电针神庭、百会穴对MCAO/R大鼠γ-氨基丁酸受体Gabbr1表达的影响

目的通过观察电针神庭、百会穴对大脑中动脉缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion and reperfusion,MCAO/R)认知功能障碍大鼠海马区γ-氨基丁酸B受体gabbr1表达的影响,探讨电针改善MCAO/R大鼠学习记忆能力的可能机制。方法27只雄性健康SD大鼠随机分为假手术组、模型组、电针组;模型组、电针组采用longa线栓法制备MCAO/R模型,假手术组仅分离颈总、颈内及颈外动脉,不插入线栓,造模后通过longa五分法验证模型。电针组取神庭、百会穴在造模后24 h进行干预,治疗7 d;干预第3 d采用Morris水迷宫实验检测各组大鼠学习记忆能力,为期4 d;干预第7 d断头取大鼠完整海马组织,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测各组大鼠海马组织中gabbr1 mRNA的表达。结果与假手术组相比,模型组水迷宫实验的第三象限距离比显著减小(P<0.05),穿越平台次数减少(P<0.01);与模型组相比,电针组经治疗后第三象限距离比扩大(P<0.05),穿越平台次数增加(P<0.05)。与假手术组相比,模型组海马区gabbr1 mRNA表达量显著增高(P<0.01);与模型组相比,电针组海马区gabbr1 mRNA表达降低(P<0.01)。结论电针神庭、百会穴能改善脑缺血再灌注大鼠的学习记忆能力,其机制可能与调节gabbr1 mRNA在海马中的表达有关。

针刺人中穴对MCAO大鼠中枢神经系统神经干细胞增殖影响的研究

[目的]探讨针刺人中穴治疗缺血性脑卒中的神经发生机制。[方法]用BrdU+/nestin+免疫荧光双标和蛋白免疫印迹法观察针刺对线栓法大鼠大脑中动脉阻断实验模型(MCAO)大鼠大脑新生神经细胞及皮质、海马、纹状体nestin蛋白表达量的变化的影响。[结果]针刺组MCAO大鼠BdrU+、nestin+和BrdU+/nestin+细胞数均高于正常组、假手术组和模型组(P<0.05),模型组高于正常组和假手术组(P<0.05);针刺组nestin在海马和皮质的表达量高于其他组别(P<0.05)。[结论]缺血缺氧能引起MCAO大鼠脑神经干细胞的增殖,而针刺人中穴能增强神经干细胞增殖作用,促进大脑功能的修复。

针刺对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞活化及炎症介质含量的影响

目的研究针刺对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞活化及TNF-α、IL-1β、IL-6含量的影响。方法建立MCAO大鼠模型,分别针刺内关、曲池后进行神经体征评分,HE染色检测神经元坏死率,ELISA法检测脑组织炎症介质含量,IBA1免疫荧光染色检测小胶质细胞活化。结果与假手术对照组相比,模型对照组大鼠神经体征评分、脑海马神经元坏死率、脑组织TNF-α、IL-1β、IL-6含量、IBA1表达均明显升高(P<0.01);与模型对照组相比,内关组、曲池组神经体征评分、脑海马神经元坏死率、IL-1含量、IBA1表达明显降低,曲池组TNF-α、IL-6含量明显降低(P<0.05)。结论针刺内关、曲池能改善MCAO大鼠的神经功能损伤,抑制小胶质细胞活化,降低炎症介质含量,提示针刺可能通过影响小胶质细胞活化从而调控脑缺血继发的炎症反应。

清开灵有效组分对MCAO大鼠脑微血管内皮细胞的影响

目的:观察脑缺血后不同时间段MCAO大鼠血浆ET-1、TXB_2、6-keto-PGF_1α、vWF表达水平及清开灵注射液有效组分黄芩苷、栀子苷、胆酸、珍珠母水解液对其表达的影响,探讨不同组分对脑缺血后微血管内皮功能状态干预的作用环节。方法:采用大鼠MCAO模型,用放免法检测脑缺血12h及24h血浆ET-1、TXB_2、6-keto-PGF_1α含量,ELISA法检测不同时段血浆vWF的含量。结果:血浆ET-1含量在不同时段均升高,各有效组分于缺血12h未表现有意义的生物效应,合方、栀子苷阻抑缺血24h血浆ET-1高表达;血浆TXB_2含量在缺血12h显著升高,除合方外有效组分均有阻抑其高表达作用,其中珍珠母作用更显著,至缺血24h,MCAO大鼠TXB_2表达与正常组差异不显著,黄芩苷、合方能较强的抑制其表达;血浆6-keto-PGF_1α含量在缺血后两个时段均显著降低,黄芩苷可升高缺血12h血浆6-keto-PGF_1α水平,珍珠母可升高缺血24h血浆6-keto-PGF_1α水平,胆酸于两个时段均发挥有意义的生物效应;TXB_2/6-keto-PGF_1α比值在不同时段均显著升高,栀子苷、胆酸、黄芩苷、合方能降低缺血12h其比值,黄芩苷、合方能降低而栀子苷可升高缺血后24h其比值;血浆vWF水平于缺血后不同时间段均显著升高,珍珠母在不同时段均有阻抑作用,黄芩苷阻抑缺血12h vWF释放。

