CIDP患者血清和脑脊液中硫脂抗体、P2蛋白抗体的临床意义

目的 通过测定慢性炎性脱髓鞘性多发性神经病 (CIDP)患者血清和脑脊液 (CSF)中抗硫脂抗体及P2蛋白抗体水平 ,探讨其临床意义和可能的致病机制。方法 应用ELISA法检测 2 4例CIDP患者血清和脑脊液中抗硫脂抗体和P2蛋白抗体水平。结果 (1 )CIDP组血清中高滴度抗硫脂抗体与其它周围神经病 (OPN)组和其它神经系统疾病 (OND)组比较无显著的差异 (P >0 .0 5) ;脑脊液中IgM 抗硫脂抗体与各对照组比较差异有显著性 (P <0 .0 5)。 (2 )CIDP组血清中高滴度抗P2抗体与OPN、OND组比较无显著的差异 (P >0 .0 5) ;脑脊液中抗P2抗体与各对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 ,P <0 .0 1 )。 (3) 1 3例抗硫脂抗体阳性CIDP患者中 9例 (69.2 % )为感觉轴索性损害 ,1 1例阴性患者中 3例 (2 7.4 % )为感觉轴索性损害 ,差异有显著性 (P <0 .0 5)。 (4) 1 8例抗P2抗体阳性CIDP患者中 ,1 3例 (72 .2 % )为轴索性损害 ,6例抗P2抗体阴性患者中 3例 (50 % )为轴索性损害 ,差异无显著性 (P >0 .0 5)。结论 CIDP患者脑脊液中IgM 抗硫脂抗体可以作为感觉轴索型周围神经病的临床诊断参考指标 ;血清和脑脊液中P2抗体的检测对CIDP诊断参考价值不大 ,可能与疾病的修复有关。

EAN中神经抗原P2蛋白有效表位的鉴定及其与空肠弯曲菌LPS抗原性比较

目的 :EAN中神经抗原 (P2蛋白 )的有效表位的鉴定以及将其与空肠弯曲菌 (Campylobacterjejuni,Cj)LPS抗原性比较。方法 :采用噬菌体呈现技术对 8个EAN模型血清抗体进行肽库筛选 ,并将获得的克隆用ELISA方法进行阳性鉴定 ,以及将阳性克隆与空肠弯曲菌LPS相似性进行比较。结果 :33个阳性克隆的亲和性均显著高于阴性对照 (P <0 0 1) ,说明它们是具有特异性的克隆 ;C J LPS与血清的亲和力显著高于对照组 (P <0 0 1) ,与阳性克隆的OD值相差不显著 ,C J LPS与阳性克隆之间存在相似性。结论 :噬菌体呈现技术可筛选出与P2蛋白具有相同表位的噬菌体克隆 ;空肠弯曲菌LPS与P2蛋白之间存在表位模拟 ,C J LPS可能是启动GBS自身反应性免疫应答的重要因素。

P2蛋白及其合成肽与实验性变态反应性神经炎的研究

概述了 P2蛋白及其合成肽 SP2 6的免疫学特性 ,对 P2的理化性质、结构、体内分布以及 P2 -EAN模型进行分析 ,探讨实验性变态反应性神经炎的发病机制 ,以期提高吉兰 -巴雷综合征诊断、治疗、预防水平。

P2蛋白诱导兔慢性变态反应性神经炎的研究

用自制纯化牛硬脊膜内马尾神经根Ｐ２蛋白作为抗原，诱导家兔产生慢性复发性实验性变态反应性神经炎（ｃｒＥＡＮ），通过观察临床表现、电生理学、病理学改变，发现与人类慢性格林－巴利综合征（ｃＧＢＳ）相似。

吉兰-巴雷综合征患者血清和脑脊液中P2蛋白抗体检测及其临床意义

目的 评价P2蛋白抗体在辅助吉兰 巴雷综合征 (GBS)临床诊断中的价值。方法 用ABC -ELISA方法检测 64例血清和CSF配对的GBS病人样品中IgG和IgM型P2抗体水平。结果 GBS患者CSF中IgM型P2抗体阳性率明显高于其它神经系统疾病组和正常对照组(P <0 0 1 ) ,且重症型GBS病人高于轻症型病人 (P =0 0 0 1 9) ,血清与CSF间P2抗体水平无相关性。结论 GBS病人CSF中存在P2特异性免疫球蛋白 。

