左归降糖舒心方调控自噬对糖尿病转基因MKR鼠心肌损伤的影响

目的 通过观察左归降糖舒心方对骨骼肌胰岛素样生长因子1及胰岛素双受体功能缺失(mouse overexpressing a dominant-negative IGF-I receptor specifically in muscle,MKR)糖尿病心肌病小鼠的自噬标志蛋白Beclin-1表达的影响,研究调控自噬水平对糖尿病心肌损伤的保护作用机制。方法 C57 BL小鼠设作正常组,普通饲料喂养,MKR小鼠采用高脂饲养(high-fat diet,HFD)联合多次链脲佐菌素(streptozocin,STZ)腹腔注射造模后,随机分为模型组、左归降糖舒心方组(中药组)、雷帕霉素组、3-甲基腺嘌呤(3-Methyladenine,3-MA)组、盐酸二甲双胍片+马来酸依那普利片组(西药组),药物干预28 d。记录小鼠一般情况及空腹血糖(fasting blood glucose,FBG);ELISA检测肌钙蛋白I(cardiac troponin I,cTnI)和肌酸激酶同工酶(creatine kinase isoenzymes,CKMB)以评价心肌损伤程度;透射电镜观察心肌形态结构的改变及自噬体;免疫组化检测心肌胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ以评估心肌纤维化程度;免疫荧光检测自噬标志蛋白Beclin-1表达。结果 与正常组比较,模型组小鼠多饮多食多尿,FBG升高明显(P<0.01),cTnI、CK-MB水平及胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ的阳性表达均显著升高(P<0.01),Beclin-1蛋白表达明显下降(P<0.01);电镜下心肌细胞紊乱,各细胞器形态显著改变。与模型组比较,中药组小鼠FBG降低(P<0.01),cTnI、CK-MB水平与胶原蛋白Ⅰ、胶原蛋白Ⅲ表达均下降(P<0.01),Beclin-1蛋白表达增强(P<0.01);心肌细胞形态明显改善。中药组小鼠胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达显著低于西药组(P<0.01)。与模型组比较,3-MA组小鼠Beclin-1蛋白表达减弱(P<0.01), cTnI、CK-MB水平及胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达水平升高(P<0.01)。与模型组比较,雷帕霉素组小鼠Beclin-1蛋白表达增强(P<0.01), cTn I、CK-MB水平及胶原蛋白Ⅰ、Ⅲ表达水平下降(P<0.01)。结论 左归降糖舒心方可能通过上调自噬水平,减轻MKR糖尿病心肌病小鼠的心肌纤维化、改善心肌损伤,延缓糖尿病心肌病的进展。

降糖益肾方干预胰岛素信号通路改善转基因2型糖尿病MKR鼠肾损伤的研究

目的观察降糖益肾方对高脂饮食转基因2型糖尿病MKR鼠血糖、血胰岛素及肾皮质中胰岛素受体、磷脂酰肌醇-3-激酶蛋白表达的影响。方法选取MKR鼠40只经鉴定后,随机分为MKR鼠组、MKR鼠高脂组、降糖益肾方组和糖适贝那组。MKR鼠组用基础饲料喂养,MKR鼠高脂组、降糖益肾方组和糖适贝那组用高脂饲料喂养,连续喂养8周后,降糖益肾方组给予降糖益肾方,糖适贝那组给予糖适平加贝那普利,同时MKR鼠组和MKR鼠高脂组分别给予蒸馏水灌胃4周。4周后处死小鼠收集标本,免疫组织化学SABC法检测肾小球中胰岛素受体1(IRS-1)、磷脂酰肌醇-3-激酶(PI-3K)的蛋白表达。结果降糖益肾方明显降低高脂饮食MKR鼠肾小球中IRS-1和PI-3K的蛋白表达水平,与MKR鼠高脂组比较,差异有统计学意义(P<0.01)。结论降糖益肾方改善糖尿病肾病系膜细胞增殖的机制可能与干预胰岛素信号通路有关。

