乳岩宁对三阴乳腺癌荷瘤裸鼠Notch1信号通路的作用机制

目的 观察乳岩宁方与卡培他滨联用对MDA-MB-231乳腺癌荷瘤裸鼠的瘤组织中Notch1信号通路的作用。方法 用对数生长期的MDA-MB-231细胞悬液,于裸鼠左侧胸壁接种,成功长出瘤组织后将其移植到未接种裸鼠的胸壁,建立三阴乳腺癌模型,共40只荷瘤裸鼠,分5组,每组8只,日1次灌胃,连续21 d灌药。观察裸鼠状态并计算肿瘤组织的抑制率;免疫印迹法测定Notch 1、Notch1受体的细胞内结构(Notch1 intracellular domain, NICD1)、与YRPW基序相关的发状分裂增强子1(Hairy and enhancer of split related with YRPW motif 1,Hey1)、发状分裂相关增强子1(Hairy and enhancer of split Homolog 1,Hes1)、髓细胞增生原癌基因(Cellular myelocytomatosis oncogene, C-myc)的蛋白表达量;实时荧光定量PCR测定Notch 1、Hey1、Hes1、C-myc的基因表达量。结果 与模型组对比,中药、西药和中药+西药组的肿瘤质量均有明显减轻,差异有统计学意义(P<0.01),3组的抑瘤率分别为33.11%、59.60%、65.93%。免疫印迹法结果表明,与模型组相比,中药组、西药组、中药+西药组的Notch 1、NICD1、Hey1、Hes1、C-myc蛋白水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);而Notch 1和Hes1的蛋白表达水平在中药组和西药组中水平相当,差异无统计学意义(P>0.05);中药+西药组较西药组中Hes1蛋白表达水平明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。实时荧光定量结果表明,与模型组相比,中药组、西药组、中药+西药组Notch 1、Hey1、Hes1、C-myc的mRNA水平明显降低,差异有统计学意义(P<0.01);与西药组相比,中药组与西药组Notch 1、Hes1、C-myc的mRNA水平相当,差异无统计学意义(P>0.05);中药+西药组较西药组中Notch 1及Hey1的mRNA水平明显减低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 疏肝理气中药复方乳岩宁能够抑制三阴乳腺癌荷瘤裸鼠的肿瘤生长,其作用机制与三阴乳腺癌中的Notch1信号通路受到抑制相关。为疏肝理气中药治疗三阴乳腺癌,尤其是影响乳腺癌Notch1信号通路方面提供了实验依据。

白藜芦醇抑制Notch1信号通路对抗小鼠急性T淋巴细胞白血病

目的:观察白藜芦醇(Res)对急性T淋巴细胞白血病(T-ALL)小鼠的影响,并进一步探讨其对Notch1信号通路的作用机制。方法:将25只6-8周龄雌性C57BL/6小鼠随机分为正常对照组、T-ALL组和Res组,其中Res组又进一步分为low-Res(L-Res)、middle-Res(M-Res)和high-Res(H-Res)3个浓度给药组。应用流式细胞术和瑞氏-吉姆萨染色法检测外周血及脾细胞悬液中白血病细胞百分比,HE染色法观察脾脏和骨髓组织病理形态,RT-q PCR法检测脾脏组织中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b和PTEN m RNA表达水平,Western blot法检测Notch1、Hes-1、c-Myc、p-PTEN和PTEN蛋白表达水平。结果:与对照组相比,T-ALL组小鼠外周血中白血病细胞明显增多,脾脏及骨髓组织中白血病细胞弥漫性浸润,脾脏中Notch1、Hes-1、c-Myc、mi R-19b m RNA表达水平和Notch1、Hes-1、c-Myc蛋白表达水平均明显增高(P<0.01),PTEN m RNA及其蛋白水平显著降低(P<0.01),经白藜芦醇处理后,H-Res组以上各项指标较T-ALL组均获得逆转。结论:白藜芦醇具有抗小鼠T-ALL的作用,其机制可能通过抑制Notch1信号通路发挥作用。

