中药降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏瘦素受体mRNA及P-JAK2/P-STAT3的影响

目的:观察降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠的治疗作用及其对血清瘦素、肝组织瘦素受体mRNA、P-JAK2/P-STAT3蛋白含量表达的影响.方法:将60只SD♂大鼠,随机分为空白组(正常饮食)和造模组(高脂饮食).待造模成功后将造模组大鼠随机分为模型对照组、降脂颗粒低、中、高剂量组和东宝甘泰组.治疗4 wk后行肝组织生化和病理学检测,并同时应用ELISA试剂盒检测血清瘦素,RT-PCR法检测肝组织瘦素受体mRNA表达,应用Western blot检测肝组织P-JAK2和P-STAT3蛋白的表达.结果:低、中、高剂量组降脂颗粒能明显降低非酒精性脂肪肝大鼠模型肝脂(TG和TC)水平,改善脂肪变性,降低肝脏炎症反应,并能明显降低血清瘦素高水平状态(193.02±23.8ng/ L,163.97±31.38ng/L,147.83±17.59ng/L vs 317.22±39.26ng/L,P<0.01),改善瘦素抵抗,同时增加瘦素受体mRNA的表达(1.87±0.06,2.20±0.04,2.78±0.04 vs 1.50±0.05,P<0.01),增加肝组织P-JAK2和P-STAT3蛋白的含量(119.88±2.98,123.45±0.68,124.34±3.42 vs 113.15±1.27,P<0.01;94.15±0.78,100.18±3.33,101.94±2.20 vs 89.06±0.69,P<0.01).结论:降脂颗粒对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏脂质和炎症有较好的治疗作用,其可能机制是改善瘦素抵抗,增加肝脏瘦素受体mRNA表达及P-JAK2,P-STAT3蛋白含量.

重组人粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注损伤后p-JAK2及p-STAT3信号通路的影响

目的观察SD大鼠大脑中动脉缺血再灌注损伤模型在给予重组人粒细胞集落刺激因子(recombinant human granulocyte colony-stimulating factor,rhG-CSF)后脑组织磷酸化酪氨酸激酶-2(p-JAK2)、磷酸化信号转导子和转录活化子-3(p-STAT3)蛋白表达及细胞凋亡的情况,探讨rhG-CSF的神经保护作用机制。方法将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组、rhG-CSF治疗组(治疗组),每组12只。采用Longa线栓法制作大脑中动脉闭塞再灌注模型(MCAO/R),治疗组大鼠于脑缺血2h后再灌注的即刻及24h分别给予rhG-CSF(按体质量50μg/kg)腹部皮下注射,假手术组和脑缺血再灌注组则予等量生理盐水。采用Longa 5分制标准评分法于术后24h进行神经功能评分,用免疫组化法检测各组大鼠脑组织p-JAK2及pSTAT3蛋白表达水平,用2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法测定脑梗死体积,用原位末端转移酶标记(TUNEL)检测神经细胞凋亡情况。结果假手术组大鼠未见神经功能缺损,脑组织未发现梗死灶;治疗组梗死灶体积〔(16.27±1.44)%〕较缺血再灌注组〔(28.65±1.36)%〕明显减少(P<0.01),治疗组神经功能评分(1.45±0.51)低于缺血再灌注组(2.72±0.45;P<0.01)。缺血再灌注组p-JAK2、p-STAT3表达(灰度值分别为25.62±6.25、24.52±5.08)均低于假手术组(灰度值分别为41.59±6.43、43.36±5.68;均P<0.01)〕,治疗组p-JAK2及p-STAT3表达(灰度值分别为36.47±6.38、35.87±5.52)均较缺血再灌注组(灰度值分别为25.62±6.25、24.52±5.08)增高(均P<0.01);假手术组偶见细胞凋亡,治疗组凋亡细胞比例〔(27.84±2.69)%〕较缺血再灌注组〔(39.51±3.74)%〕明显减少(P<0.01)。结论 rhG-CSF可能对脑缺血再灌注损伤有神经保护作用,其机制可能为通过抑制炎性细胞因子介导JAK2/STAT3信号转导通路而减轻脑缺血再灌注引起的神经损伤。

