清解化攻方调控NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路对重症急性胰腺炎小鼠模型胰腺组织的保护作用

目的观察清解化攻方对重症急性胰腺炎(SAP)小鼠模型的治疗作用,探索清解化攻方抗炎症反应的作用机制。方法将36只C57BL/6J雄性小鼠随机分成空白组,模型组,清解化攻方低、中、高剂量组,西药组(乌司他丁),每组6只,除空白组小鼠,余各组小鼠采用逆行胰胆管注射5%牛黄胆酸钠建立SAP模型,清解化攻方低、中、高剂量组在造模后分别予以清解化攻方1、2、4 g/kg灌胃,西药组在造模后予以腹腔注射乌司他丁(5×10^(4) U/kg),共干预7 d。采用苏木素-伊红染色观察胰腺组织病理改变;酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测小鼠α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α水平;RTqPCR检测胰腺组织NOD样受体蛋白3(NLRP3)、Toll样受体4(TLR4)、核因子-κB(NF-κB)mRNA表达水平;免疫组化检测胰腺组织NLRP3、TLR4、NF-κB的阳性表达率;Western Blot技术检测NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白的表达水平。计量资料多组间比较采用方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与空白组相比,模型组小鼠胰腺组织结构弥漫性破坏、胰腺小叶间隔局灶性扩张、腺泡萎缩和大量炎症细胞浸润,α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显升高(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显上升(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达均明显上调(P值均<0.05)。与模型组相比,清解化攻方各剂量组和西药组可见小鼠胰腺组织结构稍紧密、完整,胰腺腺泡细胞排列有序,伴少量炎症细胞浸润和胰腺小叶出血灶,α-淀粉酶、脂肪酶、IL-1β、IL-6、IL-8、IL-18和TNF-α含量明显下降(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB mRNA表达水平及阳性表达率均明显降低(P值均<0.05),NLRP3、TLR4、NF-κB、IL-1β、IL-6蛋白表达水平均明显减弱(P值均<0.05)。结论清解化攻方可能通过抑制NLRP3/TLR4/NF-κB信号通路相关蛋白的激活,减少炎症介质的释放,防止炎症级联反应增强,进而对SAP小鼠胰腺组织发挥保护作用。

肠脂肪酸结合蛋白联合NLR、PCT检测对小儿绞窄性肠梗阻的诊断价值

【目的】探讨肠脂肪酸结合蛋白(IFABP)联合中性粒细胞与淋巴细胞比值(NLR)、降钙素原(PCT)检测对小儿绞窄性肠梗阻的诊断价值。【方法】以两院收治的96例肠梗阻患儿作为观察组,另选取同期来医院体检的84例健康小儿为对照组。比较两组对象的血清IFABP、NLR、PCT水平。统计绞窄性肠梗阻患儿的发生情况,比较绞窄性肠梗阻患儿与单纯肠梗阻患儿的临床特征,采用Logistic多元回归分析影响绞窄性肠梗阻发生的因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IFABP联合NLR、PCT水平诊断小儿绞窄性肠梗阻的价值。【结果】观察组患儿血清IFABP、NLR、PCT水平均高于对照组(P<0.05);96肠梗阻患儿中绞窄性肠梗阻的发生率为43.75%(42/96)。绞窄性肠梗阻患儿腹膜刺激征、腹部手术史构成比及血清IFABP、NLR、PCT水平均高于单纯肠梗阻患儿,且差异有统计学意义(P<0.05)。Logistic多因素回归分析显示:血清IFABP、NLR、PCT水平及腹部手术史均是小儿发生绞窄性肠梗阻的独立危险因素(P<0.05);ROC分析显示,血清IFABP、NLR、PCT水平诊断小儿绞窄性肠梗阻的最佳截断点分别为375.80 pg/mL、3.82 ng/mL、0.34 ng/mL,曲线下面积(AUC)分别为0.818、0.786、0.821,联合诊断时特异度和AUC均最高。【结论】绞窄性肠梗阻患儿血清IFABP、NLR、PCT水平均异常升高,其均可作为诊断小儿绞窄性肠梗阻的敏感指标,且联合诊断时价值更高。

