养殖水域Cu^(2+)胁迫对虹鳟MT2基因表达模式的影响

为了探究水体中铜离子胁迫对虹鳟(Oncorhynchus mykiss)MT2基因表达模式的影响,开发Metallothioneins作为检测水域生态中重金属铜污染的分子标志,该研究利用TA克隆法获得了虹鳟MT2基因的CDS序列,检测了MT2基因在虹鳟不同组织中的表达模式,以及Cu^(2+)胁迫(Cu^(2+)浓度75、150和300μg/L)后1、2、3和4 d和胁迫恢复1、2 d时间点的MT2基因表达动态。结果表明,虹鳟MT2基因CDS区长186 bp,编码62个氨基酸,具有典型的半胱氨酸(Cys)-X(1~3个)-半胱氨酸结构,属不稳定亲水性蛋白。虹鳟MT2基因序列与大西洋鲑的同源性最高且在肝脏中表达量最高,其次是脑和肠道。胁迫试验结果显示,MT2基因在肝脏和鳃中呈现先升高后降低的趋势,在头肾、脾脏和脑中呈现逐渐升高的趋势,且呈现一定的剂量依赖性,肠道MT2基因在胁迫2、3和4 d被显著抑制。胁迫恢复后,处理组肝脏、头肾、鳃、脑MT2基因表达量仍显著升高。综上,虹鳟MT2基因能在不同组织中被Cu^(2+)诱导表达,推测MT2基因在虹鳟抗重金属毒性中可能发挥着重要作用,且MT2基因表达量与铜离子的浓度相关,可以作为分子生物标志检测水域生态中的重金属铜污染。

IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响

目的:研究IL-16对人白血病细胞系MT2细胞增殖抑制和凋亡的影响,为进一步研究IL-16功能奠定基础。方法:IL-16腺病毒载体转染MT2细胞后,不同时间收获细胞,通过MTT、流式细胞术(FCM)、测定线粒体膜电位和单细胞凝胶电泳等方法,证实MT2细胞增殖抑制和凋亡。结果:用MTT法绘制生长曲线,观察到IL-16腺病毒载体转染的MT2细胞增殖受到明显抑制;DNA片段分析在转染6h后出现凋亡片段;进一步用FCM检测细胞周期停滞于G1期,并且出现细胞凋亡;单细胞凝胶电泳发现细胞12h后有明显凋亡DNA拖尾形成;IL-16对细胞线粒体膜电位的影响24h内逐渐增强,预示细胞凋亡;免疫荧光发现12h自噬相关蛋白LC3,即可在细胞膜上表达,自噬已经开始出现。结论:重组人IL-16腺病毒载体转染MT2细胞,24h内即可诱导MT2细胞发生细胞增殖抑制并且出现凋亡,为进一步研究IL-16的功能奠定了基础。

pCDNA3.1-MT2A真核表达载体的构建及亚细胞定位

目的:构建pCDNA3.1-MT2A真核表达载体并观察其在293T和SMMC7721细胞株中的定位和表达情况。方法:使用基因合成法合成MT2A基因,在其N端添加Kozak序列及His标签序列,将扩增后的目的基因双酶切连接至pcDNA3.1(+)载体的BamHⅠ和NotⅠ之间。转化DH5α大肠杆菌后,挑取阳性克隆子进行质粒抽提电泳及测序鉴定。将鉴定正确的pCDNA3.1-MT2A质粒采用脂质体法转染293T和SMMC7721细胞株,激光共聚焦显微镜观察其在真核细胞中的表达和定位情况。结果:pCDNA3.1-MT2A重组质粒经酶切电泳及DNA测序证实,目的基因MT2A的序列完全正确,真核表达载体构建成功,激光共聚焦观察发现该重组质粒表达于293T和SMMC7721细胞的胞质中。结论:成功构建pCDNA3.1-MT2A融合基因并进行真核表达,发现MT2A主要定位于293T和SMMC7721细胞的细胞质中。本研究为探讨MT2A在肝癌细胞内的功能奠定了基础。