转基因2型糖尿病MKR鼠心肌NADPH氧化酶和一氧化氮合酶表达的变化

目的糖尿病心肌病与氧化应激及NOS密切相关,研究骨骼肌胰岛素样生长因子1受体及胰岛素受体功能缺失转基因2型糖尿病MKR鼠的心肌NADPH氧化酶和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)表达的变化。方法转基因2型糖尿病MKR鼠和C57BL/6野生小鼠各10只,透射电镜观察小鼠心肌形态学改变;比色法测定心肌中总抗氧化能力(T-OAC),丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性;全自动生化分析仪检测血清心肌酶肌酸激酶同工酶(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性;Western blot及免疫组织化学检测NADPH氧化酶亚基P47phox和eNOS在心肌中的表达。结果透射电镜下可见正常C57BL/6野生鼠心肌纤维排列整齐,线粒体浓密;MKR模型组心肌细胞周围水肿,部分肌节断裂消失,z线模糊或消失,心肌细胞线粒体部分嵴部分膜断裂或消失。与C57BL/6野生鼠比较,MKR小鼠心肌组织MDA含量显著升高(P<0.01),而T-OAC及SOD和GSH-Px活性显著下降(P<0.01),MKR小鼠血清心肌酶CK-MB和LDH活性均显著升高(P<0.01);MKR小鼠心肌NADPH氧化酶亚基p47phox蛋白表达上升(P<0.05),心肌eNOS蛋白表达显著降低(P<0.05)。结论转基因2型糖尿病鼠心肌NADPH氧化酶亚基p47phox表达上调,eNOS蛋白表达下调,氧化应激加剧,引起心肌线粒体和心肌细胞损伤,提示抗氧化治疗可延缓糖尿病心肌病的发展,同时MKR鼠可为糖尿病心肌病的防治研究提供良好的技术平台。

降糖益肾方对MKR鼠2型糖尿病肾病早期的保护作用

目的探讨滋阴益气、补肾活血解毒法组方(降糖益肾方)对MKR转基因小鼠2型糖尿病肾病早期的保护作用。方法15周龄MKR鼠24只,根据性别和空腹血糖分层,随机分为3组,即模型组、中药组[降糖益肾方16.72g/(kg·d)]、西药组[格列喹酮4.33mg/(kg·d)+贝那普利1.44mg/(kg·d)],同期另设C57BL/6野生型小鼠为正常组。用药组分别给予相应剂量药物灌胃,模型组和正常组给予等容量蒸馏水灌胃。30d后,同步观察各组小鼠的空腹血糖、尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白(ELISA法)的含量,电镜观测肾脏病理改变。结果给药30d后,降糖益肾方能显著降低MKR鼠空腹血糖、尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白的排泄,与给药前比较,P<0.01;与模型组比较,P<0.01。电镜结果显示:降糖益肾方组肾小球基底膜增厚减轻,系膜区基质堆积减少。结论降糖益肾方能显著改善MKR鼠空腹血糖、降低尿微量白蛋白和尿β2-微球蛋白的含量、改善肾脏的病理损害,从而延缓MKR鼠肾脏病变的进一步发展。

