白藜芦醇通过ERK1/2和NF-κB通路调节NADPH氧化酶表达改善急性肺损伤

目的探讨白藜芦醇对急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶的影响,并分析相关信号通路机制。方法将50只雄性SPF级SD大鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组,每组10只。对照组和模型组给予生理盐水干预,地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组分别给予2 mg/kg地塞米松、100 mg/kg白藜芦醇、500 mg/kg白藜芦醇干预,1次/d,连续干预14 d。干预结束后,除对照组外,其余组别大鼠构建急性肺损伤模型。比较各组大鼠肺组织病理状态、肺湿重/干重比(W/D)、肺损伤评分,采用ELISA法检测肺泡灌洗液白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平;采用RT-PCR法检测各组NADPH氧化酶亚基p47^(phox)、p22^(phox),及ERK、NF-κB mRNA水平;采用Western bloting法检测各组p47^(phox)、p22^(phox)、p-ERK1/2、ERK1/2、p-NF-κB、NF-κB蛋白水平。结果模型组、地塞米松组、低剂量白藜芦醇组和高剂量白藜芦醇组W/D及肺损伤评分、MDA水平、p22^(phox)、p47^(phox)、ERK1/2、NF-κB mRNA、p47^(phox)蛋白、p-ERK/ERK、p-NF-κB/NF-κB、IL-6、IL-8、TNF-α水平高于对照组,而SOD、GSH-Px水平低于对照组(P<0.05)。结论白藜芦醇可改善LPS诱导的急性肺损伤大鼠NADPH氧化酶及氧化应激状态,其作用机制可能与ERK1/2-NF-κB通路有关。

NADPH氧化酶4在心血管损伤中的作用机制

心血管结构和功能损伤是许多心血管疾病的重要病理基础,许多研究表明氧化应激在缺血性心脏病、动脉粥样硬化、高血压等诸多病理性心血管损伤中发挥重要作用。NADPH氧化酶(Nox)是调控氧化还原信号的关键酶,而血管内的活性氧主要来源于Nox4。随着研究的不断深入,发现Nox4在不同阶段或不同刺激下会发挥不同甚至截然相反的作用,如双向调节动脉粥样硬化的进展、双向作用影响血压等。现总结Nox4在不同心血管损伤中的不同影响及作用机制,为后续的研究提供一定的理论基础。

川芎嗪对脑缺血再灌注小鼠脑损伤及NADPH氧化酶表达的影响

目的研究川芎嗪对脑缺血再灌注小鼠大脑氧化应激损伤的保护作用和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶表达的影响。方法采用线栓法建立大脑中动脉闭塞/再灌注模型。造模后对小鼠进行Longa神经功能评分;采用HE和氯化三苯基四氮唑染色法(triphenyltetrazolium chloride staining,TTC)分别观察脑组织的病理改变和梗死情况;检测脑组织中超氧化物歧化酶(total antioxidative capacity,T-AOC)、过氧化物酶(superoxide dismutase,SOD)、乳酸脱氢酶(malondialdehyde,MDA)、过氧化氢(hydrogen peroxide,H_(2)O_(2))和髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)的变化,Western blot检测NADPH氧化酶活化蛋白p47抗体(NADPH oxidase activated protein p47 antibody,P47phox)和NADPH氧化酶(NADPH oxidase,Nox)4蛋白的表达,免疫组化检测肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α的表达。结果川芎嗪能显著减轻脑缺血再灌注小鼠的脑组织损伤、缩小脑梗死体积,升高脑缺血再灌注小鼠脑组织中T-AOC、SOD水平而降低MDA、H_(2)O_(2)和MPO的含量(P<0.05),同时降低其脑组织中P47phox、Nox4和TNF-α的蛋白表达(P<0.05)。结论川芎嗪对脑缺血再灌注小鼠大脑损伤具有明显的保护作用,其机制与降低NADPH氧化酶的表达进而抑制氧化应激及减轻炎症反应有关。

NADPH氧化酶对ROS和铁死亡在骨稳态作用中的研究进展

NADPH氧化酶(NADPH Oxidase,NOXs)是产生超氧化物的酶,在机体防御、生物合成途径以及细胞信号传导中发挥作用。NOXs作为活性氧(ROS)的主要来源,已成为抗氧化应激、炎症、纤维化和肿瘤的热门靶点。文献提示,NOXs及其相关的氧化还原反应与破骨细胞和成骨细胞密切相关,它驱动膜相关活性氧(reactive oxygen species,ROS)及启动铁死亡,影响骨形成和骨吸收。本文拟综述NOXs对ROS和铁死亡在骨稳态中的作用为NOXs治疗骨代谢相关疾病提供文献参考。