MT2受体介导褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用

目的探讨褪黑素(MLT)通过褪黑素膜受体MT2抑制小鼠前胃癌(MFC)细胞增殖及其与丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)、磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)-Akt信号通路的关系。方法应用siRNA技术沉默MT2表达,观察褪黑素对小鼠前胃癌细胞的抑制作用及ERK1/2、Akt的磷酸化的影响。结果 1.siRNA介导的MT2沉默能明显拮抗褪黑素对胃癌细胞增殖的抑制作用;2.沉默MT2可部分阻断褪黑素抑制ERK1/2、Akt磷酸化的作用。结论褪黑素可通过MT2受体抑制ERK1/2、Akt的磷酸化从而抑制胃癌细胞增殖。

植物金属硫蛋白MT2的生物信息分析

用生物信息分析方法对已在GenBank上注册的拟南芥等13种植物金属硫蛋白MT2的氨基酸序列与组成、亚细胞定位、跨膜区与信号肽、疏水性/亲水性、蛋白质二、三级结构以及功能等进行分析与预测。结果表明,植物MT2主要位于叶绿体中,无信号肽,是非跨膜的亲水性蛋白,不规则卷曲是其蛋白质二级结构的主要结构元件,无功能结构域。这一结果可为植物MT2深入的结构与功能分析及利用提供进一步的信息与参考。

Sirt1去乙酰化酶抑制剂诱导成人白血病细胞系MT2生长阻滞及凋亡

目的:研究Sirtuin1(Sirt1)去乙酰化酶抑制剂对成人T细胞白血病细胞系MT2增殖及存活的影响。方法:采用RT-PCR方法,比较了成人白血病细胞系MT2与其他两种白血病细胞系(Jurkat,MOLT-4)中Sirt1 mRNA表达水平;通过Sirt1抑制剂尼克酰胺(Nicotinamide)处理MT2细胞后,观察其细胞形态学的变化,并采用MTT、流式细胞术等方法检测Nico-tinamide对MT2细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。结果:成人白血病细胞系MT2中Sirt1表达水平明显高于Jurkat细胞系(P<0.05),而与MOLT-4细胞系无明显差异;抑制Sirt1的去乙酰化酶活性能明显抑制MT2细胞的增殖,引起细胞G2/M期阻滞,诱导细胞凋亡;镜下观察到细胞膜皱缩、卷曲及破裂等凋亡样形态改变。结论:抑制Sirt1去乙酰化酶活性可能是治疗成人T细胞白血病的可行途径之一。

膜型基质金属蛋白酶-2(MT2-MMP)在NSCLC组织中的表达及临床意义研究

目的:探讨MT2-MMP在NSCLC组织中的表达情况,与NSCLC临床病理特征之间的关系及MT2-MMP对NSCLC预后的价值。方法:收集2015年01月至2018年06月于我院外科接受手术治疗的NSCLC患者的NSCLC组织及其癌旁正常肺组织各89例。采用免疫组化SP法检测NSCLC组织及其癌旁正常肺组织中MT2-MMP的表达水平。统计分析MT2-MMP蛋白与NSCLC患者临床病理特征、预后之间的相关性。结果:MT2-MMP在NSCLC组织中高表达62.9%(56/89)显著高于癌旁正常组织5.6%(5/89),差异有统计学意义(P<0.001)。MT2-MMP的表达与肿瘤分化程度及淋巴结转移有关(P<0.05),与患者性别、年龄、吸烟史、肿瘤直径、组织学类型、临床TNM分期无关(P>0.05)。生存曲线分析提示MT2-MMP高表达组生存率显著低于低表达组(χ^(2)=4.536,P=0.033)。Cox单因素分析结果显示:吸烟、TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、低中分化、淋巴结转移、MT2-MMP高表达是影响NSCLC患者预后的危险因素(P<0.05);多因素分析结果显示:TNM分期Ⅲ-Ⅳ期、低中分化、淋巴结转移、MT2-MMP高表达是NSCLC患者预后的独立危险因素(P<0.05)。结论:MT2-MMP高表达与NSCLC患者的不良预后有关,提示MT2-MMP有可能作为NSCLC患者的预后标志物及临床检测或联合检测的指标,提高临床诊断率。

