银杏叶提取物基于TLR4/NF-κB通路对骨质疏松大鼠的干预效果及作用机制

目的分析银杏叶提取物基于TLR4/NF-κB通路对骨质疏松大鼠的干预效果及作用机制。方法选取周龄在4~6周的SPF健康雌性SD大鼠40只,随机分对照组(A组)、骨质疏松组(B组)、阳性药物己烯雌酚组(C组)和银杏叶提取物(D组),适应性饲养1周后,第2周进行建模,饲养3个月后起给予药物干预,C组大鼠每日给予己烯雌酚0.05 mg·kg^(-1)·d^(-1),D组大鼠给予银杏叶提取物,以200 mg·kg^(-1)·d^(-1)的剂量给药,给药方式均采用灌胃给药。C组、D组进行药物干预6周,与此同时,A组、B组给予10 mL·kg^(-1)·d^(-1)0.9%氯化钠溶液灌胃。给药周期满6周后,麻醉大鼠成功,处死大鼠,取出股骨组织,检测并观察各组大鼠碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、25-羟基维生素D 3(25-hydroxyvitamin D_(3),25OHD)、抗酒石酸盐酸性磷酸酶(Tartrate-resistant acid phosphatase,TRACP)、钙离子(calcium ion,Ca^(2+))、镁离子(magnesian ion,Mg^(2+))、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)、过氧化氢酶(catalase,CAT)水平及toll样受体4(toll-like receptoR4,TLR4)、核因子κB(nucleaRfactoRkappa-B,NF-κB)蛋白表达。结果与A组比较,B组、C组、D组ALP、TRACP、MDA、TLR4、NF-κB水平升高,OPG、25OHD、Ca^(2+)、Mg^(2+)、SOD、GSH-Px、CAT水平降低,差异有统计学意义(P<0.05);与B组比较,C组、D组ALP、TRACP、MDA、TLR4、NF-κB水平降低,OPG、25OHD、Ca^(2+)、Mg^(2+)、SOD、GSH-Px、CAT水平升高,差异有统计学意义(P<0.05);与C组比较,D组ALP、TRACP、MDA、TLR4、NF-κB水平降低,OPG、25OHD、Ca^(2+)、Mg^(2+)、SOD、GSH-Px、CAT水平升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论银杏叶提取可能会通过抑制TLR4/NF-κB通路活化来改善骨质疏松大鼠骨代谢水平及氧化应激反应,影响破骨细胞吸收,同时会调节机体Ca^(2+)、Mg^(2+)水平,未来对临床骨质疏松的治疗有重要意义。

苦豆碱通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路改善香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤

目的探究苦豆碱(Alo)对香烟烟雾诱导的人支气管上皮细胞损伤的作用及其可能的作用机制。方法16HBE人支气管上皮细胞经100 mL/L香烟烟雾提取物(CSE)和(50、100、200)μmol/L Alo共处理后,CCK-8法检测细胞活力,试剂盒检测乳酸脱氢酶(LDH)活性;原位末端转移酶标记技术(TUNEL)、Western blot法检测细胞凋亡,ELISA检测炎性因子水平;2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(DCFH-DA)荧光探针和相关试剂盒检测氧化应激水平;Western blot法检测Toll样受体4(TLR4)/核因子κB(NF-κB)/含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)通路相关蛋白表达水平。16HBE细胞经100 mL/L CSE和200μmol/L Alo共处理后,采用上述方法检测过表达TLR4对TLR4/NF-κB/NLRP3通路、细胞LDH活性、凋亡、炎症反应及氧化应激的影响。结果CSE暴露可降低16HBE细胞活力,增加LDH释放和细胞凋亡,增强炎症反应和氧化应激水平,且激活TLR4/NF-κB/NLRP3通路;经Alo处理后,细胞活性升高,LDH释放减少、凋亡降低、炎症减轻、氧化应激水平下降,且TLR4/NF-κB/NLRP3通路失活;TLR4过表达可逆转Alo处理对CSE诱导的16HBE细胞损伤的保护作用。结论Alo可通过抑制TLR4/NF-κB/NLRP3通路减轻CSE诱导的人支气管上皮细胞损伤。