终末期肾病患者外周血NOD样受体蛋白水平与血管钙化的相关性研究

目的分析终末期肾病患者外周血NOD样受体蛋白(NLRP3)水平与血管钙化的相关性。方法选取2019年11月至2020年11月在浙江衢化医院接受治疗的72例终末期肾病患者,使用腹部侧位平片评估患者血管钙化发生情况,将患者分为血管钙化组29例和无血管钙化组43例,采用酶联免疫吸附试验检测其外周血NLRP3水平,分析其水平变化与血管钙化的关系。结果血管钙化组患者血清Ca^(2+)水平低于无血管钙化组患者,血清磷、钙×磷、碱性磷酸酶(ALP)、骨保护素(OPG)、超敏C反应蛋白(hs-CRP)、白细胞介素(IL)-6、甲状旁腺激素(PTH)、血红蛋白(Hb)、血肌酐(Scr)、外周血NLRP3等指标水平和血管钙化评分均高于无血管钙化组患者,差异有统计学意义(P<0.05),而2组患者总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)、白蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05)。外周血NLRP3水平截断值为110 pg/ml时,预测终末期肾病患者发生血管钙化的ROC曲线下面积为0.76,95%CI(1.236~3.428),此时敏感度和特异度分别为75%和71%。对影响终末期肾病患者发生血管钙化的独立危险因素进行分析,结果显示,血Ca^(2+)[OR=1.278,95%CI(1.024~1.594)]、hs-CRP[OR=1.443,95%CI(1.086~1.918)]、外周血NLRP3[OR=1.328,95%CI(1.073~1.645)]是终末期肾病患者发生血管钙化的独立危险因素(OR>1,P<0.05)。重度钙化患者外周血NLRP3、血Ca^(2+)、hs-CRP水平高于中度钙化患者和轻度钙化患者,中度钙化患者外周血NLRP3、血Ca、hs-CRP水平高于轻度钙化患者,差异达到统计学意义(P<0.05)。Peason相关性分析结果显示,外周血NLRP3水平与血Ca呈正相关(r=0.364,P<0.01);外周血NLRP3水平与hs-CRP呈正相关(r=0.273,P<0.01);外周血NLRP3水平与血管钙化积分呈正相关(r=0.358,P<0.01)。结论外周血NLRP3水平是终末期肾病患者血管钙化的独立影响因素,其水平与患者血管钙化程度呈正相关,可为终末期肾病患者血管钙化程度评估及临床干预提供依据。

NOD样受体家族蛋白3/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在大鼠心肌缺血再灌注损伤中的作用

目的探究NOD样受体家族蛋白3(NLRP3)/半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)在大鼠心肌缺血再灌注损伤诱导的心肌细胞凋亡中的作用及其对自噬的影响。方法选择SPF级雄性大鼠60只,建立心肌缺血再灌注损伤模型,将大鼠分为假手术组、模型组及尼莫地平组,每组20只。检测各组大鼠缺血再灌注后心功能,测定心肌酶、细胞因子。采用苏木精-伊红染色检测心肌病理改变;流式细胞术测定细胞凋亡率;透射电镜下计数自噬小体,RT-PCR和Westernblot法检测NLRP3和Caspase-3表达。结果各组大鼠左心室舒张末期压力、左心室收缩压、左心室压力最大上升及下降速率、心肌细胞凋亡率、TNF-α、白细胞介素6、肌酸激酶、天冬氨酸转氨酶和乳酸脱氢酶水平比较,差异有统计学意义(P<0.01)。模型组和尼莫地平组自噬小体计数明显高于假手术组[(10.55±1.87)个、(6.32±1.43)个vs(3.45±0.67)个,P<0.01],且尼莫地平组自噬小体计数明显低于模型组,差异有统计学意义(P<0.01)。与假手术组比较,模型组和尼莫地平组大鼠NLRP3、Caspase-3mRNA及蛋白表达明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,尼莫地平组大鼠NLRP3、Caspase-3mRNA及蛋白表达明显降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论大鼠缺血再灌注损伤可增加细胞凋亡率,降低心功能,诱发炎性反应,增强机体自噬小体形成能力,与NLRP3/Caspase-3的异常高表达有关。

