MTT实验检测重组人角质细胞生长因子-2诱导不同细胞系增殖的差异

目的:用MTT法检测重组人角质细胞生长因子-2(rhKGF-2)诱导不同细胞系增殖的差异,建立验证rhKGF-2生物活性的细胞模型。方法:利用载体pBV220-KGF-2原核表达和纯化rhKGF-2,然后用MTT法分别检测rhKGF-2诱导大鼠气管上皮细胞RTE、大鼠小肠上皮细胞IEC-6、小鼠成纤维细胞NIH/3T3和人喉癌细胞Hep-2增殖的能力。结果:rhKGF-2具有强促Hep-2细胞增殖的生物活性,而对RTE细胞、IEC-6细胞、NIH/3T3细胞的诱导增殖作用不明显。结论:在体外,rhKGF-2具有较强的诱导Hep-2细胞增殖的作用。本研究为确立验证rhKGF-2生物活性的细胞模型的选择提供了实验依据。

反复熔铸Ni-Cr烤瓷合金体外细胞毒性实验(MTT法)

目的:初步评价反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性。方法:根据ISO标准采用体外细胞毒性试验(MTT法)测试不同熔铸次数Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液培养小鼠结缔组织成纤维细胞(L-929)的结果,从而对反复熔铸后Ni-Cr烤瓷合金的生物相容性进行初筛。结果:各浓度实验组细胞生长形态良好、细胞毒性级为0～1级;经过2～5次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金不同浓度的浸提液、不同培养时间的A492均值与经过1次熔铸的Ni-Cr烤瓷合金相应A492均值无显著性差异(P>0.05)。结论:初步认为Ni-Cr烤瓷合金经过1～5次熔铸后具有较好的生物相容性。

MTT体外药敏实验评价中药在乳腺癌化疗中的意义

目的 :通过MTT法体外药敏实验检测乳腺癌细胞对中药及其提取物的敏感性 ,并与临床常用的化学合成化疗药作比较 ,评价中草药在乳腺癌化疗中的意义。方法 :采用手术切除标本制得细胞悬液进行原代细胞培养 ,并在此基础上进行药敏实验 ,MTT法检测其敏感性。结果 :乳腺癌细胞对中草药的高度敏感性低于临床常用化疗药且差异有显著性 (P <0 .0 1) ,而对两者的中度敏感性则差异无显著性 (P >0 .0 5 )。结论 中草药在肿瘤化疗中具有重要意义 ,尤其作为肿瘤的二线化疗药具有广阔的应用前景。

基于网络药理学和体外实验探究枸杞子的抗结直肠癌活性

目的:利用网络药理学预测和体外实验验证,探讨枸杞子提取物的抗癌活性及作用机制。方法:利用中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)获取枸杞子的活性成分以及对应的靶点;通过TTD数据库、Gene Card数据库和DisGeNET数据库筛选结直肠癌的治疗靶点;采用Venny2.1在线工具获取枸杞子与结直肠癌的共同靶点,并用STRING数据库进行PPI (Protein-Protein Interaction)网络分析;借助Metascape网站实现基因本体(GO)富集分析和KEGG通路富集分析;采用溶剂法提取,并采用真空冷冻法进行浓缩干燥;利用MTT实验检测枸杞子的抗癌活性。结果:获取枸杞子活性成分35个;潜在的抗癌靶点121个,其中基于PPI分析度值,最有潜力的5个靶点分别是TP53、HSP90AA1、AKT1、MAPK1、RELA;KEGG富集显示枸杞子活性成分主要通过PI3K-Akt信号通路、HIF-1信号通路、松弛素信号通路等发挥作用;MTT实验表明黑枸杞和红枸杞粗提物均具有抗结直肠癌的活性。结论:初步筛选并明确了枸杞子的活性成分及其抗癌活性,为枸杞子的抗癌作用机制研究提供一定的参考。