NF-KappaB、p38 MAPK和JNK通路在运动神经损伤引起的大鼠病理性疼痛中的作用及机制

【目的】探讨肿瘤坏死因子α(TNF-α)激活的下游信号转导途径-核转录因子kappaB(NF-κB)、JNK和p38MAPK是否参与运动神经损伤引起的大鼠病理性疼痛的形成,并探讨其可能机制。【方法】采用痛行为学测试和免疫荧光组织化学方法,观察蛛网膜下腔内注射NF-κB抑制剂(PDTC)、p38 MAPK抑制剂(SB203580)和JNK抑制剂(SP600125)对腰5脊神经前根切断(L5-VRT)大鼠机械性痛过敏及腰5背根神经节(DRG)内电压门控钠通道(Nav1.3)表达的影响。【结果】①L5-VRT术前应用NF-κB抑制剂PDTC可完全抑制大鼠双侧机械性痛过敏的形成,并阻断同侧L5 DRG内Nav1.3的上调;②术前应用p38 MAPK抑制剂SB203580和JNK抑制剂SP600125主要抑制大鼠对侧后肢的机械性痛过敏;对手术同侧DRG内Nav1.3的表达,SB203580和SP600125分别具有完全阻断和部分阻断作用;③术后7 d给予PDTC或SB203580或SP600125对已形成的大鼠机械性痛过敏均无影响。【结论】运动神经损伤可能通过NF-κB、p38 MAPK和JNK途径调控未损伤DRG神经元内Nav1.3的表达从而进一步调控L5-VRT引起的大鼠后肢机械性痛过敏。

NF-kappaB对ICAM-1表达的调节作用

目的:研究NF-kappaB对粘附分子ICAM-1表达的调控作用。方法:原代培养HUVECs,用LPS(100 ng.ml-1)刺激不同时间(1、4、8、24 h)后,其中于4 h处预先用NF-κB抑制剂PDTC(1 mmol.L-1)处理15 min,再分别提取核蛋白进行凝胶电泳迁移改变分析(Electrophoretical Mobility Shift Assay EMSA)法测定NF-kappaB活性及提取总RNA进行RT-PCR检测ICAM-1mRNA表达。结果:NF-kappaB的活性变化与ICAM-1的表达有着明显的一致性。用PDTC(NF-kappaB抑制剂)处理内皮细胞,发现ICAM-1的表达随着NF-kappaB活性的降低而下调(2.40±0.11vs0.76±0.09,P<0.01)。结论:NF-kappaB对ICAM-1基因表达起着重要的调控作用。

