细胞类型,并通过R.Cellchat分析细胞互作强度,找到与HCC进展相关的重要细胞类型。流式细胞术检测肝癌条件培养基诱导THP-1向M2样极化,RT-qPCR验证MRG在HBV阳性的肝癌细胞系和M2巨噬细胞中表达。结果M2巨噬细胞高浸润状态与患者不良预后显著相关(P=0.025)。高风险组的总生存期(OS)均显著低于低风险组(训练集P=0.021,测试集P=0.046)。高风险组中M2巨噬细胞显著富集(P=0.03),低风险组中幼稚B细胞显著富集(P=0.049)。药物BI.2536对高风险组更有效(P=0.025),AG.014699(P=0.044)、AKT.inhibitor.VIII(P=0.041)、AZD.0530(P=0.0033)、AZD7762(P=0.0051)和BMS.708163(P=0.015)对低风险组更有效。通路富集分析结果表明,增殖相关通路和代谢相关通路在高风险组中富集。单核细胞在高风险组HCC进展的细胞互作中最为活跃。VTN在PLC/PRF/5中的表达显著上调(P<0.0001),GCLC、PARVB、TRIM27和GMPR在M2样THP-1中的表达显著上调(P=0.0037、P=0.0015、P=0.0071、P=0.0004)。结论MRG风险评分能准确预测HBV相关HCC患者的预后,揭示其肿瘤微环境的差异,为HCC患者的精准治疗提供了指导。

IL-33介导M2巨噬细胞在口腔黏膜上皮-间充质转化中的相关作用机制

目的探讨白细胞介素33(IL-33)介导M2巨噬细胞在口腔黏膜上皮-间充质转化(EMT)中的相关作用机制。方法将25只雄性BALB/c小鼠分为口腔黏膜成纤维化(OSF)组(20只)和对照组(5只)。OSF组通过槟榔碱刺激建立OSF小鼠模型,对照组使用PBS注射液在相同部位给药。观察口腔黏膜组织巨噬细胞表型、IL-33以及转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad通路表达水平;培养人口腔黏膜细胞并与M2巨噬细胞相互作用体外模型,使用IL-33添加剂和TGF-β受体抑制剂,观察EMT标志物表达水平。结果HE染色和Masson染色证实了口腔黏膜纤维化模型建立成功,与对照组比较,OSF组口腔黏膜组织中E-钙黏蛋白(E-cadherin)表达水平降低,波形蛋白(Vimentin)表达水平升高(均P<0.05)。此外,观察到IL-33和TGF-β水平升高以及TGF-β1/Smad通路激活,巨噬细胞在口腔黏膜组织中聚集且表型为M2巨噬细胞。与空白对照组比较,IL-33组E-cadherin水平降低,Vimentin的表达增高(均P<0.05);LY-2109761+IL-33组与IL-33组相比,E-cadherin的表达增高,Vimentin的水平降低(均P<0.05)。Western blot检测TGF-β、p-Smad2和Smad2的表达水平提示,与IL-33组相比,LY2109761+IL-33组IL-33对TGF-β有促进作用(P<0.05);IL-33组与空白对照组相比,p-Smad2水平显著提高(P<0.05);LY-2109761+IL-33组与IL-33组相比,p-Smad2水平显著降低(P<0.05)。结论IL-33通过介导M2巨噬细胞调控TGF-β1/Smad通路促进口腔黏膜上皮间质转化。

