绵羊肺炎支原体P109蛋白质分子特征、原核表达及其免疫反应性

为了研究绵羊肺炎支原体P109蛋白质的结构与功能,本试验对p109基因进行生物信息学分析,并对其部分基因片段进行了PCR扩增、克隆和原核表达,采用Western-blot方法对其免疫反应性进行分析。结果显示,P109基因与猪肺炎支原体黏附相关基因mhp384高度同源。重组蛋白质在大肠杆菌Rosetta(DE3)工程菌中成功获得表达,以包涵体的形式存在;经纯化的重组蛋白质与山羊抗绵羊肺炎支原体全菌血清发生结合反应,表明P109蛋白质是绵羊肺炎支原体的免疫原之一。

CA-125抗原、肿瘤抑制蛋白质p53、Ki-67抗原及抑癌基因p27蛋白作为卵巢癌病理辅助诊断指标的评价

目的评价CA-125抗原(CA125)、肿瘤抑制蛋白质p53(P53)、Ki-67抗原(Ki-67)及抑癌基因p27蛋白(P27)作为卵巢癌辅助诊断指标的临床意义。方法采用组织芯片微阵列技术检测所选免疫组化指标在96例卵巢癌和22例卵巢良性瘤组织中的表达,绘制受试者工作特征(ROC)曲线,并以病理诊断为金标准,比较单项和多项免疫检测指标联合检测的准确性。结果卵巢癌和卵巢良性瘤组织中CA125、P53、Ki-67、P27的阳性表达率比较,差异均有统计学显著意义(P<0.05)。P53、CA125、Ki-67、P27单项检测的AUC分别为0.730(P<0.01)、0.657(P<0.05)、0.617(P>0.05)和0.371(P>0.05);CA125+P53、CA125+P53+Ki-67、CA125+P53+Ki-67+P27联合检测使ROC曲线下面积(AUC)分别提高到0.773(P<0.01)、0.804(P<0.01)和0.824(P<0.01)。结论多个免疫组化指标联合检测均能不同程度地提高检测效能,优于任何单项检测。

P53蛋白质N末端的二级结构预测及其三维构象

以编码Ｐ５３Ｎ末端１２０个残基的ｍＲＮＡ二级结构为基础，结合Ｃｈｏｕ－Ｆａｓｍａｎ蛋白质二级结构预测原则，预测出Ｐ５３蛋白质Ｎ端的９３个残基包含四段α螺旋结构（１４－２６；３８－４６；５１－５６；６８－７０），没有发现β片层。与四种以多重序列联配为基础的蛋白质二级结构预测方法（准确率均为７３．２０％左右）相对照，结果十分相近。在ＳＧＩ工作站上以此为初始结构建立的三维构象提示，Ｐ５３Ｎ末端前８０个氨基酸肽段呈弧型板块结构，其转录激活区由两段主要螺旋组成，呈上下构形，占据弧型板块的顶部及底部外侧缘。Ｃ端１３个富含脯氨酸肽段则呈弯曲松散状。

肿瘤抑制蛋白质P53单克隆抗体的制备及其免疫活性分析

目的制备可特异性地识别肿瘤抑制蛋白质P53的单克隆抗体。方法应用重组人野生型P53蛋白为免疫抗原,采用经典的细胞融合技术制备单克隆抗体。亲和层析纯化抗体蛋白;ELISA测定抗体滴度。纯化的抗体作用于含有不同p53基因型的MDA-MB-231〔p53(mutant)〕和〔H1299,p53(null)〕肿瘤细胞系,Western印迹、免疫组化和免疫荧光染色法检测抗体与内源性P53蛋白的结合特异性。结果对筛选到的3株单克隆抗体1P15,2P37和3P40,进行了亲和层析技术纯化。SDS-PAGE结果显示,纯化后的3株抗体纯度均在90%以上;ELISA滴度测定结果显示,3株单抗的滴度均在1∶6000以上。免疫印迹结果表明,3株抗体在p53检测中具有较高的灵敏度,其中3P40的灵敏度最高,可以达到5 ng。Western印迹、免疫组化以及免疫荧光染色结果显示,抗体与细胞内源性P53蛋白的结合特异性,说明3P40可以特异性地结合细胞总蛋白提取物以及细胞中内源性P53蛋白,而在检测不表达P53蛋白的细胞系样品时,没有非特异性结合。结论成功制备3株对P53具有高亲和力的单克隆抗体,其中3P40的抗体滴度和灵敏度最佳。

