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鲤鱼MAVS基因的克隆、表达及免疫功能分析
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作者 左明忠 张美娜 +4 位作者 刘雨晴 陈孟娟 刘变枝 李明 于光晴 《中国畜牧兽医》 CAS CSCD 北大核心 2024年第11期4653-4664,共12页
【目的】获取鲤鱼线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)基因CDS区,对其进行生物信息学分析,并探讨MAVS基因在免疫反应中的功能。【方法】参考NCBI中公布的鲤鱼MAVS基因预测序列(GenBank登录号:XM_0190... 【目的】获取鲤鱼线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial antiviral signaling protein,MAVS)基因CDS区,对其进行生物信息学分析,并探讨MAVS基因在免疫反应中的功能。【方法】参考NCBI中公布的鲤鱼MAVS基因预测序列(GenBank登录号:XM_019072216.2)设计引物对MAVS基因进行克隆和测序,使用生物信息学软件分析鲤鱼MAVS蛋白的性质和功能。对鲤鱼进行嗜水气单胞菌攻毒试验,使用实时荧光定量PCR技术检测MAVS基因在攻毒前后鲤鱼各组织中的表达水平。通过免疫荧光检测试验进行MAVS和线粒体的亚细胞定位;使用双荧光素酶报告基因系统检测MAVS基因调控下游基因的表达情况。【结果】克隆得到鲤鱼MAVS基因CDS区序列全长1749 bp,共编码582个氨基酸。鲤鱼MAVS基因核苷酸序列与鲫鱼、多磷白甲鱼、虎皮鱼、野鲮、草鱼、团头鲂、拉氏鱥、金线鲃、胖头鱥的相似性分别为92.3%、89.5%、85.1%、79.1%、73.6%、73.1%、72.0%、70.1%和69.8%。系统进化树结果显示,鲤鱼与鲫鱼、野鲮、多磷白甲鱼等聚为一支。鲤鱼MAVS蛋白为酸性、不稳定蛋白质,具有较强的亲水性,含有133个磷酸化位点及1个跨膜螺旋,属于跨膜蛋白;不含有信号肽,不属于分泌蛋白。蛋白保守性分析显示,MAVS蛋白的N-端CARD结构域、中间富含脯氨酸结构域(PRR)和C-端跨膜结构域(TM)在不同物种之间高度保守。鲤鱼MAVS蛋白的二级结构和三级结构显示,该蛋白主要由无规则卷曲(58.93%)和α-螺旋(23.37%)构成,延伸链(13.92%)和β-转角(3.78%)含量较低,表明其为一种混合性蛋白。蛋白互作结果显示,MAVS蛋白与NLRP3、TRAF6、ATG5、DDX58、TBK1等免疫蛋白之间存在相互作用。实时荧光定量PCR结果表明,与对照组相比,攻毒后鲤鱼MAVS基因在心脏、脑、脾脏、肝脏、肠道、肌肉、鳃组织中表达量显著或极显著升高(P<0.05;P<0.01),在肾脏中表达量极显著降低(P<0.01),在眼组织中表达量无显著差异(P>0.05)。细胞免疫荧光结果显示,MAVS蛋白表达位置与线粒体一致。双荧光素酶基因检测报告结果显示,MAVS基因能够极显著激活IFN和ISRE启动子(P<0.01)。【结论】MAVS基因在不同物种及在遗传进化过程中高度保守,在鲤鱼不同组织中广泛表达。本试验结果为进一步研究MAVS基因在鲤鱼先天免疫反应中的功能及分子机制提供了理论依据。 展开更多
关键词 鲤鱼 mavS基因 克隆 嗜水气单胞菌 免疫
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MAVS ΔTM基因真核表达载体的构建及其在293T细胞中的表达定位
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作者 杨超玥 李钰昌 +6 位作者 郑亮 高鑫誉 曹宏伟 吴志军 张华 高振秋 肖莉杰 《黑龙江八一农垦大学学报》 2023年第6期95-101,共7页
线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondria antiviral signaling protein,MAVS)在脊椎动物的抗病毒免疫反应中起着非常重要的作用。为了后续研究MAVS跨膜区氨基酸在病毒侵染宿主细胞时所发挥的作用,通过基因工程方法,构建了MAVS基因C端跨膜结... 线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondria antiviral signaling protein,MAVS)在脊椎动物的抗病毒免疫反应中起着非常重要的作用。为了后续研究MAVS跨膜区氨基酸在病毒侵染宿主细胞时所发挥的作用,通过基因工程方法,构建了MAVS基因C端跨膜结构域缺失突变体(MAVS ΔTM)。首先通过PCR技术扩增MAVS ΔTM基因片段,通过无缝克隆技术连接到pcDNA3.0-Flag载体上,后经酶切鉴定及测序结果表明MAVS ΔTM基因成功克隆到pcDNA3.0-Flag载体上,并将重组质粒定名pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM。将重组质粒pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM转染至人肾上皮细胞(HEK-293T)细胞中,利用蛋白免疫印迹实验和间接免疫荧光技术检测pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM的表达以及定位情况。结果显示,pcDNA3.0-Flag-MAVS ΔTM在293T细胞中成功表达,并且均匀分布于细胞中。研究将为进一步研究MAVS蛋白跨膜区氨基酸的功能奠定基础。 展开更多