白芍通过调控M2巨噬细胞极化有效缓解何首乌引发的特异质肝损伤

特异质药物性肝损伤(IDILI)是一种因药物引起的严重不良反应,通常发生在少数易感人群中。何首乌(PM)虽是一个常用的补益药,但许多临床数据已证明PM会引发IDILI。大多数IDILI的发生与机体免疫应激相关,然而对于PM导致IDILI的内在机制仍尚未被阐明。白芍(PRA)在临床上常与其他中药配伍,具有增效减毒缓解炎症等功效。但PRA是否能够缓解PM引发的肝损伤及内在机制仍未可知。在本研究中,通过网络药理学分析预测了PRA配伍PM在天然免疫中的相关靶点可能与巨噬细胞极化相关。同时采用非肝毒性剂量的LPS复制免疫应激模型,通过肝功能指标及病理等结果显示,当PM与PRA联用后,肝损伤的程度有所改善,相关促炎因子TNF-α和IL-6下降,M2巨噬细胞相关因子也有所上升。在体外,PM抑制了小鼠骨髓来源巨噬细胞(BMDMs)中IL-4诱导的Arg1及M2巨噬细胞标记物的表达,PRA则能够促进M2巨噬细胞极化,当二者配伍时,PRA可以改善PM对M2巨噬细胞极化的抑制作用。总之,这些研究结初步表明PRA能够通过促进M2巨噬细胞极化,降低炎症因子的表达,从而缓解PM引发的肝损伤,为解决何首乌引发的IDILI提供了新的思路和方案。

SPHK1调控M2巨噬细胞极化对膀胱癌细胞上皮间质转化的机制研究

目的:探讨鞘胺醇激酶1(Sphingosine kinascs-1,SPHK1)对M2巨噬细胞极化作用的调控以及对膀胱癌细胞上皮间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)的影响机制。方法:选取巨噬细胞系Raw264.7进行原代培养,构建Control-NC(SPHK1空白质粒转染Raw264.7细胞系)、LV-SPHK1组(过表达SPHK1质粒转染Raw264.7细胞系)、si-SPHK1组(敲除SPHK1质粒转染Raw264.7细胞系);Western-blot检测各组细胞内SPHK1及M2巨噬细胞标志物(CD206、ArgI)蛋白表达;免疫荧光检测M2巨噬细胞标志物(CD206、ArgI)蛋白荧光强度;在上述各组巨噬细胞与膀胱癌T24细胞共培养24h后,采用MTT法检测各组T24细胞的增殖活性;划痕、Transwell实验检测各组T24细胞迁移、侵袭能力;Western-blot检测各组T24细胞增殖、侵袭相关蛋白(Survivin、MMP-2、MMP-9)及EMT相关蛋白(E-Cadherin、Vimentin、N-Cadherin)浓度表达。结果:与Control-NC组相比,LC-SPHK1组SPHK1蛋白表达明显提升,si-SPHK1组SPHK1蛋白表达明显下调(P<0.05);SPHK1过表达质粒转染可以上调M2巨噬细胞标志物CD206、ArgI蛋白表达及荧光强度(P<0.05);SPHK1沉默质粒转染可以下调M2巨噬细胞标志物CD206、ArgI蛋白表达及荧光强度(P<0.05)。随着细胞培养时间的延长,各组膀胱癌T24细胞均体现出增殖活性提升趋势(P<0.05);与Control-NC组相比,SPHK1过表达会提升T24细胞增殖活性、迁移及侵袭能力,SPHK1沉默则会降低T24细胞增殖活性、迁移及侵袭能力(P<0.05);SPHK1过表达会提升T24细胞内Vimentin、N-Cadherin蛋白表达,降低E-Cadherin蛋白表达(P<0.05);SPHK1沉默则会降低T24细胞内Vimentin、N-Cadherin蛋白表达,提升E-Cadherin蛋白表达(P<0.05)。结论:SPHK1过表达可以提升M2型巨噬细胞极化程度,促进膀胱癌肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭能力及EMT进程,最终提升膀胱癌的远处扩散能力,值得临床进一步研究。