田蓟苷对大鼠A7R5血管平滑肌细胞增殖、迁移、表型转化及Notch1信号通路调控的影响

目的 研究田蓟苷对A7R5血管平滑肌细胞(VSMCs)表型转化的影响及其抗动脉粥样硬化(AS)的可能作用机制。方法 采用氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)刺激A7R5细胞建立血管平滑肌表型转化模型,将细胞分为正常组、模型组、田蓟苷组、Notch1通路抑制剂组(DAPT组)和辛伐他汀组。采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞迁移情况,实时荧光定量PCR法检测细胞SM22α、α-SMA、Notch1、Hes1、Hes5、Jagged-1 mRNA表达,Western blot法检测细胞Notch1、RBP-Jκ、Hes1蛋白表达。结果 与模型组比较,各给药组均可抑制A7R5细胞的异常增殖和迁移(P<0.05,P<0.01),上调α-SMA mRNA表达(P<0.01);田蓟苷组和DAPT组下调Notch1通路相关基因Notch1、Hes-1、Hes-5和Jagged-1 mRNA表达(P<0.05,P<0.01);田蓟苷组下调Notch1、Hes-1、RBP-Jκ蛋白表达(P<0.05,P<0.01)。结论 田蓟苷通过抑制VSMCs的异常增殖、迁移、表型转化及调控Notch1信号通路,从而保护ox-LDL诱导的A7R5细胞损伤。

Notch1信号通路相关蛋白在急性期缺氧缺血脑损伤SD乳鼠脑组织中表达变化及其对神经细胞凋亡的作用

目的观察急性期缺氧缺血脑损伤SD乳鼠脑组织中Notch1信号通路相关蛋白(转录因子Notch1和其活性成分NICD以及其下游的蛋白HES1)表达变化及Notch1信号通路抑制后急性期缺氧缺血脑损伤SD乳鼠脑组织中神经细胞凋亡情况,以探讨Notch1信号通路在新生儿脑损伤中的作用及机制。方法18只3日龄SD乳鼠随机分成Notch1抑制组、模型组及对照组,均分为6只。Notch1抑制组于造模前30 min腹腔注射DAPT(100 mg/kg),然后缺血缺氧处理;模型组缺氧和缺血处理前腹腔注射1%DMSO;对照组接受假手术。采用Western blottting法检测各组Notch1信号通路蛋白(Notch1、NICD、HES1)及凋亡蛋白(Caspas-3、Bax、Bcl-2);通过尼氏染色和TUNEL染色观察脑组织结构变化和细胞凋亡情况。结果与对照组相比,模型组Notch1信号通路的转录因子NICD以及下游的调控蛋白HES1相对表达量升高(P均<0.05),促凋亡蛋白Caspas-3相对表达量升高(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少(P<0.05);与模型组相比,Notch1抑制组NICD和HES1蛋白相对表达量降低(P均<0.05),Caspas-3蛋白相对表达量降低(P<0.05),而Bcl-2相对表达量升高(P<0.05);与模型组比较,Notch1抑制组缺氧缺血损伤的脑组织结构明显改善,细胞凋亡数减少(P<0.05)。结论急性期缺氧缺血脑损伤SD乳鼠脑组织Notch1信号通路相关蛋白NICD、HES1升高,促凋亡蛋白Caspas-3表达增加、抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少;Notch1信号通路抑制后,急性期缺氧缺血脑损伤SD乳鼠脑组织中神经细胞凋亡减少;Notch1信号通路可通过促进脑组织中神经细胞凋亡从而诱发新生儿脑损伤。

DOT1L介导Notch1信号通路对喉鳞状细胞癌上皮间质转化的机制

目的探讨类端粒沉默干扰体1(disruptor of telomeric silencing 1-like,DOT1L)介导Notch1信号通路对喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)上皮间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用机制。方法选择30例病理确诊LSCC患者的肿瘤组织和癌旁组织,免疫组织化学染色检测DOT1L及其催化产物H3K79me3的阳性表达率,qRT-PCR检测DOT1L和H3K79me3的mRNA相对表达量。选择人LSCC细胞系TU686分为空白对照组、过表达组和低表达组,培养48 h后MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot法检测Notch1、E-cadherin、N-cadherin和Vimentin蛋白相对表达量。结果(1)与癌旁组织相比,肿瘤组织中DOT1L和H3K79me3阳性表达率[(41.5±8.9)%vs.(18.3±3.6)%,t=56.963,P<0.001;(40.5±7.7)%vs.(10.2±2.3)%,t=96.635,P<0.001]以及mRNA表达量[(0.69±0.13)vs.(0.13±0.09),t=102.302,P<0.001;(0.42±0.19)vs.(0.09±0.03),t=85.659,P<0.001]均显著增加,差异比较有统计学意义。(2)与空白对照组相比,过表达组细胞增殖率明显升高(t=45.628,P<0.001),凋亡率降低(t=40.125,P<0.001),Notch1、N-cadherin和Vimentin蛋白表达升高,E-cadherin降低(t=22.524、30.263、45.629、27.859,P<0.001);低表达组细胞增殖率显著下降(t=33.427,P<0.001),凋亡率增加(t=78.529,P<0.001),Notch1、N-cadherin和Vimentin蛋白表达下降,E-cadherin增加(t=19.864、23.524、28.957和33.426,P<0.001)。结论DOT1L在LSCC中高表达,影响组蛋白的甲基化水平,进而调控细胞增殖、凋亡和EMT行为,DOT1L有望成为肿瘤靶向干预的新位点。