NADPH氧化酶导致糖尿病肾病病理改变机制的研究进展

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶是引发糖尿病肾病病理改变的重要因素,通过氧化应激反应作用于肾脏。对NADPH氧化酶的研究成为近年热点。本文对NADPH氧化酶导致糖尿病肾病病理改变机制进行综述。

NADPH氧化酶2在七氟烷所致新生大鼠海马氧化应激及神经元凋亡中的作用机制

目的探究吸入性麻醉药七氟烷是否通过激活新生大鼠海马NADPH氧化酶2介导氧化应激损伤引起神经元凋亡及远期认知功能损害。方法新生7d的清洁级SD雄性大鼠116只,采用随机数字表法分为空气对照组(Con组,n=29)、夹竹桃麻素对照组(Apo组,n=29)、七氟烷实验组(Sevo组,n=29)、七氟烷+夹竹桃麻素实验组(Sevo+Apo组,n=29)。Con组和Sevo组新生大鼠分别暴露于空气或2.3%七氟烷中6h,Apo组和Sevo+Apo组于空气或七氟烷暴露前腹腔注射给予新生大鼠夹竹桃麻素50mg/kg。于七氟烷暴露结束后6h检测4组新生大鼠海马组织NADPH氧化酶2活性和蛋白表达水平,评估氧化应激产物丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量和凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平,运用尼氏染色法观察海马CA1、CA3区神经元的形态学变化并计数,并于七氟烷暴露结束后21d采用八臂迷宫实验检测大鼠空间工作记忆和参考记忆用于评估学习记忆能力变化。结果与Con组比较,Sevo组NADPH氧化酶2活性及蛋白表达水平均升高(P<0.05),氧化应激产物MDA含量及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3表达水平同样升高(P<0.05);而与Sevo组相比,Sevo+Apo组NADPH氧化酶2活性及蛋白表达量、MDA含量及cleaved caspase-3表达水平均降低(P<0.05)。与Con组比较,Sevo组海马锥体神经元排列明显稀疏紊乱,部分胞质溶解,细胞核固缩、碎裂伴有CA1区和CA3区锥体神经元数目减少(P<0.05),Sevo+Apo组也可见细胞水肿、核固缩等病理形态,但其程度较Sevo组明显减轻,且椎体神经计数仍多于Sevo组(P<0.05)。八臂迷宫实验提示第1~5天Sevo组工作记忆错误次数高于Con组(P<0.05),但Sevo+Apo组出现空间工作记忆错误次数少于Sevo组,差异有统计学意义(P<0.05);而在参考记忆错误方面,4组大鼠表现差异无统计学意义(P>0.05)。结论七氟烷所致发育脑海马神经元凋亡及认知功能损害与其激活NADPH氧化酶2介导氧化应激损伤密切相关。