糖尿病皮肤组织及创面增殖细胞核抗原和蛋白质P53表达对增殖修复能力的影响

目的:探讨糖尿病创面难愈发生的可能机制,研究增殖细胞核抗原,蛋白质P53在糖尿病皮肤组织及创面中的表达对增殖修复能力的影响。方法:实验于2003-04/10在广西医科大学第一附属医院和上海市烧伤研究所完成。12例需手术治疗的糖尿病足部溃疡患者供皮区12个创面作为观察对象,同部位非糖尿病手术者12例作为对照。切取皮肤组织后以及术后第3天或第7天或第14天再次切取创面组织作为标本,免疫组化方法检测标本增殖细胞核抗原,P53蛋白。结果:糖尿病皮肤组织与非糖尿病皮肤组织均存在一定的增殖细胞核抗原,P53蛋白表达,但糖尿病皮肤组织与非糖尿病比较,增殖细胞核抗原,P53蛋白表达更多。而在创面组织修复过程中,糖尿病创面增殖细胞核抗原,P53蛋白表达明显少于非糖尿病创面。结论:糖尿病皮肤组织在创伤前就可能存在着一系列的分子生物学异常,从而影响糖尿病创面组织的增殖修复能力,使糖尿病创面的愈合明显滞后于非糖尿病创面的愈合。

p53蛋白质Gly249和Ser249替换型三维结构的分子动力学研究

利用 p5 3蛋白质核心区晶体结构作分子动力学发现 ,除了生化方面的稳定性之外 ,该区还具有分子力学上的高度稳定性 .在此基础上作的R2 49残基替换分子动力学研究显示 ,p5 3蛋白质核心区 2 49位点精氨酸被其他残基替换后能引起 p5 3蛋白质核心区L2、L3结构域间的密切联系趋于松散 ,正常的空间构象发生改变并使整个核心区结构稳定性受到破坏 .这一研究从三维结构变化上 ,直观地解释了R2 49残基替换造成的 p5 3蛋白质免疫和生化特性改变的结构机制 .

一种新的红细胞生成调控因子P59蛋白质的分离纯化和性质研究

以正常人尿为原料，经过ＤＥＡＥ纤维素离子交换层析、硫酸铵沉淀、凝胶过滤、碱性制备电泳等纯化步骤得到一个分子量为５９ｋＤａ的蛋白质，称为Ｐ５９蛋白．该蛋白质在体外可以促进１３ｄ胎鼠肝细胞红系集落的形成，在体内可以刺激小鼠网织红细胞的生成，促使５／６肾切除大鼠贫血症状和Ｈｙｍａｎｎ肾炎大鼠贫血症状的改善，对尿毒症病人的贫血症有明显疗效．

P53蛋白质R175残基替换的分子动力学研究

利用 p53蛋白质核心区晶体结构作分子动力学研究发现 ,除了生化方面的稳定性之外 ,该区还具有分子动力学上的高度稳定性。在此基础上作的R175残基替换分子动力学研究显示 ,p53蛋白质核心区175位点精氨酸被其他残基替换后能引起 p53蛋白质核心区L2、L3结构域间的密切联系趋于松散 ,正常的空间构象发生改变并使整个核心区结构稳定性受到破坏。这一研究从三维结构变化上 ,直观地解释了R175残基替换造成的p53蛋白质免疫和生化特性改变的结构机制。