左归降糖清肝方对MKR鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝损伤的影响

目的探讨左归降糖清肝方对2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病MKR鼠肝组织FOXO1、FASL表达的影响,进一步证实左归降糖清肝方治疗糖尿病非酒精性脂肪肝病变的科学依据。方法选取8周龄高脂饲养的MKR小鼠40只,雌雄各半,随机分为模型组(Model组)、左归降糖清肝方低剂量组(ZGJTQGF-L组:左归降糖清肝方7.4 g·kg^(-1))、左归降糖清肝方高剂量组(ZGJTQGF-H组:左归降糖清肝方14.8 g·kg^(-1))、二甲双胍组(Met组:二甲双胍67×10^(-3)g·kg^(-1)),每组10只,另设10只FVB小鼠作为正常组(Control组),予普通饲料喂养。药物干预治疗28 d后,检测空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST),HE染色及电镜观察肝组织形态结构及病理变化,Western Blot检测肝组织FOXO1、FASL的蛋白表达水平,PCR定量检测肝组织FASL、FOXO1的mRNA表达含量。结果与正常组比较,模型组FBG、ALT、AST、TG、TC显著升高;与正常组比较,模型组FASL、FOXO1蛋白表达量显著升高,FASL mRNA表达量显著升高(P<0.05);与模型组比较,中药组与西药组血糖显著降低(P<0.05);中药组与西药组之间差异无统计学意义(P>0.05),中药组与西药组ALT、AST显著降低(P<0.05);中药组高、低剂量之间差异无统计学意义(P>0.05),中药组与西药组TG、TC显著降低(P<0.05),中药组与西药组FASL、FOXO1蛋白表达量显著降低(P<0.01),中药组与西药组FASL、FOXO1的mRNA表达量显著降低(P<0.01),中药组与西药组之间FOXO1 mRNA表达量差异无统计学意义(P>0.05)。HE染色结果:与正常组比较,模型组肝细胞弥漫性脂肪变性,肝组织纤维化变化;与模型组比较,中药组与西药组均未出现明显的脂肪空泡现象,肿胀和纤维化的程度降低。电镜结果:与正常组比较,模型组肝细胞内积有很多脂肪,溶酶体被大量的脂肪颗粒包围;与模型组比较,西药组及中药组溶酶体外围均有少量或无脂肪颗粒,脂肪堆积显著减少。结论左归降糖清肝方通过下调FOXO1蛋白,降低FASL的蛋白表达,肝细胞凋亡率减少,延缓肝损伤,从而起到保护肝脏,治疗T2DM合并NAFLD的作用。

左归降糖舒心方调控TLR4/NF-κB通路抑制糖尿病心肌病小鼠心肌纤维化的机制研究

目的 基于Toll样受体4(Toll-like receptor 4,TLR4)/核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)信号通路探讨左归降糖舒心方对糖尿病心肌病MKR小鼠心肌纤维化及炎症因子的影响。方法 以8周龄雄性MKR小鼠为实验对象,采用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)40 mg/kg构建糖尿病心肌病模型,随机分为中药高剂量组[33.67 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、中药低剂量组[16.84 g/(kg·d)左归降糖舒心方2 g/mL]、西药联合组[0.23 g/(kg·d)二甲双胍联合1.5 mg/(kg·d)依那普利]和模型组(等容量蒸馏水);另设FVB小鼠为空白对照组(等容量蒸馏水)。每组10只,连续给药8周后取材。收集尾静脉血液检测空腹血糖水平;采用HE、Masson染色观察心肌病理改变,电镜观察心肌组织超微结构变化;采用ELISA检测小鼠血清肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)及白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)含量;采用Western blot法检测TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达情况;RT-qPCR及Western blot检测小鼠心肌组织Ⅰ型胶原(collagen type I,CollagenⅠ)、Ⅲ型胶原(collagen typeⅢ,CollagenⅢ)及α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)的表达水平。结果 与空白对照组比较,模型组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量增高(P<0.01);心肌细胞结构紊乱,胶原含量增加,心肌细胞重度退行性变;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA mRNA及蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01),中药高剂量组小鼠心肌组织CollagenⅠ、CollagenⅢ蛋白表达增加(P<0.01)。与模型组比较,中药高、低剂量组和西药联合组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均降低(P<0.01);心肌结构改善,胶原沉积减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达下调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达下调(P<0.01)。与西药联合组比较,中药低剂量组小鼠空腹血糖及血清中TNF-α、IL-1β含量均升高(P<0.01),心肌结构无明显改善,胶原沉积无显著减少;心肌组织中TLR4、NF-κB p56、p-NF-κB p56/NF-κB p56蛋白表达上调(P<0.01),CollagenⅠ、CollagenⅢ、α-SMA蛋白及mRNA表达上调(P<0.01)。结论 左归降糖舒心方能抑制心肌炎性反应、改善心肌细胞结构,其作用机制可能与调控TLR4/NF-κB通路、下调细胞炎症因子表达、抑制心肌纤维化有关。