M2巨噬细胞分泌的IL-10通过JAK2/STAT3信号通路调节乳腺癌细胞的增殖、侵袭与凋亡

目的探讨M2巨噬细胞分泌的IL-10通过JAK2/STAT3信号通路对乳腺癌细胞的增殖、侵袭迁移与凋亡的影响。方法THP-1细胞诱导为M2巨噬细胞,并对标志基因(CD206、ARG1、IL-6和IFN-β)进行检测;ELISA检测细胞上清液中IL-10的表达;细胞集落形成实验和EdU实验检测细胞的增殖能力;细胞侵袭与迁移实验检测细胞的侵袭与迁移能力;细胞流式术检测细胞的凋亡率和细胞周期;Western blot检测JAK2/STAT3通路相关蛋白的表达。结果 M2巨噬细胞在体外被成功诱导并进行了鉴定;与未经处理的THP-1细胞相比,M2巨噬细胞上清液中IL-10的明显增加;M2巨噬细胞分泌的IL-10可促进MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭与迁移(均P<0.001),抑制MDA-MB-231细胞的凋亡(P<0.001);抑制IL-10的表达可抑制MDA-MB-231细胞的增殖、侵袭与迁移(均P<0.05),促进MDA-MB-231细胞的凋亡(P<0.05);IL-10可激活JAK2/STAT3信号通路,而抑制IL-10的表达可抑制JAK2/STAT3信号通路的激活。结论 M2巨噬细胞分泌的IL-10可促进乳腺癌细胞的增殖、侵袭与迁移,抑制乳腺癌细胞凋亡,其机制可能与JAK2/STAT3信号通路激活有关。

微小RNA-155在小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中表达的差异

背景:目前对微小RNA-155在巨噬细胞中的表达和功能的研究还集中在总体单核巨噬细胞水平。目的:了解小鼠骨髓来源M1和M2巨噬细胞中微小RNA-155表达的差异。方法:用100U/mL干扰素γ和5μg/L脂多糖诱导骨髓细胞来源的巨噬细胞向M1分化,用10μg/L白细胞介素4诱导出M2巨噬细胞。结果与结论:流式细胞检测显示实验诱导的M1和M2巨噬细胞纯度分别达91%和95%。RT-PCR检测显示诱导型一氧化氮合酶mRNA在M1巨噬细胞中高表达,在M2中则基本不表达;而Ⅰ型精氨酸酶、发现于炎症区域1mRNA在M2中高表达,在M1中则表达较低;炎症因子肿瘤坏死因子αmRNA在M1中的表达明显高于M2,相反白细胞介素10mRNA在M2中的表达高于M1(P<0.05)。实时荧光定量PCR检测显示M1巨噬细胞中微小RNA-155的表达量明显高于M2(P<0.05)。提示微小RNA-155可作为鉴别M1,M2巨噬细胞的标志。

miR-125a-3p对动脉粥样硬化斑块及M1/M2巨噬细胞、MMP-9和VEGF的影响

目的探讨miR-125a-3p对大耳兔动脉粥样硬化斑块形成、M1/M2巨噬细胞、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)的影响。方法15只成年雄性健康日本大耳兔,随机分为3组,每组5只,对照组给予普通饲料喂养,动脉粥样硬化模型组给予牛血清白蛋白注射和高胆固醇饲料喂养,miR-125a-3p抑制剂干预组给予动脉粥样硬化兔注射miR-125a-3p干扰慢病毒载体。油红O染色后图像分析法测定斑块面积,免疫组化法测定MMP-9和VEGF,免疫荧光法检测斑块组织中M1标记物CD11c和M2标记物CD206。结果与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂组斑块面积百分比显著降低(P<0.0001)。与对照组相比,动脉粥样硬化组MMP-9(P<0.001)、VEGF(P<0.01)和CD11c(P<0.001)水平显著升高,CD206水平显著降低(P<0.001);与动脉粥样硬化组相比,miR-125a-3p抑制剂干预组MMP-9(P<0.01)、VEGF(P<0.01)和CD11c(P<0.001)水平有所降低,CD206水平有所升高(P<0.001)。结论抑制miR-125a-3p可减轻动脉粥样硬化斑块的形成,平衡M1/M2巨噬细胞,降低斑块组织中MMP-9和VEGF的表达,miR-125a-3p可能是治疗不稳定动脉粥样硬化斑块的新靶点。

