基于P-糖蛋白信号通路研究龙血竭对大鼠失重空肠屏障损伤的保护机制

传统中药龙血竭在航天肠道损伤的防护中发挥重要作用,但其保护失重屏障损伤的作用机制尚不清楚.P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)是肠上皮细胞膜上的外排转运体,能够将毒素、有害菌等外排以维持肠屏障完整性.文中采用大鼠尾吊模型模拟微重力效应,灌胃给药龙血竭(Dragon’s Blood,DB)21d后,观察大鼠空肠组织形态、测定肠屏障通透性标志物质量浓度、检测P-gp与Wnt/β-Catenin信号通路相关蛋白的表达.结果表明,龙血竭可通过激活Wnt/β-Catenin信号通路促进空肠中P-gp基因及蛋白的表达,能够缓解模拟微重力效应下的大鼠空肠屏障损伤.研究结果或可为航天员在轨肠道损伤防护提供基础研究数据.

中药附子对P-糖蛋白活性和紧密连接蛋白的影响及与地高辛的相互作用

目的:探讨中药附子对Caco-2细胞中P-糖蛋白(P-gp)外排活性和紧密连接蛋白的影响,研究附子合并用药对地高辛的影响和作用机制。方法:通过测定附子对罗丹明123(Rh123)的外排、摄取及Caco-2细胞内ATP水平的影响,研究附子对P-gp外排活性和功能的影响;通过细胞免疫荧光实验,考察附子对紧密连接蛋白表达的影响;通过Caco-2细胞模型吸收转运实验及分子对接,阐明附子合并用药对地高辛在细胞内转运的影响和作用机制。结果:附子对P-gp的作用具有双向调节作用,并可能与作用时间有关;附子可通过调节ATP水平从而影响P-gp的外排功能。附子长时间作用(72 h)可能会促进地高辛的外排。附子可以提高Caco-2细胞紧密连接蛋白ZO-1与Occludin蛋白的表达量,可能通过抑制细胞旁路途径减弱地高辛的吸收。结论:附子与地高辛合并用药时,可能通过减少吸收及促进外排来影响地高辛的血药浓度。

多西他赛治疗老年前列腺癌患者的疗效及其对患者P-糖蛋白表达的影响分析

目的 探讨老年前列腺癌患者治疗中多西他赛的应用效果及其对P-糖蛋白表达的影响。方法 73例老年前列腺癌患者,经随机数字表法分为对照组(36例)与研究组(37例)。对照组采用比卡鲁胺治疗,研究组采用比卡鲁胺联合多西他赛治疗。对比两组P-糖蛋白表达、临床疗效及治疗前后生活质量。结果 治疗后,研究组治疗总有效率81.08%高于对照组的55.56%,差异有统计学意义(P<0.05);研究组P-糖蛋白阳性表达率18.92%低于对照组的58.33%,差异有统计学意义(P<0.05);治疗后,两组物质生活、躯体功能、社会功能及心理功能评分均明显高于本组治疗前,研究组物质生活评分(74.26±3.46)分、躯体功能评分(86.14±5.31)分、社会功能评分(81.36±3.61)分、心理功能评分(79.84±4.51)分均明显高于对照组的(62.14±3.47)、(76.58±5.28)、(72.64±3.56)、(71.16±4.48)分,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 老年前列腺癌患者治疗中应用多西他赛,可有效降低P-糖蛋白阳性表达率,有效提高治疗效果,生活质量明显改善,具有推广价值。

天然植物活性成分通过下调P-糖蛋白逆转肿瘤多药耐药的研究进展

多药耐药(multidrug resistance, MDR)是临床上肿瘤患者复发及化疗失败的主要因素,其发生机制较为复杂,目前研究最为深入的机制之一为肿瘤细胞膜上P-糖蛋白(P-glycoprotein, P-gp)过表达所致。大多数化疗药物为P-gp的底物,肿瘤细胞会通过P-gp介导的主动转运将化疗药物转运到胞外,使细胞内有效药物浓度降低,从而产生耐药性,导致临床疗效下降。P-gp的逆转剂可通过下调P-gp表达和转运活性,减少化疗药物从胞内泵出,增强肿瘤细胞对化疗药物的敏感性,从而提高治疗效果。本文将对可逆转P-gp介导的MDR的天然植物活性成分及其调控机制进行总结,为临床及相关研究提供参考。