雌激素受体α、β及细胞周期蛋白D1、癌基因蛋白质P21在子宫内膜癌组织中的表达及临床意义

目的探讨雌激素受体α(ERα)、β(ERβ)及细胞周期调控因子CyclinD1、P21在子宫内膜癌组织中的蛋白表达水平及相关的临床意义。方法选取徐州市中心医院2016年1月至2017年12月65例子宫内膜癌组织、30例子宫内膜不典型增生组织以及30例正常子宫内膜组织,利用免疫组织化学染色检测各组组织中ERα、ERβ、CyclinD1和P21的蛋白表达水平。结果ERα、ERβ、CyclinD1和P21蛋白在子宫内膜癌(47.69%、32.31%、76.92%、49.23%)、子宫内膜不典型增生(90.00%、46.67%、43.33%、66.67%)和正常子宫内膜(73.33%、63.33%、13.33%、96.67%)三组间的阳性表达率均差异有统计学意义(P<0.05)。ERα在子宫内膜不典型增生组织中阳性表达率最高,ERβ和P21在正常子宫内膜组织中阳性表达率最高,CyclinD1在子宫内膜癌组织中阳性表达率最高。在子宫内膜癌组织中,ERα在Ⅲ?Ⅳ期、低分化、肌层浸润深度≥1/2以及有淋巴结转移的组织中阳性表达率降低(P<0.05);ERβ在Ⅲ?Ⅳ期组织中的阳性表达率低于Ⅰ?Ⅱ期病人(P<0.05);CyclinD1在低分化和肌层浸润深度≥1/2的组织中具有较高的阳性表达率(P<0.05);而P21在Ⅰ?Ⅱ期、高中分化以及肌层浸润深度<1/2的组织中具有较高的阳性表达率。结论ERα和ERβ可能在子宫内膜癌形成及进展过程中发挥不同的作用,CyclinD1在子宫内膜癌中可能发挥促进癌症形成及进展的作用,P21在子宫内膜癌中则可能发挥抑制癌症形成及进展的作用。

P53蛋白质的末端二极结构预测及核心区点突变模拟研究

根据刘次全研究员等发现的蛋白质与其编码mRNA二级结构之间可能存在着二级结构单元数目间的对应关系 ,首次尝试参照P53蛋白质N/C末端的编码mRNA二级结构预测P53蛋白质N/C末端相应的二级结构。预测结果显示 ,在P53蛋白质N端 1 -93残基肽段可能存在四个α螺旋结构 (1 4-2 6 ,38-4 6 ,51 -56 ,6 8-70aa)。在P53蛋白质C端单体聚合区以后的区域可能存在另外两个α螺旋 (36 8-373,381 -388aa)。在P53蛋白质N/C端末知二级结构的预测区域内没有发现β层片结构。这些预测结果与法国蛋白质生物和化学研究所 (IBCP)多重序列联配蛋白质二级结构预测方法对照 (其准确率为 73.2 0 %左右 ) ,结果基本一致。在此工作基础上 ,将P53蛋白质N/C端预测的二级结构在SGI-INDIGO2 工作站上分别构建出三维构象模型。与分子生物学研究的资料对照 ,这两个模型较好的解释了P53蛋白质N/C末端特定的生物功能在三维结构上的相应特点。此外 ,在SGI -INDIGO2 工作站上 ,首次选择和利用P53蛋白质突变研究近十年积累的大量资料 ,以及P53蛋白质核心区三维晶体结构数据资料 ,对Arg1 75,Arg 2 49,和Arg 2 48三个P53蛋白质高频率突变点的十种不同的残基替换做了分子动力学研究。结果发现 ,P53蛋白质核心区在经历 1 2 ps的分子动力学过程后 。

牛病毒性腹泻病毒非结构蛋白p20的原核表达

牛病毒性腹泻是由黄病毒科、瘟病毒属中的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)感染牛引起的一种传染病,是一种全球性牛传染病。为了在原核表达系统表达BVDV非结构蛋白p20,并分离纯化蛋白进行晶体学研究。首先对BVDV-1 p20蛋白基因进行密码子优化,合成后克隆到pET30表达载体上。测序鉴定成功的pET30-p20表达质粒转化大肠埃希氏菌表达菌株BL21(DE3),IPTG诱导获得的p20蛋白经过Ni柱、分子筛纯化。最终,经过多重缓冲溶液的筛选,p20蛋白可以稳定存在于含有5 mmol/Lβ-巯基乙醇、5%甘油、150 mmol/L氯化钠(pH8.0)的Tris-HCl缓冲液中。高纯度均一性的p20蛋白获得,为后续p20晶体学研究以及单克隆抗体的制备提供原核表达纯化方案。