锁阳黄酮对阿尔茨海默病大鼠海马组织ROS含量及NADPH氧化酶、NLRP3表达的影响

目的 观察锁阳黄酮对β淀粉样蛋白(Aβ)_(1-42)诱导的阿尔茨海默病(AD)大鼠海马组织活性氧(ROS)含量及NADPH氧化酶、Nod样受体蛋白3(NLRP3)表达的影响,探讨其神经保护作用的机制。方法 70只SPF级Wistar雄性大鼠随机分为空白组、假手术组、模型组、多奈哌齐组及锁阳黄酮低、中、高剂量组,每组10只。大鼠于双侧海马注射Aβ_(1-42)建立AD大鼠模型。假手术组注射等体积生理盐水,空白组不予任何处理。多奈哌齐组和锁阳黄酮低、中、高剂量组予相应药物灌胃,空白组、假手术组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续28 d。Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力,HE染色观察海马组织病理变化,免疫组化检测海马组织Aβ_(1-42)表达,ELISA检测海马组织及血清ROS含量,Western blot检测海马组织NADPH氧化酶亚基(gp91^(phox)、p22^(phox)、p67^(phox)、p47^(phox))、NLRP3、白细胞介素(IL)-1β蛋白表达,RT-PCR检测海马组织NADPH氧化酶各亚基(gp91^(phox)、p22^(phox)、p67^(phox)、p47^(phox))mRNA表达。结果 与假手术组比较,模型组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期明显延长(P<0.01),跨平台次数和目标象限停留时间明显减少(P<0.01);海马CA1区锥体细胞凋亡明显,局部锥体细胞排列紊乱,海马组织Aβ_(1-42)表达明显升高(P<0.05);海马组织及血清ROS含量明显增加(P<0.01),海马组织NADPH氧化酶各亚基和NLRP3、IL-1β蛋白表达明显升高(P<0.01),NADPH氧化酶各亚基mRNA表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。与模型组比较,锁阳黄酮高剂量组大鼠Morris水迷宫实验逃避潜伏期明显缩短(P<0.01),跨平台次数和目标象限停留时间明显增加(P<0.05,P<0.01);海马CA1区病理形态有所改善,海马组织Aβ_(1-42)表达明显降低(P<0.05);海马组织及血清ROS含量明显减少(P<0.01),海马组织NADPH氧化酶各亚基和NLRP3、IL-1β蛋白表达明显降低(P<0.05,P<0.01),NADPH氧化酶各亚基mRNA表达明显降低(P<0.05,P<0.01)。结论 锁阳黄酮可通过调节AD大鼠海马组织ROS含量及NADPH氧化酶、NLRP3表达,抑制氧化应激和炎症反应,发挥神经保护作用。

ERK1/2通过调控NADPH氧化酶和线粒体分裂在结肠炎中的作用

目的研究细胞外信号调节激酶1和2(ERK1/2)通过调控NADPH氧化酶(Nox)和线粒体分裂在结肠炎中的作用。方法3%葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导小鼠急性结肠炎。将30只C57BL/6J小鼠用随机数表法分为6组:Control组、3%DSS组、1%二甲亚砜(DMSO)组、ERK1/2抑制剂(PD98059)组、3%DSS+1%DMSO组、3%DSS+PD98059组,每组5只。评估Control组和3%DSS组小鼠体重变化、结肠长度改变、疾病活动指数和结肠组织病理学改变,检测小鼠结肠黏膜ERK1/2、磷酸化(p)-ERK1/2、Nox1和Nox2表达水平。1%DMSO组、3%DSS+1%DMSO组给予腹腔注射1%DMSO;PD98059组、3%DSS+PD98059组小鼠给予腹腔注射PD98059。评估4组小鼠结肠组织病理学改变,检测Nox1、Nox2、动力相关蛋白1(DRP1)、p-DRP1-S616和p-DRP1-S637等线粒体分裂相关蛋白表达水平的改变。透射电镜观察Control组和3%DSS组小鼠结肠上皮细胞线粒体分裂情况。免疫荧光双染分析2组小鼠结肠黏膜中Nox2与线粒体外膜转位酶TOM复合体(TOMM20)共定位情况。分析2组小鼠结肠黏膜DRP1与Nox2 mRNA相对表达量的相关性。结果与Control组相比,3%DSS组小鼠体重下降、结肠长度缩短、疾病活动指数增加和结肠组织病理学评分升高,结肠黏膜p-ERK1/2、Nox1和Nox2表达增加(P均<0.05)。结肠炎小鼠结肠上皮细胞中的线粒体分裂增加,结肠黏膜的DRP1和Nox2共定位增加,两者mRNA相对表达呈正相关(r=0.678,P<0.05)。ERK1/2抑制剂PD98059改善结肠炎小鼠结肠组织病理学变化,并且下调结肠黏膜Nox1、Nox2、DRP1、p-DRP1-S616的表达。结论抑制ERK1/2可能通过减轻Nox表达和线粒体分裂,改善结肠炎。

NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用

目的探讨NADPH氧化酶在人真皮成纤维细胞氧化应激损伤中的作用。方法 H_2O_2构建氧化应激模型,将实验分为正常组、氧化损伤组和NADPH氧化酶抑制剂(DPI)组,MTT检测细胞活力,DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)改变,Western blot分析NADPH氧化酶胞膜亚基gp91phox表达变化。结果 H_2O_2对成纤维细胞的氧化损伤呈时间和浓度依赖,H_2O_2700μmol/L处理24 h后细胞活力下降约40%(P<0.05),ROS升高2倍(P<0.05)。而抑制剂组细胞活力较氧化损伤组增加20%(P<0.05),ROS下降至正常水平(P<0.05)。Western blotting结果显示氧化损伤组gp91phox表达随H_2O_2浓度逐渐升高,而抑制剂组表达接近正常水平。结论 H_2O_2可通过影响NADPH氧化酶特别是胞膜亚基gp91phox引发成纤维细胞氧化损伤。