针刺水沟穴抑制MCAO大鼠海马区神经细胞坏死的作用研究

目的:对比针刺水沟穴与水沟旁非穴对MCAO大鼠海马区坏死神经元作用。方法:将72只健康雄性Wistar大鼠按照随机数字表分为正常组、假手术组、模型对照组、非针刺组、水沟旁组、水沟组6组,每组12只。模型对照组、水沟旁组、水沟组参照Zea-Longa线栓法复制大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO)。水沟旁组、水沟组以频率180次/min、持续5s进行针刺干预。观察大鼠神经行为学,血流量,脑梗死面积比率,以及海马区神经细胞坏死率。结果:水沟组分别与非针刺组和水沟旁组比较差异都具有显著差异性P<0.05,而增加血流量方面水沟组也明显优于水沟旁组P<0.01。水沟旁组与非针刺组无显著性差异(P>0.05)。结论:针刺水沟穴抑制MACO大鼠神经细胞坏死,增加血流量从而降低梗死面积,而水沟旁无此作用.

MCAO模型大鼠中医证候研究

目的:探讨大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠中医证候。方法:SD大鼠70只随机分为正常组、假手术组、手术组,假手术组与手术组按不同时间分为6 h、48 h、72 h组,每组10只。以大脑中动脉栓塞法建立MCAO大鼠模型,分别在手术完成后6 h、48 h、72 h时观察大鼠的一般状况、Zea-longa神经功能评分、放射免疫法检测大鼠血清皮质酮(cortisone,CORT)水平,光镜下观察大鼠脑组织形态结构变化。结果:模型大鼠偏瘫症状明显,行走呈顺钟向追尾状,甚则向一侧倾倒;精神萎靡、活动减少、身体蜷缩、体质量明显下降、舌质紫暗、神经功能Zea-longa评分明显增高,血清CORT水平明显增高,脑组织形态结构发生明显改变。结论:MCAO大鼠存在明显的肾虚血瘀证证候。

内关穴捻转手法干预MCAo大鼠的针刺时间和频率的正交优化研究

目的:筛选针刺内关穴并采用捻转手法改善大脑中动脉阻塞模型(MCAo)Wistar大鼠脑血流量的针刺频率和时间优化方案。方法:参照Zea-Longa线拴法复制Wistar大鼠MCAo模型,按正交设计分9组并分别施以频率1、2、3次/s,时间5、60、180s不同组合下的针刺干预,以大鼠梗塞侧脑血流量为评价效应指标。结果:内关穴的针刺时间和频率均是改善MCAo模型Wistar大鼠脑血流量显著因素(P<0.05),针刺频率与时间的最优搭配是3次/s,60s。结论:内关穴针刺时间和频率均是改善MCAo模型大鼠脑血流量的显著因素,且针刺频率和时间存在最优搭配方案。

针刺对MCAO大鼠神经功能恢复及脑微循环血流量的影响

目的:探讨针刺内关穴、曲池穴连续治疗7d,对大脑中动脉栓塞(MCAO)模型大鼠神经功能恢复及脑微循环血流量的影响。方法:采用线栓法建立MCAO大鼠模型,连续针刺内关穴、曲池穴7d,通过神经行为学评分、走横木实验(BWT)评价MCAO模型大鼠神经功能的恢复情况,利用激光多普勒微循环分析仪检测MCAO模型大鼠软脑膜微循环血流量的变化。结果:连续针刺内关穴、曲池穴7d能够显著改善MCAO模型大鼠神经功能损伤,促进其运动功能的恢复;针刺曲池穴与针刺内关穴的效应无显著性差异。连续针刺曲池穴、内关穴7d能够显著增加MCAO模型大鼠软脑膜微循环血流量。结论:针刺内关穴、曲池穴能够有效改善MCAO模型大鼠神经功能损伤,增加其脑微循环血流量,这可能是针刺治疗脑缺血的作用机制之一。