龙胆泻肝汤对实验性自身免疫性葡萄膜炎大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用

目的探讨龙胆泻肝汤(Longdan Xiegan decoction,LXD)对实验性自身免疫性葡萄膜炎(EAU)大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。方法将48只雌性Lewis大鼠随机分为正常对照组、EAU模型组和LXD干预组,其中EAU模型组和LXD干预组大鼠首先诱导并建立EAU模型,LXD干预组大鼠每天给予LXD灌胃处理12 d,EAU组大鼠给予相同体积的PBS缓冲液灌胃处理12 d。实时荧光定量PCR(Q-PCR)和酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫后12 d三组大鼠脾脏、淋巴结及眼组织中iNOS和Arg1 mRNA及蛋白的表达;此外,采用流式细胞仪检测以上各组织中M1型、M2型巨噬细胞极化水平,分析LXD对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的影响。结果免疫后12 d,与正常对照组相比,EAU模型组大鼠各组织中iNOS mRNA和蛋白表达均升高,而Arg1 mRNA和蛋白表达均降低(均为P<0.05);与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠脾脏、淋巴结以及眼组织中iNOS表达均降低,而Arg1表达均升高(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,免疫后12 d,EAU模型组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平升高,而M2型巨噬细胞极化水平降低(均为P<0.05),呈现不均衡表达;与EAU模型组相比,LXD干预组大鼠各组织中M1型巨噬细胞极化水平下降,而M2型巨噬细胞极化水平升高,两者比例逐渐恢复均衡。结论在EAU大鼠中,M1/M2巨噬细胞极化比例紊乱,LXD可明显降低M1型巨噬细胞极化水平以及相关因子iNOS表达,提高M2型巨噬细胞极化水平以及相关因子Arg1表达,从而发挥对EAU大鼠M1/M2巨噬细胞极化平衡的调控作用。

PI3K/AKT信号通路在SjCystatin诱导M2巨噬细胞分化过程中的影响

目的:进一步确定日本血吸虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Sj Cystatin)诱导M2巨噬细胞分化的亚型及相关机制。方法:用ELISA、RT-q PCR或Western blot法测定IL-10、IL-12、巨噬细胞亚型表面标志物LIGHT(M2b)及Arg-1(M2a+M2c)的表达;用Western blot法测定AKT的磷酸化水平。结果:Sj Cystatin处理组在6 h、12 h和24h时IL-10表达量持续增加;处理12 h,LIGHT的mRNA和蛋白表达量增加但Arg-1的mRNA和蛋白表达量降低;AKT磷酸化水平增加。PI3K/AKT抑制剂处理组IL-10的释放量在12 h和24 h持续降低;24 h,LIGHT的mRNA和蛋白表达量降低但Arg-1的mRNA和蛋白表达量增加;AKT的磷酸化水平减少。结论:Sj Cystatin促进了活化的M2巨噬细胞分化为M2b亚型巨噬细胞,并且PI3K/AKT信号通路参与了这一过程。

IL-10+IL-4能提高M2巨噬细胞表型和嗜酸性粒细胞的迁移

目的:研究论证IL-10是否能通过诱导IL-4来提高M2。方法:用C57BL/6J鼠中的骨髓细胞诱导M-CSF诱导的骨髓源巨噬细胞,利用小鼠全基因组版本进行转录,进而嗜酸性粒细胞的迁移实验,体内巨噬细胞的转移实验。结果:研究发现在M-CSF诱导的BMDMs中通过IL-4、IL-10及IL-4+IL-10诱导来分析M2巨噬细胞,IL-10通过IL-4来提高M2a标志物的表达,此外,IL-4和IL-10诱导产生CCL24时起协同作用。在GM-CSF诱导的BMDMs中CCL24的表达提高。CCL24是CCR3的激动剂和嗜酸性粒细胞的趋化因子。在体外,IL-4+IL-10激活的巨噬细胞产生大量的CCL24,并且能提高嗜酸性粒细胞的迁移。这个过程能被抗CCL24抗体抑制。IL-4+IL-10激活的巨噬细胞转移到C57BL/6J小鼠的腹膜,这能增加嗜酸性粒细胞浸润腹膜腔。结论:IL-4+IL-10激活的巨噬细胞能增强M2a巨噬细胞相关基因的表达,提高CCL24的产生和嗜酸性粒细胞的浸润,导致嗜酸性粒细胞相关疾病的发生。