镉/铬胁迫对谷子幼苗生长和NADPH氧化酶及抗氧化酶体系的影响

为了探讨重金属镉(Cd)、铬(Cr)胁迫对谷子幼苗生长和生理的影响,采用营养液培养法,检测不同浓度的Cd、Cr胁迫对谷子幼苗生长以及过氧化氢(H_2O_2)含量、叶绿素含量、丙二醛(MDA)含量、NADPH氧化酶和抗氧化酶活性的影响。结果表明:不同浓度(50/1000μmol·L^(-1))两种金属(Cd、Cr)胁迫下,谷子幼苗株高、根长显著减小(P<0.05),H_2O_2和MDA含量升高,叶绿素含量降低;随Cd、Cr的浓度升高,根和叶片中NADPH氧化酶活性显著增强,高浓度Cd、Cr可导致过氧化物酶(POD)、过氧化氢酶(CAT)和抗坏血酸过氧化物酶(APX)活性显著升高;同时Cd、Cr诱导编码NADPH氧化酶基因Sirboh D和Sirboh F的表达,而超氧化物歧化酶(SOD)活性呈低浓度增加高浓度下降的趋势。由此可知,Cd、Cr对谷子幼苗的胁迫使其发生一系列生理指标变化,造成植株不同程度损伤,植株自身则通过增强抗氧化酶活性对机体起到保护作用。

熊果酸对活化型肝星状细胞NADPH氧化酶亚基p47^(Phox)表达及ERK1/2信号通路活化的影响

目的研究熊果酸(ursolic acid,UA)对瘦素诱导的大鼠肝星状细胞(HSC-T6)NADPH氧化酶(NOX)亚基p47Phox表达及ERK1/2信号通路活化的影响,并观察Ⅰ型胶原合成及细胞增殖情况。方法将培养激活的HSC-T6细胞株分为6组:正常对照组,不加任何药物;瘦素组,给予重组大鼠瘦素(100 ng/ml)刺激细胞;各干预组分别给予UA(50μmol/L)、JAK抑制剂AG490(50μmol/L)、NOX抑制剂DPI(20μmol/L)、ERK抑制剂PD98059(30μmol/L)预处理30 min,再加入瘦素刺激不同时间。采用蛋白质印迹分析检测细胞膜移位的p47Phox蛋白、细胞总p47Phox蛋白和磷酸化的ERK1/2(p-ERK1/2)蛋白表达;采用RT-PCR法检测Ⅰ型胶原mRNA的表达;采用MTT法检测细胞增殖。结果瘦素刺激HSC-T6细胞30 min后细胞膜p47Phox蛋白表达较正常对照组增高(P<0.01),细胞内p-ERK1/2蛋白表达也随之增高(P<0.05);UA、AG490、DPI、PD98059干预后抑制了p47Phox蛋白向细胞膜移位以及细胞内ERK1/2蛋白磷酸化。瘦素刺激HSC-T6细胞12 h后Ⅰ型胶原的mRNA表达较正常对照组升高(P<0.01),UA、AG490、DPI及PD98059干预组Ⅰ型胶原mRNA的表达均低于瘦素组(P均<0.01)。瘦素刺激HSC-T6细胞12、24、48 h后细胞增殖率高于正常对照组(P均<0.01);UA、AG490、DPI及PD98059干预不同时间点的细胞增殖率均低于瘦素组(P均<0.01),UA的抑制细胞增殖作用弱于DPI(P<0.01)。结论 UA能抑制瘦素诱导的HSC-T6细胞增殖及Ⅰ型胶原表达,机制可能与抑制NOX亚基p47Phox向细胞膜移位及下游信号通路ERK1/2的激活有关。