左归降糖舒心方对转基因2型糖尿病MKR鼠心肌损伤的保护作用

目的研究左归降糖舒心方对转基因2型糖尿病MKR鼠心肌损伤的保护作用。方法以MKR鼠为研究对象,ig左归降糖舒心方对其进行30 d治疗,设野生C57BL/6鼠同期对照。用透射电镜观察小鼠心肌形态学改变;比色法测定心肌中丙二醛(MDA)的量和超氧化物歧化酶(SOD)的活性;全自动生化分析仪检测心功能指标肌酸激酶同工酶(CKMB)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果经左归降糖舒心方治疗后,MKR鼠心肌组织形态学病变减轻,心肌细胞线粒体嵴部分消失,肌纤维排列较整齐;心肌组织MDA量下降(P<0.05、0.01),SOD活性升高(P<0.01),且呈剂量依赖性;血清CKMB和LDH活性下降(P<0.05、0.01),且呈剂量依赖性。结论左归降糖舒心方可通过抗脂质过氧化,对MKR转基因2型糖尿病MKR鼠心肌产生保护作用。

左归降糖清脂方对2型糖尿病转基因MKR鼠脂肪肝发生的影响

目的:探讨左归降糖清脂方对2型糖尿病转基因MKR鼠脂肪肝发生的影响。方法:30只MKR鼠随机分为MKR组、MKR高脂组和左归降糖清脂方组;左归降糖清脂方组以生药29.64 g.kg-1 ig干预治疗高脂饮食诱发脂肪肝的MKR鼠,观察其肝脏病理形态、血糖、血胰岛素、肝功能和血脂变化。结果:高脂饲料诱发MKR鼠形成非酒精性脂肪肝,肝细胞有大小不一的脂滴,呈脂肪性变;MKR高脂组小鼠空腹血糖、血胰岛素、肝质量、肝指数、肝功能指标[谷丙转氨酶(ALT),谷草转氨酶(AST)]、血清总胆固醇(TCHO)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)高于MKR组(P<0.05,P<0.01),甘油三酯(TG)下降,低于MKR组(P<0.01)。2型糖尿病并发脂肪肝MKR鼠经左归降糖清脂方治疗后,肝细胞内脂肪性变得到改善,空腹血糖、血胰岛素、肝质量、肝指数、肝功能指标(ALT,AST)和血脂(TCHO,LDL-C和TG)显著下降,低于MKR小鼠(P<0.05,P<0.01);HDL-C高于MKR小鼠(P<0.05)。结论:左归降糖清脂方可通过调节高脂饮食MKR鼠体内的糖脂代谢,改善肝脏脂肪性变。

左归复方对MKR转基因2型糖尿病鼠PPARγ表达的影响

目的观察左归复方(滋阴益气活血解毒组方)干预治疗MKR小鼠后,糖代谢及PPARγ在肝脏、骨骼肌和脂肪组织中的表达变化。方法取MKR小鼠40只,经鉴定后随机分为MKR模型组、左归复方高、低剂量组、文迪雅组(阳性药对照组),每组10只,C57野生鼠10只作为空白对照组。各药物组分别以相应剂量连续给药30d。末次给药后0.5h,空腹测定血糖;心脏取血,放射免疫法测定血清胰岛素,RT-PCR法检测PPARγmRNA在肝脏、骨骼肌中的表达,Western Blotting及免疫组化法检测PPARγ蛋白在肝脏、骨骼肌和脂肪组织中的表达。结果左归复方干预治疗后,其高剂量组具有显著的降低MKR小鼠空腹血糖、改善高胰岛素血症的作用(P<0.05或P<0.01)。与C57野生鼠组比较,MKR模型组小鼠肝脏和骨骼肌PPARγmRNA表达均显著下调(P<0.01),而其蛋白表达在骨骼肌和脂肪组织中也显著下调(P<0.05);经左归复方治疗后,与MKR模型组比较,左归复方高剂量组MKR鼠肝脏和骨骼肌PPARγmRNA表达均明显上调(P<0.05),PPARγ蛋白表达在三种组织中均显著上调(P<0.05或P<0.01)。左归复方上调各组织中PPARγmRNA及蛋白表达与阳性对照药文迪雅组作用相当(P>0.05)。结论左归复方具有显著的改善MKR鼠糖代谢的作用,其机制与上调肝脏、骨骼肌和脂肪组织中PPARγ表达,增强外周组织对胰岛素的敏感性,改善胰岛素抵抗有关。

