用低G/C%含量引物通过PCR扩增家蝇细胞色素P-450 cDNA

根据昆虫细胞色素Ｐ－４５０基因的多型性和遗传多态性，以苯巴比妥钠诱导、室内饲养的杀虫剂敏感种群雌性家蝇ＭｕｓｃａｄｏｍｅｓｔｉｃａｖｉｃｉｎａＭａｃｑｕａｒｔ为材料，提取总ＲＮＡ，以Ｏｌｉｇｏ（ｄＴ）－纤维素亲和层析分离出总ｍＲＮＡ；以此为模板反转录合成总ｃＤＮＡ。再以总ｃＤＮＡ为模板，以Ｐ－４５０ＣＹＰ６Ａ１ｃＤＮＡ序列为参考设计一对低Ｇ／Ｃ％含量引物，进行ＰＣＲ扩增，获得１．５ｋｂ左右的预期目的片段。

杯[6]芳烃-双金属卟啉仿P-450酶模型的研究 Ⅳ.对异丙苯氧化的催化行为

研究了杯[6]芳烃-双金属卟啉在氧化异丙苯中的催化行为,结果表明杯[6]芳烃-双金属卟啉比之相应的金属卟啉具有更高的催化活性,并表现同样的选择性,生成苯乙酮和醇组份.此一结果同通常酞菁或其它如西弗碱大分子金属络合物催化下生成丙酮和酚不同.还考察了温度、轴向配体、催化剂用量及金属离子种类等对反应的影响,仔细地通过测定反应速度比较了反应的活性.

棉酚和烟碱对棉铃虫的生长和细胞色素P-450单加氧酶活性的影响

以人工饲料添加法测定了 0 5%的棉酚和烟碱对棉铃虫的生长和细胞色素P 4 50单加氧酶 (简称P 4 50酶系 )活性的影响。研究结果显示 ,在测定浓度下 ,高龄棉铃虫短期取食含棉酚和烟碱的人工饲料后 ,对幼虫的生长没有显著影响 ,由此表明 ,棉铃虫对其主要寄主植物中的次生物质棉酚和烟碱具有很好的适应能力。与此同时 ,棉铃虫中肠微粒体P 4 50酶系的蛋白组成和酶活性发生了不同的变化 ,有升有降 ,有的没有变化。棉铃虫可能通过调整P 4 50酶系的各种蛋白含量和酶的活力水平 ,来适应对植物次生物质的代谢解毒的需要。另外 ,棉铃虫取食棉酚和烟碱后 ,细胞色素B5含量均显著提高 ,而细胞色素P 4 50含量均显著降低 。

细胞色素芳香化酶P-450在正常、子宫内膜异位症子宫内膜的表达及意义

目的 :探讨细胞色素芳香化酶P - 45 0在子宫内膜异位症 (内异症 )发病中的作用 ,检测子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达用于诊断内异症的可行性。方法 :应用免疫组化方法检测正常子宫内膜和内异症的在位及异位内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达。结果 :细胞色素芳香化酶P - 45 0在正常子宫内膜无表达 ,在内异症的在位和异位内膜均有强表达 ,增殖期与分泌期无差别。检测子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达 ,用于诊断内异症的敏感度为 91 5 % ,特异度为 10 0 % ,阳性预测值为 10 0 %。内异症子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0的表达与AFS分期无相关性。结论 :子宫内膜细胞色素芳香化酶P - 45 0分泌增加促进内异症的发生 ;内异症子宫内膜细胞色素芳香化酶P -45