关键词 真核表达载体 线粒体抗病毒信号蛋白 跨膜区氨基酸
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线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)在宿主天然免疫信号通路中的调节作用 被引量:17
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作者 杨星星 王凯 +2 位作者 陈晓娟 邢雅玲 陈忠斌 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2013年第5期397-405,共9页
线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)作为一种接头蛋白在调节宿主天然免疫信号通路过程中扮演重要角色.Toll样受体(TLR)和RIG-Ⅰ样受体(RLR)等细胞模式识别受体识别入侵的病原体并将信号传递给MAVS,MAVS通过刺激下游的TBK1复合体和IKK复合体分... 线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)作为一种接头蛋白在调节宿主天然免疫信号通路过程中扮演重要角色.Toll样受体(TLR)和RIG-Ⅰ样受体(RLR)等细胞模式识别受体识别入侵的病原体并将信号传递给MAVS,MAVS通过刺激下游的TBK1复合体和IKK复合体分别活化NF-κB和IRF3等信号通路,进而激活干扰素α/β表达,诱发细胞内抗感染天然免疫反应.MAVS除定位线粒体外,也可定位于过氧化物酶体上.MAVS在细胞内的不同定位决定了其在早期快速和持续性抗病毒天然免疫中的不同调节机制.MAVS只有同时定位在过氧化物酶体和线粒体上才可诱导干扰素刺激基因(ISG)快速且稳定地表达.本文通过对MAVS的发现、结构、细胞定位及其在天然免疫信号通路中的调控机制等最新进展进行综述,以期揭示MAVS蛋白在细胞内天然免疫信号通路中的重要调节作用,为研究病毒逃逸宿主天然免疫的机制和研究新型抗病毒免疫治疗策略提供新思路. 展开更多
关键词 mavS 天然免疫 Ⅰ型干扰素 RIG-Ⅰ TLR
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一种MAV航姿估计算法及其半实物仿真 被引量:4
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作者 赵世峰 张海 +1 位作者 沈晓蓉 范耀祖 《系统仿真学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第18期4160-4163,共4页
配置MIMU(Micro Inertial Measurement Unit,微惯性测量单元)中的加速度计工作在倾角仪状态,利用当地的重力加速度计算MAV(Micro Air Vehicles,微小型飞行器)的姿态角。同时利用MIMU中的陀螺仪,计算载体的姿态角。提出了一种构造加权系... 配置MIMU(Micro Inertial Measurement Unit,微惯性测量单元)中的加速度计工作在倾角仪状态,利用当地的重力加速度计算MAV(Micro Air Vehicles,微小型飞行器)的姿态角。同时利用MIMU中的陀螺仪,计算载体的姿态角。提出了一种构造加权系数的方法,可以根据MIMU的特性,构造不同性能的加权系数。通过对姿态角进行加权平均,实现惯性数据的融合,对MAV的姿态进行估计。该方法既保证了飞行器稳定飞行时姿态估计的精度,避免了姿态误差随时间的积累;又保证了姿态估计系统的动态性能,减小了系统的动态误差。基于该方法搭建的微小型AHRS(Attitude and Heading Reference System,姿态航向参考系统)体积小、重量轻、精度高,特别适用于载荷与体积都有限的载体使用。 展开更多
关键词 半实物仿真 信息融合 AHRS mav
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三黄鸡MAVS基因克隆及生物信息学分析 被引量:1
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作者 曹艳杰 何怡宁 +5 位作者 王海勇 唐宁 张丽华 韦平 韦天超 磨美兰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期1216-1221,共6页