四味土木香散通过调节miR-34a-5p/Notch1信号通路改善机械牵张诱导的H9c2心肌细胞肥大

目的探讨四味土木香散(siwei tumuxiang powder,STP)对机械牵张诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大模型的保护作用及作用机制。方法制备STP含药血清及细胞肥大模型,并筛选STP含药血清最适剂量与作用时间;检测H9c2心肌细胞中心房钠尿肽(atrial natriuretic peptide,ANP)、脑钠肽(brain natriuretic peptide,BNP)、miR-34a-5p及Notch1等因子的表达,验证STP是否通过调控miR-34a-5p/Notch1通路对H9c2心肌细胞起保护作用。结果STP含药血清干预模型细胞最适剂量为低剂量(0.972g/kg),作用时间为24h。STP降低了模型细胞中ANP、BNP、miR-34a-5p的表达(P<0.05)。转染miR-34a-5p mimic逆转了STP降低ANP、BNP表达的作用(P<0.05)。用siRNA法敲低Notch1逆转了STP降低ANP、BNP的表达(P<0.05)。Notch1为miR-34a-5p直接靶基因,miR-34a-5p降低了Notch1的表达(P<0.05)。STP干预后,Notch1、NICD1、Hes1蛋白表达降低(P<0.05);转染miR-34a-5p mimic逆转了STP降低Notch1、NICD1、Hes1蛋白表达的作用(P<0.05)。结论STP可能是通过影响miR-34a-5p表达负调控Notch1信号通路对机械牵张诱导的大鼠H9c2心肌细胞肥大发挥保护作用。

基于DLL4/Notch1信号通路探讨人参皂苷Rg-3对AOM/DSS诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠血管形成机制

目的基于Delta样配体4(delta-like ligand 4,DLL4)/Notch1信号通路探究人参皂苷Rg-3对氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(azoxymethane/dextran sulphate sodium,AOM/DSS)诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠血管形成机制。方法48只C57BL/6J APCMin/+小鼠随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg-3组(10 mg/kg),每组16只。建立AOM/DSS诱导的结直肠癌模型,采集腹主动脉血与完整结直肠组织,检测血常规与炎症指标,HE染色观察肠组织形态,免疫组化、Western blotting检测肠组织DLL4、Notch1表达。肿瘤细胞、人脐静脉内皮细胞(human umbilical vascular endothelial cells,HUVECs)分为对照组、人参皂苷Rg-3组、人参皂苷Rg-3+DLL4组,通过MTT、克隆形成、划痕、Transwell与血管形成实验检测细胞增殖、迁移、血管形成能力,Western blotting检测DLL4/Notch信号通路、血管形成相关分子表达情况。结果与对照组相比,模型组、人参皂苷Rg-3组RBC、Hct、Hb水平降低(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、DLL4、Notch1表达水平升高(P<0.05);与模型组相比,人参皂苷Rg-3组RBC、Hct、Hb水平提高(P<0.05),IL-1β、IL-6、TNF-α、DLL4、Notch1表达水平下降(P<0.05),肿瘤数量、2~3.5 mm及>3.5 mm的肿瘤数量减少(P<0.05)。细胞实验结果显示,与对照组相比,人参皂苷Rg-3组肿瘤细胞、HUVECs增殖、克隆形成、迁移、血管形成能力下降(P<0.05),DLL4、Notch1、VEGF、VEGFR2、转录因子重组信号结合蛋白Jκ(recombination signal binding protein-Jκ,RBP-Jκ)、Hes1表达水平降低(P<0.05)。结论人参皂苷Rg-3通过抑制DLL4/Notch1信号通路促进血管形成,抑制AOM/DSS诱导结直肠癌进展。