急性大、中强度运动对大鼠骨骼肌p38 MAPK、NF-kappaB活性,IL-6、MRFs mRNA的影响

目的:探索急性大、中强度运动对大鼠肌肉发生相关因子p38 MAPK、NF-kappaB、IL-6、MRFs(MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4)、MEF2c活性/mRNA影响。方法:66只雄性SD大鼠分为11组,C组(安静组)、大强度组H-0、1、6、16、24 h组(急性大强度运动后0、1、6、16、24 h组,跑台运动方案:1 h、27 m/min、倾角10%,运动30 min后休息5 min,同样强度再跑25 min),M-0、1、6、16、24 h组(急性中等强度运动后0、1、6、16、24 h组,运动方案:1 h、20 m/min、5%,运动30 min后休息5 min,同样强度再跑25 min)。检测各组大鼠腓肠肌p38、Phospho-p38、p65、Phospho-p65、IL-6 mRNA、MRFs(MyoD、MyoG、Myf-5、MRF4)mRNA、MEF2c mRNA水平。结果:(1)H-0、1、6 h组Phospho-p38、Phospho-p65、IL-6 mRNA显著高于C组(均P<0.01)。M-0、1、6 h组Phospho-p38及M-0、1h组Phospho-p65、IL-6 mRNA显著高于C组(均P<0.01),但均显著低于H对应组,其中M-0、1h组IL-6 mRNA显著性水平为P<0.05,其余为P<0.01。(2)H-0、1、6 h组MEF2c mRNA显著高于C组(均P<0.01),M-0、1 h组显著高于C组(均P<0.01)但显著低于H对应组(均P<0.05)。H-1、6 h组MRF4 mRNA,H-6h、M-6 h组MyoD mRNA,H-6、16 h组MyoG mRNA显著高于C组(均P<0.01)。M-6 h组MyoD mRNA显著低于H对应组(P<0.05)。(3)H-6 h、M-6 h组MyoD mRNA/MyoG mRNA比值显著高于C组(P<0.01),H-16 h组显著低于C组(P<0.01)。大、中强度运动后,该比值分别在24、16 h恢复至C组水平(P>0.05)。结论:(1)p38、NF-B活性、IL-6 mRNA均对运动刺激敏感,急性运动后,三者变化相似,特别是大强度条件下。p38活性、NF-B活性、IL-6 mRNA上调幅度及NF-B活性、IL-6 mRNA上调时间与运动强度有关。(2)MEF2c、MyoD mRNA均对运动刺激敏感。MEF2c、MyoD mRNA的上调幅度、MEF2c mRNA的上调时间与运动强度有关。MRF4、MyoG mRNA仅对大强度运动刺激敏感,Myf-5基因表达对运动刺激敏感。(3)大强度运动后,肌肉表型转化趋势经历了慢-快、快-慢两个阶段,后再恢复正常水平。中等强度运动后早期,表型转化同样为慢-快,表型转化结束较早。

口腔鳞癌组织中Kai1基因、NF-kappaB/p50的表达及相关性研究

目的研究Kai1基因、NF-kappaB/p50在口腔鳞癌组织中的表达情况,分析二者在口腔鳞癌发生、发展进程中的作用及意义。方法运用免疫组织化学(SABC)法检测Kai1基因、NF-kappaB/p50在67例口腔鳞癌、28例淋巴结转移灶及23例口腔黏膜白斑、12例癌旁正常口腔黏膜组织中的表达。结果Kai1基因、NF-kappaB/p50的阳性表达率分别为:正常口腔黏膜100%、0%;口腔黏膜白斑(伴中、重度不典型性增生)86.9%、4.4%;无淋巴结转移的口腔鳞癌原发灶59.0%、12.8%;有淋巴结转移的口腔鳞癌原发灶28.6%、57.1%;淋巴结转移灶7.14%、82.1%。有转移的原发灶组较无转移组中Kai1基因的表达明显减低,而其在淋巴结转移灶中的表达又比相对应的原发灶组中的表达进一步减低,差异有统计学意义(χ2=6.0599,P=0.0138;χ2=4.3826,P=0.0363)。有淋巴结转移与无淋巴结转移的原发灶相比较,NF-kappaB/p50在细胞质、胞核中的表达明显增高(χ2=14.8787,P=0.0001);而其在淋巴结转移灶中的表达进一步增高(χ2=4.1388,P=0.0419)。Kai1/CD82、NF-kappaB/p50在口腔鳞癌中的表达呈明显的负相关性(r=-0.5345,P=0.0000)。二者在口腔鳞癌中的表达与患者的年龄、性别、病程、肿块的大小、癌组织浸润的深度、肿瘤的pTNM分期及组织分化程度等临床病理参数均无关(P>0.05)。结论Kai1基因表达下调、NF-kappaB的表达增高很可能促进了口腔鳞癌的转移,Kai1基因的表达减低可能与NF-kappaB的激活有关。