【目的】掌握三黄鸡线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)基因的生物信息学,为MAVS基因诱导表达及禽类固有免疫相关机制研究打下基础。【方法】根据Gen Bank中已公布的原鸡MAVS基因序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR扩增三黄鸡MAVS基因,并应用相... 【目的】掌握三黄鸡线粒体抗病毒信号蛋白(MAVS)基因的生物信息学,为MAVS基因诱导表达及禽类固有免疫相关机制研究打下基础。【方法】根据Gen Bank中已公布的原鸡MAVS基因序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR扩增三黄鸡MAVS基因,并应用相关生物软件进行序列分析及其蛋白结构预测。【结果】三黄鸡MAVS基因编码区(CDS)全长1926 bp,编码641个氨基酸,与Gen Bank中已发表的原鸡MAVS氨基酸序列(NP_001012911.1)比对,三黄鸡MAVS氨基酸序列在第440、488、506和606位存在4个氨基酸差异,分别为440A→T、488P→L、506I→L和606E→K。三黄鸡MAVS基因与原鸡的相似性最高,达99.0%;与日本鹌鹑的相似性次之,为91.0%;与斑马鱼的相似性最低,仅37.6%。三黄鸡MAVS蛋白分子质量为67.79 ku,理论等电点(p I)为5.04,属于跨膜蛋白,无信号肽序列;其二级结构中折叠占0.5%,无规则卷曲占88.7%,螺旋占10.8%。【结论】三黄鸡MAVS基因序列表现出高度的保守性,可作为今后研究三黄鸡抗病毒机制的重要指标之一。 展开更多
关键词 三黄鸡 mavS基因 克隆 生物信息学 相似性
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静电纺丝法制备仿生MAV翼初探 被引量:1
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作者 司廷 贾来兵 尹协振 《实验流体力学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期25-30,共6页
静电纺丝法是一种制备超细纤维的重要方法。本文以聚乙烯醇(PVA)为原料,通过实验研究了静电纺丝法制备纳米纤维非织造物的方法,分析了PVA溶液浓度、粘度、表面张力、电导率、流量以及实验电压和接收距离等各种实验参数对纤维形貌的影响... 静电纺丝法是一种制备超细纤维的重要方法。本文以聚乙烯醇(PVA)为原料,通过实验研究了静电纺丝法制备纳米纤维非织造物的方法,分析了PVA溶液浓度、粘度、表面张力、电导率、流量以及实验电压和接收距离等各种实验参数对纤维形貌的影响,并利用光学显微镜和CCD得到了纳米纤维的微观形貌。由于静电纺丝法得到的纳米纤维非织造物直径小,有较高的比表面和较大的比强度,用金属丝制作的仿生翅膀骨架做接收装置,利用静电纺丝法得到了质量轻、易控制的仿生MAV翼。 展开更多
关键词 静电纺丝 聚乙烯醇 纳米纤维 mav
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平面形状对MAV气动特性的影响 被引量:2
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作者 王晋军 涂建强 《空气动力学学报》 CSCD 北大核心 2007年第4期474-478,494,共6页
通过风洞测力实验研究了平面形状(后掠角)对展长/根弦长之比为1.0的机翼的气动特性的影响,实验结果表明,模型后掠角在很大程度上影响小展弦比机翼的气动特性,当模型后掠角A≤35^o时,能增大模型的最大升力系数和失速迎角,推迟... 通过风洞测力实验研究了平面形状(后掠角)对展长/根弦长之比为1.0的机翼的气动特性的影响,实验结果表明,模型后掠角在很大程度上影响小展弦比机翼的气动特性,当模型后掠角A≤35^o时,能增大模型的最大升力系数和失速迎角,推迟失速;当模型后掠角A=56^o-64^o时,能得到较好的升力曲线,改善机翼的失速特性。此外,实验结果表明模型前缘背风面倒角与迎风面倒角相比,有效地提高了模型的最大升阻比和失速后的升力系数。 展开更多
关键词 mav平面形状 小展弦比机翼 气动特性
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MAV气动外形优化设计 被引量:3
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作者 何烈堂 曾庆华 《航空计算技术》 2002年第4期45-48,共4页
针对微型飞行器的特点,抽象出其气动模型和飞行性能模型。采用单学科优化和多学科优化相结合的方法对常规气动布局进行了气动外形优化,并比较分析了单、多学科的优化结果,得出重要结论。
关键词 mav 多学科优化 升阻比 过载系数 静稳定裕度