褪黑素MT2受体激动剂IIK-7对骨癌大鼠产生镇痛作用

目的:研究褪黑素MT2受体激动剂IIK-7对骨癌疼痛(bone cancer pain,BCP)大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)的影响。方法:将30只180~220 g清洁级雌性SD大鼠随机分为5组(n=6):空白对照组(CONT组)、假手术组(Sham组)、骨癌痛组(BCP组)、IIK-7组及DMSO组。CONT组不做任何处理;Sham组大鼠左后肢胫骨骨髓腔内注射10μL PBS液,鞘内置管,术后第3天开始鞘内连续输注DMSO(1μL/h,10 h);BCP组大鼠左后肢胫骨骨髓腔内注射10μL Walker256大鼠乳腺癌细胞PBS混悬液,连续输注DMSO(1μL/h,10 h);IIK-7组大鼠左后肢胫骨骨髓腔内注射10μL Walker256大鼠乳腺癌细胞PBS混悬液,术后第3天开始鞘内连续输注IIK-7(1μL/h,0.5μg/μL,10 h);DMSO组大鼠左侧后肢胫骨骨髓腔内注射10μL Walker256大鼠乳腺癌细胞PBS混悬液,术后第3天开始鞘内连续输注DMSO(1μL/h,10 h)。用Von Frey纤毛测痛仪测定术前及术后第7、14、21天各组大鼠左后肢MWT;X线拍摄检测大鼠左后肢骨癌模型建立情况。结果:影像学结果显示,骨癌痛大鼠(BCP组)术侧胫骨骨皮质不连续,骨小梁缺失,周围组织明显肿胀。术前,各组大鼠术侧后肢MWT比较,差异均无统计学意义(P>0.05);术后第7、14、21天,CONT组与Sham组术侧后肢MWT较术前均无明显变化(P>0.05),但BCP组大鼠术侧后肢MWT均较CONT组明显降低(P<0.05);术后第7天,IIK-7组大鼠术侧后肢MWT与BCP组比较,差异无统计学意义(P>0.05),术后第14、21天,IIK-7组大鼠术侧后肢MWT较BCP组均明显升高(P<0.05)。结论:褪黑素MT2受体激动剂IIK-7可以提高骨癌痛大鼠MWT,缓解骨癌大鼠的疼痛。

IEC TC 108 MT1/MT2/HBSTD工作组会议

1参会情况介绍 IECTC108于2011年10月17日至21日存澳大利亚悉尼爿开MT1／MT2／HBSTD工作组会议

EOLA1与MT2A相互作用及其上下游关系的确定

目的研究内皮细胞高表达脂多糖相关因子1（EOLA1）与金属硫蛋白2A（MT2A）的相互作用关系,明确其相互作用位点及上下游关系。方法构建EGFP-EOLA1融合表达载体,转染HUVEC细胞,应用免疫荧光共定位成像技术观察EOLA1和MT2A在HUVEC中的共定位情况;应用截短突变和酵母双杂交确定EOLA1和MT2A的相互作用位置;应用RNAi技术建立EOLA1/MT2A上调和下调的HUVEC细胞模型,观测模型细胞EOLA1/MT2A的表达情况。结果 EOLA1和MT2A在HUVEC中存在共定位现象,共定位主要发生在核膜周围;酵母双杂交和免疫共沉淀实验结果显示,EOLA1的截短突变体1~77氨基酸（aa）片段和MT2A无结合活性,1~115aa片段及1~158aa片段和MT2A有结合活性。EOLA1上调/下调表达时MT2A同时相应上调/下调表达,MT2A的上调和下调表达对EOLA1表达无明显影响。结论 EOLA1和MT2A在HUVEC细胞内存在相互作用,相互作用位点位于EOLA1ORF的100~113功能域,EOLA1可以调控MT2A在HUVEC中的表达。

GALNT14与MT2A相互作用验证

利用免疫共沉淀(Co-IP)和蛋白沉降实验(GST pull-down),分别从体内外对N-乙酰氨基半乳糖转移酶(GALNT14)与金属硫蛋白2A(MT2A)之间的相互作用进行了验证.将MT2A全长c DNA片段克隆到p ET-Dsb A和p CMV-Myc载体上.表达并纯化了His-Dsba-MT2A和GST-GALNT14蛋白,在体外通过GST pulldown技术分析,显示MT2A能与GALNT14结合,证实了二者在体外的直接相互作用.继而,共转染p CMVMyc-MT2A和p CDNA3.1-Flag-GALNT14到人乳腺癌细胞株MCF-7中,通过免疫共沉淀实验发现抗Myc抗体可以将GALNT14从细胞裂解液中沉淀下来,证实了它们在胞内的相互作用.结果显示了GALNT14和MT2A在体内外条件下能够发生直接相互作用,这为进一步明确GALNT14的功能及作用机制奠定了基础.