LHRH类似物对体外培养肝癌细胞增殖阻抑作用的实验研究

目的 :探讨黄体素释放激素 (LHRH)类似物对肝癌细胞增殖的调节作用 ,为阐明LHRH在肝癌发病中的作用机制提供实验资料。 方法 :以体外培养的人肝癌细胞系hHCC和大鼠肝癌细胞系FSK 790 2为研究对象 ,用MTT试验检测LHRH类似物对这两种肝癌细胞生长的抑制作用 ;用流式细胞仪测定LHRH类似物作用后癌细胞的细胞周期变化 ;用免疫组化染色法检测PCNA和Bax蛋白表达以反映LHRH类似物对癌细胞增殖和程序性死亡指标的影响。 结果 :MTT试验表明 ,LHRH类似物可抑制hHCC和FSK 790 2的生长 ,并且这种作用呈时间和剂量依赖关系。LHRH类似物作用后 ,肝癌细胞中G1/G0 期细胞比率上升 ,S期细胞比率下降 ,说明细胞生长停滞。LHRH类似物可使癌细胞中PCNA免疫反应阳性细胞比率下降 (P <0 .0 5 ) ;而Bax阳性细胞比率增加 (P <0 .0 5 )。 结论 :LHRH类似物具有体外抑制肝癌细胞增殖的活性 ;

黄芪甲苷对体外培养内皮细胞影响的实验研究

从体外培养HUVEC内皮细胞系为出发点，运用中药血清药理学体外实验方法，对黄芪甲苷含药血清进行体外药理学实验研究，综合评价该含药血清对受损内皮细胞的增殖能力。

细胞毒性检查法中相对增殖度法与细胞增殖实验法的对比研究

目的:比较相对增殖度法和细胞增殖实验(MTT法)对26种不同药包材细胞毒性的结果差异性和相关性,比较两种方法在应用中的差异。方法:以L-929细胞为观察对象,采用MTT法及相对增殖度法对26种药包材的浸提液进行细胞毒性实验,比较毒性等级。结果:通过两种实验方法测定,26种药包材表现出对L-929细胞不同的细胞毒性,两种方法之间存在高度相关性。结论:与相对增殖度法比较,MTT法由于其实验周期短,灵敏度高,重复性好,操作简单,结果更加客观,提高了实验结果的准确性和重现性,更适合于对细胞毒性进行评价,是相对增殖度法的比较好的替代检测方法。

苦马豆素对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用

目的研究苦马豆素(Sw)对肝癌细胞在体内外生长的抑制作用。方法采用体外抑瘤试验培养人源性肝癌HHCC细胞的方法,通过MTT法等试验测定其体外抑癌浓度;体内试验采用小鼠的鼠源性肝癌H22移植瘤法,通过对抑瘤率及病理切片的观测,探讨其抑瘤作用。结果3.84μg.ml-1的Sw体外作用72 h后,HHCC细胞的存活率明显下降(P<0.05),其24 h的IC50为0.4μg.ml-1;SW在3、61、2 mg.kg-1时,对肝癌H22实体移植瘤的抑制率分别为13.2%、28.9%、27.3%;对腹水型H22的小鼠生命延长率分别为48.40%、64.16%、58.22%,病理切片显示,用药后肿瘤组织明显出血、坏死和炎症细胞浸润。结论苦马豆素对人源性和鼠源性肝癌生长都有一定的抑制作用。

水溶性紫杉醇前药的制备及抗肿瘤活性的研究

目的紫杉醇是具有良好抗肿瘤疗效的化学药物,由于紫杉醇本身化学结构复杂,难溶于水,在一定程度上限制了紫杉醇药物在临床上的广泛应用,因此改善紫杉醇水溶性是解决紫杉醇药物不足的关键问题。方法本实验选用水溶性叶酸配体作为"导向基团",谷氨酸为连接叶酸和紫杉醇的Linker,氨基PEG(MW:350)为药物增溶剂和稳定剂,制备水溶性叶酸-PEG-谷氨酸-紫杉醇前药。用LC-MS鉴定前药的化学结构,通过对前药溶解性及释药动力学曲线的测定,确定前药的理化性质。用MTT实验分析并对比紫杉醇原药与前药在不同肿瘤细胞(MCF-7、MDA-MB-231、A549)和正常细胞HELF(人胚肺成纤维细胞)中的毒性和药效作用。用荧光标记法直观观察紫杉醇前药在肿瘤细胞和组织中的靶向性。结果实验结果证明已成功合成叶酸-PEG-谷氨酸-紫杉醇前药,并具有较好的溶解性和原药释放动力学曲线,细胞实验表明在叶酸受体-配体作用的介导下,叶酸-PEG-谷氨酸-紫杉醇前药靶向叶酸受体高表达的肿瘤细胞,减少对叶酸受体低表达正常细胞的毒副作用。结论叶酸-PEG-谷氨酸-紫杉醇前药具有良好的抗肿瘤活性。