[TPPFe(Ⅲ)]_2O的合成及其对细胞色素P-450的模拟

TPPFe（Ⅲ）Cl通过中性Al2O3色谱柱得到一个新化合物,它在HPLC中的保留时间比TPPFe（Ⅲ）Cl大得多,IR、UV-Vis和元素分析表明,这个新化合物是[TPPFe（Ⅲ）]2O.同TPPFe（Ⅲ）Cl一样,它具有在常温常压下催化碳氢化合物单充氧化的性质。[TPPFe（Ⅲ）]2O倦化下PhIO氧化环己烷的反应,在CH2Cl2和环己烷介质中,氧化产率分别为14.97和62.6％,高于TPPFe（Ⅲ）Cl作催化剂时的产率。在环己烷溶剂中,反应产率与反应时间呈线性关系,且反应有大约3小时诱导期。但在GH2Cl2溶剂中不存在反应产物与时间的线性关系,也不存在诱导期。与TPPFe（Ⅲ）Cl比较,[TPPFe（Ⅲ）]2O对氧化剂更稳定。上述事实表明,[TPPFe（Ⅲ）]2O能够作为细胞色素P-450的模型化合物。

中草药对细胞色素P-450酶调控研究进展

对近 5年国内外关于中草药对细胞色素P 4 5 0酶调控的文献进行检索、整理分析和归纳总结 ,综述了有关中草药及其单体化合物对细胞色素P 4 5 0酶调控方面的研究进展并评述了对P 4 5 0酶调控的研究策略。提出加强中草药对P 4 5 0酶作用的研究有重要意义 ,有助于指导中药的安全合理应用和发现新药。

黄鳝P-450芳香化酶基因的克隆及序列分析

P-450芳香化酶(P450arom)是催化雄激素生物合成雌激素的关键酶。本文采用RT-PCR和RACE(Rapid amplifi- cation of cDNA ends)法,首次分离和克隆了雌雄同体鱼黄鳝卵巢中P450 arom基因。该基因cDNA全长1802bp(不包 括poly(A)),5'端非翻译区有49bp,3'端202bp(不包含poly(A)),阅读框(Open reading frame,ORF)1551bp,翻译成517 个氨基酸,计算的蛋白质分子量58．2kDa。同源性分析显示,黄鳝卵巢P450arom的氨基酸序列与其他鱼卵巢 P450arom具有63％-80％同源性,与其他鱼脑P450arom为58％-60％同源,与人胚盘和鸡卵巢P450arom则为 50％-52％同源;但在芳香化酶高保守区(包括1-螺旋区,芳香化酶特异保守区和血红素结合区)的同源性高达 76％-92％。系统发育分析表明芳香化酶基因是单起源,黄鳝卵巢芳香化酶基因与鳉鱼卵巢的关系最近,与鱼类卵 巢P450arom属于同一分支的,与鱼类脑及鸡和人的属于不同分支。

对模拟细胞色素P-450的卟啉类化合物的研究

本文评述和总结了细胞色素P-450模型体系研究现状。

以杯芳烃为基体的仿细胞色素P-450单加氧酶模型的合成

用对叔丁基杯［４］芳烃与卟啉羧酸的酰氯化物反应，并引入金属，合成了杯芳烃－金属卟啉仿细胞色素Ｐ－４５０单加氧酶模型Ａ，Ａ及前体化合物６的结构经ＩＲ，＾１ＨＮＭＲ，ＭＳ和元素分析确定，并确证Ａ中杯环呈“锥体”构象。

担载金属卟啉模拟细胞色素P-450的催化丙烯环氧化

制备了SiO2化学键合金属卟啉Mn（TPP）Cl，Mn（TDCPP）Cl的担载配合物催化剂，并与单氧给体次氯酸钠（NaClO）构造了细胞色素P－450单加氧酶模拟体系，并考察了该体系的反应性能及其影响因素．金属卟啉经化学修饰的SiO2担载之后，由于表面官能团与金属中心的轴向配位及刚性载体SiO2对金属卟啉在载体表面很好的位置分离作用，使得金属卟啉的抗氧化性及稳定性显著增加，表现出优良的催化丙烯环氧化反应性能．