糖尿病相关蛋白质有助于开发新药

日本的最新研究结果显示，一种名为p53的蛋白质与糖尿病相关，抑制这种蛋白质的功能可以改善实验鼠胰岛素分泌和糖耐受水平。研究人员对患有糖尿病的实验鼠进行研究后发现，p53蛋白质能与一种名为Parkin的蛋白质结合，导致胰岛B细胞中负责细胞能量代谢的线粒体无法更新，功能下降．使胰岛B细胞失去分泌胰岛素所需的能量。研究人员随后抑制实验鼠体内p53蛋白质与Parkin蛋白质结合，结果实验鼠的胰岛素及糖耐受水平都得到了改善。

p27蛋白在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义

目的 :探讨p2 7在子宫内膜癌组织中的表达及其临床意义。方法 :采用免疫组化S -P法测定 16份正常子宫内膜、18份子宫内膜不典型增生及 50份子宫内膜癌组织中的p2 7蛋白表达。结果 :p2 7蛋白在子宫内膜癌、子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜中的表达率分别为 34%、6 6 .6 7%和 93.75% ,正常子宫内膜及不典型增生组均显著高于子宫内膜癌组 ,差异有显著性 (P <0 .0 5)。p2 7蛋白表达与子宫内膜癌组织学分级、肌层浸润程度及患者预后显著相关 (P <0 .0 5) ,但与临床分期无关。结论 :p2 7蛋白表达下降或缺失可能在子宫内膜癌的发生、发展中起重要作用 。

喉癌和喉乳头状瘤组织中人乳头状瘤病毒和p16蛋白的检测

目的 探讨人类乳头状瘤病毒 (humanpapillomavirus ,HPV)感染和抑癌基因p16的失活与喉癌和喉乳头状瘤 (laryngealpapilloma ,LP)发生的相关性 ,以进一步阐明喉癌和LP的病因和发病机理。方法 收集LP 46例 ,其中成人型喉乳头状瘤 (adult onsetLP ,ALP) 2 1例 ,青少年型喉乳头状瘤(juvenile onsetLP ,JLP) 2 5例、喉癌 2 6例、癌旁正常组织 6例、声带小结 15例 ,用标记的HPV1,6,8,11,13 ,16,18,30 ,31,32 ,33 ,4 5,51通用引物直接法原位聚合酶链反应 (polymerasechainreaction ,PCR)方法和免疫组化 (SP法 )方法分别检测HPV DNA和p16蛋白。结果 ①HPV阳性率JLP组 (84% ,2 1/2 5 )显著高于ALP组 (38.1% ,8/2 1)、喉癌组 (19.2 % ,5 /2 6 )、声带小结组 (0 /15 )和癌旁组织组 (0 /6 ) (χ2 检验 ,P <0 .0 5 ) ;而ALP组、喉癌组、声带小结组和癌旁组织组之间HPV阳性率差异无显著性 (χ2 检验或Fisher精确概率法 ,P >0 .0 5 ) ;②p16蛋白的阳性率ALP组 (5 7.1% ,12 /2 1)和喉癌组 (38.5 % ,10 /2 6 )均显著低于JLP组 (88% ,2 2 /2 5 )、癌旁组织组 (10 0 % ,6 /6 )和声带小结组 (93.3 % ,14/15 ) (χ2 检验 ,P <0 .0 5 ) ;ALP组和喉癌组之间及JLP组和声带小结组之间p16蛋白阳性率无显著差别 (χ2 检验 ,P >