应用基因表达谱芯片技术筛选NS4ATP2蛋白反式调节基因

目的:对丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)反式激活新基因NS4ATP2转染肝癌细胞的基因表达谱进行分析,探索该基因表达对肝细胞基因表达的调节机制及其生物学功能.方法:应用基因表达谱芯片技术对重组表达质粒pcDNA3.1(-)-NS4ATP2和pcDNA3.1(-)空载体分别转染的HepG2细胞的mRNA的差异性表达进行检测.结果:基因表达谱芯片所检测的1152条目的基因均为GenBank中登录的基因,NS4ATP2表达质粒转染的细胞有29条差异表达基因,其中12条基因表达增强,17条基因表达降低.这些差异表达的基因与细胞信号转导、凋亡、肿瘤的发生密切相关.结论:基因表达谱芯片技术对于初步探索新基因的功能提供重要的资料.本实验结果为进一步阐明NS4ATP2生物学功能及HCV-NS4A的致病机制提供了理论依据.

乳腺癌中CDC25A和P57kip2蛋白表达与病理分级及临床分期的关系

目的探究乳腺癌检测中患者病理分级、临床分期与CDC25A、P57kip2蛋白的相关性。方法选取2016年4月至2019年5月本院收治的120例乳腺癌患者,采用免疫组化法对癌细胞中CDC25A、P57kip2蛋白的表达进行检测,按患者病理分级分为:Ⅰ级44例,Ⅱ级36例,Ⅲ级40例;按照患者临床分期分为:Ⅰ期35例,Ⅱ期40例,Ⅲ期45例,比较两种蛋白表达与临床分期、病理分级的相关性。结果年龄与P57kip2、CDC25A表达无相关性。临床分期、病理分级、淋巴结转移与P57kip2、CDC25A表达有相关性,随着分级、分期及转移程度加深,P57kip2、CDC25A表达率下降(P<0.05)。结论乳腺癌诊断过程中可将P57kip2、CDC25A表达情况作为乳腺癌诊断预测因子,进而判断患者癌症程度,值得临床推广应用。

老年大鼠肾脏损伤中ASPP2蛋白调控与内质网应激的作用及相关性分析

目的探讨P53凋亡刺激蛋白(ASPP)家族成员ASPP2蛋白及内质网应激在老年大鼠肾脏损伤中的作用机制。方法以6月龄SD大鼠为成年组,18月龄SD大鼠为老年组,苏木精-伊红染色(HE)观察各组大鼠肾脏结构的改变;qRT-PCR检测内质网应激相关指标C/EPB同源蛋白(CHOP)、活化转录因子6(ATF6)、X盒结合蛋白-1(XBP-1)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)的mRNA表达水平;Western blot法检测各组大鼠ASPP2蛋白的表达水平,并对ASPP2的表达水平与内质网应激相关指标CHOP、ATF6、XBP-1、GRP78的表达水平作相关性分析。结果与成年组SD大鼠相比,老年组SD大鼠肾脏结构明显改变,CHOP、ATF6、XBP-1、GRP78的mRNA表达水平及ASPP2蛋白表达水平显著增高,且ASPP2水平与CHOP和XBP-1呈正相关,ASPP2水平与ATF6呈负相关。结论在老年SD大鼠中,ASPP2调控内质网应激可能是引起肾脏损伤的重要机制之一。

TP53BP2基因真核表达载体的构建及在人胚肾Expi293F细胞中蛋白表达、纯化及活性鉴定

目的构建人肿瘤抑制因子p53结合蛋白2(tumor suppressor p53-binding protein 2,TP53BP2)的重组真核表达载体,转染人胚肾Expi293F细胞,获得高纯度的重组人全长TP53BP2蛋白并对其进行生物学活性鉴定。方法利用UniProt网站查询TP53BP2基因序列,并进行Expi293F表达系统序列优化,通过同源重组连接至pcDNA3.1(+)-P2Ae GFP载体并进行双酶切和测序鉴定,通过转染试剂聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)将pcDNA3.1(+)-P2A-eGFPTP53BP2质粒瞬时转染至Expi293F细胞,荧光显微镜观察转染效率,收集实验组及对照组细胞,利用免疫印记试验(Western blot,WB)检测TP53BP2重组蛋白表达水平。通过His标签纯化试剂盒及Superdex 20010/300GL层析柱进行蛋白纯化,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)对纯化后重组蛋白进行鉴定。利用免疫共沉淀(Co-immunoprecipitation,Co-IP)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白结合情况。利用免疫荧光(immunofluorescence,IF)检测重组人全长TP53BP2蛋白与p65蛋白共定位。利用表面等离子体共振(surface-plasmon resonance,SPR)技术,检测纯化后的重组人全长TP53BP2蛋白与TP53BP2抗体的相互作用。结果经测序和双酶切鉴定,重组质粒pcDNA3.1(+)-P2A-eGFP-TP53BP2构建成功。经荧光显微镜观察结果显示转染效率约为60%,WB结果表明TP53BP2蛋白在Expi293F细胞中过表达,证明转染成功。SDS-PAGE结果表明纯化后重组蛋白纯度在90%以上,证明纯化成功。Co-IP结果表明,TP53BP2重组蛋白可与p65蛋白相互作用。IF结果表明,His标签蛋白、TP53BP2蛋白及p65蛋白存在共定位,表明三者之间存在相互作用。SPR结果表明,纯化的重组人TP53BP蛋白与TP53BP2抗体具有较好的结合活性。以上结果均证明重组人全长TP53BP2蛋白具有生物学活性。结论成功构建了TP53BP2基因真核表达载体并在人胚肾Expi293F细胞中成功表达出具有生物学活性的重组人全长TP53BP2蛋白,为进一步研究TP53BP2的结构和功能奠定了基础。