中枢神经系统药物转运体P-糖蛋白的表达水平变化对儿童药物代谢的影响

药物转运体P-糖蛋白属于结合盒式蛋白转运体蛋白家族,其可将小分子物质等排出大脑,有效地减少或阻止药物进入脑组织,从而发挥中枢神经系统保护作用。但对脑组织的药物转运体P-糖蛋白在新生儿出生后表达水平变化的研究较少。本文综述了药物转运体P-糖蛋白在中枢神经系统的外排转运功能、儿童中枢神经系统表达量变化、中枢神经系统发育早期阶段P-糖蛋白表达量对脑组织药物浓度的影响、动物外推至人类药代动力学模型以及内含P-糖蛋白的中枢神经系统生理药代动力学模型研究,为药物转运体P-糖蛋白底物在儿童生理药代动力学研究提供参考。

P-糖蛋白在肿瘤中的研究新进展

P-糖蛋白是一种位于细胞膜上,对疏水性及两性化合物具有特异性的一类转运蛋白。在生理条件下,P-糖蛋白分布在机体内多种组织、器官中,在药物的吸收、分布、代谢及排泄过程中都发挥着重要的作用。P-糖蛋白广泛存在于各种肿瘤细胞,与其发展密切相关。P-糖蛋白可加速机体抗癌药物产生耐药,调控P-糖蛋白水平可以调控肿瘤的发展和减少肿瘤药物耐药性。

P-糖蛋白的核酸适配体筛选及应用研究

基于SELEX技术筛选P-糖蛋白(permeability glycoprotein,P-gp)的特异性核酸适配体(aptamer,Apt),并用酶联免疫吸附测定(ELISA)法、表面等离子体共振(SPR)法表征了Apt与P-gp的结合能力,采用与P-gp结合能力最强的Apt5在人结直肠腺癌细胞(Caco-2)、人脑微管内皮细胞(hCMEC/D3)两种细胞系上考察了对P-gp外排功能的抑制效果.筛选得到10条长度为81 bp的P-gp核酸适配体,结合能力大小顺序为:Apt5>Apt8>Apt1>Apt4>Apt6>Apt10>Apt7>Apt2>Apt9>Apt3.Apt5使hCMEC/D3及Caco-2细胞内罗丹明123的蓄积量分别增加了40.77%(P<0.01),32.39%(P<0.05),能潜在抑制P-gp的外排功能.本研究首次报道了P-gp的多条核酸适配体,与P-gp有较强的结合能力,并能抑制P-gp的外排功能,有望成为P-gp的潜在新型抑制剂.

P-糖蛋白抑制药逆转肿瘤多药耐药的研究进展

P-糖蛋白(permeabilityglycoprotein,P-gp)过度表达是多药耐药(multidrugresistance,MDR)产生的主要原因,P-糖蛋白抑制药可以抑制P-糖蛋白对肿瘤药物的外排作用,使肿瘤细胞内的药物浓度提高,从而逆转肿瘤MDR,第3代P-糖蛋白抑制药具有高效、低毒、选择性高等特点,中药可以通过多种途径抑制P-糖蛋白的表达和功能,从而逆转MDR。

药物制剂技术在抑制P-糖蛋白外排作用中的应用研究近况

P-糖蛋白(P-gp)是一个ATP依赖性药物外排泵,可影响药物代谢动力学,是导致药物吸收差以及肿瘤多药耐药性产生的重要因素。综述P-gp抑制剂的作用机制和具有P-gp抑制作用的药用辅料的实验研究,探讨利用药物制剂技术抑制P-gp对药物的外排作用,促进药物体内吸收,逆转肿瘤多药耐药性。