围绝经期抑郁症大鼠海马Notch1信号通路基因的表达与甲基化水平研究

目的 从表观遗传学之基因启动子DNA甲基化角度探讨围绝经期抑郁症对大鼠海马Notch1信号通路关键基因表达及其启动子DNA甲基化的影响。方法 将12月龄雌性围绝经期SD大鼠随机分为对照组和模型组。分别采用旷场实验和糖水消耗实验进行焦虑样及抑郁样的行为学评价。采用实时荧光定量PCR法(real time quantitative PCR,RT-qPCR)检测大鼠海马Notch1信号通路关键基因的表达。运用重亚硫酸氢盐测序(bisulfite sequencing PCR,BSP)法分析Notch1信号通路关键基因启动子区的甲基化位点及其甲基化水平。结果 围绝经期抑郁症大鼠旷场实验水平得分和垂直得分及糖水消耗率均显著下降;围绝经期抑郁症大鼠海马组织中Notch1信号通路关键基因Jagged1、Notch1和Hes5的表达均显著下调(P<0.01或P<0.05);其中Hes5基因的部分甲基化位点及其甲基化率均显著增加,而Jagged1和Notch1基因的甲基化位点及其甲基化率差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 围绝经期抑郁症大鼠海马Notch1信号通路关键基因表达显著下调,其中Hes5基因表达下调可能与其启动子DNA甲基化水平上升有关。

Notch1信号通路调节成骨因子影响腰椎间盘钙化机制研究

目的:探究Notch1信号通路调节成骨因子影响腰椎间盘钙化的机制。方法:分离SD大鼠原代纤维环细胞并进行传代培养,分别加入诱导因子骨形态发生蛋白-2(bone morphogenetic protein-2,BMP-2)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)诱导钙化(分别为BMP-2组和b-FGF组),并设置对照组(正常培养基中培养)。随后进行细胞形态及细胞荧光鉴定、茜素红染色、ELISA检测、qRT-PCR实验,以确定诱导钙化的效果。再次进行细胞分组,分为对照组、钙化组(加入诱导因子BMP-2)、钙化+LPS组(加入诱导因子BMP-2和Notch1通路激活剂LPS)、钙化+DAPT组(加入诱导因子BMP-2和Notch1通路抑制剂DAPT),进行茜素红染色、流式细胞术检测细胞凋亡,ELISA检测成骨因子含量,Western blot检测BMP-2、b-FGF、Notch1蛋白表达情况。结果:诱导因子筛选结果表明BMP-2组和b-FGF组大鼠纤维环细胞矿化结节数目均明显增加,且BMP-2组效果更显著;同时ELISA及Western blot结果表明诱导组细胞中BMP-2、b-FGF含量水平及BMP-2、b-FGF、Notch1 mRNA表达水平均显著升高(P<0.01)。探究Notch1信号通路影响腰椎间盘钙化机制结果表明:与钙化组相比,钙化+LPS组大鼠纤维环细胞矿化结节数目,细胞凋亡率,BMP-2、b-FGF含量水平,BMP-2、b-FGF、Notch1蛋白表达水平进一步显著增加;而钙化+DAPT组大鼠纤维环细胞矿化结节数目,细胞凋亡率,BMP-2、b-FGF含量水平,BMP-2、b-FGF、Notch1蛋白表达水平均降低(P<0.05或P<0.01)。结论:Notch1信号通路通过正向调控成骨因子含量促进腰椎间盘钙化。