半夏化学成分的研究

目的:研究传统中药半夏的化学成分。方法:用各种色谱技术进行分离纯化,通过理化性质和波谱数据鉴定结构。结果:从半夏乙醇提取物的石油醚萃取部分分离鉴定了6个化合物:豆甾4烯3酮(stigmast4en3one)(Ⅰ),环阿尔廷醇(cycloartenol)(Ⅱ),5α,8α桥二氧麦角甾6,22双烯3醇(5α,8αepidioxyergosta6,22dien3ol)(Ⅲ),β谷甾醇3OβD葡萄糖苷6′O二十烷酸酯(βsitosterol3OβD glucoside6′eicosanate)(Ⅳ),α棕榈精(αmonpalmitin)(Ⅴ),β谷甾醇(βsitosterol)(Ⅵ)。经MTT实验表明:化合物Ⅲ对人肿瘤细胞株HCT8,Bel7402,BGC823,A549,A2780具有一定抑制作用。结论:化合物Ⅰ～Ⅳ均为首次从该植物中分离得到,其中化合物Ⅱ为首次从该属植物中分离得到的三萜类化合物,化合物Ⅲ可能为半夏抗肿瘤作用的有效成分之一。

茶多酚对体外培养人胚肝细胞生存率的影响

目的探讨不同浓度茶多酚对体外培养人胚肝细胞(L-02细胞)生存率的影响。方法体外培养L-02细胞,采用50、100、250、500、1 000 mg/L浓度的茶多酚分别干预12、24、36、48 h,倒置显微镜观察各组细胞形态学的变化,用噻唑蓝法测定细胞的存活率。结果与对照组比较,250 mg/L及以上浓度茶多酚组干预12 h后细胞形态即发生变化,初期表现为细胞皱缩、体积变小,而后细胞固缩变为圆形,出现大量漂浮细胞及细胞碎片,形态学变化的程度与茶多酚浓度及作用时间有关。50 mg/L、100 mg/L茶多酚组作用48 h时L-02细胞存活率均高于对照组(P<0.05);250 mg/L及以上浓度茶多酚组干预后L-02细胞存活率均低于对照组(P<0.05),并且随着作用时间的延长和茶多酚浓度的增加,L-02细胞存活率减少(P<0.01)。结论低剂量(≤100 mg/L)茶多酚可能具有促进肝细胞生长、保护肝细胞的作用,较大剂量(≥250 mg/L)则有细胞毒性和抑制细胞生长的作用。

细胞培养法评价自制镍铬烤瓷合金的细胞毒性(英文)

背景:具有良好抗腐蚀性能的镍铬铸造烤瓷合金正在临床广泛应用,但不容忽视的是其释放出的镍离子、铍离子具有明显的毒副作用。因此,改进合金的组成成分,提高其理化性能和生物相容性是目前研究的热点。目的:检测自制镍铬烤瓷合金的体外细胞毒性,并与口腔科常用的镍铬合金、纯钛金属的细胞毒性进行比较。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/12在中国医科大学中心实验室完成。材料:细胞选用对数生长期的小鼠成纤维细胞(L-929细胞)。自制镍铬烤瓷合金由中国科学院金属研究所提供,纯钛由日本松风公司提供,镍铬合金由贺利氏古莎齿科有限公司提供。方法:实验分为自制镍铬烤瓷合金、纯钛组、镍铬合金组,阳性对照组,阴性对照组。取96孔培养板,每板选出5组孔,每组重复孔12个,每孔中均加入浓度为1.0×108L-1的细胞悬液100μL。在自制镍铬烤瓷合金、纯钛组、镍铬合金组孔中分别加入各种材料浸提液100μL,阳性对照组孔中加入铅浸提液100μL,使材料浸提液浓度最终为50%,在阴性对照组孔内加入RPMI1640培养液100μL。主要观察指标:分别于培养1,2,3,4,5d时采用四唑盐比色法测定各组吸光度值,计算相对增殖率。结果:3种金属材料组与阴性对照组之间的吸光度值差异均无显著性意义(P>0.05),与阳性对照组之间的吸光度值差异有显著性意义(P<0.05或P<0.01)。纯钛组细胞增殖率>100%,细胞毒性为0级,自制镍铬烤瓷合金组和镍铬合金组的细胞增殖率为86.36%～99.49%,细胞毒性为1级,阳性对照组在培养3d后细胞毒性增长至2级。结论:自制镍铬烤瓷合金仅具有极微弱的细胞毒性,符合口腔材料临床应用的要求。