左归降糖益肾方对糖尿病肾病MKR鼠肾组织miRNA-181a及GRP78表达的影响

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病(DN)骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体缺失转基因鼠(MKR鼠)肾组织miRNA-181a及GRP78表达的影响。方法:8周龄MKR鼠,按性别、空腹血糖、体质量随机分为空白组,模型组(高脂喂养联合单侧肾切除),左归降糖益肾方组,阳性药物组(格列喹酮片0.0039g/kg+盐酸贝那普利片0.0013g/kg),4-苯基丁酸组(1.44g/kg),每组15只;同龄C57鼠10只作为正常组。造模后8周灌胃给药,左归降糖益肾方28.8g/kg灌胃治疗8周。留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠。电化学法检测空腹血糖,酶联免疫吸附法(ELISA)检测尿微量白蛋白含量;荧光PCR检测肾组织miRNA-181a表达水平,逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)和Western blot法分别检测肾组织GRP78 mRNA及蛋白表达水平;电镜观察肾组织病理变化。结果:与模型组比较,左归降糖益肾方能降低DN小鼠空腹血糖及尿微量白蛋白含量(P﹤0.01),并能调控miRNA-181a及GRP78的表达水平(P﹤0.01);疗效等同于阳性药物组;并能改善肾组织病理损伤。结论:左归降糖益肾方可通过调控miRNA-181a、GRP78表达水平,从而抑制肾组织损伤。

左归降糖益肾方对糖尿病肾病MKR鼠肾组织TGF-β_1及CTGF mRNA表达的影响

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病骨骼肌特异性胰岛素样生长因子-1受体缺失转基因鼠(MKR鼠)转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)基因mRNA表达的影响。方法:MKR鼠60只,按性别、空腹血糖、体重随机分为4组,即空白组,模型组,左归降糖益肾方组(28.8 g·kg-1),阳性药物组(格列喹酮0.003 9 g·kg-1与盐酸贝那普利0.001 3 g·kg-1),每组15只,同龄C57鼠10只作为正常组,除正常组与空白组外,其余各组高脂喂养联合单侧肾切除造成糖尿病肾病(DN)小鼠模型,造模后8周ig给予相应药物8周,留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠。电化学法检测空腹血糖(FBG),常规生化法检测血清肌酐(SCr),尿素氮(BUN)含量,ELISA检测尿微量白蛋白含量;并取新鲜肾组织,RT-PCR检测肾组织TGF-β1及CTGF mRNA的表达水平;其余组织4%多聚甲醛固定24 h,HE及Masson染色观察肾组织病理变化。结果:与空白组比较,模型组小鼠FBG,SCr,BUN及尿微量白蛋白含量明显升高(P<0.01);与模型比较,左归降糖益肾方能明显降低DN小鼠FBG,降低SCr,BUN及尿微量白蛋白含量(P<0.01);下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平(P<0.05,P<0.01),疗效等同于阳性药物组;与空白组比较,模型组肾组织肾小球体积缩小,肾小球萎缩,球囊腔增宽,球囊腔壁层细胞增多且异形化,左归降糖益肾方能明显改善肾组织病理损伤。结论:左归降糖益肾方可以通过下调TGF-β1mRNA及CTGF mRNA的表达水平,从而抑制肾组织纤维化的发生发展。

MKR转基因小鼠生物学特性的初步探讨

试验旨在测定MKR转基因2型糖尿病小鼠生物学特性数据,为2型糖尿病研究提供技术平台。由美国国立卫生研究院(NIH)授权使用引进的MKR鼠,经自然交配后繁殖的子代作为研究对象,测定MKR鼠的体重、血糖、记忆力、抗疲劳、耐缺氧、麻醉耐受试验,同期采用昆明小鼠和C57BL/6J小鼠作为对照。结果表明,新生MKR鼠自出生3周开始,血糖增高,体重随年龄的增加而减慢,与对照组小鼠同期比较,具有非常显著性意义,MKR鼠抗疲劳、耐缺氧、麻醉耐受能力比昆明小鼠差(P<0.01)。因此,MKR鼠是一种良好的2型糖尿病的动物模型。