川续断皂苷Ⅵ调控Notch1信号通路对大鼠正畸牙移动及骨改建的作用

目的探讨川续断皂苷Ⅵ在大鼠正畸牙移动、牙槽骨改建以及Notch1信号通路中的作用。方法40只大鼠建立正畸牙移动模型,随机分为模型组、川续断皂苷Ⅵ组、抑制剂组和抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组,每组10只,另设对照组。川续断皂苷Ⅵ组大鼠在双侧上颌第一磨牙近中牙龈黏膜下注射川续断皂苷Ⅵ10 mg/kg,抑制剂组大鼠在同样位置注射γ-外分泌酶抑制剂(DAPT)溶液0.6 mL/kg,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠在同样位置注射DAPT溶液0.6 mL/kg,1 h后再注射川续断皂苷Ⅵ10 mg/kg,1次/2 d,共注射7次。测量各组大鼠第一磨牙移动距离,HE染色观察牙周组织病理学改变,TRAP染色检测破骨细胞数,RT-PCR法和蛋白印迹法检测牙周组织中Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch1、Jagged1 mRNA和蛋白水平。结果模型组和抑制剂组大鼠牙周膜纤维排列紊乱,宽度增加,骨吸收陷窝少,抑制剂组表现的更明显;川续断皂苷Ⅵ组和抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组牙周膜纤维排列较规则,增宽不明显,骨吸收陷窝增多,川续断皂苷Ⅵ组大鼠以上各变化更显著;与模型组比较,川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离增长,破骨细胞数增多,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05);与川续断皂苷Ⅵ组比较,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离缩短,破骨细胞数减少,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平降低(P<0.05);与抑制剂组比较,抑制剂+川续断皂苷Ⅵ组大鼠第一磨牙移动距离增长,破骨细胞数增多,Nfatc、CTSK、MMP-9、Notch 1、Jagged 1 mRNA和蛋白水平升高(P<0.05)。结论川续断皂苷Ⅵ可加速正畸牙移动,增加牙周组织中破骨细胞数量,促进牙周改建,其可能是通过激活Notch1信号通路发挥作用。

牵张应力调控Notch1信号通路促进大鼠BMSCs增殖和成骨分化

目的 探讨牵张应力调控Notch1促进骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖和成骨分化的机制。方法 制备并鉴定大鼠BMSCs。细胞分组设置为:0%拉伸幅度组、0%+DAPT组、5%拉伸幅度组、5%+DAPT组。运用CCK-8法测定BMSCs增殖;采用碱性磷酸酶、茜素红和油红O染色法检测细胞成骨和成脂分化;通过Western bloting检测Notch1和Jagged1蛋白表达。结果 5%拉伸幅度牵张应力可显著提高BMSCs增殖、碱性磷酸酶表达及钙化结节形成,抑制BMSCs成脂分化(P<0.05或P<0.01),同时显著提高Notch1和Jagged1蛋白表达(P<0.01);DAPT可显著逆转牵张应力对BMSCs增殖、碱性磷酸酶表达、钙化结节形成、成脂分化及Notch1和Jagged1蛋白表达的影响(P<0.05或P<0.01)。结论 5%拉伸幅度的牵张应力促进了BMSCs增殖和成骨分化,Notch1信号通路可能是牵张应力促进BMSCs增殖和成骨分化的靶点。

基于miR-34a-5p/Notch1信号通路探讨蒙药四味土木香散对压力超负荷心肌肥厚大鼠的保护机制

目的探讨四味土木香散(STP)对压力超负荷性心肌肥厚大鼠的保护作用及机制。方法第一部分:将Wistar大鼠按随机数表法分为假手术(sham)组,模型(Mod)组,Mod+STP高、中、低剂量(STP-H、STP-M、STP-L)组,Mod+阳性药卡托普利(CAP)组,检测血压、超声心动图、HE及Masson染色。第二部分:将Wistar大鼠按随机数表法分为sham组、Mod组、Mod+STP-H组、Mod+STP-H+miR-34a-5p激动剂(agomir)组、Mod+STP-H+Notch1抑制剂(DAPT)组,观察HE及Masson染色,RT-qPCR检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、核因子κB(NF-κB)、miR-34a-5p表达量,Western Blot检测Notch1、NICD1、hes1蛋白表达量。结果第一部分:STP各剂量组均对压力超负荷心肌肥厚具有改善作用,其中高剂量治疗效果最佳。与Mod组比,STP-H组在8周、10周时血压降低,心功能提高,细胞短轴直径及心肌纤维化降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。第二部分:与Mod组比,STP-H组TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平降低,Notch1、NICDI、hes1表达量升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与STP-H组相比,agomir组、DAPT组细胞短轴直径及心肌纤维化增加,TNF-α、IL-6、NF-κB、miR-34a-5p表达水平升高,Notch1、NICDI、hes1表达降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论STP可抑制miR-34a-5p的表达,同时靶向激活Notch1通路而改善压力超负荷性心肌肥厚,发挥心肌保护作用。