NADPH氧化酶对自发性高血压大鼠体内氧化应激的影响

目的考察NADPH氧化酶对自发性高血压大鼠体内氧化应激的影响。方法22wk龄自发性高血压大鼠(SHR)和正常血压WKY大鼠,采用尾套法测定血压,Greiss反应测定血清一氧化氮分泌量,ABTS和FRAP法进行血清总抗氧化能力测定,血管环舒缩测定来评价超氧阴离子清除剂超氧化物歧化酶(SOD)和NADPH氧化酶抑制剂夹竹桃麻素(Apo)对大鼠腹主动脉内皮依赖性舒张反应;采用RT-PCR考察内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、NADPH氧化酶亚基p22phox以及NADPH氧化酶亚基gp91phox类似物nox4mRNA表达。结果与WKY大鼠相比,SHR血压升高,而血清总抗氧化水平及NO分泌量均降低。PCR显示SHR胸主动脉中eNOS及p22phoxmRNA表达与WKY大鼠相比差异无显著性,而nox4表达则升高。SHR腹主动脉内皮依赖性舒张反应与WKY相比降低,SOD或Apo均能明显逆转该变化。结论结果提示SHR体内氧化应激状态与NADPH氧化酶gp91phox类似物nox4mRNA过表达有关;NADPH氧化酶依赖性的氧化应激参与了SHR内皮功能障碍的发生发展;药理调节NADPH氧化酶功能或应用抗氧化治疗可明显改善SHR内皮依赖性舒张反应。

丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺NADPH氧化酶亚单位p22phox表达水平的影响

目的探讨益气养阴活血方丹蛭降糖胶囊联合运动对糖尿病大鼠胰腺烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶亚单位22kD多肽(p22phox)蛋白表达水平的影响。方法雄性Wistar大鼠60只,分为正常组、模型组、运动组、丹蛭降糖胶囊组(简称中药组)及丹蛭降糖胶囊加运动组(简称中药加运动组),用小剂量链脲佐菌素(STZ)联合高脂饲料的方法建立糖尿病大鼠模型,用免疫组化法检测大鼠胰腺组织中p22phox、8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2-de-axyguanine,8-OHdG)的表达,用Western blot检测各组p22phox表达水平。结果模型组p22phox、8-OHdG的表达水平明显高于正常组,差异有统计学意义(P<0.01),免疫组化观察到p22phox、8-OHdG主要在胰岛细胞胞浆中表达,中药、运动能明显降低p22phox、8-OHdG水平(P<0.01),运动与中药联用对降低p22phox、8-OHdG水平有协同作用(P<0.05)。结论运动、丹蛭降糖胶囊及两者联用能降低NADPH氧化酶的表达,减少氧化应激的来源,从而保护胰岛β细胞。

内皮微颗粒通过NADPH氧化酶损伤内皮细胞功能

目的探讨冠心病患者循环内皮微颗粒(EMPs)与血流介导的内皮舒张功能(FMD)之间的关系以及EMPs损伤内皮细胞功能的机制。方法选择2009年3～6月在中山大学附属第一医院高血压血管病科住院的冠心病患者及冠心病高危患者各15名,检测血生化指标、循环内皮微颗粒水平及血流介导的内皮舒张功能,分析各项指标之间的关系;培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs),制备内皮细胞来源的微颗粒,用内皮微颗粒刺激培养的人脐静脉内皮细胞,检测活性氧产物(ROS)及一氧化氮(NO)的水平。结果冠心病患者硝酸酯类的使用比率高于冠心病高危患者,冠心病患者循环内皮微颗粒水平高于高危患者,而血流介导的内皮舒张功能低于高危患者,在所有患者中,循环内皮微颗粒水平与血流介导的内皮舒张功能之间呈负相关;EMPs呈浓度依赖性地增加脐静脉内皮细胞活性氧产物的产生,并降低NO的生成,应用20μmol/lNADPH氧化酶抑制剂Apocyine能显著抑制EMPs导致的ROS增加和NO的降低。结论在冠心病患者中,循环EMPs可以损伤内皮细胞舒张功能,NADPH氧化酶参与EMPs导致内皮细胞功能障碍的损伤过程。

