过表达长穗偃麦草EeHKT1;4基因增强拟南芥抗旱耐盐性分析

植物高亲和性K^(+)转运蛋白基因(HKT)编码K^(+)、Na^(+)转运或K^(+)-Na^(+)共转运质膜通道蛋白,在植物抗逆过程中发挥重要作用。为了研究长穗偃麦草EeHKT1;4(GenBank:KF956112.1)的功能作用,构建了EeHKT1;4过表达植物表达载体转化拟南芥,进行拟南芥转基因植株的抗旱耐盐性评价分析。结果显示,正常生长条件下野生型(WT)与转基因株系的主根长度无差异,NaCl与甘露醇处理下WT和转基因株系根的生长受到抑制,转基因株系根长度均大于同等胁迫条件下(WT)的根长;正常生长条件下WT与转基因株系表型无显著差异,但在NaCl与甘露醇处理下WT表现出叶片萎缩和植株枯黄,转基因株系仅部分植株表现出叶片萎缩,同一胁迫条件下转基因株系的植株存活率皆高于WT。硝基氮蓝四唑(NBT)与二氨基联苯胺(DAB)染色结果显示,正常生长条件下WT与转基因株系叶片染色相对较浅,随着NaCl与甘露醇浓度提高,所有叶片染色程度逐渐加深且同等胁迫下WT染色程度高于转基因株系。以正常生长条件下基因的表达量为对照,随着NaCl浓度的增加,AtSOS1基因在WT和转基因植株中逐渐上调且在转基因中的表达量高于WT;AtNHX1基因在NaCl处理下上调表达且转基因植株中表达量低于WT,除转基因株系L5外并未检测到WT和转基因株系自身因NaCl浓度的提高AtNHX1基因表达量发生改变;在甘露醇处理下,AtRD29B和AtP5CS1基因均上调表达且转基因植株中表达量高于WT。综上所述,EeHKT1;4过表达降低了逆境胁迫下拟南芥中超氧阴离子和H_(2)O_(2)的积累,诱导抗逆基因上调表达,增强拟南芥抗旱耐盐性。

人源EC-SOD在毕赤酵母中的构建与表达

利用基因工程技术构建表达载体并电转化至毕赤酵母中,成功实现人源EC-SOD在毕赤酵母X33中的表达.重组蛋白经盐酸羟胺法测得25 mL摇瓶发酵液上清酶活为508 U·mg^(-1),5 L发酵液上清酶活为909U·mg^(-1).发酵液上清用硫酸铵沉降后,使用DEAE弱阴离子交换树脂初步分离纯化出较纯的EC-SOD,测得比活为1 700 U·mg^(-1),并进行氯化硝基四氮唑蓝(NBT)活性定性染色.结果表明,毕赤酵母成功胞外表达具有一定活性的SOD蛋白.

碱性磷酸酶组化染色在炎症性肠病鉴别诊断中的价值

目的探讨碱性磷酸酶组化染色在炎症性肠病鉴别诊断中的价值。方法应用BCIP/NBT组化染色检测34例克罗恩病(CD组)、36例溃疡性结肠炎(UC组)及15例非炎症性肠病(NIBD组,包括12例肠结核、2例细菌性肠道感染和1例缺血性结肠炎)肠黏膜中肠碱性磷酸酶表达水平。结果 CD组碱性磷酸酶组化染色阳性率显著高于UC组和NIBD组(85.29%vs.5.56%和0)(P<0.05)。碱性磷酸酶组化染色诊断CD的敏感性为93.55%,特异性为90.74%,阳性预测率为85.29%,阴性预测率为96.08%;其与CD病变部位、是否伴有肛周病变、活动度及病变类型无明显相关性(P>0.05)。结论碱性磷酸酶BCIP/NBT组化染色可以作为CD诊断的一个辅助指标。