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MAV和复配柴油降凝剂的制备 被引量:1
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作者 苏扬 卜世啸 +4 位作者 姚国胜 田计兰 沈恩辉 田佳伟 张笑通 《广州化工》 CAS 2016年第14期69-70,106,共3页
以马来酸酐、醋酸乙烯酯、丙烯酸高级酯为原料单体合成一种三元共聚物MAV降凝剂。采用单因素法研究反应温度、投料比和引发剂BPO用量对0#柴油降凝效果的影响。结果表明,反应温度80℃,投料比马来酸酐∶丙烯酸高级酯∶醋酸乙烯酯为1∶1∶2... 以马来酸酐、醋酸乙烯酯、丙烯酸高级酯为原料单体合成一种三元共聚物MAV降凝剂。采用单因素法研究反应温度、投料比和引发剂BPO用量对0#柴油降凝效果的影响。结果表明,反应温度80℃,投料比马来酸酐∶丙烯酸高级酯∶醋酸乙烯酯为1∶1∶2,引发剂BPO用量1.5 g时,0#柴油冷滤点均降低6℃。研究了MAV与不同的分散剂复配制得降凝剂的效果,结果表明采用分散剂6501(1∶1.5)复配时,具有较好的降滤效果,降低冷滤点8℃。 展开更多
关键词 三元共聚物 mav 柴油降凝剂 冷滤点
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MAV飞行控制器的μ综合设计方法 被引量:1
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作者 曾庆华 张为华 《国防科技大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第5期1-5,共5页
从MAV飞行控制系统的基本组成出发,讨论了MAV飞行控制器设计的性能评估准则、鲁棒性评估准则、安全性评估准则和控制能量准则。重点研究了在MAV质量、展长、质心位置、飞行速度和气动计算误差等参数摄动情况下的线性化建模方法,由此建立... 从MAV飞行控制系统的基本组成出发,讨论了MAV飞行控制器设计的性能评估准则、鲁棒性评估准则、安全性评估准则和控制能量准则。重点研究了在MAV质量、展长、质心位置、飞行速度和气动计算误差等参数摄动情况下的线性化建模方法,由此建立了MAV的Δ-P-K结构,求取了广义被控对象的传递函数矩阵,进一步讨论了利用μ综合手段进行MAV飞行控制器设计的方法和步骤。 展开更多
关键词 微型飞行器 飞行控制 鲁棒控制 Μ综合 mav
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鸡MAVS(IPS-1)基因的克隆及其对IFN-β激活作用
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作者 刘云霞 程玉强 +2 位作者 王逸豪 严亚贤 孙建和 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2018年第2期9-15,共7页
为研究鸡线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial anti-viral signaling protein,MAVS)在I型干扰素信号通路中的作用,对克隆的鸡MAVS基因进行了生物信息学分析。结果表明,多数在哺乳动物MAVS中发挥重要作用的蛋白基序及氨基酸位点在鸡中不... 为研究鸡线粒体抗病毒信号蛋白(mitochondrial anti-viral signaling protein,MAVS)在I型干扰素信号通路中的作用,对克隆的鸡MAVS基因进行了生物信息学分析。结果表明,多数在哺乳动物MAVS中发挥重要作用的蛋白基序及氨基酸位点在鸡中不保守;对鸡MAVS与其他物种进行了进化分析,发现该基因具有较强的种间特异性;DF-1细胞在感染新城疫病毒后12h,MAVS和IFN-β的mRNA水平均被上调,提示鸡MAVS可能参与了细胞抗病毒免疫反应;同时在DF-1细胞中过表达鸡MAVS能够激活IFN-β启动子活性。上述研究揭示了鸡MAVS在诱导I型干扰素产生中具有重要作用,为进一步研究禽类先天性免疫抗病毒途径奠定基础。 展开更多
关键词 mavS天然免疫 信号通路 IFN-Β
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关于MAV型织机送经机构的讨论
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作者 丁辛 邵俊 《棉纺织技术》 CAS CSCD 北大核心 1991年第3期12-15,共4页
本文介绍了法国MAV型刚性剑杆织机的送经机构,对经纱送出装置和经纱张力调节进行了分析和讨论。
关键词 织机 mav 送经机构
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MAV3104与鸟胞内分枝杆菌复合群耐克拉霉素作用研究