猪NF-kappaB p65/p50基因克隆、序列鉴定及实时荧光定量PCR检测方法的建立

NF-κB信号通路在病毒感染、免疫损伤性疾病、肿瘤疾病中发挥重要作用,其活化水平常作为机体免疫应答水平、疾病发展进程的检测指标。为获得猪NF-κB p65/p50基因序列特征并建立体外定量检测其表达水平的实时荧光定量PCR方法,作者对猪NF-κB p65ORF和成熟p50编码区进行RT-PCR扩增、克隆、测序及生物信息学分析;设计特异性荧光定量引物,建立检测p65、p50实时荧光定量PCR方法。结果显示:所扩增的猪NF-κB p65ORF长1 662bp,编码553aa,成熟p50编码区长1 653bp,编码551aa;与不同动物的p65、p50序列相似性均较高;56.5%p65位于细胞核内,78.3%p50存在于细胞质中,p65、p50均无信号肽及跨膜区。荧光定量结果表明:起始模板与Ct值之间线性关系好,相关系数达到0.999,扩增效率均在95%左右;敏感性高,初始模板的检出下限达到101 copies.μL-1;特异性强,扩增产物形成单一的特异性熔解峰;重复性好,组内变异系数均小于5‰。本试验为进一步研究猪NF-κB p65/p50生物学功能及其在猪相关疾病发生发展中表达量变化奠定了基础。

口腔鳞癌中NF-kappaB/p50的表达及意义

目的研究核转录因子NF-kappaB/p50在口腔鳞癌中的表达及意义。方法运用免疫组化法检测67例口腔鳞癌(包括39例不伴、28例伴淋巴结转移的原发灶)、28例淋巴结转移灶及23例口腔粘膜白斑、12例癌旁正常口腔粘膜组织中NF-kappaB/p50的表达情况。结果67例口腔鳞癌组织中21例有NF-kappaB/p50的异常表达;而正常口腔粘膜组织中无表达,口腔粘膜白斑中仅有少量表达。有淋巴结转移较无淋巴结转移的原发灶相比,NF-kappaB/p50的表达明显增高(16/28∶5/39);而其在淋巴结转移灶中的表达进一步增高(23/28)。NF-kappaB/p50在口腔鳞癌中的表达与组织分化程度、pTNM分期及患者的年龄、性别等临床病理参数无关。结论NF-kappaB/p50在口腔鳞癌及其淋巴结转移灶中的异常高表达,提示NF-kappaB/p50很可能是口腔粘膜上皮癌变及恶性进展进程中一重要的调控因子。

Role of NF-kappaB in Liver Ischemia Reperfusion Injury of Rats

To determine the role of NF-kappaB in ischemia reperfusion (I/R) injury of the rat liver, rats underwent partial hepatic ischemia and reperfusion. The left and median lobes of the liver were subjected to ischemia for 90 min followed by reperfusion for defined times. NF-kappaB activity was analyzed by electrophoretic mobility shift assay (EMSA). Semiquantitative reverse-transcriptase polymerase chain reaction was used to analyze TNF-α and ICAM-1 mRNA levels. Results showed during liver I/R injury, NF-kappaB activation was induced in a time dependent manner. NF-kappaB was activated within 1h and 2h after the initiation of reperfusion and decreased after 4 h. Messenger RNA expression of TNF-α and ICAM-1 were increased after the reperfusion of 2 h. It was concluded that during hepatic I/R injury, NF-kappaB was activated and could bind to special sequence in the promoters of budget genes, which can up-regulate the expression of TNF-α and ICAM-1 mRNA to result in ischemia reperfusion injury of the rat liver.