阿托伐他汀对大鼠缺血再灌注脑组织中NADPH氧化酶源性超氧阴离子的抑制作用

目的:脑组织在缺血再灌注的早期,超氧阴离子的大量生成加重了脑组织损伤,本实验研究阿托伐他汀对缺血再灌注脑组织保护作用的可能机制。方法:成年雄性Sprague-Dawley大鼠经线栓法阻断大脑中动脉建立脑缺血再灌注模型,再灌注前经腹腔给予阿托伐他汀(立普妥)治疗。脑梗死灶体积用四唑氮蓝染色后测量;NADPH氧化酶酶活性和超氧阴离子水平使用光泽精增强化学发光法定量测定;NADPH氧化酶膜亚基gp91phox、膜易位亚基p47phox和小GTP酶Rac-1蛋白的表达用蛋白质印迹分析。结果:缺血半暗区的NADPH氧化酶活性和超氧阴离子水平增高,于再灌注2h达到高峰,但缺血中心区的NADPH氧化酶活性和超氧阴离子水平无明显增高。阿托伐他汀预治疗能抑制再灌注2h后缺血半暗区的NADPH氧化酶活性和超氧阴离子增高,减少膜亚基gp91phox蛋白的表达和预防细胞质亚基p47phox蛋白易位至细胞膜。结论:阿托伐他汀对缺血再灌注脑组织NADPH氧化酶源性超氧阴离子的抑制作用,是其脑保护作用机制之一。

熊果酸(UA)对大鼠活化型肝星状细胞(HSC)的NADPH氧化酶(NOX)亚基及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路活化的影响

目的观察熊果酸(ursolic acid,UA)对大鼠活化型肝星状细胞-6(hepatic stellate cell T6,HSC-T6)NADPH氧化酶(NAPDH oxidase,NOX)亚基及其调控的磷脂酰肌醇-3-羟激酶/蛋白激酶(phosphatidyl inosit013-kinase/Akt,PBK/Akt)、P38丝裂原活化蛋白激酶(P38 mitogen-activated protein kinase,P38MAPK)信号通路及其对基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1,TIMP-1)、基质金属蛋白酶-1(metalmatrix proteinase-1,MMP-1)蛋白表达的影响,并探讨其机制。方法取对数生长期的HSC-T6细胞,随机分成6组:空白对照组、瘦素组(100 ng/mL)、UA干预组(UA 50μmol/L+瘦素)、NOX抑制剂DPI干预组(DPI 20μmol/L+瘦素)、P38MAPK抑制剂SB203580干预组(SB203580 10μmol/L+瘦素)及PI3K抑制剂LY294002干预组(LY294002 10μmol/L+瘦素)。采用Western blot法分别检测NOX亚基gp91^(phox)、p22^(phox)、p67^(phox)、Rac1蛋白表达;信号通路PI3K、Akt、P38MAPK的活化及TIMP-1、MMP-1蛋白表达。结果 UA能显著抑制瘦素诱导的gp91^(phox)、p22^(phox)、p67p^(phox)、Rac1蛋白表达(P均<0.01),但UA对gp91^(phox)、p67^(phox)蛋白表达的抑制作用不及DPI和LY294002。UA能抑制瘦素诱导的PI3K蛋白表达及Akt、P38MAPK蛋白磷酸化(P均<0.01),与DPI及LY294002作用的差异无统计学意义。UA能抑制瘦素诱导的TIMP-1蛋白表达,同时促进MMP-1蛋白表达(P均<0.01)。结论 UA能抑制瘦素诱导的大鼠HSC-T6细胞NOX亚基gp91p^(phox)、p22ph^(phox)、p67p^(phox)、Rac1表达及PI3K/Akt、P38MAPK信号通路的活化;其下调TIMP-1蛋白及上调MMP-1蛋白表达的机制可能与UA抑制NOX调控的PI3K/Akt及P38MAPK信号通路有关。

灵芝多糖抑制NADPH氧化酶表达防治大鼠动脉粥样硬化

目的探讨灵芝多糖对食饵性实验动脉粥样硬化(AS)大鼠的防治作用及其作用机制。方法将40只大鼠随机分为正常对照组、动脉粥样硬化模型组、灵芝多糖低、中、高剂量预防组。12周末颈动脉取血检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)含量;处死大鼠,光镜观察各组主动脉粥样斑块形成情况;取主动脉测定活性氧(ROS)含量;免疫印迹观察其Nox4、p22phox蛋白表达情况。结果灵芝多糖各剂量组均可有效抑制动脉粥样硬化病理进程,降低血清MDA、SOD及主动脉ROS含量等氧化应激反应指标,减少主动脉Nox4、p22phox蛋白表达。结论灵芝多糖通过下调Nox4、p22phox等NADPH氧化酶蛋白表达水平抑制主动脉氧化应激反应,明显改善大鼠动脉粥样硬化。