茵陈蒿汤对MKR鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的作用

目的:探讨茵陈蒿汤对MKR鼠2型糖尿病合并非酒精性脂肪性肝病的作用机制。方法:8周龄MKR小鼠40只高脂喂养8周后,随机分为模型组、茵陈蒿汤原方剂量组(17.16 g·kg^(-1)),茵陈蒿汤教材剂量组(4.68 g·kg^(-1)),二甲双胍+辛伐他汀组[(65+2.6)×10^(-3) g·kg^(-1)],同龄MKR鼠10只作为空白组,FVB鼠10只分别作为正常组。各组灌胃给药8周后,测定小鼠肝脏湿重,口服糖耐量(OGTT),血清炎性因子白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),血脂和肝功能的变化,透射电镜和苏木素-伊红(HE)染色对肝脏组织形态进行观察,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝脏组织Toll样受体4(TLR4),髓样分化因子88(MyD88),核转录因子-κB(NF-κB)蛋白表达变化。结果:与模型组比较,给药组小鼠肝湿重指数显著降低(P<0.01),OGTT较模型组明显有所改善(P<0.05),血清中IL-6,TNF-α含量显著降低(P<0.01),形态学改变上,茵陈蒿汤对肝细胞结构有保护作用,减少肝细胞脂肪样变性;茵陈蒿汤可以明显下调T2DM合并NAFLD模型小鼠肝脏组织TLR4,MyD88,NF-κB蛋白含量(P<0.05),且对于TLR4,NF-κB的下调,茵陈蒿汤原方剂量明显优于茵陈蒿汤剂量(P<0.05)。结论:茵陈蒿汤能降低炎症因子水平,肝组织TLR4,MyD88,NF-κB的表达水平,改善肝脏病理损伤,干预MKR鼠T2DM合并NAFLD疾病状态,具有一定保护肝功能,降低血脂以及延缓肝脏炎症反应的作用。

左归降糖益肾方对糖尿病肾病MKR鼠肾组织VDR、CYP27B1表达的影响

目的:探讨左归降糖益肾方对糖尿病肾病(DN)MKR鼠肾组织VDR、CYP27B1表达的影响。方法:8周龄MKR鼠随机分为假手术组、模型组(高脂喂养联合单侧肾切除)、中药(左归降糖益肾方)组、阳性药物组(格列喹酮片与盐酸贝那普利片),每组15只;正常组选取同龄C57鼠10只。造模8周后灌胃给药,治疗8周。留取尿标本,心脏采血处死各组小鼠。电化学法检测空腹血糖,常规生化法检测尿蛋白含量;取新鲜肾组织,实时荧光定量PCR检测肾组织VDR、CYP27B1 mRNA的表达水平;Western blot法检测肾组织VDR、CYP27B1蛋白的表达水平;HE及电镜观察肾组织病理变化。结果:与模型组比较,中药组能升高DN小鼠体质量(P<0.05),降低肾质量、肾肥大指数、空腹血糖、尿蛋白含量、血清肌酐、尿素氮含量(P<0.01);上调VDR、CYP27B1的mRNA及蛋白的表达水平(P<0.01);改善肾组织病理损伤结构。结论:左归降糖益肾方可以通过调控VDR、CYP27B1的表达水平,改善肾组织病理结构损伤。