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作者 胡锦兴 彭德虎 +6 位作者 梁小朋 何司琪 韩建芳 吴碧彤 罗立全 冯永忠 林兆原 《广州医药》 2016年第4期1-5,共5页
目的研究鸟胞内分枝杆菌复合群(MAC)MAV3104基因编码蛋白与药物外排的关系。方法以MAC标准株基因组为模板,扩增MAV3104基因,构建p MV261-MAV3104c重组质粒;测序正确后,转化重组质粒到大肠杆菌DH5并在MAC标准株中诱导表达,Western Blot鉴... 目的研究鸟胞内分枝杆菌复合群(MAC)MAV3104基因编码蛋白与药物外排的关系。方法以MAC标准株基因组为模板,扩增MAV3104基因,构建p MV261-MAV3104c重组质粒;测序正确后,转化重组质粒到大肠杆菌DH5并在MAC标准株中诱导表达,Western Blot鉴定MAV3104表达;按照CLSIM24-A2的操作要求检测MAC标准株对克拉霉素的敏感性及外排泵抑制试验。结果经基因测序及Western Blot蛋白表达验证重组质粒构建成功;MAV3104过表达能提高鸟分枝杆菌对克拉霉素的MIC,且硫利达嗪能抑制该作用;MAV3104过表达也能提高胞内分枝杆菌对克拉霉素的MIC,但硫利达嗪对其没有抑制效应。结论 MAV3104转运蛋白介导的药物外排在鸟分枝杆菌耐克拉霉素中起重要作用。 展开更多
关键词 鸟胞内分枝杆菌复合群 mav3104 耐药 克拉霉素
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一种新的MAV航姿控制系统的研究
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作者 张丹彤 《核电子学与探测技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1398-1403,共6页
阐述基于iMEMS技术的MAV飞行控制系统设计方案。在MAV导航中,导出四元数与捷联矩阵的转换关系,提出一种新型控制算法。利用Smith预估器补偿受控过程的纯滞后作用,模糊推理控制器实时调整PID参数,以优化系统动态响应性能指标,改善控制器... 阐述基于iMEMS技术的MAV飞行控制系统设计方案。在MAV导航中,导出四元数与捷联矩阵的转换关系,提出一种新型控制算法。利用Smith预估器补偿受控过程的纯滞后作用,模糊推理控制器实时调整PID参数,以优化系统动态响应性能指标,改善控制器性能。仿真结果表明,所设计的MAV微型飞行系统具有理想的动态调节性能、较强的抗干扰性,同时符合飞控系统的高精度、小型化、数字化发展趋势,具有很好的应用前景。 展开更多
关键词 iMEMS传感器 mav 航姿控制
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具有反馈的启动-关闭型Geom^X/G/1(MAV)排队
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作者 贾松芳 陈彦恒 刘金魁 《重庆三峡学院学报》 2011年第3期35-40,共6页
文章研究具有反馈的启动-关闭型GeomX/G/1(MAV)排队模型,给出了系统稳态队长和等待时间的母函数及其它们的随机分解结果,并分析系统的忙期,讨论了特例,并推导出一些结论.
关键词 伯努利反馈 mav-多级适应性休假 批量到达 启动-关闭 随机分解 离散时间排队
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p21对MAVS通路的调节 被引量:2
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作者 孙婷 苏文莉 +4 位作者 白吉伟 凌焱 袁静 李咏梅 何湘 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期832-834,共3页
目的:研究MAV S与p21的相互作用,对MAVS通路的调节。方法:我们首先通过PCR的方法克隆了全长的p21基因,然后通过co-IP方法进一步验证p21与MAVS是否可以发生相互作用,接下来通过荧光素酶报道基因的方法研究p21对MAVS通路的影响。结果:通过... 目的:研究MAV S与p21的相互作用,对MAVS通路的调节。方法:我们首先通过PCR的方法克隆了全长的p21基因,然后通过co-IP方法进一步验证p21与MAVS是否可以发生相互作用,接下来通过荧光素酶报道基因的方法研究p21对MAVS通路的影响。结果:通过co-IP发现p21与MAVS可以发生相互作用,另外p21降低MAVS活性。结论:成功地克隆了p21基因,p21与MAVS在293T细胞内可以发生相互作用,p21可以抑制MAVS激活NF-κB途径和IFN-β途径的活性,为进一步研究p21在MAVS通路中所起的作用奠定基础。 展开更多
关键词 P21 mavS 蛋白相互作用
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MAV/UAV task coalition phased-formation method 被引量:9