中国荷斯坦牛MT1和MT2基因多态性及其与泌乳性状关联性分析

探索MT1及MT2基因对中国荷斯坦牛泌乳性状的影响,为中国荷斯坦牛泌乳性状的提升提供理论基础。本试验采用直接测序法,将测序结果运用生物信息分析软件进行对比分析,寻找突变位点;将检测到的SNP位点与中国荷斯坦牛泌乳性状进行关联性分析。通过扩增MT1的第2外显子区域,检测到1个SNP位点;扩增MT2基因内含子区域,检测到2个SNP位点。将其与中国荷斯坦牛泌乳性状关联分析,结果显示:MT1基因g.22354G>A位点,GG基因型乳脂率、乳蛋白率、总蛋白、总乳脂均值均显著高于AA基因型均值(P<0.05);MT2基因的g.13647T>A与g.13810T>A位点,各基因型的泌乳性状之间差异均不显著(P>0.05)。MT1基因可以作为影响泌乳性状的候选基因,为中国荷斯坦牛辅助标记育种提供理论依据。

MT2000型2kW短波发射机谐波滤波单元控制继电器故障分析

MT2000型2kW短波发射机的运转效率较高,且具备稳定性特征。然而,继电器非常容易发生故障,进而出现吸合异常,导致误差加大。基于此,本文就MT2000型2kW短波发射机谐波滤波单元控制继电器故障,展开全面以及深入的探究分析,期望可以提供参考。

MT2000型2kW短波发射机的原理与维护

本文通过理论数据与实践操作形式介绍了MT2000型2 kW短波发射机的单元功能、组成构件及核心部分的原理分析。论述了其设计紧凑、体积小、高效稳定等特点,以及通过日常工作使用经验和维护经验进行总结,对MT2000型2kW短波发射机的维护做出论述,为工作中的一线技术人员提供参考。

飞利浦时尚高品质液晶电视150MT2上市

近日,飞利浦公司推出了最新款时尚高品质液晶电视150MT2。这款极具震憾力的多媒体液晶电视采用了飞利浦特有的DCDi影像清晰提升技术,加之时尚亮丽的外观设计,500;1的超高对比度和310流明的超高亮度,一上市就成为当今家用娱乐显示设备中的新贵。

SSRI联合MT1/MT2受体激动剂对伴生物睡眠节律紊乱特征抑郁症治疗后的PSG分析

SSRI联合MT1/MT2受体激动剂对伴生物睡眠节律紊乱特征抑郁症治疗干预后的PSG检测进行评估分析。方法:选取于我院就诊的80例伴生物睡眠节律紊乱特征抑郁发作患者作为观察对象。分为治疗组和对照组各30例,治疗组接受MT1/MT2受体激动剂+一种SSRI类药物联合治疗。对照组接受一种SSRI类药物。分别对两组患者多导睡眠监测(PSG),评估汉密尔顿抑郁量表(HAMD)、匹兹堡睡眠质量指数(PQSI)表和生活质量综合评定量表(GQOLI-74)。观察分析治疗组和对照组的PSG指标及情绪、睡眠、生活质量相关量表评估结果差异,并对SSRI+MT1/MT2对伴生物睡眠节律紊乱特征抑郁症干预治疗进行分析。结果:治疗前两组患者HAMD评分、PSQI评分、GQOLI-74评分、TESS评分两两对比差异均无统计学意义(P>0.05);治疗后第7天、第14天、第28天HAMD评分、PSQI、评分TESS评分呈持续降低趋势,治疗组较对照组低,差异有统计学意义(P<0.05),与治疗组相比,对照组主观抑郁分值及焦虑分值更高;对照组存在更严重的睡眠问题,且药物不良反应率低。治疗后第7天、第14天、第28天GQOLI-74评分呈持续升高趋势,治疗组较对照组高,差异有统计学意义(P<0.05),可见改联合治疗能否更快更有效的改善伴生物节律紊乱特征抑郁症状且不加重药物副作用,提升生活质量。对两组受试者监测多导睡眠(PSG),对照组REM期睡眠潜伏期较治疗组组的长,差异具有统计学意义(p<0.05),与治疗组相比较,对照组具有更长的入睡后清醒时间,且睡眠效率更低。结论:SSRI联合MT1/MT2受体激动剂对伴生物睡眠节律紊乱特征抑郁症治疗效果显著,有助于改善患者的HAMD评分、PSQI评分、GQOLI-74评分及PSG指标。