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠HPA轴影响的实验研究

目的:通过对MCAO模型大鼠缺血不同时点及地黄饮子灌胃后HPA轴水平的检测,观察其变化特点及地黄饮子的干预效应。方法:采用放射免疫分析法测定MCAO模型大鼠缺血后6h、48h和灌胃地黄饮子7d后的血浆HPA轴水平。结果:①脑缺血6h时模型组HPA轴水平低于正常组,其功能呈抑制状态;②脑缺血48h时,模型组ACTH、COR的含量较正常组明显升高,CRH含量进一步降低;③地黄饮子能够提高MCAO模型大鼠CRH、ACTH的血浆含量并降低COR的含量。结论:地黄饮子加减方能够提高MCAO模型大鼠CRH、ACTH的血浆含量并降低COR的含量,通过改善HPA轴功能的紊乱在脑缺血急性期发挥保护作用。

清开灵注射液不同时间给药对MCAO小鼠血清SOD的影响

目的:研究清开灵注射液不同时间给药对MCAO小鼠血清SOD的影响。方法:将60只昆明小鼠随机分为6组:假手术组、模型组、0h给药组、1h给药组、3h给药组、4h给药组,每组10只。线栓法制备局灶脑缺血模型,采用C lark评分方法进行神经功能评分,用TTC法测定脑梗塞体积。采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD活力。结果:缺血同时及缺血后1h、3h、4h给予清开灵注射液治疗,均能显著减少梗塞体积,局灶功能损伤均有显著恢复。清开灵注射液不同时间点给药,均可显著增加血清SOD的含量,并且1h给药时作用最明显。结论:清开灵注射液对脑缺血再灌小鼠有保护作用,抗氧化作用是其机制之一。

线栓法制备MCAO模型大鼠的经验体会

线栓法制备大鼠局灶性脑缺血模型具有不开颅、损伤小、重复性高等优点,是制备该模型最常用的方法,但目前仍存在很多因素的制约,如技术要求高、模型成功率和存活率较低、术后差异较大等,这些都是亟待解决的问题。笔者从实验动物的选择、术前禁食与否、麻醉剂的选择、线栓制备、手术操作、护理及并发症7个方面对模型制备进行探讨,以期能为各位同仁提供参考。

电针对MCAO大鼠脑小胶质细胞TLR4及NF-κB p65蛋白表达的调控研究

目的研究电针对MCAO大鼠脑组织小胶质细胞TLR4及NF-κB蛋白表达的影响。方法建立MCAO大鼠模型,分别电针内关、曲池后进行神经体征评分,HE染色检测神经元坏死率,双重免疫荧光染色检测TLR4、NF-κB p65蛋白在小胶质细胞的表达。结果模型组与正常组比较,大鼠神经体征评分、脑海马神经元坏死率、脑组织TLR4、NF-κB p65蛋白表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);内关组、曲池组与模型组比较,神经体征评分、脑海马神经元坏死率、TLR4、NF-κB p65蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);曲池组与地机组比较,脑海马神经元坏死率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05);内关组与地机组比较,大鼠脑组织小胶质细胞TLR4蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论电针内关、曲池能改善MCAO大鼠的神经功能损伤,抑制TLR4及NF-κB蛋白在小胶质细胞的表达,提示电针能够通过影响小胶质细胞TLR4/NF-κB信号通路的活化从而发挥脑保护作用。

不同频率针刺内关穴对MCAo模型大鼠脑血流量的影响

目的:研究不同频率针刺内关穴对大脑中动脉阻塞模型(middle cerebral artery obstruction,MCAo)大鼠脑血流量的作用及机制。方法:参照Zea-longa线栓法复制MCAo模型。成年雄性Wistar大鼠144只随机分为正常组、非针刺组、非穴组、内关组,后两者又按60次/分钟、120次/分钟、180次/分钟各分3组。针刺每次行针5秒钟,每天2次,共3天。观察指标为脑血流量、软脑膜微循环管径和脑组织微血管数。结果:针刺内关穴比非穴能明显提高MCAo模型大鼠脑血流量,扩张软脑膜微循环管径,增加脑组织微血管数,差异有统计学意义(P<0.01),且内关120次/分钟组、180次/分钟组与60次/分钟组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论:针刺内关穴能提高MCAo大鼠局部脑血流量且其提高脑血流量作用可能与扩张软脑膜微循管径,增加脑组织微血管数有关。与非穴相比,针刺内关对MCAo大鼠脑血流量的影响作用具有特异性且与不同针刺频率有关,在行针时间为5秒前提下,120次/分钟、180次/分钟比60次/分钟频率针刺更能提高其脑血流量。