P-糖蛋白的融合表达研究

目的 对P 糖蛋白胞外段基因进行表达研究。方法 根据P 糖蛋白抗原性分布曲线及mdr1基因结构 ,设计了一对引物 ,PCR扩增产物插入到pGEM T中 ,经测序正确后 ,再克隆入表达载体pGEX 2T ,构建高效表达载体pGEX Pgp ,转化大肠杆菌DH5α ,进行表达、鉴定及纯化。结果 经IPTG诱导 4h ,蛋白表达即达高峰 ,SDS PAGE分析 ,表达出约 3 0kD大小的蛋白。结论 该基因片段的高效表达为进一步制备其抗体或筛选其特异性结合肽 ,进行靶向治疗等工作奠定了基础。

血脑屏障上P-糖蛋白与耐药性癫痫关系的研究进展

耐药性癫痫是癫痫治疗的瓶颈。P-糖蛋白通过跨膜外排泵作用阻止抗癫痫药物由血脑屏障入脑发挥期望效应是耐药性癫痫产生的重要原因。本文介绍了耐药性癫痫与血脑屏障上P-糖蛋白的相互关系,对目前提出的调节P-糖蛋白功能,改善耐药性癫痫预后应注意的问题进行说明。安全地调节P-糖蛋白功能到适度可能为耐药性癫痫的治疗带来希望。

化疗后残存乳腺癌组织中乳腺癌耐药蛋白、P-糖蛋白的表达及其与癌干细胞的相关性

目的通过对比化疗前乳腺癌组织和化疗后残存乳腺癌组织中乳腺癌耐药蛋白(ABCG2)、P-糖蛋白(P-gp)表达差异,探讨其与乳腺癌干细胞(BCSCs)的相关性。方法免疫组织化学检测化疗前乳腺癌组织和化疗后残存乳腺癌组织ABCG2、P-gp及BCSCs标志物CD44及CD24蛋白的表达;免疫荧光检测"BCSCs微球体"细胞中CD44及CD24蛋白表达;有限稀释法检测"BCSCs微球体"细胞单克隆形成能力;Western blot检测"BCSCs微球体"细胞ABCG2、P-gp、CD44及CD24蛋白的表达。结果与化疗前乳腺癌组织相比,化疗后残存乳腺癌组织ABCG2、P-gp表达与CD44蛋白表达呈正相关(χ2=41.34,r=0.83;χ2=22.81,r=0.61);而其与CD24蛋白表达呈负相关(χ2=-21.25,r=0.72;χ2=-17.26,r=0.65);差异均有统计学意义(P<0.05)。化疗后残存乳腺癌组织中"BCSCs微球体"直径明显增加,且化疗后BCSCs含量是化疗前BCSCs含量的2.5倍;Western blot显示化疗后残存乳腺癌组织"BCSCs微球体"细胞ABCG2、P-gp及CD44蛋白表达明显升高(P<0.05),而CD24蛋白表达明显降低(P<0.05)。结论化疗赋予残存乳腺癌组织"癌干细胞样"特征,导致乳腺癌多药耐药产生。

甘草与芫花对P-糖蛋白底物罗丹明123经空肠黏膜透过性的影响

目的:观察甘草与芫花合用前后对P-糖蛋白(P-gp)的调控作用,探讨甘草、芫花及其合用影响药物经胃肠道渗透的可能作用机制。方法:将25只Wistar大鼠分为5组,分别给大鼠口服甘草液、芫花液、甘草芫花合煎液、合并液以及生理盐水,1周后用体外扩散池法(ussing chamber)评价各种药液对罗丹明123(R123)和荧光素钠(CF)经空肠黏膜透过性的影响,用荧光分光光度法测定R123和CF的浓度,并分析各组表观渗透系数(Papp)差异。结果:4种药液均具有增加R123经吸收方向的透过性,与生理盐水组比较,P<0.05,且芫花液、合煎液以及合并液还可减少分泌方向的透过(P<0.05,与生理盐水组比较),甘草对分泌方向透过影响无统计学意义。甘草对CF透过无影响,而其他3组药液则可减少CF吸收和分泌方向的透过性。结论:甘草和芫花对P-gp均有抑制作用,但后者作用较强。芫花某些化学成分抑制P-gp,而另一些成分可能使细胞之间紧密连接加强,引起旁细胞途径药物CF渗透的降低。甘草与芫花合用后对P-gp抑制作用增强,可能是甘草对芫花有协同作用,使一些毒性成分吸收增加,这可能是两者配伍产生毒性的机制之一。