绵羊性腺褪黑素受体基因MT2的克隆及其生物信息学分析

采用RT-PCR技术,以绵羊性腺(睾丸和卵巢)cDNA为模板扩增褪黑素受体MT2基因,经连接转化,蓝白斑筛选,挑取阳性克隆测序。结果显示,该试验成功克隆了MT2基因(282bp);通过Blast比对,克隆的MT2基因与已知序列(GenBank ID:NM_001130938)的同源性达到100%。生物信息学分析表明,克隆的MT2基因序列属于MT2第二外显子的一部分,富含GC(69.5%);整个MT2总共编码376个氨基酸的肽序列,其中丙氨酸(Ala)比例最高(13.03%);通过对绵羊MT2编码产物的二级结构、亲水性/疏水性、信号肽、亚细胞定位和跨膜结构域等进行预测和分析,发现绵羊MT2基因的编码蛋白是一种脂溶性较强的跨膜蛋白,与山羊MT2的分子进化距离最近,亲缘关系最为密切。MT2基因的成功克隆及其生物信息学分析为进一步研究它与绵羊繁殖季节性的相关性奠定了基础。

吗啡对HIV-1在MT2细胞内复制影响

目的探讨吗啡对人类免疫缺陷病毒-1(HIV-1)在MT2细胞中复制的影响。方法将MT2细胞按单纯随机分组的原则分为吗啡处理组、吗啡+纳洛酮处理组、纳洛酮处理组和病毒对照组,先用浓度为10-8mol/L的纳洛酮预处理吗啡+纳洛酮处理组和纳洛酮处理组0.5 h,再用10-12、10-10和10-8mol/L 3个浓度的吗啡处理吗啡+纳洛酮处理组和吗啡处理组24 h,然后每组细胞加入HIV-1感染MT2细胞,并分别于感染的第3、4、5和6 d取培养上清测定HIV-1 p24抗原表达。结果 HIV-1感染MT2细胞第3、4、5、6 d,10-12、10-10和10-8mol/L 3个浓度吗啡处理组的HIV-1 p24抗原表达均高于病毒对照组,差异均有统计学意义(P<0.01);吗啡+纳洛酮处理组、纳洛酮处理组与病毒对照组HIV-1 p24抗原表达比较,差异均无统计学意义(P>0.05);第3、4、5、6 d,3个浓度吗啡处理组的HIV-1 p24抗原表达量比对照组增加的倍数比较,差异均有统计学意义(P<0.05);10-12、10-10和10-8mol/L 3个浓度吗啡处理组在不同时间HIV-1 p24抗原表达量比对照组增加倍数比较,3个吗啡处理组的HIV-1 p24抗原表达量比对照组增加倍数均随着感染时间的延长而呈现递增的趋势(P<0.05)。结论吗啡能够促进HIV-1在MT2细胞和内的复制,并且随感染时间的延长呈现递增趋势;吗啡促进HIV-1复制的作用可被阿片受体阻滞剂纳洛酮阻断。

孕母MT2A-5A/G多态性与子代先天性心脏病相关性

目的探讨孕母MT2A-5A/G多态性与子代先天性心脏病的相关性。方法采用1∶1配对设计,在孕16-24周通过胎儿超声心动检查募集孕育先天性心脏病胎儿孕母和无畸形胎儿孕母各174例,检测孕母MT2A-5A/G多态性、全血锌、血清MT。结果病例组AG基因型所占比例(28.73%)高于对照组(18.97%),差异有统计学意义(χ2=4.572,P=0.032);全血锌浓度病例组低于对照组,血清MT活力病例组低于对照组,差异有统计学意义,(t=2.86,P=0.004;t=9.48,P<0.001);病例组AA基因型的全血锌浓度高于AG基因型(t=2.848,P=0.005);MT活性两个基因型之间有明显差异(t=1.924,P=0.0056);对照组AA基因型全血锌浓度、MT活性高于AG基因型(t=1.986,P=0.048;t=2.62,P=0.0011)。结论孕母MT-2A-5A/G基因型可能锌浓度、氧化压力,继而影响出生结局,可能是先天性心脏病的危险因素。其具体机制需通过进一步研究证实。