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作者 JIAO Zhiqiang YAO Peiyang +2 位作者 ZHANG Jieyong ZHONG Yun WANG Xun 《Journal of Systems Engineering and Electronics》 SCIE EI CSCD 2019年第2期402-414,共13页
The formation of the manned aerial vehicle/unmanned aerial vehicle(MAV/UAV) task coalition is considered. To reduce the scale of the problem, the formation progress is divided into three phases. For the task clusterin... The formation of the manned aerial vehicle/unmanned aerial vehicle(MAV/UAV) task coalition is considered. To reduce the scale of the problem, the formation progress is divided into three phases. For the task clustering phase, the geographical position of tasks is taken into consideration and a cluster method is proposed. For the UAV allocation phase, the UAV requirement for both constrained and unconstrained resources is introduced, and a multi-objective optimal algorithm is proposed to solve the allocation problem. For the MAV allocation phase, the optimal model is firstly constructed and it is decomposed according to the ideal of greed to reduce the time complexity of the algorithm. Based on the above phases, the MAV/UAV task coalition formation method is proposed and the effectiveness and practicability are demonstrated by simulation examples. 展开更多
关键词 TASK coalition FORMATION TASK clustering unmanned AERIAL vehicle (UAV) ALLOCATION manned AERIAL vehicle (mav) ALLOCATION
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Analysis on MAV/UAV cooperative combat based on complex network 被引量:20
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作者 Jie-ru Fan Dong-guang Li +1 位作者 Ru-peng Li Yue Wang 《Defence Technology(防务技术)》 SCIE EI CAS CSCD 2020年第1期150-157,共8页
A formation model of manned/unmanned aerial vehicle(MAV/UAV) collaborative combat can qualitatively and quantitatively analyze the synergistic effects.However,there is currently no effective and appropriate model cons... A formation model of manned/unmanned aerial vehicle(MAV/UAV) collaborative combat can qualitatively and quantitatively analyze the synergistic effects.However,there is currently no effective and appropriate model construction method or theory,and research in the field of collaborative