石蒜碱上调Notch1信号通路并减轻心肌细胞缺氧/复氧诱导的损伤

目的 研究石蒜碱对H9c2心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及机制。方法 将H9c2心肌细胞随机分为4组:对照组、H/R组、H/R+石蒜碱低剂量组、H/R+石蒜碱高剂量组;使用CCK-8分析H9c2心肌细胞活力;用试剂盒测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量,丙二醛(MDA)和活性氧簇(ROS)的含量,超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性;用流式细胞仪检测细胞凋亡率;Western blot检测Notch1蛋白水平;用Realtime聚合酶链反应检测HES-1、HES-5和Hey-1 mRNA水平。结果 与对照组比较,H/R组H9c2心肌细胞的活力减弱(P<0.05),SOD和GSH-Px的活性减弱(P<0.05),细胞凋亡率,LDH释放量,MDA和ROS含量,Notch1蛋白水平,HES-1、HES-5和Hey-1 mRNA水平均增加(P<0.05);与H/R组相比,石蒜碱低、高剂量组H9c2心肌细胞的活力增强(P<0.05),SOD和GSH-Px的活性增强(P<0.05),细胞凋亡率,LDH释放量,MDA和ROS含量均降低(P<0.05),Notch1蛋白水平,HES-1、HES-5和Hey-1 mRNA水平均增加(P<0.05)。结论 石蒜碱能减轻H/R诱导心肌细胞的损伤作用,其作用机制是否与上调Notch通路有关有待于进一步研究。

基于Notch1信号通路调控巨噬细胞极化改善佐剂关节炎大鼠关节炎症的机制

目的:探讨Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号轴通过调控巨噬细胞向M2型极化对佐剂性关节炎(AA)大鼠炎症反应的影响。方法:大鼠随机分成3组(6只):健康组(NC)、模型组(MC)及Notch1抑制剂组(FLI),在致炎后12 d开始给予药物,并于30 d后检测各组大鼠的关节炎指数(AI)、右后足关节肿胀度(E);采用流式细胞仪测定CD80+和CD163+细胞在大鼠外周血巨噬细胞中的表达量;ELISA检测大鼠血清中IL-4、IL-10、IL-1β、及TNF-α的水平;Western Blot检测大鼠关节滑膜组织中Notch1、Jagged1、RBP-Jκ、Hes1蛋白的表达。结果:MC组AA大鼠的E及AI均明显高于NC组(P<0.01);CD80+细胞的表达显著高于对照组(P<0.01),而CD163+细胞的表达显著低于对照组(P<0.01);IL-1β、TNF-α表达水平明显升高(P<0.01), IL-4、IL-10表达水平明显降低(P<0.01);Notch1、RBP-Jκ、Jagged1、Hes1蛋白的表达量明显增加(P<0.01);与MC组比较,Notch1抑制剂组大鼠E、AI显著降低(P<0.01);CD80+细胞表达明显降低(P<0.01),CD163+细胞表达明显升高(P<0.01);IL-1β、TNF-α表达水平明显降低(P<0.05),IL-4、IL-10显著增加(P<0.01);Notch1、Jagged1、Hes1、RBP-Jκ蛋白表达量显著降低(P<0.05)。相关性分析表明,CD80+与Notch1、Jagged1、Hes1、RBP-Jκ呈正相关(P<0.01),CD163+与上述蛋白的表达呈负相关(P<0.01)。结论:阻断Notch1/Jagged1/RBP-Jκ/Hes1信号轴可以调控巨噬细胞向M2型极化,减轻AA大鼠的炎症反应。

动物水平的绿原酸通过Notch1信号通路调控非小细胞肺癌凋亡及机制研究

背景与目的绿原酸类物质可通过调节细胞周期、诱导凋亡、抑制细胞生长等途径产生抗癌作用,Notch信号通路与人类许多肿瘤都存在密切的关系,本研究旨在探讨绿原酸通过Notch1信号通路控制非小细胞肺癌细胞凋亡的作用机制,为临床应用以及Notch1靶向药物的研究提供依据。方法 MTT法检测不同浓度的绿原酸对非小细胞肺癌细胞系A549细胞形态和细胞增殖的影响;流式细胞仪检测绿原酸对A549细胞的凋亡和细胞周期的影响;建立A549细胞的裸鼠荷瘤模型;测量肿瘤大小和重量;实时荧光定量PCR法检测Notch信号通路相关因子的m RNA表达水平;免疫印迹法检测Notch信号通路相关因子的蛋白表达水平。结果绿原酸抑制A549细胞增殖,诱导A549细胞凋亡,增加细胞G2期/M期细胞百分比增加(P<0.05),并且呈现剂量依赖趋势。在A549细胞的裸鼠荷瘤模型中,实验组肿瘤大小和体积明显小于对照组,差异具有统计学意义(P<0.01)。试验组Notch1、VEGF、Delta4、HES1、HEY1 m RNA表达量较对照组明显减少(P<0.05)。实验组Notch1蛋白明显减少,PTEN、p-PTEN、p-AKT明显增加(P<0.05)。结论在动物水平,绿原酸可能通过Notch1信号通路调控非小细胞肺癌的凋亡,可能是通过减少VEGF的表达,下调Delta 4水平,从而抑制Notch1信号通路的活化。Notch1信号通路可能通过PTEN与PI3K/AKT通路存在交叉调控作用。