下瘀血汤对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病小鼠模型的治疗作用及机制

目的探讨下瘀血汤调控核苷酸结合寡聚化结构域样受体含pyrin结构域蛋白6(NLRP6)抑制高脂饮食(HFD)诱导的小鼠非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的作用机制。方法15只雄性C57BL/6小鼠随机分为低脂饮食(LFD)组、HFD组和下瘀血汤-HFD(XYXD)组,每组各5只。测量肝功能指标ALT和AST、血脂代谢指标TG、TC水平;肝组织经过HE染色、油红O染色,观察小鼠组织形态、脂滴沉积;实时荧光定量PCR检测肝组织中炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6及NLRP6表达水平;Western Blot检测NLRP6、NF-κB和NF-κB p65蛋白水平;免疫组化检测NLRP6和CD68表达。棕榈酸(PA)、脂多糖(LPS)和下瘀血汤含药血清处理鼠Raw264.7细胞,检测炎症情况。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果与LFD组比较,HFD组血清ALT、AST和TC、TG水平显著升高(P值均<0.05)。肝组织病理学显示,HFD组肝脂肪变性明显,NAS评分显著升高(P<0.05);实时荧光定量PCR结果显示,IL-1β、IL-18等炎症相关因子显著升高,NLRP6表达显著下调(P值均<0.05)。免疫组化显示NLRP6表达与巨噬细胞标志物CD68重合。Western Blot显示,NLRP6表达下调后,磷酸化的NF-κB p65(p-NF-κB p65)显著上调(P<0.05)。与HFD组相比,下瘀血汤可有效改善HFD小鼠的肝脏炎症,上调NLRP6的表达,下调p-NF-κB p65(P<0.05)。PA处理Raw264.7细胞后下调NLRP6,促进炎症进展(P<0.05);下瘀血汤处理可上调NLRP6,抑制炎症和NF-κB(P<0.05)。结论下瘀血汤可显著改善HFD诱导NAFLD小鼠模型的肝脂肪变性和炎症,调控NLRP6/NF-κB减轻巨噬细胞活化可能是其作用机制之一。

辅助生殖技术在葡萄胎治疗中的应用及研究进展

葡萄胎(hydatidiform mole)是一种临床上较常见的产科疾病,属于妊娠滋养细胞疾病,主要特征是绒毛水肿变性。现阶段葡萄胎的诊断和分类主要通过临床表现和组织学检查。但是,葡萄胎分类复杂且病因不清楚,且复发性葡萄胎再发风险较高,很难预防。随着测序技术的发展,辅助生殖技术,尤其是胚胎植入前遗传学检测,近年来得到了飞速发展,可以应用于体外获取胚胎并予以评估。然而,由于现阶段对葡萄胎这一疾病了解的局限性,辅助生殖技术在葡萄胎患者中的应用依旧较局限。对于有生育要求的葡萄胎患者,特别是复发性葡萄胎患者,建议给予再生育指导。综述葡萄胎的流行病学、临床表现、组织病理学以及遗传学特点,并探讨辅助生殖技术在复发性葡萄胎中的应用进展。