骨髓增殖性肿瘤患者外周血细胞中JAK2V617F突变和p-STAT5蛋白表达及其与临床特征的相关性

本研究旨在探讨骨髓增殖性肿瘤(MPN)患者外周血细胞中JAK2V617F突变和p-STAT5蛋白表达的情况及二者与疾病临床特征之间的相关性,为临床实践及靶向治疗研究提供理论依据。选择山东大学附属省立医院血液科确诊的45名BCR-ABL阴性的MPN患者及15例健康成年人为研究对象,提取外周血单个核细胞的DNA及蛋白质,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫蛋白印迹法定量检测研究对象的JAK2V617F突变比例及p-STAT5蛋白表达量,并结合收集的临床病例资料进行相关性分析。结果表明,MPN患者JAK2V617F突变总体阳性率为73.3%(33/45),其中真性红细胞增多症(PV)的JAK2V617F突变阳性率为83.3%(20/24),原发性血小板增多症(ET)的阳性率为68.8%(11/16),特发性骨髓纤维化(IMF)患者的阳性率为40.0%(2/5);PV、ET、IMF患者的JAK2V617F突变比例分别为0.472±0.245,0.216±0.162,0.435±0.239;p-STAT5蛋白表达灰度值分别为1.396±0.758,0.760±0.623,0.792±0.612;JAK2V617F突变负荷与p-STAT5蛋白表达灰度值呈线性相关(P<0.05);在PV患者中,JAK2V617F突变负荷越高,白细胞计数、血红蛋白水平及红细胞压积越高,血小板水平越低;ET患者中JAK2V617F突变负荷越高者,年龄越大,白细胞计数、血红蛋白水平及红细胞压积越高,与血小板水平无明显相关性;IMF患者中JAK2V617F突变负荷越高者白细胞、血小板计数、血红蛋白水平及红细胞压积均较低。JAK2V617F突变阳性者更易发生脾肿大、出血及血栓事件。结论:JAK2V617F突变在BCR-ABL阴性的MPN患者中阳性率较高,突变负荷越高者其下游p-STAT5蛋白的表达量越大,发生脾肿大、血栓事件的几率越高。

p-JAK2蛋白在食管鳞状细胞癌中的表达及意义

目的探讨JAK2/STAT3信号通路相关蛋白磷酸化的JAK2(p-JAK2)在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达及意义。方法采用免疫组织化学SP法检测食管鳞癌组织及对应癌旁组织中p-JAK2蛋白的表达。结果食管鳞状细胞癌组织p-JAK2阳性表达率明显高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P<0.05)。p-JAK2表达与肿瘤分化程度相关,差异有统计学意义(P<0.05);而与性别、年龄、病理形态、浸润深度、淋巴结转移及临床分期无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在食管鳞状细胞癌组织中p-JAK2的高表达与分化程度呈正相关,与肿瘤恶性程度呈负相关,可能为食管癌的预后判断提供新思路。

益肾胶囊对高糖环境下小鼠足细胞SOCS3、p-JAK2和p-STAT3表达的影响

目的:观察益肾胶囊含药血清对高糖干预足细胞中SOCS3、p-JAK2、p-STAT3表达的影响。方法:制备不同浓度益肾胶囊含药血清及氯沙坦钾含药血清,对体外培养的小鼠肾小球足细胞进行分组干预,细胞随机分为6组:正常组、高糖组、益肾含药血清低剂量组、益肾含药血清中剂量组、益肾含药血清高剂量组和氯沙坦钾组。Western blotting方法检测高糖刺激及药物血清干预后SOCS3、p-JAK2、p-STAT3及Nephrin蛋白的表达;Real-time PCR检测高糖刺激及药物血清干预后SOCS-3 mRNA的表达。结果:(1)正常组小鼠足细胞可有微量SOCS3表达,高糖刺激后SOCS3蛋白及mRNA表达逐渐升高(P<0.05),于24 h达高峰,同时Nephrin的表达下降;(2)伴随高糖干预时间的变化,p-JAK2及p-STAT3的表达逐渐升高(P<0.05);(3)给予益肾胶囊及氯沙坦钾含药血清干预后,SOCS3、p-JAK2及p-STAT3的表达较高糖组下降(P<0.05),Nephrin的表达升高(P<0.05),并呈一定的剂量依赖性。结论:益肾胶囊含药血清可能通过调控JAK/STAT/SOCS信号通路,改善高糖诱导的足细胞损伤。