M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。

活性维生素D通过STAT-1-TREM-1途径调控M1/M2巨噬细胞表型激活失衡缓解糖尿病肾病中的肾间质纤维化的机制

目的 探究活性维生素D通过信号转导和转录激活因子-1(STAT-1)-髓样细胞触发受体-1(TREM-1)途径调控M1/M2巨噬细胞表型激活失衡缓解糖尿病肾病中的肾间质纤维化的机制。方法 45只健康雄性SD大鼠随机数字表法分为对照组、DN模型组和VD治疗组,每组各15只。对照组为正常饲养大鼠,作为实验对照;DN模型组和VD治疗组均建立大鼠糖尿病模型;VD治疗组于糖尿病模型建立后,每日口服VD,剂量为0.1μg/kg。第18周处死大鼠。采集血样用于测量生化参数,并采集肾脏进行组织学检查和分子检测。通过蛋白印迹法检测STAT-1和p-STAT-1蛋白表达。通过自动生化分析仪对大鼠血糖、血尿素氮和血清肌酐进行分析。通过RT-PCR检测大鼠肾组织中Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达。通过免疫组织化学分析大鼠肾小球和肾间质CD68巨噬细胞浸润。通过蛋白印迹法分析大鼠肾组织CD163与CD68的蛋白表达。通过RT-PCR分析各组大鼠肾小球和间质内的巨噬细胞分泌的细胞因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、Arg-1和MR的浓度。结果 DN模型组STAT-1和p-STAT-1蛋白表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组STAT-1和p-STAT-1蛋白表达较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组蛋白尿、血糖、血尿素氮和血清肌酐水平升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组蛋白尿、血尿素氮和血清肌酐水平较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组Ⅰ型胶原蛋白和纤连蛋白的mRNA表达较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组肾小球和肾间质巨噬细胞浸润较对照组增加,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组肾小球和肾间质巨噬细胞浸润较DN模型组减少,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组CD163蛋白表达和CD163/CD68比率较对照组均降低,CD68较对照组升高,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组CD163蛋白表达和CD163/CD68比率较DN模型组升高,CD68较DN模型组降低,差异均有统计学意义(P <0.05)。DN模型组TNF-α和iNOS mRNA表达较对照组均升高,Arg-1和MR mRNA表达降低,差异均有统计学意义(P <0.05);VD治疗组TNF-α和iNOS mRNA表达较DN模型组降低升高,Arg-1和MR mRNA表达升高,差异均有统计学意义(P <0.05)。结论 VD通过STAT-1-TREM-1途径调控M1/M2巨噬细胞表型,改善链脲菌素诱导的DN大鼠肾间质纤维化。

贝伐单抗激活M2巨噬细胞促进肿瘤转移

目的研究贝伐单抗与肿瘤微环境中的巨噬细胞间相互关系,初步探讨临床贝伐单抗治疗肝癌无效的机制。方法采用免疫组化检测肝癌微环境中巨噬细胞表型。巨噬细胞与肿瘤细胞共培养体系中加入贝伐单抗,采用酶联免疫吸附测定(ELISA)方法检测培养体系中炎症因子及血管生长因子的分泌。采用划痕实验检测共培养体系上清对肿瘤细胞迁移的影响。结果临床标本检测肿瘤微环境中的巨噬细胞为M2型,贝伐单抗显著增加M2型巨噬细胞与肿瘤细胞共培养体系中炎症因子转化生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-10(IL-10)、白细胞介素-12(IL-10)及血管内皮生长因子(VEGF)的水平,肿瘤细胞迁移显著增加。结论贝伐单抗激活M2型巨噬细胞,促进炎症因子及血管生长因子分泌,促进肿瘤细胞迁移。