左归复方对MKR转基因2型糖尿病小鼠糖代谢及抗氧化应激的影响

目的观察左归复方(滋阴益气活血解毒组方)干预治疗MKR小鼠后糖代谢及抗氧化应激的影响。方法50只MKR小鼠经鉴定后,随机分为MKR模型组,左归复方高、中、低剂量组,阳性对照组(文迪雅),每组10只。各药物组分别以相应剂量连续ig给药30d。于给药前、给药第15天及第30天,分别测定空腹血糖(FBG)。末次给药后0.5h,心脏取血,放射免疫法测血清胰岛素,比色法测定心、肾和肝组织中总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)水平、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活性。结果左归复方干预治疗后,其高剂量具有显著的降低MKR小鼠空腹血糖、改善高胰岛素血症的作用(P<0.05、0.01),且呈剂量依赖性;MKR小鼠心、肾和肝组织中MDA水平显著高于C57野生鼠组(P<0.05、0.01),而T-AOC及SOD和GSH-Px活性显著低于C57野生鼠组(P<0.01)。左归复方干预治疗后,能显著降低MKR小鼠心、肝和肾组织中MDA水平(P<0.05、0.01),提高各组织T-AOC,显著增强SOD和GSH-Px的活性(P<0.05、0.01),其作用呈剂量依赖性。结论左归复方具有显著地改善MKR小鼠糖代谢,保护心、肝和肾的抗氧化酶,抑制氧化应激反应,对MKR小鼠产生保护作用。

左归复方对MKR小鼠血糖血脂及炎症因子CRP、IL-6、TNF-α的影响

目的观察左归复方对MKR小鼠血糖血脂代谢及血清CRP、IL-6、TNF-α水平的影响。方法以MKR小鼠为观察对象,用左归复方对其进行30 d灌胃治疗。采用电化学法检测血糖,全自动分析仪检测血脂和CRP,双抗体夹心ELISA法分别检测血清IL-6、TNF-α含量。结果给药30 d后,左归复方低、高剂量组,文迪雅组均有显著降低血糖作用,与给药前模型组比较,差异均有统计学意义(P<0.01);而各用药组的降血糖作用相当(P>0.05)。给药30 d后,各组血清TCHO、TG、HDL、LDL的含量变化组间无统计学差异(P>0.05);而左归复方低、高剂量组,文迪雅组中血清CRP、IL-6和TNF-α含量均低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01,P<0.05);但用药组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论左归复方有显著降低MKR鼠空腹血糖、CRP、IL-6、TNF-α含量的作用,可改善MKR鼠2型糖尿病的炎症反应。

左归降糖益肾方对MKR糖尿病肾病小鼠足细胞葡萄糖调节蛋白78、C/EBP同源蛋白表达的影响

目的观察内质网应激相关分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、C/EBP同源蛋白(CHOP)在MKR转基因糖尿病肾病(DN)小鼠足细胞的特异性表达及左归降糖益肾方的干预作用。方法以8周龄MKR小鼠为研究对象,随机分为空白组、模型组、左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组、格列喹酮片+贝那普利组,以C57野生鼠为正常组,每组10只。采用高脂喂养加单肾切除复制DN模型,各给药组予相应药物灌胃30 d。采用电化学法观察小鼠空腹血糖(FBG),ELISA测定尿微量白蛋白(Um Alb),RT-PCR及Western blot检测GRP78、CHOP基因和蛋白表达,电镜观察足细胞形态结构。结果与空白组比较,模型组FBG、Um Alb明显升高(P<0.01),足细胞GRP78基因及蛋白表达明显下调(P<0.01),CHOP基因及蛋白表达明显上调(P<0.01);与模型组比较,各给药组FBG、Um Alb明显降低(P<0.01),左归降糖益肾方组、4-苯基丁酸组GRP78基因及蛋白表达明显上调、CHOP基因及蛋白表达明显下调(P<0.01)。电镜观察结果显示,各给药组小鼠肾小球足细胞结构、数量及密度较模型组明显改善。结论左归降糖益肾方能改善内质网应激介导的足细胞损伤,延缓DN进展。