针刺对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠JAK2、P-STAT3、IL-17表达的影响

目的:观察针刺干预C57BL/6小鼠实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的疗效及其对JAK2、PSTAT3和IL-17表达的影响,为临床治疗MS提供新的思路及理论支持。方法:采用髓鞘少突胶质细胞糖蛋白(MOG35-55)制备的完全抗原将C57BL/6小鼠诱导成EAE模型,将40只C57BL/6小鼠随机分为空白对照组、EAE模型组、激素治疗组、针刺治疗组,记录各组0天、14天、20天及28天的体质量、神经功能缺损评分观察临床症状,免疫第28天取材后脑组织进行LFB髓鞘染色观察病理变化,检测脑组织JAK2、P-STAT3免疫组化阳性表达及血清中IL-17ELISA表达。结果:与空白对照组相比,各组的体质量明显降低(P <0. 01),神经功能缺损评分明显升高(P <0. 01),脑组织LFB染色脱髓鞘程度明显升高,脑组织免疫组化JAK2、P-STAT3表达显著升高(P <0. 01),血清IL-17表达显著升高(P <0. 01)。与EAE模型组相比,针刺治疗组、激素治疗组的体质量明显增高(P <0. 01),神经功能缺损评分明显降低(P <0. 05或P <0. 01),脑组织LFB染色脱髓鞘程度明显降低,JAK2、P-STAT3表达显著降低(P <0. 01),IL-17表达显著降低(P <0. 05或P <0. 01)。与激素治疗组相比,针刺治疗组体质量较低(P <0. 05),神经功能缺损评分较高(免疫20天,P <0. 01;免疫28天,P> 0. 05),JAK2、PSTAT3表达较高但差异无统计学意义(P> 0. 05),IL-17表达较高(P <0. 05)。结论:针刺可能是通过降低EAE小鼠JAK2、P-STAT3、IL-17表达,调节特异性免疫应答,减轻炎症反应,改善髓鞘脱失程度,从而发挥治疗作用。

泄浊解毒方通过miRNA-155-5p/JAK2/STAT3通路改善溃疡性结肠炎小鼠结肠黏膜炎症反应分析

目的:应用生物信息学方法分析溃疡性结肠炎(UC)活动期与缓解期之间差异表达的微小RNA(miRNAs),筛选差异表达基因(DEGs)构建调控关系,推测泄浊解毒方治疗UC的作用机制,并通过动物实验进行验证。方法:从基因表达数据库(GEO)中获取UC患者结肠黏膜组织miRNAs数据集,运用GEO2R、Excel等工具筛选差异表达最显著的miRNAs作为研究对象,运用TargetScan、miRTarbase、miRDB及STRING、TRRUST、Matescape数据库筛选关键DEGs、预测下游转录因子(TF)、基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,选取关键信号通路进行动物实验验证。动物实验采用2.5%的葡聚糖硫酸钠(DSS)自由饮方式制备UC小鼠模型,泄浊解毒方及美沙拉嗪灌胃7 d,苏木素-伊红(HE)染色观察结肠黏膜炎性浸润情况,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测结肠组织中miR-155-5p mRNA表达量;免疫组化法及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中细胞因子信号转导抑制因子1(SOCS1)、磷酸化转录信号转导子及激活子3(p-STAT3)、磷酸化JAK激酶2(p-JAK2)、维甲酸受体相关孤儿受体-γt(ROR-γt)蛋白表达量;酶联免疫吸附测定法(ELLSA)检测血清中转换生长因子-β(TGF-β)、白细胞介素-17(IL-17)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-10(IL-10)表达量。结果:GEO数据库筛选出GSE48957数据集,从活动期与缓解期样本中筛选到miR-155-5p作为研究对象,筛选出131个DEGs,其GO/KEGG富集分析主要与miRNA转录的正调节、蛋白质磷酸化等生物学过程,干细胞信号通路、IL-17信号通路、辅助性T细胞17(Th17)细胞分化等信号通路密切相关。运用Matescape数据库筛选出关键DEGs 10个,其中SOCS1是miR-155-5p的关键DEGs之一,进一步筛选关键DEGs的TF发现,STAT3是SOCS1的主要TF之一。动物实验结果显示,泄浊解毒方能有效下调UC小鼠结肠组织中miR-155-5p mRNA和p-STAT3、p-JAK2、ROR-γt蛋白表达,上调SOCS1蛋白表达,下调UC小鼠血清中IL-17、IL-6表达,上调TGF-β、IL-10表达,提高抑炎因子水平,减轻炎症细胞浸润情况。结论:推测泄浊解毒方可能通过调控UC小鼠miR-155-5p表达干预SOCS1,抑制STAT3磷酸化,抑制CD4^(+)T细胞分化为Th17细胞,降低促炎因子(IL-17、IL-6)升高抑炎因子(TGF-β、IL-10)的水平,进而缓解UC小鼠结肠黏膜炎症反应。