姜黄素调控Notch1信号通路诱导结肠癌SW480细胞株凋亡

目的从Notch1信号通路探讨姜黄素诱导结肠癌SW480细胞株凋亡的分子机制。方法 (1)利用流式细胞技术检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60μmol/L)处理结肠癌SW480株24 h和48 h后的细胞凋亡情况。(2)通过RT-PCR检测不同浓度姜黄素(0,7.5,15,30,60μmol/L)处理结肠癌SW480细胞株24 h和48 h后,Notch1信号通路中膜受体基因Notch1及下游靶基因Hes-1 m RNA表达情况,观察姜黄素对Notch1信号通路中Notch1及Hes-1基因m RNA表达的影响。结果 (1)姜黄素能诱导结肠癌SW480细胞株凋亡;(2)姜黄素能一定程度上下调Notch1信号通路中Notch1及Hes-1基因m RNA的表达(P<0.05)。结论姜黄素能一定程度上诱导结肠癌SW480细胞株凋亡,这种对结肠癌SW480细胞毒性作用可能与调控Notch1信号通路中膜受体基因Notch1及下游靶基因Hes-1转录有关。

miR-34a通过Notch1信号通路对肺癌干细胞的抑制

背景:已有报道证实mi R-34a对肺癌干细胞有一定的抑制作用,但是其作用机制目前还不清楚。目的:探索mi R-34a对肺癌干细胞的抑制作用及机制。方法:应用免疫磁珠分选细胞技术从肺腺癌A549细胞系中分离出CD133+肺癌干细胞;脂质体转染技术构建miR-34a过表达的肺癌干细胞;双荧光素酶报告基因分析miR-34a与Notch1的靶向关系;基因敲除Notch1并检测其对肺癌干细胞的影响。结果与结论:(1)经过免疫磁珠分选和流式细胞术检测得到高比率的CD133+肺癌干细胞;(2)qR T-PCR检测发现miR-34a在CD133+肺癌干细胞中的表达明显低于CD133-肺癌细胞;(3)成功构建miR-34a过表达的肺癌干细胞,发现miR-34a能够抑制肺癌干细胞的增殖,诱导细胞凋亡;(4)双荧光素酶报告基因分析证明Notch1与miR-34a具有靶向关系;(5)基因敲除Notch1显著抑制肺癌干细胞的增殖,诱导细胞凋亡;(6)结果提示,miR-34a可能通过抑制Notch1信号通路来抑制肺癌干细胞的生长。

厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤中Notch1信号通路的影响

目的:观察厄贝沙坦对糖尿病大鼠心肌损伤的作用,分析Notch1信号通路在其中的变化。方法:实验分4组:正常对照组(CON)、高糖高脂组(HC)、糖尿病组(DM)和厄贝沙坦+糖尿病组(Ir+DM)。制作2型糖尿病(T2DM)大鼠模型成功后,第8周开始检测大鼠空腹血糖水平(FBG)、全心质量及左心室重量,计算心脏指数(H/B)及左室重量指数(LVWI),检测大鼠血浆甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)水平,检测心肌组织超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)含量变化,免疫组化检测Bcl-2、Bax表达变化,Western blot检测大鼠心肌组织Notch1、Hes-1及Jagged-1的蛋白表达。结果:与CON组相比,HC组H/B、LVWI、FBG无明显变化,血脂、MDA含量明显升高,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1、Hes-1、Jagged-1蛋白表达降低;与HC组相比,DM组H/B、LVWI、FBG、MDA含量增加明显,血脂水平无明显变化,SOD活性、Bcl-2/Bax及Notch1信号通路蛋白表达进一步降低;与DM组相比,厄贝沙坦干预组H/B、LVWI明显降低,血脂、血糖水平无明显变化,但SOD活性、Bcl-2/Bax增加,MDA含量降低,同时Notch1信号通路相关蛋白表达增加。结论:糖尿病可导致大鼠发生心肌损伤,厄贝沙坦可能通过增强Notch1信号通路的表达发挥心肌保护作用。