PKC-δ在大鼠机械通气相关性肺损伤中的作用:与NLRC4的关系

目的评价蛋白激酶C(PKC)-δ在大鼠机械通气相关性肺损伤中的作用及其与NOD样受体包含CARD结构域蛋白4(NLRC4)的关系。方法清洁级健康雄性SD大鼠36只,6~8周龄,体重200~250 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、机械通气相关性肺损伤组(V组)和机械通气相关性肺损伤+KAI 9803组(VK组)。气管切开后置入气管导管行机械通气,设置VT 40 ml/kg,通气频率60次/min,I∶E为1∶2,吸入空气。C组气管插管后不行机械通气。气管插管完成后即刻VK组于气管内滴注PKC-δ特异性抑制剂KAI 9803200μg/kg,余2组滴入等量PBS。机械通气4 h时,股动脉采血行血气分析,记录PaO2。开胸取肺组织,行左侧肺灌洗,收集肺泡灌洗液。光镜下观察肺组织病理学结果并行肺损伤评分;采用ELISA法检测肺泡灌洗液IL-1β和IL-18浓度,Western blot法检测右肺下叶NLRC4、caspase-1和PKC-δ表达,RT-PCR法检测右肺下叶NLRC4 mRNA表达,计算右肺中叶湿重/干重(W/D)比值。结果与C组比较,余2组肺损伤评分和W/D比值升高,PaO2降低,肺泡灌洗液IL-18和IL-1β浓度升高,肺组织NLRC4、caspase-1和NLRC4 mRNA表达上调,V组肺组织PKC-δ表达上调(P<0.01),肺泡腔内可见大量水肿液渗出并伴炎性细胞浸润;与V组比较,VK组肺损伤评分和W/D比值降低,PaO2升高,肺泡灌洗液IL-18和IL-1β浓度降低,肺组织NLRC4、caspase-1、PKC-δ和NLRC4 mRNA表达下调(P<0.05),肺泡腔液体渗出和炎性细胞浸润程度减轻。结论PKC-δ参与了大鼠机械通气相关性肺损伤的过程,与抑制NLRC4表达有关。

雷帕霉素对大鼠呼吸机相关性肺损伤时NLRC4炎症小体活性的影响

目的评价雷帕霉素对大鼠呼吸机相关性肺损伤(VILI)时NOD样受体C4(NLRC4)炎症小体活性的影响。方法清洁级健康雄性SD大鼠36只,6~8周龄,体重200~250 g,采用随机数字表法分为3组(n=12):对照组(C组)、VILI组和雷帕霉素组(RAPA组)。RAPA组造模前连续3 d腹腔注射雷帕霉素4 mg·kg^-1·d^-1,C组和VILI组给予等容量生理盐水。VILI组和RAPA组行机械通气4 h,通气参数设置:RR 80次/min,FiO221%,PEEP 0 cmH2O,I∶E1∶1,VT 20 ml/kg。机械通气结束后采集股动脉血样行血气分析,记录PaO2;采用ELISA法检测血清IL-1β和IL-18浓度。收集左肺支气管肺泡灌洗液(BALF),采用ELISA法测定中性粒细胞计数及IL-1β、IL-18浓度。取肺组织,HE染色后光镜下观察病理学结果,并进行肺损伤评分,测定湿重/干重(W/D)比值,采用Western blot法检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)、NLRC4和caspase-1的表达,采用RT-PCR法检测NLRC4 mRNA表达。结果与C组比较,VILI组和RAPA组肺组织W/D比值、肺损伤评分、BALF中性粒细胞计数及血清、BALF IL-1β、IL-18浓度均升高,PaO2下降,肺组织mTOR、NLRC4、caspase-1及NLRC4 mRNA表达上调(P<0.01);与VILI组比较,RAPA组肺组织W/D比值、肺损伤评分、BALF中性粒细胞计数及血清、BALF IL-1β、IL-18浓度均降低,PaO2升高,肺组织mTOR、NLRC4、caspase-1及NLRC4 mRNA表达下调(P<0.05)。结论雷帕霉素减轻大鼠VILI的机制可能与抑制mTOR信号通路激活,进而抑制NLRC4炎症小体活性有关。