JAK2-STAT3通路和E-cadherin在结直肠癌进展中的相互作用分析

目的:探讨JAK2-STAT3通路和E-cadherin在结直肠癌进展中的相互作用。方法:选取择期行手术治疗的结直肠癌患者87例,利用Westernblot检测结直肠癌及癌旁组织中STAT3、p-STAT3和E-cadherin蛋白的表达,并计算p-STAT3/STAT3值。结果:结直肠癌组织中STAT3、p-STAT3蛋白相对表达量和p-STAT3/STAT3值均高于癌旁组织,而E-cadherin蛋白相对表达量则低于癌旁组织,差异具有统计学意义(P<0.05);结直肠癌患者STAT3、p-STAT3和E-cadherin蛋白表达均与肿瘤大小、分化程度、淋巴结转移、浸润深度和TNM分期有关(P<0.05);Pearson相关分析显示,结直肠癌组织中STAT3表达与p-STAT3呈正相关(r=0.736,P<0.05),而与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.497,P<0.05),p-STAT3表达与E-cadherin表达呈负相关(r=-0.642,P<0.05)。结论:STAT3和p-STAT3蛋白在结直肠癌组织中表达上调,可能通过激活JAK2-STAT3通路抑制E-cadherin蛋白表达而实现对肿瘤细胞浸润、转移的调控作用。

电针对脑缺血再灌注损伤小鼠脑梗死体积及JAK2/STAT3信号通路影响

目的观察电针处理对大脑中动脉阻塞(MCAO)小鼠再灌注损伤后脑梗死体积、P-JAK2、P-STAT3含量、神经行为学的影响,探讨电针对脑缺血再灌注损伤(CIRI)作用机制。方法健康C57BL/6N小鼠150只,随机分为假手术组(S组)、模型组(M组)、电针组(EA组),每组再分2 h、8 h、24 h、3 d、7 d亚组,每亚组小鼠各10只。模型组和电针组通过longa改良线栓法建立MCAO小鼠模型;假手术组仅分离血管,不阻塞血管;电针组在造模成功后1 h电针"百会""内关",以后每天1次,每次30 min,直到断头取脑的那一天。每只MCAO小鼠在再灌注(I/R)后2 h、8 h、24 h、3 d、7 d时间点进行神经功能学评分,随后处死。每组每个时间点处死10只MCAO小鼠,5只采用TTC染色来判定小鼠脑梗死体积,计算体积百分比;5只采用Western Blot法观察不同时间点缺血灶半暗带区P-JAK2、P-STAT3表达的改变。结果 Longa评分比较:两组神经功能评分在I/R后2 h开始下降(P<0.05),在24 h后开始上升,提示神经功能逐步恢复(P<0.05,P<0.01)。EA组与M组在I/R后3 d, 7 d各相应时间点比较,EA组恢复优于M组(P<0.01)。根据TTC染色所示,EA组与M组在I/R后2 h、8 h时间点梗死灶体积均呈增大趋势(P<0.01),两组间同时间点对比差异无统计学意义(P>0.05);两组I/R后24 h、3 d、7 d梗死灶体积均呈逐步减少(P<0.01),且两组相应时间点比较,EA组小于M组(P<0.05,P<0.01)。半暗带区P-JAK2蛋白表达:I/R后2 h, M组和EA组P-JAK2水平迅速升高,M组在I/R后8 h达到高峰,EA组在I/R后2 h达到高峰;M组在I/R后8 h后开始回落,而EA组在I/R后三天期间基本在高峰徘徊。两组所有的同时间点相比,P<0.01。M组组内对比,I/R后24 h开始表达下降,与3 d、7 d相比,P<0.01,在2 h与8 h对比,两个时间点表达差异无统计学意义(P>0.05);EA组在I/R后2 h与24 h、3 d时间点相比,表达均在高峰,P>0.05;在I/R后3 d与7 d相比,表达逐步下降(P<0.01)。半暗带区P-STAT3蛋白表达比较:M组在I/R后2 h与8 h、24 h时间点比较,表达逐渐增强,P<0.01;在I/R后8 h与I/R后3 d, 7 d时间点比较表达逐渐减弱,P<0.01。EA组I/R后2 h与24 h组内比较,表达逐渐增强,P<0.01);I/R后24 h与3 d、7 d组内比较,表达逐渐减弱,P<0.01。两组在2 h、24 h、3 d、7 d时间点,EA组表达均高于M组(P<0.01)。结论电针"百会""内关"可以迅速激活脑内JAK2/STAT3信号通路,减少脑梗死体积,改善CIRI后小鼠的神经功能。提示电针治疗CIRI的部分机制是通过激活脑内JAK/STAT信号通路,促进缺血灶中P-JAK2和P-STAT3的表达增加起作用。