基于Notch1信号通路观察电针对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血周边皮质与SVZ区神经干细胞增殖的影响

目的:探讨电针曲池、足三里穴对脑缺血再灌注损伤大鼠缺血周边区皮质、室管膜下区(SVZ)内源性神经干细胞增殖的影响及可能机制。方法:采用改良Zea Longa线栓法制备大鼠脑缺血再灌注损伤模型。电针患肢曲池、足三里穴,治疗3 d和7 d后,观察大鼠神经功能缺损和脑梗死体积情况,以及动物整体行为学的变化;采用免疫组化和免疫荧光法观察Nestin、Vimentin阳性细胞分布及与Brdu共标情况;采用Western Blotting法检测Notch1信号转导通路相关蛋白的表达水平。结果:(1)电针曲池、足三里穴后,脑缺血再灌注损伤大鼠的神经缺损评分降低,脑梗死体积减小(P<0.05);(2)Catwalk步态分析显示,电针治疗3 d和7 d后大鼠通过Catwalk通道的平均速度增加,而持续时间减少(P<0.05);(3)模型组大鼠脑缺血再灌注损伤8d,缺血周围区皮质以及缺血侧SVZ区Ki-67、Nestin和Vimentin阳性细胞数量较缺血再灌注损伤4 d时增加(P<0.05或P<0.01)。电针治疗3 d和7 d均促进神经干细胞增殖(P<0.05);(4)电针治疗7 d后缺血周围区皮质以及缺血侧SVZ区JAG1、NICD、Hes1、Hes5的表达量较模型组明显增加(P<0.05或P<0.01),而电针+GSI组大鼠脑缺血周围区皮质以及缺血侧SVZ区NICD、Hes1、Hes5蛋白的表达量显著降低(P<0.05),但JAG1的表达无统计学意义(P>0.05)。(5)电针+GSI组Nestin阳性细胞、Brdu与Nestin共定位细胞在缺血周围区皮质、缺血侧SVZ区均明显增加(P<0.01或P<0.05)。结论:电针曲池、足三里穴能够减少脑梗死体积,改善动物整体行为学,发挥积极的神经保护作用。其作用机制可能为活化Notch1信号转导通路,释放NICD调控Hes1、Hes5的表达,促进缺血周围区皮质以及缺血侧SVZ区内源性神经干细胞的增殖。

TNF-α抑制剂通过激活Notch1信号通路治疗创伤后心肌再灌注损伤的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子-α（TNF-α）抑制剂（依那西普）通过跨膜蛋白受体Notch1信号通路对小鼠创伤性心肌损伤的保护作用。方法选取c57系清洁级雄性小鼠36只（10-12周龄）,采用随机数字表法分为假手术组（腹腔注射5 ml/kg生理盐水）、对照组（腹腔注射5 ml/kg生理盐水）、依那西普组（建立创伤后心肌缺血再灌注损伤模型,依那西普8 mg/kg）各12只,采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组小鼠再灌注30 min后的血浆TNF-α、3 h后的血清心肌肌钙蛋白I（cTnI）浓度,测定各组再灌注24 h后的左室射血分数（LVEF）、采用TUNEL染色法检测各组心肌细胞凋亡率、采用TTC双染色检测各组心肌梗死面积比值,采用免疫印迹法（Western-blot）检测再灌注6 h后心肌跨膜蛋白受体Notch1胞内活性片段（Notch1-ICD）、细胞凋亡相关蛋白3（caspase-3）的表达。结果对照组、依那西普组大鼠的血浆TNF-α、血清cTnI水平、心肌Notch1-ICD、caspase-3蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积比值均显著高于假手术组（P〈0.05）;依那西普组血浆TNF-α、血清cTnI水平、心肌caspase-3蛋白表达水平、心肌细胞凋亡率、心肌梗死面积比值显著低于对照组（P〈0.05）,Notch1-ICD蛋白表达水平、LVEF值显著的高于对照组（P〈0.05）。结论 TNF-α抑制剂对创伤后心肌缺血再灌注损伤心肌具有保护作用,其作用机制与激活Notch1信号通路以调节caspase-3蛋白表达水平有关。