P-糖蛋白抑制剂的研究进展

肿瘤细胞对化疗药物产生多药耐药（MDR，即肿瘤细胞对某种化疗药物产生耐药，同时对其他化学结构，机理不同的化疗药物亦产生交叉耐药）是肿瘤患者化疗的主要原因，许多因素参与MDR的发生过程，而MDR基因编码的P-糖蛋白（P—gp）过度表达是主要因素，因此通过抑制其过度表达，从而使肿瘤细胞的MDR产生逆转，对于提高疗效、降低毒副反应具有重要意义。近几年来P—gp抑制剂的研发较快，已发展至第3代。随着研究的不断深入，将有更多疗效突出、副作用小的P—gp抑制剂问世。

安息香醛、香草醛和β-细辛醚对P-糖蛋白功能的影响

目的研究芳香开窍药物苏合香、安息香和石菖蒲主要成分安息香醛、香草醛和β-细辛醚对P-糖蛋白(P-gp)功能的影响。方法培养Caco-2细胞,加入β-细辛醚、香草醛和安息香醛作用2.0 h后,加入Rho-123,继续培养0.5 h和1.0 h,HPLC测定细胞培养液中Rho-123的含有量。结果 Rho-123低、中、高3个质量浓度的回收率为(69.37±3.82)%、(72.33±6.75)%和(70.73±5.94)%,精密度和稳定性RSD均小于7.0%;与对照孔比较,安息香醛、香草醛和β-细辛醚孔细胞培养液中Rho-123的质量浓度明显降低。结论安息香醛、香草醛和β-细辛醚可明显促进Caco-2细胞对Rho-123的摄取,对P-gp外排功能有明显抑制作用。

川芎嗪和人参皂苷Rgl对Caco-2细胞P-糖蛋白功能和表达的影响

目的研究川芎嗪和人参皂苷Rgl对Caco-2细胞上P-糖蛋白(P-gp)功能和表达的影响。方法利用高效液相色谱检测P-gp底物罗丹明-123的浓度,用流式细胞仪测定Caco-2细胞膜上P-gp的表达量。结果中、高浓度(120,240 mg·L^(-1))的川芎嗪能够使Caco-2细胞内Rh-123的浓度分别增加了1.7和8.2倍,与细胞孵育72 h后能够使Caco-2细胞表面P-gp的表达水平下调46.4%和61.2%,在1.5 h使罗丹明-123在Transwell的BL侧的累积排放量增加了1.3和1.8倍。中浓度(10 mg·L^(-1))的人参皂苷Rgl对罗丹明-123的外排和转运无显著影响。高浓度(20 mg·L^(-1))的人参皂苷Rgl使细胞内Rh-123的浓度增加了3.5倍,使1.5 h后在BL侧累积转运量增加1.3倍。中、高浓度(10,20 mg·L^(-1))的人参皂苷Rgl与细胞孵育72 h对P-gp的表达影响不大。中浓度(120 mg·L^(-1))的川芎嗪和人参皂苷Rgl(10 mg·L^(-1))合用时,细胞内Rh-123的浓度增加6.4倍,使罗丹明-123的累积转运量增加1.6倍,使P-gp的表达下调了38.2%。结论川芎嗪减少P-gp对细胞内罗丹明-123的外排,增强罗丹明-123跨小肠上皮细胞的转运;同时川芎嗪直接抑制P-gp的活性而影响P- gp功能,长期应用川芎嗪可下调P-gp的表达水平影响降低肠道P-gp的活性。高浓度的人参皂苷Rgl通过直接抑制P-gp的外排转运功能而影响肠道P-gp的功能,长期应用不影响P-gp的表达水平。当川芎嗪和人参皂苷Rgl合用时,对肠道P-gp功能具有协同抑制作用,但是对P-gp的表达无协同作用。

血脑屏障中P-糖蛋白的调节机制

P-糖蛋白属于ABC转运蛋白超家族。它在脑微血管中大量表达,限制毒性物质和大量治疗中枢神经系统的药物进入脑内,因此弄清P-糖蛋白在血脑屏障中的调节机制对疾病的治疗尤为重要。该文总结了P-糖蛋白基本结构、分布、功能,并讨论了P-糖蛋白在血脑屏障中调节机制的研究进展。