葫芦巴碱调节PI3K/Akt/NF-κB信号通路对变应性接触性皮炎大鼠免疫反应的影响

目的探讨葫芦巴碱对变应性接触性皮炎(ACD)大鼠免疫、炎性反应及PI3K/Akt/NF-κB信号通路的影响。方法60只SD大鼠随机分为正常组、ACD组、葫芦巴碱(低、中、高)剂量组(20、40、80 mg/kg)和PI3K抑制剂(LY294002)组(40 mg/kg),每组10只。除正常组外,其余组大鼠采用2,4二硝基氟苯(DNFB)诱导ACD模型。给药结束后,通过录像观察大鼠挠痒行为;HE染色检测大鼠耳皮肤组织病理学变化;ELISA检测大鼠血清IgE及Th1、Th2、Th17型细胞因子(IFN-γ、IL-4、IL-17)水平;Western blot检测大鼠耳皮肤组织中炎性因子(IL-1β、IL-6)蛋白及PI3K/Akt/NF-κB信号通路相关蛋白表达。结果与正常组比较,ACD组大鼠挠痒次数增加,血清IgE、IFN-γ、IL-4、IL-17水平及耳皮肤组织中IL-1β、IL-6蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB比值升高(P<0.05),耳皮肤组织角化过度且可见大量炎性细胞浸润;与ACD组比较,葫芦巴碱(低、中、高)剂量组和LY294002组大鼠挠痒次数减少,血清IgE、IFN-γ、IL-4、IL-17水平及耳皮肤组织中IL-1β、IL-6蛋白表达和p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt、p-NF-κB/NF-κB比值降低(P<0.05),耳皮肤组织病理损伤均有所改善,且葫芦巴碱各给药组呈剂量依赖效应;葫芦巴碱高剂量组和LY294002组大鼠上述指标比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论葫芦巴碱可抑制ACD大鼠皮肤组织中PI3K/Akt/NF-κB信号通路激活,调控Th1、Th2、Th17型免疫应答并减轻皮肤局部和全身炎性反应。

组织芯片研究Notch1与NF-κB在胃癌中的表达和意义

目的:研究Notchl和NF-KB在胃癌中的表达与临床病理特征的关系以及两者间相互作用的关系。方法:通过免疫组化的方法检测了含有168例胃癌和27例正常胃组织的组织芯片中Notchl和NF-κB的表达情况。结果:Notchl在胃癌中表达较正常胃组织明显上调(P<0.01),并与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、脉管浸润明显相关;NF-κB在胃癌中表达明显高于正常对照组,并与肿瘤大小、分化程度、浸润深度、远处转移及脉管浸润明显相关。Kaplan-Meier分析显示Notchl和NF-κB阳性组的预后较阴性组差。Cox回归多因素分析显示Notchl是影响胃癌预后的独立因素之一(P<0.05)。结论:NF-κB的过度表达可能参与了Notchl信号通路失调介导的胃癌发生发展机制。Notchl可能成为评价胃癌预后和生存的新的指标,也可能作为胃癌治疗的新靶点。

姜黄素阻断NF-κB信号通路促进食管鳞癌细胞凋亡的体外研究

背景与目的:活化的核转录因子-kappa B(nuclear factor-kappa B,NF-κB)信号通路参与调控多种与炎症、抗凋亡、肿瘤形成和转化有关的基因表达。但在食管鳞癌中的作用尚不清楚。姜黄素具有抗感染、抗氧化等多种药理作用。本研究将探讨姜黄素是否能够通过阻断NF-κB信号通路对食管鳞癌细胞增殖、抗凋亡产生影响。方法:Western blot法检测EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素(50μmol/L)培养不同时间后,pIκBα和抗凋亡蛋白Bcl-2的表达情况。在EC9706和Eca109细胞中加入姜黄素培养72h,流式细胞仪检测凋亡细胞情况。MTT法检测姜黄素单独或与5-FU联合对细胞增殖的影响。结果:Western blot的结果显示,在姜黄素作用下EC9706和Eca109细胞中pIκBα和Bcl-2蛋白的表达水平随着时间的延长逐渐下降。在单独使用姜黄素后,就可促进EC9706和Eca109细胞的凋亡(P<0.05);当与5-FU联合使用时,可明显提高EC9706和Eca109细胞对化疗药物的敏感性,凋亡细胞显著增加(P<0.05)。姜黄素与5-FU联合应用48h和72h,可明显抑制EC9706和Eca109细胞的增殖,与单独使用姜黄素或5-FU组相比,细胞存活率显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:姜黄素可以通过抑制IκBα的磷酸化阻断NF-κB信号通路,促进细胞凋亡,抑制细胞增殖,增加细胞对5-FU的敏感性。