p53蛋白、雌激素受体、孕激素受体在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的 检测非小细胞肺癌 (NSCLC)中p5 3蛋白、雌激素受体 (ER)和孕激素受体 (PR)表达与临床病理和预后的相关性。方法 应用免疫组织化学SP法检测 14 7例NSCLC癌组织标本中p5 3、ER、PR的表达。结果 p5 3蛋白总阳性率为 61.2 % ( 90 / 14 7) ,鳞癌、腺癌、鳞腺癌、大细胞癌阳性率分别为63 .5 % ( 4 0 / 63 )、5 7.6% ( 3 3 / 66)、66.7% ( 10 / 14 )、5 0 % ( 2 / 4)。腺癌p5 3蛋白阳性表达与其预后有密切关系 ,生存期低于 3年组和高于 3年组的p5 3蛋白阳性率分别为 75 % ( 2 1/ 2 8)和 44.7% ( 17/ 3 8) ,差异有显著性 (P <0 .0 2 5 )。ER和PR总阳性率分别为 49.7% ( 73 / 14 7)和 76.9% ( 113 / 14 7) ,鳞癌与腺癌的ER阳性率分别为 3 8.1% ( 2 4/ 63 )和 66.7% ( 4 4/ 66) ,PR阳性率分别为 66.7% ( 4 2 / 63 )和 90 .9% ( 60 / 66)。ER和PR的阳性表达与肺癌组织分型相关 ,腺癌的阳性率明显高于鳞癌 (P <0 .0 0 5 ) ;ER和PR表达的部位在鳞癌和腺癌中亦有不同 ,鳞癌以核阳性居多 ,腺癌则以浆阳性为多。在PR阳性组中 ,细胞核阳性者的 3年生存率低 ,而细胞浆阳性者生存率高 ,差异有显著性 (P <0 .0 2 5 )。结论 检测肺腺癌p5 3蛋白表达可作为判断其预后的指标 ;检测ER和PR表达在鉴别肺鳞癌和肺腺癌中具?

低剂量电离辐射对小鼠睾丸生精细胞P53和Bcl-2蛋白表达的影响

目的 :研究低剂量 X射线对小鼠睾丸生精细胞 P5 3和 Bcl- 2蛋白表达的影响。方法 :采用免疫组织化学方法 (SABC法 )观察不同低剂量 X射线照射后各类生精细胞 P5 3和 Bcl- 2蛋白表达的剂量及时程效应关系。结果 :低剂量照射后各类生精细胞不同程度表达 P5 3和 Bcl- 2。 P5 3蛋白表达主要见于精原细胞和精母细胞 ,前者阳性率高于后者 ,并且随照射剂量增加而逐渐升高 ,而精子细胞和精子阳性率较低 ;Bcl- 2蛋白主要表达于精子细胞和精子 ,并且随照射剂量增加而逐渐降低 ,而精原细胞和精母细胞 Bcl- 2蛋白表达阳性率较低。结论 :低剂量电离辐射诱导小鼠睾丸各类生精细胞 p5 3和 Bcl- 2蛋白表达具有一定规律性 。

Cyclin D1和P16蛋白在胃癌中的表达及其临床意义

1 材料和方法 1.1 材料 为本院1994/1997手术切除,病理确诊为胃癌72例,其中早期癌17例,中、晚期癌55例,72例痛旁组织中,包括肠上皮化生36例,不典型增生15例,正常上皮21例。鼠抗人Cyclin D1单克隆抗体,兔抗人P16多克隆抗体,相应的生物素化二抗均购于北京中山公司,为美国Zymed公司产品。 1.2 方法 采用免疫组化链霉素亲生物素-辣根过氧化物酶法(SP法)。步骤如下:组织块按常规100mL/L中性福尔马林固定,石蜡包埋,制成厚4μm切片,常规二甲苯脱蜡,梯度酒精水化,PBS洗5min,微波抗原修复,PBS清洗,一抗(工作浓度Cyclin D1为1:20,P16为1:40)室温过夜,PBS洗5min,生物素标记二抗(1:150)15min,PBS洗5min;SP(1:150)15min,PBS洗5min;DAB显色5min～10min,自来水充分冲洗,苏木精复染、脱水、透明、封固,每批实验用已知阳性切片做阳性对照。