黄连素对P-糖蛋白底物在Caco-2和L-MDR1细胞跨膜转运的影响

目的研究黄连素(berberine,Ber)对P-糖蛋白底物环孢素(cyclosporine A,CsA)和地高辛在Caco-2和L-MDR1细胞跨膜转运的影响。方法以Caco-2、L-MDR1细胞为模型,在50μmol·L-1～5mmol·L-1Ber作用后,测定地高辛和CsA跨膜转运的转运率和表观渗透系数。结果Ber在50μmol·L-1～5mmol·L-1范围内可剂量依赖性地降低地高辛在Caco-2和L-MDR1细胞单层底端(B侧)至顶端(A侧)的转运。对于CsA在Caco-2细胞的转运,50μmol·L-1～5mmol·L-1的Ber不但剂量依赖性地降低CsA从B→A方向的转运,而且也明显增加其在A→B方向的转运。在Caco-2和L-MDR1细胞,Ber抑制地高辛B→A方向转运的IC50值分别为1.44mmol·L-1和1.24mmol·L-1。Ber抑制CsA在Caco-2细胞转运的IC50值为607μmol·L-1。结论Ber和CsA相互作用的机制可能涉及P-gp功能的抑制和饱和。

回、汉族癫痫患者血清、脑脊液中P-糖蛋白表达与癫痫耐药的相关性研究

目的研究回、汉族癫痫患者血清、脑脊液中P-糖蛋白(P-gp)表达与癫痫耐药之间的关系。方法选取187例符合标准的癫痫患者,其中回族敏感患者28例、回族耐药患者31例;汉族敏感患者59例、汉族耐药患者69例。采用ELISA法测定癫痫患者血清和脑脊液中P-gp浓度。结果敏感组癫痫患者脑脊液、血清中P-gp浓度,以及二者的比值均低于耐药组,差异存在统计学意义(P<0.05)。回族和汉族癫痫患者脑脊液中P-gp浓度、以及脑脊液与血清中P-gp浓度比值比较,差异无统计学意义(P>0.05),但是二者血清中P-gp浓度比较,具有统计学差异(P<0.05)。结论癫痫患者血清和脑脊液中P-gp过表达与癫痫耐药密切相关。

几种肿瘤多药抗药性逆转剂对耐药细胞膜脂流动性及P-糖蛋白表达的影响

目的：探讨几种有效的抗肿瘤药多药抗药性（ＭＤＲ）逆转剂对ＭＤＲ细胞膜脂流动性及Ｐ糖蛋白（Ｐｇｐ）表达的影响，以阐明其逆转ＭＤＲ机理。方法：细胞株为抗阿霉素人乳腺癌细胞ＭＣＦ７／ＡＤＲ及其相应的敏感株ＭＣＦ７。Ｐｇｐ表达测定采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ法，膜脂流动性的测定采用ＤＰＨ标记的荧光分光光度计法。结果：在无逆转剂存在时，ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞的荧光偏振度显著低于ＭＣＦ７细胞，吲哚衍生物２苯３（３’，５’双吗啉甲基４’羟基）苯甲酰吲哚（ＨＷＬ１２）及吗丙嗪（Ｐｒｏ）显著增加ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞的荧光偏振度，即降低膜脂流动性。苄普地尔（Ｂｅｐ）及维拉帕米（Ｖｅｒ）对ＭＣＦ７／ＡＤＲ细胞的荧光偏振度无影响，即不能改变膜脂流动性。Ｖｅｒ、Ｂｅｐ、ＨＷＬ１２能显著地降低Ｐｇｐ表达，而Ｐｒｏ无此作用。结论：ｐｒｏ逆转ＭＤＲ的作用可能与降低ＭＤＲ细胞膜脂流动性有关；Ｂｅｐ及Ｖｅｒ可能与降低Ｐｇｐ表达有关；ＨＷＬ１２可能既与降低ＭＤＲ细胞的膜脂流动性有关，也与降低Ｐｇｐ表达有关。