罗格列酮对大鼠肝细胞色素P-4502E1活性的影响

目的 :探讨罗格列酮对细胞色素P 4 5 02E1活性的影响。方法 :在正常大鼠肝细胞微粒体中加入浓度为 0 ,0 .10 ,0 .2 5 ,0 .5 0 ,1.0 0mmol·L- 1罗格列酮 ,以N 二甲基亚硝胺为底物 ,测定细胞色素P 4 5 0 2E1活性。另外用 0 ,0 .2 ,2 ,2 0mg·kg- 1剂量的罗格列酮分别对用乙醇诱导和未用乙醇诱导的大鼠灌胃 ,然后取大鼠肝细胞微粒体 ,以N 二甲基亚硝胺为底物 ,测定细胞色素P 4 5 0 2E1活性。结果 :在体外试验中 ,加入不同浓度罗格列酮的大鼠肝微粒体中细胞色素P 4 5 0 2E1活性差异无显著意义。在体内试验中 ,给予不同剂量罗格列酮的大鼠的肝细胞色素P 4 5 0 2E1活性差异也无显著意义 ;结论 :罗格列酮对大鼠的肝细胞色素P 4 5 0

细胞色素P-450酶系的研究进展

细胞色素P-450酶系(简称P-450)因其在内源性和外源性的化学物质尤其对各种杀虫剂和环境有害化学物质的氧化代谢方面起着重要的作用,而受到广泛的重视。该酶系还在昆虫对杀虫剂的抗性机制以及选择毒性中,昆虫对寄主植物的适应性等方面都起着重要作用。

地塞米松对大鼠肝脏微粒体细胞色素P-450的诱导效应

目的:观察地塞米松(dexamethasone,DEX)对细胞色素P-450(cytochrome P450,CYP450)的诱导效应,并探讨其诱导机制。方法:雄性Wistar大鼠分别以DEX 0,25,50和100mg·kg^(-1)·d^(-1)诱导处理(ip)4d后,测定大鼠肝脏总CYP450含量,CYP3A1,CYP3A2和CYP2B1/2的mRNA及蛋白的表达水平,肝脏ERD(CYP3A活性),PROD(CYP2B活性)和BROD(总CYP450活性)。结果:CYP450含量、ERD、PROD和BROD活性在DEX多次诱导后都有升高。CYP3A1 mRNA表达水平、蛋白含量和酶活性有明显的升高,剂量效应关系明显;CYP3A2蛋白明显升高,但mRNA表达水平却无明显变化。PROD和CYP2B1/2的mRNA表达水平以及总CYP450含量均在50mg·kg^(-1)·d^(-1)剂量组达到最高值。结论:DEX对雄性大鼠主要诱导CYP3A1和CYP3A2两个CYP450成员表达上调,对CYP2B1/2也有一定的诱导作用,其诱导作用主要表现在酶活性、酶蛋白含量和mRNA表达水平的升高。CYP3A1和CYP3A2的诱导方式可能不同。

NADPH-细胞色素P-450还原酶的制备及在外来化合物代谢中的作用

ＮＡＤＰＨ－细胞色素Ｐ－４５０还原酶是肝微粒体酶系的主要组成成分。本文报道了一种简单经济制备还原酶的方法，并通过ＮＡＤＰＨ的氧化证明还原酶及细胞色素Ｐ－４５０２Ｂ１重组酶系能代谢苯、二氯乙烯和石棉。但代谢过程中的中间产物未能引起质粒ＤＮＡ电泳图谱的变化。

维拉帕米对FK 506肾毒性的防治作用与肾脏P-450的关系

通过对大鼠应用FK506及维拉帕米从而观察其对肝、肾P－450的影响。结果：FK506及CsA均使Bun和Scr升高，使用维拉帕米后BUN及Scr较FK506组低。FK506和CsA均致肾脏P－450含量升高，使用维拉帕米后肾脏P－450下降。而FK506和CsA均使肝P－450含量下降。实验证明：FK506具有肾毒性，FK506经肝脏代谢，且抑制肝脏微粒体中P－450的产生。FK506和CsA相似，也会引起肾脏P－450增多，这可能参与肾毒性，而维拉帕米致肾脏产生P－450减少，在这一环节亦起到防治肾毒性的作用。