副猪嗜血杆菌重组P2蛋白的高效表达及间接ELISA方法的建立

根据GenBank中副猪嗜血杆菌(HPS)的P2蛋白基因序列,设计合成1对特异性引物,用P2-PCR方法从HB070214株中克隆了1 077bp的P2蛋白基因。将P2蛋白基因亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建了重组表达质粒pET-P2,在IPTG的诱导下成功表达了相对分子质量约为60 500的可溶性融合蛋白P2-His;经SDS-PAGE和凝胶薄层扫描分析,融合蛋白的表达量约占细菌总蛋白量的30%。将融合蛋白加入镍琼脂糖凝胶树脂层析柱,经300mmol/L咪唑磷酸盐缓冲液洗脱,其纯度可达92.5%。用Western blotting分析纯化后的融合蛋白,显示良好的生物学活性。利用纯化融合蛋白作包被抗原及优化ELISA反应条件,建立了可检测抗HPS P2蛋白抗体的间接ELISA方法(P2-ELISA),并用所建立的P2-ELISA与国外进口的HPS检测试剂盒Synbiocits-ELISA对196份临床送检血清进行平行检测,阳性符合率为93.4%。结果表明,本试验建立的P2-ELISA与Synbiocits-ELISA具有同样高的特异性。

阴茎癌及其癌旁组织中癌基因ras产物P21蛋白的表达

目的探讨阴茎癌及其癌旁组织中癌基因ｒａｓ产物Ｐ２１蛋白表达的临床意义。方法用免疫组化ＡＢＣ法检测３２例阴茎癌、３２例癌旁组织和１６例正常阴茎组织的癌基因ｒａｓ产物Ｐ２１蛋白。结果２８例癌组织，８例癌旁组织中有Ｐ２１蛋白表达，而１６例正常阴茎组织中Ｐ２１阴性。Ｐ２１蛋白和病理分级、临床分期呈正相关表达，即随分级和分期的上升阳性增强，并且癌旁组织Ｐ２１蛋白表达阳性者显示早期复发和转移的不良预后。结论Ｐ２１蛋白可作为阴茎癌的生物学指标。

P2X嘌呤能受体通道蛋白参与实体瘤进展的研究

腺苷三磷酸(adenosine triphosphate, ATP)是生物体内最普遍存在的供能物质,亦是一种重要的信号分子,肿瘤微环境中ATP的表达水平显著上调。嘌呤能受体离子通道P2X广泛分布多种组织内,微环境中ATP特异性激活P2X受体,调控门控离子通道开放,进而影响下游信号传导参与机体生理活动。而异常嘌呤能信号在肿瘤恶性进展中也发挥着重要作用。本文就P2X受体蛋白家族的结构、表达与功能特点,以及P2X受体家族参与多种实体瘤进展的机制和靶向P2X家族治疗肿瘤的研究进行了综述,以期丰富嘌呤能信号相关基础研究资料,为肿瘤临床治疗靶点的开发提供新思路和策略。

大肠腺癌组织中p57^(kip2)蛋白和基因的表达及其与临床病理的关系

目的探讨细胞周期调控抑制因子p57kip2蛋白和基因在大肠腺癌发生发展中的作用。方法采用免疫组化技术SP法,检测p57kip2蛋白在37例大肠腺癌和26例正常大肠黏膜组织中的表达;采用RT-PCR技术,检测p57kip2基因mRNA在32例大肠腺癌和癌旁组织中的表达。结果p57kip2蛋白阳性表达率在大肠腺癌组织中为40.5%,显著低于正常大肠黏膜组织(χ2=5.039,P<0.05),并与大肠腺癌组织分化程度和淋巴结转移均有关(χ2=8.914,χ2=4.416,P<0.05);p57kip2基因mRNA阳性表达率在大肠腺癌组织中为34.4%,显著低于癌旁大肠黏膜组织(χ2=4.016,P<0.05),并与大肠腺癌组织分化程度、淋巴结转移无关;大肠腺癌组织p57kip2基因mRNA表达水平显著低于癌旁组织(P<0.05)。结论p57kip2蛋白的低表达与大肠腺癌的发生发展有关,p57kip2基因mRNA的低表达与大肠腺癌的发生有关,且p57kip2基因mRNA的低表达可能是p57kip2蛋白低表达的原因之一。