结核性胸膜炎患者胸腔积液M1/M2巨噬细胞比例与预后

目的分析结核性胸膜炎(tuberculous pleurisy,TP)患者单核细胞中M1/M2巨噬细胞比例与TP预后的关系。方法选取2019年6月至2022年12月浙江大学医学院附属第二医院临平院区诊治的TP患者206例,以单因素与多因素Logistic回归分析影响TP预后的危险因素,采用受试者操作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线评估M1/M2单核–吞噬细胞比例对TP预后不良的预测价值。结果Logistic分析显示,发病至就诊时间、感染耐药菌、ESR、M1及M2巨噬细胞表达水平、M1/M2巨噬细胞比例是影响TP患者预后不良的危险因素(P<0.05);M1及M2巨噬细胞表达水平预测TP患者预后不良的曲线下面积(area under the curve,AUC)分别为0.783、0.829,敏感度分别为70.45%、81.47%,特异性分别为79.62%、73.44%,M1/M2巨噬细胞比例预测TP患者预后不良的AUC为0.921、敏感度为92.59%、特异性为84.96%,均明显大于二者单独预测(P<0.05)。结论发病至就诊时间、感染耐药菌、ESR、M1及M2巨噬细胞表达水平、M1/M2巨噬细胞比例是影响TP患者预后不良的危险因素,其中M1/M2巨噬细胞比例对TP患者预后不良的预测价值较高。

靶向M2巨噬细胞的纳米药物体内抗肿瘤效应的初步研究

目的:探索靶向M2巨噬细胞的纳米复合物(MICE-NPs)在BALB/c小鼠肿瘤模型中的抑瘤效应及其相关机制。方法:建立BALB/c小鼠肿瘤模型,通过免疫组化法观察癌巢周围肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)的聚集情况;采用不同浓度纳米药物在小鼠体内进行急性毒性实验,从而获得后续实验纳米药物的合适浓度;利用荧光显微镜观察纳米药物在小鼠不同组织中的分布情况;通过肿瘤控制率的计算,评估MICE-NPs对小鼠肿瘤生长的抑制作用;采用流式细胞技术观察MICE-NPs对荷瘤小鼠病灶内免疫细胞组成的影响。结果:免疫组化结果表明,模型小鼠肿瘤微环境(TME)中存在大量TAMS及M2型巨噬细胞。急性毒性实验表明,MICE-NPs急性期毒性不明显,MICE-NPs具较好的安全性。荧光显微镜观察到在给药后24 h仍可于肿瘤组织中观察到较高水平的荧光显示,证明MICE-NPs可在肿瘤组织中蓄积。MICE-NPs的抑瘤实验证明高浓度MICE-NPs抑瘤效果良好。流式细胞仪结果显示,与对照组相比,纳米药物组小鼠的肿瘤组织中M2、Treg的比例下降,M1、CTL比例升高。结论:MICE-NPs体内实验未见明显毒副作用,抑瘤效应良好,有望能为肿瘤治疗提供一种新的思路与方法。