吴茱萸碱调控人结肠癌HCT-116细胞中JAK2/STAT3信号通路的机制研究

目的探讨吴茱萸碱(evodiamine,EVO)对人结肠癌HCT-116细胞中JAK2/STAT3信号通路的影响。方法EVO诱导人结肠癌HCT-116细胞2、4、6 h后,Hoechst法检测细胞核凋亡的形态学改变;6μmol·L-1的EVO作用于HCT-116细胞2、4和6 h,不同浓度的AG490作用于HCT-116细胞48 h,6μmol·L-1的EVO和50μmol·L-1的AG490分别诱导HCT-116细胞以及两药联合诱导HCT-116细胞6 h后,运用蛋白质印迹法检测各组细胞中JAK2、pJAK2、STAT3和p-STAT3的蛋白表达量。结果镜下观察EVO诱导后的细胞核浓缩聚集,染色质边缘化,并出现染色质碎裂成块,形成凋亡小体等形态学改变。Western blot结果显示:EVO可以明显下调HCT-116细胞内p-STAT3的表达;AG490可以抑制JAK2/STAT3信号通路的激活;EVO对JAK2/STAT3信号通路中p-STAT3蛋白的表达抑制效果较AG490更明显,且两药联合应用后抑制效果进一步增强。结论EVO对人结肠癌HCT-116细胞的抗肿瘤活性有可能是通过抑制JAK2/STAT3信号通路的激活来发挥的。

黄芪甲苷与阿魏酸合用调控JAK-STAT通路促进血管内皮细胞增殖作用的研究

目的探讨黄芪甲苷与阿魏酸合用调控JAK-STAT通路对氯化钴所致的缺氧人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖的作用及机制。方法建立人脐静脉内皮细胞氯化钴缺氧损伤模型,采用CCK-8和活细胞染色技术,检测药物对细胞的增殖作用;采用荧光染色技术,观察细胞形态的变化;采用划痕实验测定细胞迁移能力;通过成管实验,观察药物对内皮细胞体外成管作用;采用Western blot法检测各给药组对p-JAK2和p-STAT3蛋白表达的影响。结果与模型组相比,黄芪甲苷与阿魏酸联合作用于氯化钴所致的缺氧HUVECs 24 h,可明显促进HUVECs的增殖,并改善由于缺氧所致的细胞形态的变化,促进细胞的迁移,有利于血管生成。同时可上调p-STAT3和p-JAK2蛋白的表达。结论黄芪甲苷与阿魏酸合用对氯化钴所致的缺氧HUVECs有保护作用,其机制可能与激活JAK-STAT信号通路有关。