当归注射液对大鼠心肌缺血再灌注损伤后P57^(kip2)蛋白表达的影响

目的:观察当归对缺血再灌注损伤心肌细胞内P57kip2蛋白表达的影响,探讨当归抗心肌缺血再灌注损伤保护作用的机理。方法:将35只SD大鼠随机分成4组:正常对照组(n=5);假手术组(n=10);缺血再灌注组(n=10);当归治疗组(n=10),建立在体心肌缺血再灌注动物模型。实验完毕后,将各组动物心肌组织做免疫组织化学染色,观察各组动物心肌细胞内P57kip2蛋白表达的变化。利用HPIAS-2000图像分析系统测定P57kip2蛋白在以上各组中表达的平均光密度和平均阳性面积率。结果:正常对照组心肌细胞内P57kip2蛋白表达强,当归治疗组心肌细胞内P57kip2蛋白表达强,假手术组心肌细胞内P57kip2蛋白表达较强,缺血再灌注损伤组P57kip2蛋白表达弱。图像分析结果显示:正常对照组、当归治疗组、假手术组与缺血再灌注损伤组之间P57kip2蛋白的平均光密度及阳性面积率的差异有显著性意义(P<0.01);正常对照组与假手术组之间、当归治疗组与假手术组之间平均光密度及阳性面积率的差异无显著性意义(P>005)。结论:当归注射液对大鼠缺血再灌注损伤心肌细胞的增殖起着重要的作用。

p16^(INK4)、p21^(ras)及p185^(C-erbB-2)蛋白在子宫内膜癌的表达及临床病理意义

目的:研究p16 INK4 蛋白在子宫内膜增殖症和子宫内膜癌的表达特征,以探讨其与p2 1ras、p185 C erbB 2 蛋白的相互关系及在子宫内膜癌发生发展中的作用。方法:应用免疫组化SP法检测6 5例子宫内膜癌及2 0例子宫内膜增殖症组织中p16 INK4 、p2 1ras及p185 C erbB 2 蛋白的表达。结果:子宫内膜增殖症组织p16 INK4 蛋白表达率为85 .0 0 % (17/ 2 0 ) ,子宫内膜癌组织p16 INK4 蛋白表达率为6 0 .0 0 % (39/ 6 5 ) ,其表达与组织分级及p185 C erbB 2 蛋白表达呈负相关。结论:p16 INK4 蛋白失表达与子宫内膜癌分化差有一定关系,与p2 1ras、p185 C erbB 2 蛋白的联合检测可反映肿瘤的分化。

P2X7受体蛋白在胰腺癌中的表达及其对侵袭迁移影响的实验研究

目的:探讨P2X7受体蛋白在胰腺癌中的表达及其与临床病理之间的关系,探讨P2X7受体蛋白表达对胰腺癌侵袭迁移的影响及机制。方法:免疫组织化学法分析人胰腺癌组织及癌旁组织中P2X7受体蛋白的表达情况,分析其与胰腺癌临床病理特点之间的关系;选取胰腺癌细胞系PANC-1细胞,分别经P2X7受体激动剂Bz ATP(200μmol/L)及抑制剂A740003(20μmol/L)处理后,Transwell实验、细胞划痕实验检测PANC-1的侵袭迁移能力变化,Western blot实验检测侵袭及迁移相关蛋白MMP2、MMP9的表达变化。结果:P2X7受体蛋白在胰腺癌组织中高表达,在癌旁组织中低表达;且P2X7受体蛋白表达水平与胰腺癌的临床肿瘤分化程度及淋巴结转移呈显著性相关(P<0.05)。P2X7受体蛋白可通过上调MMP2、MMP9蛋白的表达促进胰腺癌细胞的侵袭迁移。结论:P2X7受体蛋白在胰腺癌中高表达并参与调控胰腺癌的侵袭及迁移,可能成为胰腺癌治疗的潜在分子靶点。