大鼠肝脏微粒体中3种细胞色素P-450同工酶活性研究

目的 研究大鼠肝脏微粒体中CYP2D1/ 2、CYP2C11、CYP1A2 3种细胞色素P 4 5 0同工酶的活性。方法 用诱导剂和抑制剂分别在体内和体外调节大鼠肝脏P 4 5 0同工酶活性 ,并用高效液相法检测同工酶底物的特异性代谢产物来计算同工酶活性。结果 3种同工酶底物的特异性代谢产物的分离度达到了 1.5 ;天内、天间精密度均小于 10 .2 2 % ,天内、天间准确度均小于 14 .95 % ;相关系数都达到 0 .999。在体内腹腔注射地塞米松能使CYP1A2、CYP2D1/ 2、CYP2C11活性分别增加 1.3倍 (P <0 .0 5 )、1倍 (P <0 .0 1)和 2 .3倍 (P <0 .0 1)。β 萘黄酮可使CYP1A2活性增加 13.7倍 (P <0 .0 1)。在体外 ,呋拉茶碱可以不同程度地抑制CYP1A2、CYP2C11活性 ;普罗地芬、α 萘黄酮可以抑制CYP1A2活性 ;奎宁可以抑制CYP2D1/ 2活性。结论 甲苯磺丁脲、右美沙芬和非那西汀可以作为人体的探药 ,因而实验建立的方法有望用于检测人血浆或尿液中 3种探药的特定代谢产物 ,分别用于估测人肝脏CYP2C9、CYP2D6和CYP1A2的活性。

鹌鹑及与鸡的杂交后代3β-HSD和P-450c17基因的cDNA部分序列克隆

通过RT-PCR后回收测序的方法克隆了鸡、鹌鹑及其杂交后代目的基因部分cDNA序列,结果显示同源性的相似度分别为3β-HSD:鸡与鹌鹑98.06%;鸡与其杂交种96.12%;鹌鹑与其杂交种100%;鸡与NCBI已有报道的参照序列为95.15%;鹌鹑与杂交种和参照序列相比为98.06%。P.450c17:鸡与鹌鹑100%;鸡与其杂交种100%;鹌鹑与其杂交种100%;与参考鸡序列的同源性为99.29%。

黄皮酰胺类化合物及五味子素衍化物对小鼠肝细胞色素P-450的诱导作用

目的 观察 3种黄皮酰胺类化合物新黄皮酰胺 (neoclausenamide,Neo cl)、辛黄皮酰胺 (zeta clausenamide,Zeta cl)、原黄皮酰胺 (secoclausenamide ,Seco cl)及五味子素衍化物 (SE 31)对小鼠肝药酶是否有诱导作用。方法 小鼠每日ig所试化合物 1次 ,共 3d ,测定肝微粒体细胞色素P 45 0的含量 ,以及依赖细胞色素P 45 0的相关酶活性 ,并观察所试化合物提前 1h和 2 4h给药对注射戊巴比妥钠小鼠睡眠时间的影响。结果 Neo cl,Zeta cl和Seco cl及SE 31给药 3次对小鼠肝药酶都有显著的诱导作用 ;这几种化合物提前 1h给药可明显延长戊巴比妥钠所致小鼠的睡眠时间 ,提前 2 4h给药则可明显缩短睡眠时间。Seco cl和SE 31在体外与肝微粒体共温孵可明显抑制氨基比林脱甲基酶活性。结论 Neo cl,Zeta cl和Seco cl及SE 31对小鼠肝药酶都有显著的诱导作用 。

河南汉族人群细胞色素P-450 1A1与肺癌易感性的关系

目的:探讨CYP1A1基因多态与支气管肺癌癌变关系。方法:采用病例-对照设计和PCR-RFLP方法,检测肺癌组103例和对照组138例CYP1A1基因多态,以logistic回归模型计算比数比(odds ratios,OR)及95%可信区间(confidential intervals,CI)。结果:CYP1A1m1突变型等位基因频率在对照组和肺癌组分别为27.6%和42.7%。logistic回归分析表明,CYP1A1(w1/m1)杂合型(B型)和(m1/m1)纯合突变型(C型)患肺癌的危险度分别升高3.19和2.61倍,差异显著。结论:CYP1A m1突变型等位基因是患肺癌的危险因素。