SIF干预肥胖大鼠下丘脑瘦素介导JAK/STAT信号通路的研究

通过观察SIF对肥胖大鼠下丘脑中瘦素介导的信号通路蛋白表达的影响,探讨SIF对肥胖大鼠的干预机制。采用高脂饲料饲喂大鼠,建立肥胖动物模型,并将肥胖大鼠分为4组,分别灌胃SIF,剂量为:对照组(Ⅰ组)0 mg·kg^(–1)、低剂量组(Ⅱ组)50 mg·kg^(–1)、中剂量组(Ⅲ组)150 mg·kg^(–1)、高剂量组(Ⅳ组)450 mg·kg^(–1),并设置正常大鼠基础组(Ⅴ组),饲喂基础饲料,并灌胃给予SIF处理等体积的羧甲基纤维素钠,连续4周。采用HE染色法观察下丘脑组织学结构变化,免疫组织化学SABC法检测下丘脑中瘦素介导的JAK/STAT信号转导通路蛋白OB-Rb(瘦素受体长型),JAK2(内源性酪氨酸蛋白激酶2),p-STAT3(磷酸化的信号转导与转录激活子3),SOCS3(细胞因子信号3抑制因子),NPY(神经肽Y)的表达水平。结果显示:高剂量组和基础组OB-Rb,JAK2,p-STAT3的阳性表达水平显著高于其他组(P<0.05),且前述蛋白均有随SIF的剂量增加而表达增多趋势。高剂量组和基础组的SOCS3和NPY表达水平显著较其他组低(P<0.05),但NPY在背内侧核和室旁核的表达随SIF的剂量增加而增多。OB-Rb,JAK2,p-STAT3,SOCS3和NPY均在下丘脑广泛表达,并随SIF的剂量增加而变化,提示SIF对瘦素介导的信号通路有一定作用并与机体能量的调节密切相关;SIF通过干预大鼠下丘脑瘦素JAK/STAT信号通路具有减重作用,并呈剂量依赖性。

强肝胶囊对非酒精性脂肪肝大鼠肝脏瘦素受体及P-JAK2和P-STAT3蛋白的影响

[目的]观察强肝胶囊对非酒精性脂肪肝(NAFLD)大鼠的治疗作用,及其对血清瘦素、肝组织瘦素受体mRNA、P-JAK2和P-STAT3蛋白表达的影响,探讨强肝胶囊治疗NAFLD的可能机制。[方法]高脂饲料制备SD雄性大鼠NAFLD模型,随机分为空白组和造模组。待造模成功后将造模组大鼠随机分为模型对照(模型)组、强肝胶囊组和辛伐他汀组。治疗4周后行肝组织病理学检测,并同时应用ELISA试剂盒检测血清瘦素,RT-PCR法检测肝组织瘦素受体mRNA表达,western blot检测肝组织P-JAK2、P-STAT3蛋白的表达。[结果]强肝胶囊能明显降低NAFLD模型大鼠肝组织三酰甘油、总胆固醇的水平,改善脂肪变性,降低肝脏炎症反应,并能明显降低血清瘦素高水平状态,改善瘦素抵抗,同时增加瘦素受体mRNA的表达,增加肝组织P-JAK2、P-STAT3蛋白的水平。[结论]强肝胶囊对NAFLD大鼠肝脏脂质和炎症有较好的治疗作用,其可能机制是通过改善瘦素抵抗,增加肝脏瘦素受体mRNA表达及P-JAK2、P-STAT3蛋白水平而完成的。

雷帕霉素抑制IgA肾病大鼠肾小球信号蛋白STAT3的活化

目的探讨雷帕霉素对IgA肾病大鼠肾组织p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA表达的影响。方法制备IgA肾病动物模型,分为对照组、IgA肾病组、氯沙坦(ls)和雷帕霉素(rapa)治疗组。监测大鼠的生化指标及用免疫组化、Western blot、RT-PCR等方法检测肾组织p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA的蛋白及mRNA的表达。结果IgA肾病大鼠较对照组24 h尿蛋白定量明显升高、血白蛋白降低、BUN以及Cr水平明显升高(P<0.01);IgA肾病大鼠p-JAK2、STAT3、p-STAT3和PCNA蛋白及mRNA水平也显著高于对照组;雷帕霉素能显著缓解上述改变(P<0.01)。结论雷帕霉素可能通过抑制IgA肾病大鼠肾小球JAK/STAT信号途径、直接抑制STAT3的活化以及抑制系膜细胞的增殖而减轻病变程度。

磷酸化蛋白酪氨酸激酶及信号转导子和转录激活子在谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡中的表达研究