转染IκBα基因抑制NF-κB活性对A549细胞侵袭行为的影响

背景与目的:近年来的研究显示核因子-κB(nuclear factor-κB,NF-κB)的活化能够调节肿瘤细胞的侵袭和转移。本研究探讨抑制NF-κB的活性对A549细胞侵袭能力的影响及其可能的机制。方法:构建表达NF-κB抑制物α同分异构体(inhibitor of NF-κB,α isoform,IκBα)的真核表达重组质粒pcDNA3.1(+)/IκBα。体外培养A549细胞,分为未转染组(不转染质粒)、转染pcDNA3.1(+)组、转染pcDNA3.1(+)/IκBα组,分别转染相应的质粒。应用RT-PCR、Westernblot检测各组细胞IκBα的表达情况,应用凝胶电泳迁移率改变实验(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)检测各组细胞NF-κB的活性,应用Transwell侵袭小室检测各组细胞的侵袭能力,应用RT-PCR方法检测各组细胞MMP-2、MMP-9的mRNA水平,应用明胶酶谱法检测各组细胞基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase-9,MMP-9)的活性。结果:酶切鉴定结果显示pcDNA3.1(+)/IκBα质粒构建成功。RT-PCR和Westernblot检测结果表明构建的pcDNA3.1(+)/IκBα质粒能够在A549细胞中表达IκBα。转染pcDNA3.1(+)/IκBα组A549细胞NF-κΒ活性、侵袭细胞数目、MMP-2活性及MMP-9活性均低于未转染组和转染pcDNA3.1(+)组(P值均<0.05),而转染pcDNA3.1(+)组与未转染组之间的差异均无统计学意义(P值均>0.05)。结论:转染IκBα基因能够抑制A549细胞中NF-κB的活性。NF-κB的活性下降能够抑制A549细胞的侵袭能力,其机制可能与MMP-2、MMP-9表达下调有关。

AP-1与NF-κB的活化表达与T细胞的无能

目的 :探讨无能T细胞IL 2产生的缺乏与转录因子AP 1和NF kappaB的关系。方法 :通过提取活化组和无能组T细胞的核蛋白 ,进行凝胶电泳迁移率变动分析实验 (EMSA) ,检测了转录因子AP 1和NF kappaB的表达情况。结果 :与活化组相比 ,无能T细胞中AP 1不但表达水平下降 ,且出现组份缺失现象 ;转录因子NF kappaB在无能T细胞中的表达则高于活化组 ,但均有三种复合物存在。结论 :无能T细胞IL 2产生减少或缺乏可能与转录因子AP 1和NF kappaB表达紊乱 (减弱或增强 )以及组份的缺失有关。

葛根素对糖尿病大鼠肾脏NF-κB_(65)、TNF-α表达的影响

目的观察葛根素对糖尿病大鼠肾脏NF-κB65、TNF-α表达的影响。方法 SD大鼠随机分为正常对照组(A组),糖尿病组(B组),葛根素低、中、高剂量组(C、D、E组),每组10只。糖尿病大鼠模型建立后,C、D、E组分别给予葛根素注射液40、80、160mg/(kg·d)腹腔注射,A组和B组腹腔注射等量生理盐水。实验第8周末检测各组空腹血糖(FBG)、24h尿微量白蛋白排泄率(UAER)、肌酐(Scr)、尿素氮(BUN);采用光镜和电镜观察肾皮质形态学改变;采用免疫组织化学法检测肾组织中NF-κB65、TNF-α蛋白的表达。结果 C、D、E组FBG、UAER、Scr、BUN均高于A组(P<0.01或P<0.05),但明显低于B组(P<0.01或P<0.05)。光镜及电镜下,C、D、E组肾脏病理改变较B组明显改善,且肾组织NF-κB65、TNF-α表达较B组减少。结论葛根素能减少尿白蛋白,改善糖代谢、肾功能和肾组织结构,对糖尿病大鼠肾脏有保护作用,其机制可能与下调肾组织NF-κB65、TNF-α表达有关。