p14^(ARF)、p53蛋白表达与H101治疗鼻咽癌疗效的关系

目的:观察肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达状态与E1B缺陷型腺病毒治疗鼻咽癌疗效的关系,探讨E1B缺陷型腺病毒(简称H101)基因治疗的作用机制。方法:应用免疫组织化学方法对36例H101治疗的晚期鼻咽鳞癌病例进行肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白检测,分析肿瘤组织p14ARF、突变型p53蛋白表达与H101临床疗效的关系;结果:突变型p53和p14ARF蛋白在36例晚期鼻咽鳞癌中总阳性表达率分别为55.6%和44.4%;突变型p53+p14ARF+(即p14ARF蛋白无缺失)患者均无治疗有效病例;突变型p53+p14ARF-(即p14ARF蛋白有缺失)患者中有4例有效;结论:对于p53基因无突变的恶性肿瘤,p14ARF基因缺失可能是H101能在肿瘤细胞内有效复制并杀死肿瘤细胞的一个重要影响因素。

Bcl-2蛋白家族和p53基因在细胞凋亡中的调控效应

目的:细胞凋亡是个体发育过程中由一系列基因控制的细胞主动死亡过程。在多数细胞类型中,原癌基因Bcl-2蛋白家族与p53是重要的细胞凋亡调节因子,在细胞凋亡中相互联系,相互作用,从而调控细胞凋亡。文章探讨Bcl-2蛋白家族和p53基因对细胞凋亡的调控机制。资料来源:引用计算机检索1995/2006PubMed、Springer link的相关文章,检索词“apoptosis,Bcl-2protein family,p53”,并限定文章语言种类为English。同时计算机检索1995/2006中国期刊全文数据库或万方数据库的相关文章,检索词为“凋亡,Bcl-2,Bax”,限定文章语言种类为中文。并手工检索《细胞凋亡基础与临床》。资料选择:对资料进行初审,被选文献符合以下标准:①Bcl-2蛋白家族与凋亡的关系。②p53基因与凋亡的关系。③细胞凋亡基因调控的研究。④Bcl-2蛋白家族、p53基因调节细胞凋亡的机制研究。排除重复研究。资料提炼:共收集到70篇相关文献,中文文献均为全文,大部分外文文献为全文,其他为摘要。入选关于Bcl-2蛋白家族、p53基因与凋亡的关系及机制,细胞凋亡基因调控的相关文献32篇。资料综合:①Bcl-2蛋白家族是细胞凋亡相关基因研究得最多的一类蛋白质。包含抑制和促进细胞凋亡两类功能相反的蛋白质。Bcl-2蛋白家族及其家族成员共同构成一个异常复杂的相互作用网络,调控细胞凋亡。其调节细胞凋亡的机制可能于Bcl-2蛋白家族与线粒体、Bcl-2蛋白的相互作用、细胞内Ca2+;及氧自由基有关。②p53基因对防止细胞增生和保持DNA受损基因组的完整性有重要作用。p53调控细胞凋亡包括对外源性凋亡途径的调节和内源性凋亡途径的调控,p53基因究竟通过什么样的途径调控细胞凋亡?不同的实验因为不同的遗传学背景和微环境而不同。③目前主要有3种实验方法来研究p53基因对细胞凋亡的调控作用:第1种方法是通过识别p53激活的基因组的DNA断片,或者是启动所包含的依赖p53激活的因子。第2种方法是系统地识别受p53基因分别调控的基因组(或DNA组)。第3种方法是识别受p53调控的基本凋亡因子。结论:大量的凋亡因子是依赖p53激活调节细胞凋亡的,细胞凋亡中Bcl-2蛋白家族、p53基因的调控机制的分析,充分发挥细胞凋亡对机体有利的方面,对治疗各种癌症和心血管疾病具有广阔的应用前景。