capability evaluation is basically nonexistent.According to the actual conditions of cooperative operations,a new MAV/UAV collaborative combat network model construction method based on a complex network is presented.By analyzing the characteristic parameters of the abstract network,the index system and complex network are combined.Then,a method for evaluating the synergistic effect of the cooperative combat network is developed.This method provides assistance for the verification and evaluation of MAV/UAV collaborative combat. 展开更多
关键词 Complex NETWORK Stochastic NETWORK mav/UAV COLLABORATIVE COMBAT Evaluation
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猪MAVS基因原核表达载体的构建及其多克隆抗体的制备
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作者 赵倩楠 应雪 +4 位作者 李晓泉 张珂 李晓宁 梁晶晶 罗廷荣 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第4期39-42,共4页
通过RT-PCR从PK-15细胞系中扩增克隆MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,构建原核表达载体p ET-MAVS220,转化感受态细胞Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达,重组MAVS经纯化后免疫4周龄昆明系小鼠制备抗线粒体抗病病毒信... 通过RT-PCR从PK-15细胞系中扩增克隆MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,构建原核表达载体p ET-MAVS220,转化感受态细胞Rosetta(DE3),利用IPTG诱导表达,重组MAVS经纯化后免疫4周龄昆明系小鼠制备抗线粒体抗病病毒信号蛋白(MAVS)多克隆抗体。诱导表达的最佳条件为IPTG 0.05 mmol/L,37℃诱导6 h,重组MAVS以可溶性蛋白和包涵体两种形式表达。应用该重组蛋白免疫小鼠获得的抗MAVS多克隆抗体与纯化的重组MAVS蛋白反应效价可达1∶16 000;该抗体与Poly(I∶C)刺激PK-15细胞产生的MAVS及与转染了重组MAVS基因真核表达载体pcDNA3.0-MAVS的BHK-21细胞表达的MAVS蛋白发生特异性反应,效价可达1∶1 000,特异性良好。 展开更多
关键词 mavS 原核表达 多克隆抗体
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绵羊MAVS基因的原核表达及多克隆抗体的制备
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作者 董丹丹 刘腾 +2 位作者 缪秋红 朱杰 刘光清 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2019年第5期28-31,共4页
通过RT-PCR方法从绵羊肺细胞(sheep lung cells,SLT)扩增获得MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a,测序鉴定结果表明成功获得重组质粒pET-32a-MAVS。将其转化至感受肽细胞BL21中,经I... 通过RT-PCR方法从绵羊肺细胞(sheep lung cells,SLT)扩增获得MAVS(mitochondrial antiviral signaling protein)基因,并将其克隆至原核表达载体pET-32a,测序鉴定结果表明成功获得重组质粒pET-32a-MAVS。将其转化至感受肽细胞BL21中,经IPTG诱导获得重组蛋白。将纯化的MAVS蛋白免疫BALB/c雌鼠,制备抗MAVS的鼠源多克隆抗体。SDS-PAGE结果表明该抗体具有良好的反应原性。MAVS多克隆抗体的成功制备为其生物学功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 mavS基因 原核表达 多克隆抗体
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