电针对MCAO大鼠脑内GAP-43和突触囊泡蛋白表达的影响

方法:将实验大鼠分为假手术组、缺血再灌组和缺血再灌+电针组,大脑中动脉线栓（MCAO）造成局灶性缺血90min,电针组在缺血后立即给予电针1h,以后每天1次。在缺血再灌1,7和14天分别处死,进行免疫组织化学染色。结果:GAP-43和突触囊泡蛋白主要在缺血灶周围的皮质表达。在再灌后7和14天后电针组GAP-43和突触囊泡蛋白免疫阳性细胞数高于缺血再灌组（P<0.05）。结论:电针能够提高GAP-43和突触囊泡蛋白在缺血灶周围皮质的表达,从而促进缺血后轴突的出芽和突触的形成,提高了缺血后神经元可塑性。

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血浆HPA轴及脑组织HSP70表达的干预效应研究

目的探讨地黄饮子加减方对大脑中动脉线栓(middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型大鼠血浆下丘脑—垂体—肾上腺轴(HPA轴)含量及其脑组织热休克蛋白70(heatshock protein 70,HSP70)表达的干预效应。方法 MCAO法制作SD大鼠脑缺血模型,造模成功后第二天开始给予地黄饮子加减方浓缩煎剂灌胃,对照组灌胃等量的生理盐水,连续7天,于最后一次灌胃后1小时取材,放射免疫法检测血浆HPA轴含量,免疫组化法检测脑组织HSP70表达。结果经地黄饮子治疗后:MCAO模型大鼠血浆皮质醇(COR)含量明显低于正常组、模型组,差异有统计学意义(P<0.01),促肾上腺皮质激素(ACTH)、促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)含量均明显高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05);地黄饮子组较模型组脑组织的HSP70表达更为明显,差异有统计学意义(P<0.01);模型组COR含量与脑组织HSP70表达存在显著的正相关关系,CRH、ACTH含量则与HSP70表达无明显相关性,地黄饮子组HPA轴各指标与脑组织HSP70表达无明显相关性。结论地黄饮子加减方可能通过纠正HPA轴的紊乱状态、提高大鼠脑组织HSP70表达等途径在脑缺血急性期发挥神经保护作用。

清脑益髓调督法对MCAO大鼠脑组织中ephrinB2 mRNA表达的影响

目的探讨清脑益髓调督法电针治疗脑梗死的作用途径,丰富脑梗死病机研究及针刺干预机制。方法选用健康SD大鼠96只,随机分为正常空白组(假手术组)、阴性对照组(模型组)、电针Ⅰ组(清脑益髓调督组)和电针Ⅱ组(普通电针组)。相应实验处理后,采用RT-PCR检测ephrin B2 mRNA的表达率。结果各组大鼠ephrin B2 mRNA表达率的比较:假手术组各时相上呈弱阳性表达,无显著性差异(P>0.05);模型组表达率随着时间的延长而增高,3d、7d组优于1d组(P<0.05),14d组明显优于1d组及假手术组(P<0.01),7d组表达高于3d组,但无显著性差异(P>0.05);普通电针组,3d、7d、14d组明显优于1d组(P<0.05),以7d组最为显著(P<0.01),7d组与14d组无显著性差异(P>0.05);清脑益髓调督组,7d、14d组优于1d组(P<0.05),治疗3d组明显优于其他三个时相,并且优于普通电针组(P<0.01),7d组与14d组比较,无显著性差异(P>0.05)。结论针刺疗法能够促进血管新生,早期采用清脑益髓调督法治疗急性脑梗死疗效更优,其作用机制可能是通过上调ephrin B2 mRNA的表达,从而促进毛细血管新生、缺血区周围组织灌流和神经功能恢复。