白细胞介素17对大鼠高血压心力衰竭的影响及其机制分析

目的 基于核转录因子-κB(Nuclear factorκB,NF-κB)/肌浆网钙三磷酸腺苷酶2(sarco-endoplasmic reticulum adenosine triphosphatease 2S,SERCA2)信号通路探讨白细胞介素(interleukin, IL)17对大鼠高血压心力衰竭的影响及机制。方法 选择6~8周的SPF级雄性自发性高血压大鼠30只,分为对照组、模型组、磷酸缓冲盐(phosphate buffer salt, PBS)溶液注射组(PBS组)、IL-17蛋白注射组(IL-17组)和抗体IL-17注射组(IL-17+IgG组),每组6只,PBS组、IL-17组和IL-17+IgG组大鼠建立高血压心力衰竭模型,分别腹腔注射PBS、IL-17和特异性抗体(IL-17、IgG),检测IL-17、NF-κB、SERCA2水平。结果 与对照组比较,模型组和PBS组大鼠血清N末端B型钠尿肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide, NT-proBNP)、IL-17和心脏组织IL-17 mRNA、NF-κB蛋白水平明显升高,血管内皮生长因子(vascularendothlialgrowthfactor, VEGF),SERCA2蛋白明显降低(P<0.01)。与模型组比较,IL-17组血清NT-proBNP、IL-17和心脏组织IL-17 mRNA、NF-κB蛋白水平明显升高,VEGF,SERCA2蛋白水平明显降低(P<0.01)。IL-17+IgG组血清IL-17和心脏组织NF-κB蛋白水平明显低于模型组,差异有统计学意义(8.98±1.20 vs 11.19±1.22,0.88±0.03 vs 0.93±0.03,P<0.01)。IL-17+IgG组血清NT-proBNP,IL-17和心脏组织IL-17 mRNA、NF-κB蛋白水平明显低于IL-17组,VEGF、SERCA2蛋白水平明显高于IL-17组,差异有统计学意义(P<0.01)。IL-17+IgG组大鼠心率、收缩压、舒张末期室间隔厚度、左心室舒张末期后壁厚度、左心室舒张末期内径、左心室收缩末期内径明显低于模型组和IL-17组,左心室短轴缩短率明显高于模型组和IL-17组(P<0.01)。IL-17+IgG组大鼠左心室射血分数明显高于IL-17组[(70.81±6.50)%vs(62.77±5.43)%,P<0.01]。结论 IL-17、NF-κB、SERCA2信号通路参与调节高血压心力衰竭后的炎性反应,且抑制IL-17后可有效改善高血压心力衰竭造成的心功能损伤。

NF-κB激活对缺血再灌注心肌TNF-α和IL-1β表达的影响

目的探讨心肌缺血再灌注损伤时NF-κB激活对TNF-α和IL-1β表达的影响。方法65只SD大鼠随机分为3组:假手术组(n=5);对照组(心肌缺血30 min后再分别灌注0、15、30、60、120、240 min,每个时间点n=5);PDTC干预组,术前给予PDTC 15 mg/kg,其它与对照组相同。RT-PCR检测TNF-α和IL-1βmRNA表达,电泳迁移率实验(EMSA)检测NF-κB活性,硫代巴比妥酸法测定心肌MDA含量。结果TNF-α和IL-1β表达在再灌注开始之前即有升高,分别在再灌注30和60 min达到高峰,再灌注120 min仍维持较高水平;NF-κB在再灌注15 min开始激活,至再灌注60 min达到高峰。PDTC干预组的NF-κB激活被阻断,与对照组各时间点相比,TNF-α和IL-1βmRNA表达均不同程度下降,MDA含量减少。结论NF-κB激活对缺血再灌注心肌细胞因子表达具有重要作用,抑制NF-κB信号通路可能对于再灌注损伤具有潜在的治疗价值。