目的探讨谷氨酸诱导PC12细胞凋亡后磷酸化蛋白酪氨酸激酶2(P-JAK2)、磷酸化信号转导子与转录激活子3(P-STAT3)表达的变化及意义。方法采用谷氨酸诱导PC12细胞发生凋亡,实验分为6组,分别为正常对照组、500μmol/L谷氨酸作用5、10、20、30、60 min组,应用流式细胞仪观察PC12细胞凋亡,Western blot定量观测PC12细胞P-JAK2与P-STAT3蛋白表达的变化。结果对照组PC12细胞的凋亡率为(2.71±0.32)%;经500μmol/L谷氨酸作用PC12细胞20 min,凋亡率增加到(61.20±4.60)%,与对照组相比差异有显著性意义(P=-0.000);Western blot检测结果表明P-JAK2 5 min在胞浆中开始表达,20 min达最高峰,是5 min组(3.52±0.20)倍(P= 0.002);P-STAT3 5 min表达增强,30 min达高峰,为5 min组的(4.76±0.17)倍(P=0.000)。结论细胞损伤激活了JAK/STAT信号转导通路,该通路参与了神经细胞凋亡的过程。

大豆异黄酮对肥胖大鼠肠道瘦素介导Janus激酶/信号转导及转录激活因子信号转导通路的影响

本试验旨在研究大豆异黄酮(SIF)对肥胖大鼠肠道瘦素介导Janus激酶(JAK)/信号转导及转录激活因子(STAT)信号转导通路的调控作用,探讨SIF对肥胖大鼠的干预机制。选取80只5周龄SD雄性大鼠,适应环境1周后,随机分为基础饲粮组(12只)和高脂饲粮组(68只),分别饲喂基础饲粮和高脂饲粮,饲喂8周后高脂饲粮组大鼠成功建立食源型肥胖大鼠模型。将40只肥胖大鼠随机分为SIF干预低、中、高剂量组和肥胖对照组,每组10只。低、中、高剂量组大鼠分别灌胃50、150、450 mg/kg BW的SIF提取物,基础饲粮组和肥胖对照组灌胃不含SIF提取物的溶媒剂。SIF连续干预肥胖大鼠5周,监测大鼠体重,并采用免疫组织化学链霉亲和素-生物素复合物(SABC)染色法研究大鼠肠道中长型瘦素受体(OB-Rb)、Janus激酶2(JAK2)、磷酸化的信号转导与转录激活因子3(p-STAT3)、细胞因子信号3抑制因子(SOCS3)和神经肽Y(NPY)的分布和表达。结果显示:试验各时期基础饲粮组大鼠体重均极显著低于肥胖对照组(P<0.01)。SIF干预5周后,与肥胖对照组相比,各SIF干预组大鼠体重均下降,并表现出剂量依赖性,其中中、高剂量组极显著低于肥胖对照组(P<0.01)。各组大鼠OB-Rb、JAK2、p-STAT3、SOCS3和NPY在十二指肠、空肠、回肠、结肠和直肠均有表达;同基础饲粮组相比,肥胖对照组大鼠上述5种因子在各肠段的表达量均显著降低(P<0.05);SIF干预组中OBRb、JAK2、p-STAT3和NPY的表达量在各肠段均较肥胖对照组增多,总体呈现剂量依赖性。由此得出,SIF可通过增加肠道中OB-Rb的表达,激活JAK,加速STAT的磷酸化,改善能量代谢,减弱肥胖大鼠瘦素抵抗状态,来起到减重作用。

重组瘦素诱导HSC增殖及保肝宁调控作用的实验研究

目的:探讨中药复方保肝宁对外源性瘦素(leptin)诱导的肝星状细胞(Hepatic stellate cell,HSC)增殖功能的影响及其保肝宁调控作用的可能机制。方法:给正常Wistar大鼠灌胃保肝宁煎剂7天,制备含药血清,用甲基噻唑基四唑(methyl thiazolylium,MTT)检测保肝宁对leptin刺激HSC-LX2增殖的影响;应用蛋白印迹实验(Western blotting analysis)检测的P-JAK2蛋白表达水平。结果:保肝宁组作用HSC-LX2 6小时后,P-JAK2蛋白的表达水平开始降低,P-JAK2处于最低水平。与正常血清组比较,保肝宁组较秋水仙碱组更能降低P-JAK2蛋白表达水平。结论:中药复方保肝宁有阻断leptin诱导HSCs-LX2增殖的作用,而抑制P-JAK2蛋白的表达水平可能是其主要的机制之一。