大豆异黄酮抑制胃癌细胞生长作用的研究

本实验以人胃癌SGC-7901细胞为体外实验模型,通过MTT实验,分裂指数法和集落形成实验,筛选具有较强抑制胃癌细胞生长作用的大豆异黄酮单体成分。结果表明游离形式的金雀异黄素的抑癌效果最为显著,其他形式的金雀异黄素苷和黄豆苷体外抑制细胞生长作用不明显。金雀异黄素代谢前体物鸡豆苷素亦有较显著的抑制效果,但作用迟缓。苷元形式的大豆异黄酮抑制肿瘤细胞生长作用明显强于苷类形式的大豆异黄酮,三羟异黄酮金雀异黄素是大豆异黄酮发挥生物学作用的最有效单体成分。

3种花色苷对DF-1细胞的影响

目的:探讨来自心里美萝卜、紫甘薯和紫玉米的3种不同的花色苷对DF-1细胞单层生长的影响。方法:直观观察3种花色苷对DF-1细胞生长的影响,初步摸索其最适终浓度;用MTT法检测花色苷在提高细胞活性方面的作用。结果:不同浓度的3种花色苷均对细胞单层生长有不同的影响,心里美萝卜花色苷、紫甘薯花色苷和紫玉米花色苷对细胞生长的最适终浓度分别为100、75和50μg/mL;用MTT法获得相应数据并制成细胞活性图表。结论:不同品种来源及不同浓度的花色苷对DF-1细胞单层生长均有明显影响,为今后开展花色苷促细胞生长,提高细胞抗病毒活性研究提供了数据基础。

榄香烯逆转索拉非尼治疗肝癌耐药的体外研究

目的探讨榄香烯体外逆转肝癌HepG2细胞株耐索拉非尼的作用及其机制。方法购置肝癌HepG2细胞系,经过索拉非尼处理,获得索拉非尼肝癌耐药细胞;使用随机数字表,将获得的索拉非尼细胞株分为榄香烯组、索拉非尼组、榄香烯+索拉非尼组及阴性对照组,通过MTT实验、Western Blot检测等分析各组治疗效果。结果榄香烯+索拉非尼组细胞12 h、24 h抑制率,均高于榄香烯组、索拉非尼组及阴性对照组(P<0.05);榄香烯组细胞12 h、24 h抑制率,均高于索拉非尼组及阴性对照组(P<0.05);索拉非尼组细胞12 h、24 h抑制率,高于阴性对照组(P<0.05);榄香烯+索拉非尼组P21蛋白水平,高于榄香烯组、索拉非尼组及阴性对照组(P<0.05);榄香烯组P21蛋白水平,高于索拉非尼组及阴性对照组(P<0.05);索拉非尼组P21蛋白水平,高于阴性对照组(P<0.05);榄香烯+索拉非尼组Raf激酶水平,低于榄香烯组、索拉非尼组及阴性对照组(P<0.05);榄香烯组Raf激酶水平,低于索拉非尼组及阴性对照组(P<0.05);索拉非尼组Raf激酶水平,低于阴性对照组(P<0.05)。结论榄香烯能逆转肝癌细胞对索拉非尼的获得性耐药,且协同索拉非尼能发挥联合抗肿瘤作用,能为临床肝癌治疗提供新的思路与方法。

抑癌基因p27对增生性瘢痕成纤维细胞增殖及DNA合成的影响

目的 探讨抑癌基因 p2 7对增生性瘢痕的作用 .方法 取体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞 (HTs Fb) ,将构建的 pc DNA3- p2 7真核表达质粒体外转染 HTs Fb,经 G418筛选获得稳定表达的细胞克隆 ,用 MTT和 3 H- Td R掺入法观察抑癌基因 p2 7对 HTs Fb增殖及 DNA合成的影响 .结果 抑癌基因 p2 7对 HTs Fb增殖及 DNA合成均有明显抑制作用 .结论 抑癌基因 p2 7可能通过抑制成纤维细胞增殖及DNA合成抑制瘢痕增生 .

漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2增殖、生长周期和细胞凋亡的影响

目的观察漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长增殖和生长周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法采用MTT比色法研究漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞生长抑制作用;通过流式细胞仪检测DNA含量,分析细胞周期的分布。结果 MTT实验结果表明较高浓度的漆树黄酮对人肝癌细胞株HepG2细胞具有直接的抑制作用,并呈剂量和时间依赖性,200μmol.L-1的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2细胞72 h后,对细胞生长的抑制率最高可达53.78%,同对照组相比(P<0.01);流式细胞术实验结果表明,不同浓度的漆树黄酮作用于人肝癌细胞株HepG2 12 h后,可使G1期肿瘤细胞增多,引起G1期阻滞,作用时间为24 h、48 h时,则可引起S期阻滞;同时,不同浓度的漆树黄酮在不同的时间点都可使HepG2细胞出现明显的凋亡峰。结论漆树黄酮具有直接抑制肿瘤细胞生长的作用,其机制可能与引起细胞周期阻滞和诱导凋亡有关。

Ti2448合金种植体表面不同纳米管径生物活性膜对成骨细胞早期黏附的影响

观察Ti2448合金表面不同纳米管径生物活性膜对成骨细胞早期黏附的影响,筛选出能够抵抗细菌在种植体表面黏附和定植的最适管径,为研制开发具有抗菌性能的种植体提供实验基础。采用阳极氧化法,设定不同氧化电压,在Ti2448合金表面生成具有不同纳米管径的生物活性膜。通过MTT实验检测不同管径纳米管表面在不同时间点黏附的MG-63细胞数量差异;通过免疫荧光法观察接种24h后不同管径纳米管表面黏附细胞形态学差异。结果显示,细胞接种3h和24h后,30nm组的OD值显著高于对照组及其他实验组(P<0.05);随着纳米管径的增加,细胞骨架蛋白的铺展范围逐渐减小,细胞由多角形渐变为梭形、椭圆形、圆形。研究结果表明,30nm管径生物活性膜更有利于成骨细胞的早期黏附,可能更能抵抗细菌在钛种植体上的黏附与定植。

新型医用无镍不锈钢的生物相容性评价

背景:BIOSSN4无镍不锈钢是一种奥氏体医用不锈钢材料,在中国药品生物制品检定所通过了标准的溶血实验、细胞毒性实验和致敏实验。目的:评价新型医用BIOSSN4无镍不锈钢的体外细胞毒性及抗腐蚀性。方法:将小鼠L929成纤维细胞悬液以1×108 L-1的浓度接种于96孔板,分5组培养,分别加入BIOSSN4无镍不锈钢浸提液、316L不锈钢浸提液、金合金浸提液、铅材料浸提液(阳性对照)及RPMI1640培养液(阴性对照)。培养1,2,3 d,观察细胞形态,采用MTT法检测各组吸光度值,计算细胞相对增殖率,评价毒性分级。在模拟口腔环境中,检测BIOSSN4无镍不锈钢、316L不锈钢及金合金的自腐蚀电位、自腐蚀电流密度及极化电阻。结果与结论:培养3 d内,铅材料浸提液组细胞皱缩,细胞数量明显减少,细胞相对增殖率低于其余4组(P<0.05);其余4组细胞形态良好,增殖旺盛,细胞相对增殖率均在75%以上。BIOSSN4无镍不锈钢浸提液、316L不锈钢浸提液与金合金浸提液的毒性均为1级,铅材料浸提液的毒性为2至3级,表明BIOSSN4无镍不锈钢具有良好的生物相容性。BIOSSN4无镍不锈钢的抗腐蚀性高于316L不锈钢,低于金合金。