大鼠系膜增生性肾炎时NF-κB和明胶酶B表达的变化及虫草菌丝的影响

目的探讨NF-κB及明胶酶B在系膜增生性肾小球肾炎发病中的作用及虫草菌丝能否用于治疗。方法60只Wistar雄性大鼠随机分为3组。对照组仅给予生理盐水灌胃,模型组和虫草菌丝组制造系膜增生性肾小球肾炎模型共8周,开始制模10d时,虫草菌丝组灌胃给虫草菌丝生理盐水悬浊液4.95mg·g-1·d-1,共46d。4周及8周末取24h的尿液,记尿量,查尿蛋白、尿红细胞和血肌酐。4周末各组各处死8只,8周后全部处死。取两侧肾脏,分别应用微波修复免疫组化法和实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应法检测各组肾组织NF-κB及明胶酶B蛋白质及基因表达水平。结果模型组和虫草菌丝组NF-κB及明胶酶B蛋白质及基因表达水平均明显高于对照组;与模型组相比,虫草菌丝组肾小球、肾小管NF-κB蛋白表达减少〔(49.0±3.7)%vs(68.4±9.2)%〕,〔(39.7±6.8)%vs(78.7±9.0)%〕;肾小球的明胶酶B蛋白表达〔(18.0±2.6)%vs(28.3±8.6)%〕亦减少;肾组织NF-κB和明胶酶B的基因表达也减少。结论NF-κB及明胶酶B的过度表达可能在系膜增生性肾小球肾炎发病中起一定作用;虫草菌丝可以抑制NF-κB活性和调节明胶酶B的表达。

高脂喂养大鼠肝脏的NF-κBp65表达与胰岛素抵抗的相关性

目的探讨高脂饲料喂养大鼠肝脏NF-κBp65蛋白的表达与胰岛素抵抗的关系。方法采用高脂饲料喂养建立胰岛素抵抗大鼠模型,并用正常血糖-高血浆胰岛素钳夹技术评估。应用Western blotting方法检测大鼠肝脏中NF-κBp65蛋白的表达。结果①高脂饲料组大鼠的葡萄糖输注率明显低于基础饲料组[GIR60~120（0.76±0.28vs4.26±0.70）mg/（kg.min）,P〈0.01]。②高脂饲料组大鼠肝脏NF-κBp65蛋白的表达明显高于基础饲料组（A值118.48±1.45vs68.13±4.84,P〈0.01）。③高脂胰岛素抵抗大鼠肝脏NF-κBp65蛋白表达与GIR60-120（r=-0.993,P=0.000）和ISI（r=-0.773,P=0.009）负相关。结论高脂诱导的胰岛素抵抗大鼠肝脏NF-κB的激活可能是产生肝脏和全身胰岛素抵抗的根源。

NF-κB、P-gp、c-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达及意义

目的探讨核因子κB(NF-κB)、P-gp、c-erbB-2蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义。方法采用免疫组化Power visionTM两步法检测97例乳腺癌组织中NF-κB、P-gp、c-erbB-2的表达情况。结果乳腺癌组织中NF-κB、P-gp、c-erbB-2的阳性表达率分别为65.97%、43.29%、50.51%;NF-κB、c-erbB-2与乳腺癌淋巴转移及病理分期相关(P<0.05);在乳腺癌标本中NF-κB、P-gp、c-erbB-2蛋白表达两两间均有相关性(P<0.05)。结论乳腺癌中NF-κB、P-gp、c-erbB-2三者间蛋白表达均有相关性,其在乳腺癌多药耐药发生中具有一定作用。