ADAR2通过调控M2巨噬细胞中HGF表达促进非小细胞肺癌细胞凋亡

目的 研究腺苷脱氨酶ADAR2(adenosine deaminase acting on RNA2)通过负调控M2型巨噬细胞中干细胞生长因子HGF(hepatocyte growth factor)的表达抑制非小细胞肺癌生长并对相关机制进行初步探讨。方法 征集非小细胞肺癌患者40例,检测癌组织和癌旁组织M2巨噬细胞中ADAR2表达。采用IL-4刺激正常巨噬细胞诱导出M2型巨噬细胞(M2 macrophage, M2-M), RT-PCR检测2组细胞中Arg-1、CD206、CD163和CD68的表达。通过Transwell系统将M2型小鼠巨噬细胞与小鼠肺癌Lewis细胞共培养,得到普通肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophage, TAM)和M2-TAM,分别采用转染慢病毒构建敲低和过表达ADAR2细胞模型,RT-PCR检测ADAR2和HGF表达,染色质免疫共沉淀检测ADAR2和HGF启动子区域结合情况。采用转染慢病毒构建敲低和过表达HGF细胞模型,Western blot检测HGF、Bax和Bcl2表达,Tunel染色检测细胞凋亡情况。结果ADAR2在癌组织和癌旁组织M2巨噬细胞中表达降低。IL-4刺激后的巨噬细胞Arg-1、CD206、CD163和CD68表达明显升高。敲低ADAR2后HGF表达升高,ADAR2与HGF启动子区域结合强度降低。过表达ADAR2后HGF表达降低,ADAR2与HGF启动子区域结合强度增加。最后,敲低HGF后Bax/Bcl2表达和细胞凋亡率升高;细胞过表达HGF后Bax/Bcl2表达和细胞凋亡率降低。结论 ADAR2通过负调控M2型巨噬细胞中HGF的表达促进非小细胞肺癌细胞凋亡。

AMPK通过下调CCL2抑制舌鳞状细胞癌肿瘤微环境中M2巨噬细胞的极化

目的:探究单磷酸腺苷激酶(AMPK)在舌鳞状细胞癌(TSCC)中的作用及与肿瘤微环境(TME)巨噬细胞分化的关系。方法:免疫组化检测AMPK在舌癌组织的磷酸化水平及与患者预后的关系。多重免疫荧光检测AMPK的磷酸化水平与肿瘤微环境巨噬细胞极化的关系。通过条件性共培养,观察AMPK激活后,对单核细胞体外诱导成功率的影响。结果:免疫组织化学检测结果发现,在舌癌组织中AMPK磷酸化水平显著高于其癌旁组织。多重免疫荧光显示AMPK的磷酸化水平与M1型巨噬细胞浸润呈正相关,与M2型巨噬细胞浸润呈负相关。ELISA及体外条件性共培养实验提示肿瘤细胞AMPK激活后趋化因子(C-C基序)配体2(CCL2)的表达下降,促进巨噬细胞向M1极化,抑制M2极化。结论:AMPK可以通过下调舌癌细胞的CCL2的表达抑制TME中巨噬细胞的M2极化。