左归降糖方对2型糖尿病MKR小鼠脑NF-κB信号通路炎症因子的影响

目的探讨左归降糖方对高脂饮食2型糖尿病转基因MKR小鼠脑组织NF-κB信号通路炎症因子的影响。方法30只MKR小鼠随机分为MKR组、MKR高脂组和左归降糖方组;高脂饲料饲养MKR鼠加重体内糖脂代谢紊乱,左归降糖方组干预治疗高脂饮食MKR鼠4周,测定小鼠空腹血糖、血清胰岛素和血脂浓度,RT-PCR检测小鼠脑组织IKB、TNF-α和MCP-1基因mRNA表达变化。结果与普通MKR小鼠比较,高脂饮食MKR小鼠空腹血糖、血清胰岛素、总胆固醇水平升高,甘油三酯水平下降,脑组织TNF-α和MCP-1基因mRNA表达水平均增加;左归降糖方降低高脂饮食MKR小鼠空腹血糖、血清胰岛素、总胆固醇以及甘油三酯水平,同时降低脑组织TNF-α、MCP-1基因mRNA表达水平。结论左归降糖方可通过抑制高脂饮食MKR小鼠脑组织NF-κB信号通路的激活来降低炎症损伤,对脑组织具有保护作用。

MKR转基因2型糖尿病小鼠脂肪组织p38丝裂原活化蛋白激酶、c-jun氨基末端激酶蛋白的表达及左归复方的保护作用

目的观察MKR转基因2型糖尿病小鼠脂肪组织磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶、c-jun氨基末端激酶蛋白表达的变化及左归复方(滋阴益气活血解毒组方)的保护作用。方法 40只MKR小鼠经鉴定后,随机分为MKR模型组、左归复方高、低剂量组、文迪雅组,每组10只。C57BL/6J(C57)野生鼠10只作为空白对照组。各药物组分别以相应剂量连续给药30天。于给药前、第15天及第30天,分别作空腹血糖测定。末次给药后0.5 h,心脏取血,放射免疫法测血清胰岛素,酶联免疫吸附测定法检测血清细胞间黏附分子、血管细胞黏附分子,Westernblotting和免疫组织化学检测磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶、c-jun氨基末端激酶蛋白在脂肪组织中的表达。结果①左归复方干预治疗后,其高剂量具有显著的降低MKR小鼠空腹血糖、改善高胰岛素血症的作用(P<0.05,P<0.01);②MKR鼠具有显著增高的炎症因子水平,而左归复方干预治疗后具有降低与炎症反应相关的细胞间黏附分子1和血管细胞黏附分子1水平的作用(P<0.01);③MKR小鼠脂肪组织中p38丝裂原活化蛋白激酶和c-jun氨基末端激酶蛋白表达均上调,但与C57野生鼠比较差异无统计学意义(P>0.05);左归复方干预治疗后,MKR小鼠脂肪组织中p38丝裂原活化蛋白激酶和c-jun氨基末端激酶蛋白表达均显著下调(P<0.05,P<0.01),左归复方下调p38丝裂原活化蛋白激酶和c-jun氨基末端激酶蛋白表达与阳性对照药文迪雅作用相当。结论左归复方能显著改善MKR小鼠糖代谢及其炎症损伤,其机制为下调脂肪组织中磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶和c-jun氨基末端激酶蛋白表达,增强脂肪组织对胰岛素的敏感性和炎症抑制作用。

左归复方对MKR转基因2型糖尿病鼠胰岛素表达与分泌的影响

目的观察左归复方(滋阴益气活血解毒组方)干预治疗MKR小鼠后糖代谢、血清胰岛素及胰岛B细胞胰岛素表达的变化。方法40只MKR小鼠经鉴定后,随机分为模型组,左归复方高、低剂量组,阳性对照组(文迪雅),每组10只,另设10只C57小鼠为野生鼠组。各药物组分别以相应剂量连续给药30d,模型组和野生鼠组灌胃蒸馏水。于给药前、第15日及第30日分别作空腹血糖测定;末次给药后0.5h心脏取血,放射免疫法测血清胰岛素,免疫组织化学SABC法检测胰岛B细胞胰岛素表达。结果左归复方干预治疗后,其高剂量具有显著的降低MKR小鼠空腹血糖、改善高胰岛素血症的作用。MKR小鼠胰岛B细胞胰岛素表达显著高于C57野生型小鼠;左归复方高剂量组干预治疗后胰岛B细胞胰岛素表达显著下调;左归复方高剂量组下调胰岛B细胞胰岛素表达与对照药文迪雅作用相当。结论左归复方具有改善MKR小鼠糖代谢、减轻胰岛B细胞的工作负荷、减少胰岛素表达及分泌的作用。