地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血清HPA轴及其脑组织细胞凋亡表达的干预效应研究

目的探讨地黄饮子加减方对MCAO模型大鼠血清HPA轴含量及其脑组织细胞凋亡表达的干预效应。方法 MCAO法制作SD大鼠脑缺血模型,造模成功后第二天开始给予地黄饮子加减方浓缩煎剂灌胃,对照组灌胃等量的生理盐水,连续7天,于最后一次灌胃后1小时取材,放射免疫法检测血清HPA轴含量,TUNEL免疫组化法检测脑组织细胞凋亡表达。结果经地黄饮子治疗后:MCAO模型大鼠血清COR含量明显低于正常组、模型组,差异有显著统计学意义(P<0.01),ACTH、CRH含量均明显高于模型组,差异有显著统计学意义(P<0.05),缺血侧脑组织细胞凋亡表达较模型组明显减少,差异有显著统计学意义(P<0.01)。结论地黄饮子加减方能够通过纠正HPA轴的紊乱状态、抑制脑组织细胞凋亡表达等作用机制在脑缺血急性期发挥减轻脑损伤、改善预后的作用。

养血清脑颗粒对MCAO模型大鼠神经功能保护机制研究

目的 :探讨养血清脑颗粒对MCAO大鼠脑损伤的保护机制。方法 :选用 2 2月龄纯种健康大白鼠 ,采用线栓法阻塞大脑中动脉诱发脑缺血模型 ,治疗组给以养血清脑颗粒治疗 ,对照组和假手术组则给以等量生理盐水灌胃。结果 :治疗组可以显著减轻模型鼠神经缺损症状 ,改善阻断侧额顶区脑电图波幅降低和频率减慢 ;脑组织形态学观察发现 ,缺血区星形细胞增殖明显 ,神经元较对照组仅轻度减少。脑血流量也有显著改善 ,血中GSH、GSH PX水平升高 ,MDA水平则受抑制而降低。结论 :养血清脑颗粒对脑缺血损伤的保护机制是多方面的 ,而增强星形细胞活性 ,保护神经元缺血性损害 ,改善脑血流量及抗自由基损伤是其治疗缺血性脑损伤的主要机制之一。

额尔敦-乌日勒对MCAO/R大鼠脑前额叶皮质BDNF及NGF表达的影响

目的:探讨额尔敦-乌日勒对大脑中动脉阻塞/再灌注损伤(Middle Cerebral Artery Occlusion/Reperfusion,MCAO/R)大鼠皮质脑源性神经营养因子(Brain-Derived Neurotrophic Factor,BDNF)及神经生长因子(Nerve Growth Factor,NGF)的影响。方法:取清洁级健康SD大鼠60只,随机分为假手术组、模型组、尼莫地平片组、额尔顿-乌日勒组,采用改良Zea-Longa法,制备MCAO/R模型。实验结束后,各组大鼠麻醉、取脑,采用HE染色、SP等免疫组化方法评价脑组织病理形态学的改变情况,并且采用双抗夹心ELISA法和荧光定量RT-PCR法检测大鼠脑前额叶皮质BDNF m RNA、NGF m RNA相对表达量及其蛋白含量。结果:与模型组相比,额尔敦-乌日勒组大鼠脑前额叶皮质坏死细胞数显著减少(P<0.05),BDNF、NGF蛋白含量及m RNA表达明显增加(P<0.05)。结论:额尔敦-乌日勒可上调MCAO/R大鼠脑前额叶皮质BDNF、NGF表达,促进星形胶质细胞活化,从而保护神经元,进而起到脑保护作用,这可能是额尔敦-乌日勒治疗"白脉"病的传统功效机制之一。

醒脑开窍针刺法主穴内关对脑缺血模型(MCAO)大鼠脑神经细胞坏死的抑制作用研究

目的:分别从光镜和电镜两个角度探讨内关穴与非穴对脑缺血模型(MCAO)大鼠神经细胞坏死的抑制作用。方法:参照Zea-Longa线拴法复制大鼠大脑中动脉缺血模型(MCAO),分别对"醒脑开窍"针刺法主穴内关以及非穴(胁下非经非穴点),施以频率180次/s,持续时间5s的针刺干预,以光镜下神经细胞坏死率及电镜下神经细胞坏死程度作为评价效应指标。结果:光镜下,与模型对照组相比,非针刺组和非穴组神经细胞坏死率均无统计学意义(P>0.05),而内关组的神经细胞坏死率明显降低,且有统计学意义(P<0.05)。电镜下,非针刺组和非穴组神经细胞超微结构接近模型对照组,表现为神经细胞的高度水肿及细胞器的严重破坏;内关组则接近正常组和假手术组,神经细胞破坏程度均较低。结论:针刺内关可抑制MCAO大鼠神经细胞坏死,保护神经元,具有穴位特异性。