M2型巨噬细胞衍生外泌体促进小胶质细胞M2型极化

背景:目前对于M2型巨噬细胞衍生外泌体的研究多集中于促进伤口愈合及成骨细胞的增殖和分化,而很少有研究关注其对小胶质细胞表型的调控作用。目的:探讨M2型巨噬细胞衍生外泌体对于小胶质细胞的表型调控作用及分子机制。方法:①提取骨髓原代巨噬细胞,用50 ng/m L白细胞介素4刺激巨噬细胞24 h促进巨噬细胞M2型极化,流式细胞术和细胞免疫荧光鉴定M2型巨噬细胞标志物CD206;②提取和鉴定M2型巨噬细胞衍生外泌体;③将小胶质细胞BV2随机分为3组:对照组、脂多糖组、治疗组,对照组不做处理,脂多糖组加入500 ng/m L脂多糖干预24 h,治疗组同时加入500 ng/m L脂多糖和25μg/m L M2型巨噬细胞衍生外泌体干预24 h,ELISA检测培养上清中肿瘤坏死因子α和白细胞介素10的分泌量,q RT-PCR检测细胞中诱导型一氧化氮合酶、精氨酸酶1、白细胞介素1β和白细胞介素10的m RNA表达,Western blot检测诱导型一氧化氮合酶、精氨酸酶1的蛋白表达以及核因子κB信号通路相关蛋白表达。结果与结论:①ELISA结果显示,与对照组相比,脂多糖组肿瘤坏死因子α分泌明显增多;与脂多糖组相比,治疗组肿瘤坏死因子α的分泌减少而白细胞介素10的分泌增多;②q RT-PCR结果显示,与对照组相比,脂多糖组白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶m RNA表达升高;与脂多糖组相比,治疗组白细胞介素1β、诱导型一氧化氮合酶m RNA表达降低,白细胞介素10、精氨酸酶1 m RNA表达升高;③Western blot结果显示,与对照组相比,脂多糖组诱导型一氧化氮合酶蛋白表达升高;与脂多糖组相比,治疗组诱导型一氧化氮合酶蛋白表达降低,而精氨酸酶1蛋白表达升高;(4)与对照组相比,脂多糖组核因子κB信号通路中P65、p-IκB-α蛋白表达降低;与脂多糖组相比,治疗组P65、p-IκB-α蛋白表达升高。结果表明:M2型巨噬细胞衍生外泌体可以显著抑制脂多糖诱导小胶质细胞的炎症反应,促进抗炎因子白细胞介素10的表达,抑制促炎因子肿瘤坏死因子α、白细胞介素1β的表达,促进小胶质细胞表型由M1型向M2型极化,其机制可能与M2型巨噬细胞衍生外泌体抑制核因子κB信号通路激活有关。

M2巨噬细胞来源的TNFSF13通过激活IRF8对胶质母瘤细胞替莫唑胺耐药的影响

目的探讨M2巨噬细胞来源的肿瘤坏死因子配体超家族成员13(TNFSF13)通过调控干扰素调节因子8(IRF8)对胶质母瘤(GBM)细胞替莫唑胺(TMZ)耐药的影响。方法免疫组织化学法(IHC)检测正常脑组织和GBM组织中TNFSF13的表达,ELISA检测M0型巨噬细胞和M2型巨噬细胞条件培养基(CM)中TNFSF13的表达。M0-CM和M2-CM用于培养U251敏感(U251/S)细胞和U251耐药(U251/R)细胞。TMZ处理组同时加入800μmol/L的TMZ。U251/R细胞分为如下组:con组、M2^(vector)-CM组、M2^(vector)-CM+TMZ组、M2^(TNFSF13)-CM组、M2^(TNFSF13)-CM+TMZ组、si-IRF8组、si-IRF8+M2^(TNFSF13)-CM组。CCK-8检测细胞活力并计算IC_(50)值,Transwell实验检测细胞侵袭,流式细胞术检测凋亡,Western blot检测IRF8的表达。构建裸鼠移植瘤模型并且将裸鼠分为如下组:U251+M2^(si-NC)组、U251+M2^(si-TNFSF13)组、U251+M2^(si-NC+TMZ)组、U251+M2^(si-TNFSF13)+TMZ组。检测各组成瘤体积和质量,免疫组化检测各组肿瘤组织中TNFSF13和CD206的表达。结果与癌旁组织以及M0-CM比较,癌组织以及M2-CM中TNFSF13的表达上调。与M0-CM组相比,M2-CM组中U251/S和U251/R细胞TMZ的IC 50值和细胞侵袭数目均显著上调(均P<0.05)。在M2巨噬细胞中过表达TNFSF13能够促进U251/R细胞TMZ的IC_(50)值,促进细胞侵袭、抑制细胞凋亡(均P<0.05)。过表达TNFSF13促进IRF8的表达,敲低IRF8能够减弱过表达TNFSF13介导的U251/R对TMZ耐药。体内研究显示,敲低TNFSF13与TMZ单独或联合处理显著抑制肿瘤生长、降低TNFSF13和CD206的表达。结论M2巨噬细胞来源的TNFSF13通过激活IRF8促进GBM细胞TMZ耐药。