白藜芦醇对大鼠脑出血后血肿周围组织细胞凋亡的影响研究

目的探讨白藜芦醇对大鼠脑出血后血肿周围组织细胞凋亡的影响及其作用机制。方法采用二次注血法制作脑出血模型。将大鼠随机分为治疗组、对照组和假手术组,每组分3、6、12、24、48、72和168 h共7个时间,每个时间6只大鼠。利用蛋白印迹法和免疫组织化学法对P-JAK2、P-STAT3、Bcl-XL、Caspase-3蛋白做定量和定性分析。利用原位末端标记法检测细胞凋亡指数的变化。结果治疗组在各个时间细胞凋亡指数低于对照组(P<0.05),假手术组中细胞凋亡指数低于对照组与治疗组(P<0.05)。治疗组在各个时间的P-JAK2、P-STAT3、Bcl-XL蛋白的表达高于对照组(P<0.05),Caspase-3蛋白的表达低于对照组(P<0.05),假手术组中4种蛋白表达低于对照组与治疗组(P<0.05)。结论白藜芦醇可以促进JAK2、STAT3的磷酸化,增加Bcl-XL表达,降低Caspase-3表达,有抗细胞凋亡的作用。

膳食诱导肥胖小鼠睾丸JAK2/STAT3蛋白表达变化研究

目的通过检测膳食诱导肥胖小鼠血清中瘦素水平及睾丸中JAK2/STAT3蛋白表达水平变化,探讨睾丸JAK2/STAT3通路在肥胖影响雄性生殖中的作用。方法 5周龄的C57bl/6雄性小鼠,共48只,随机分为对照组(CON) 12只和实验组36只,对照组予以普通饲料,实验组予以高脂饲料,饲养19周后,将实验组小鼠按体重增加分为两组:肥胖倾向组(DIO)和肥胖抵抗组(DIO-R)。采集下腔静脉血,剥离睾丸、睾周脂肪、肾周脂肪并称重记录,采用ELISA试剂盒检测血清瘦素,Western blot检测睾丸中JAK2、p-JAK2、STAT3、p-STAT3、蛋白表达量。结果 DIO组和DIO-R组小鼠肾周脂肪、肾周脂肪系数、睾周脂肪、睾周脂肪系数明显高于对照组(P<0. 05),DIO组和DIO-R组小鼠之间上述各指标差异无统计学意义(P>0. 05); DIO组和DIO-R组小鼠血清瘦素显著高于CON组(P<0. 05),而DIO组和DIO-R组之间差异无统计学意义(P>0. 05); DIO组p-JAK2、p-STAT3蛋白表达水平显著低于CON组(P<0. 05),DIO组小鼠睾丸中p-JAK2蛋白表达水平低于DIO-R组小鼠(P<0. 05),而p-STAT3蛋白表达水平同DIO-R组小鼠相比差异无统计学意义(P>0. 05)。结论膳食诱导肥胖可导致雄性小鼠血清瘦素水平升高,而睾丸JAK2/STAT3蛋白表达降低。

探讨蛎昆一号制剂对小鼠骨髓抑制的保护作用及其分子机制

目的 探讨蛎昆一号制剂对小鼠骨髓抑制损伤的保护作用及机制。方法 60只♂BALB/c小鼠,随机分为正常对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)模型组、阳性对照组(rhG-CSF)、蛎昆一号制剂低、中、高剂量组。除正常组外,其余各组腹腔注射5-Fu 1次,建立骨髓抑制模型,给药7 d后血常规分析,ELISA检测血清TNF-α、IL-2水平,Western blot测定脾脏组织中p-JAK2、p-STAT5磷酸化水平。结果给予蛎昆一号制剂后,小鼠腹泻症状减轻,体质量升高(P<0.05),白细胞、血小板和淋巴细胞均升高(P<0.05);ELISA检测显示,蛎昆一号制剂中、高剂量组血清IL-2含量高于模型组(P<0.05),TNF-α含量低于模型组(P<0.05);Western blot检测显示,与模型组比较,蛎昆一号制剂各剂量组小鼠脾脏组织JAK2、STAT5磷酸化水平上调(P<0.05)。结论蛎昆一号制剂对5-Fu致小鼠骨髓抑制损伤有保护作用,其分子机制可能与蛎昆一号制剂增加JAK2、STAT5磷酸化水平,促进IL-2产生,减少TNF-α分泌有关。