髓鞘碱性蛋白和髓鞘蛋白P2对格林-巴利综合征患儿病情及预后的判断价值

目的探讨髓鞘碱性蛋白(MBP)及髓鞘蛋白P2在儿童格林-巴利综合征中的临床意义。方法收集2014年1月至2015年6月于郑州市儿童医院神经内科住院符合格林-巴利综合征诊断的患儿30例,患儿血清行MBP及髓鞘蛋白P2检测,与正常健康体检患儿30例进行对照。部分患儿分别于病程第1~3天及第4~7天采集2份血清进行上述指标检测并比较。结果研究组患者血清MBP[(3 397.82±2 112.39)ng/L]、髓鞘蛋白P2[(1 688.88±899.32)ng/L]明显高于对照组[(669.46±140.04)ng/L、(367.64±106.26)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05);病程第4~7天血清MBP[(4 729.92±992.51)ng/L]、髓鞘蛋白P2[(2 255.38±512.21)ng/L]浓度高于病程第1~3天[(1 040.31±155.24)ng/L、(687.83±153.54)ng/L],差异有统计学意义(P<0.05)。结论 MBP及髓鞘蛋白P2与神经脱髓鞘密切相关。同时反映了神经损伤后髓鞘的崩解是一个渐进的过程,病情越重,血清中MBP、髓鞘蛋白P2浓度越高,有助于判断病情及预后。

下调p21活化蛋白激酶2表达对人乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的:应用RNA干扰技术下调人乳腺癌MCF-7细胞中p21活化蛋白激酶2(PAK2)的表达,观察其对MCF-7细胞增殖和凋亡的影响。方法:构建针对PAK2基因的短发卡RNA(shRNA)慢病毒表达载体并包装病毒颗粒,感染MCF-7细胞,筛选获得稳定细胞株。Western blotting检测细胞中PAK2蛋白表达水平的改变;CellTiter96 AQueous法和软琼脂集落形成实验检测MCF-7细胞体外增殖能力的改变;流式细胞术检测十字孢碱诱导的MCF-7细胞凋亡的变化。结果:MCF-7细胞的PAK2基因被沉默后,PAK2蛋白表达量明显下降(P<0.01),与阴性对照组相比,sh-PAK2组细胞生长明显减缓(P<0.01),克隆形成的数目和大小明显下降(P<0.01),十字孢碱诱导的细胞凋亡率显著增加(P<0.01)。结论:通过RNA干扰技术下调PAK2的表达,可抑制MCF-7细胞的生长和增殖,并增强其对化疗药物诱导的细胞凋亡的敏感性。PAK2可能是潜在的乳腺癌治疗的新靶点。

P2X7受体蛋白表达对胰腺癌的发生及发展的影响

目的探讨胰腺癌组织中P2X7受体蛋白表达及与患者临床病理学特征之间的关系。方法选取本院病理科收集的手术后胰腺癌组织80例为病例组、既往病理科收集的20例正常胰腺组织石蜡块为对照组,收集时间2013年1月-2017年1月,应用免疫组织化学染色法(SP)检测两组标本中的P2X7受体蛋白表达水平,并分期P2X7受体蛋白表达与患者临床分期、肿瘤分化、淋巴结转移等特征的关系。结果病例组胰腺癌组织中的P2X7受体蛋白阳性表达率66.25%显著的高于对照组胰腺组织中的10.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);UICC分期(Ⅲ期)胰腺癌组织的P2X7受体蛋白阳性表达率、低分化程度的P2X7受体蛋白阳性表达率、发生淋巴结转移的P2X7受体蛋白阳性表达率均分别显著的高于UICC分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、高+中分化、未发生淋巴结转移的胰腺癌组织,差异具有统计学意义(P<0.05);经Logistic回归分析,UICC分期为Ⅲ期、组织学低分化、P2X7受体蛋白阳性表达是胰腺癌患者12个月随访不良结局的独立危险因素(P<0.05)。结论胰腺癌组织中P2X7受体蛋白表达上调,并且与UICC分期、肿瘤分化及发生淋巴结转移密切相关。

柯萨奇B4病毒非结构蛋白P_2C重组质粒的构建

目的:构建柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。方法:用RT-PCR技术,从柯萨奇B4病毒中钓取非结构蛋白P2CcDNA片段,克隆入PUCm-T载体,转化大肠杆菌DH5α,构建重组质粒。结果:以柯萨奇B4病毒的总RNA为模板,扩增出987bp大小的片段,克隆入PUCm-T载体,用BamHⅠ、HindⅢ双酶切鉴定,与非结构蛋白P2C的PCR扩增产物片段大小一致。结论:成功地构建了柯萨奇B4病毒非结构蛋白P2C重组质粒。