筋脉通含药血清对高糖培养的Schwann细胞诱导型一氧化氮合酶和NADPH氧化酶p22-phox亚基表达的影响

目的:探讨筋脉通含药血清对高糖培养的Schwann细胞诱导型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)蛋白表达及烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotidephosphate,NADPH)氧化酶p22-phox亚基mRNA表达的影响。方法:雄性Wistar大鼠随机分为3组,分别灌胃筋脉通、维生素C或蒸馏水制备含药血清和对照血清。取新出生大鼠的双侧坐骨神经用于制备Schwann细胞。将体外培养的Schwann细胞分为高糖组、筋脉通组(加入筋脉通含药血清)、维生素C组(加入维生素C含药血清)及正常对照组。培养48h后,采用免疫荧光法检测Schwann细胞内i NOS蛋白的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应法检测NADPH氧化酶p22-phox亚基mRNA的表达。结果:高糖培养的Schwann细胞内i NOS蛋白表达及NADPH氧化酶p22-phox亚基mRNA表达均较正常对照组明显升高(P<0.01);与高糖组比较,筋脉通组i NOS蛋白表达及NADPH氧化酶p22-phox亚基mRNA表达明显降低(P<0.01),且明显优于维生素C组(P<0.01)。结论:筋脉通含药血清可以下调高糖培养的Schwann细胞i NOS蛋白及NADPH氧化酶p22-phox亚基mRNA的表达。

Wangzaozin A调节NADPH氧化酶源性活性氧诱导HL-60细胞分化

利用台盼蓝排染法、吉姆萨染色及流式细胞术对对映-贝壳杉烷二萜wangzaozin A影响人早幼粒白血病细胞HL-60生长、细胞形态、NBT还原能力、细胞吞噬及细胞表面抗原CD11b表达进行了检测.结果显示,0.2~0.8μmol/L wangzaozin A抑制HL-60细胞生长,0.6和0.8μmol/L处理组细胞显示了明显的G1期周期阻滞.随着wangzaozin A浓度升高及处理时间延长,细胞核质比减小,肾形核、杆状核和分叶核细胞增多及胞质中颗粒状物质增加;同时,细胞NBT还原能力、吞噬能力及细胞表面抗原CD11b表达显著增强,表明wangzaozin A可诱导HL-60细胞向成熟粒细胞分化.进一步利用荧光探针DCF检测显示0.6和0.8μmol/L wangzaozin A处理细胞12h后细胞内ROS显著升高;抗氧化剂NAC及NADPH氧化酶抑制剂APO显著抑制wangzaozin A诱导HL-60细胞上调CD11b表达,表明wangzaozin A可通过上调NADPH氧化酶源性的活性氧浓度诱导HL-60细胞分化.

双歧杆菌抑制溃疡性结肠炎小鼠结肠氧化应激和NADPH氧化酶表达

目的:观察溃疡性结肠炎(UC)氧化应激及NADPH氧化酶表达的变化特点,探讨双歧杆菌对UC治疗的可能机制。方法:采用葡聚糖硫酸钠(DSS)制作UC小鼠模型,小鼠随机分成3组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、双歧杆菌治疗(BT)组。造模同时给予干预治疗7d,停用造模药物后续治疗7d后处死小鼠,结肠组织HE染色;化学比色法测结肠SOD,GPH-Px,MPO和MDA;qRT-PCR测NADPH氧化酶p22phox和gp91phox亚单位mRNA的表达,westonblotting检测其蛋白水平表达并进行统计学分析。结果:MD组结肠SOD,GPH-Px明显低于NC组(P<0.05);MDA、MPO明显高于NC组(P<0.05);BT组结肠SOD,GPH-Px明显高于MD组(P<0.05);MDA、MPO明显低于MD组(P<0.05);MD组结肠组织p22phox和gp91phoxmRNA与蛋白表达明显高于NC组(P<0.05),BT组明显低于MD组(P<0.05)。结论:双歧杆菌抑制UC结肠的氧化应激水平并抑制NADPH氧化酶的表达,减轻了肠道炎症,延缓UC病情的发展、预防复发。