鸡、鹌鹑及其杂交禽胚胎肌肉发育过程中MSTN和p21基因的表达规律

旨在研究MSTN和p21基因在鸡、鹌鹑和杂交禽胚胎肌肉发育过程中的表达规律,比较这2个基因在杂交禽与亲本鸡和鹌鹑中的差异表达,探讨MSTN和p21基因与肌肉发育的关系。通过人工受精获得鸡(♂)与鹌鹑(♀)杂交禽蛋,与鸡蛋、鹌鹑蛋按照鸡标准孵化条件同批入孵,采集第7～17天活胚胸肌组织,应用实时荧光定量PCR技术检测MSTN和p21基因在3个物种中每一天mRNA的相对表达量。MSTN和p21基因在胚胎肌肉发育的第7～17天均有表达,这2个基因mRNA的表达在鸡胚中第9天到达第1次峰值,在鹌鹑中第7天到达第1次峰值,后都随胚胎的发育表达水平上升,并维持相对稳定的高水平表达。杂交禽的表达规律与鸡一致,也在第9天达到峰值,而p21mRNA表达极显著高于鸡和鹌鹑(P<0.01)。MSTN mRNA表达规律与成肌细胞退出细胞周期的时间规律一致;在胚胎肌肉发育过程中,MSTN基因特异性上调p21的表达。

榄香烯抑制p21基因表达逆转肺癌化疗耐药的实验研究

目的:研究榄香烯逆转肺癌化疗耐药的作用,及其对P21基因表达的影响。方法:体内研究:榄香烯、多柔比星及两者联合预处理小鼠5 d后,检测各组小鼠血中P21基因表达情况;复制Lewis肺癌小鼠模型,观察肿瘤直径长至1 cm所耐时间;然后分别予榄香烯、多柔比星及两者联合用药10 d,称瘤重,并检测肿瘤组织中P21基因表达情况。体外研究:采用榄香烯、多柔比星及二者联合预处理的小鼠血清培养A549肺癌细胞,48 h后检测各组细胞的增殖情况。结果:榄香烯联合多柔比星预处理组小鼠血清中P21基因表达水平与二者单用预处理组及正常组无统计学差异;二者联合预处理组小鼠血清培养A549肺腺癌细胞的增殖速度小于二者单用组;榄香烯联合多柔比星的抑瘤率明显高于二者单用,且二者联用组小鼠肿瘤组织中P21基因表达水平低于多柔比星组,但高于榄香烯组。结论:榄香烯具有逆转肺癌化疗耐药的作用,这一作用的可能机理与其抑制P21基因表达相关。

dsP21-625通过激活P21基因表达抑制前列腺癌细胞的增殖

目的:探讨人工合成小分子双链RNA-625(double-stranded RNA-625,ds P21-625)对前列腺癌细胞P21基因的激活作用及对细胞增殖的影响。方法:将人工合成的ds P21-625(ds P21-625组)和ds Ctrl质粒(ds Ctrl组)分别转染至前列腺癌细胞株PC-3和DU-145。用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测转染后各组前列腺癌细胞中P21、细胞周期素E(Cyclin E)和细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)m RNA及蛋白的表达水平,流式细胞术、MTT实验和克隆形成实验分别检测细胞周期分布、细胞增殖和克隆形成能力。结果:与ds Ctrl组比较,ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21 m RNA水平升高(均P<0.01),Cyclin E和CDK2 m RNA表达水平下调(均P<0.01);ds P21-625组PC-3和DU-145细胞中P21蛋白表达上调(均P<0.01),Cyclin E和CDK2蛋白表达下调(均P<0.01);ds P21-625组细胞S期和G2/M期的细胞比例减少(均P<0.05),G0/G1期的细胞比例增加(均P<0.01);ds P21-625组细胞增殖活力降低(均P<0.05)、克隆形成数减少(均P<0.05)。结论:ds P21-625上调前列腺癌细胞中P21 m RNA及蛋白的表达,下调Cyclin E和CDK2 m RNA及蛋白的表达,抑制前列腺癌细胞的增殖能力。

新型基因转移系统介导p21基因治疗人脑胶质瘤的体外研究

目的：探索靶向性非病毒载体系统在人脑胶质瘤基因治疗中的应用。方法：组建了ＥＧＦ－Ｒ介导的ＧＥ７基因转移系统，分别与β－ｇａｌ报道基因和ｐ２１基因构成载体复合物，体外转染Ｕ２５１细胞，通过Ｘ－ｇａｌ染色、Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ分析、原位末端标记、ＤＮＡ梯带检测等，观察了外源基因的导入及对肿瘤细胞的抑制作用。结果：Ｘ－ｇａｌ染色表明，外源基因的导人率可达８０％；转染ｐ２１基因后，细胞生长受到明显抑制，第７天生长抑制率约５８％。原位末端标记及 ＤＮＡ梯带检测发现，转染细胞有明显的凋亡发生。结论：ＧＥ７载体系统能高效靶向地将外源基因导入肿瘤细胞，外源基因的表达可明显抑制肿瘤细胞的生长，有效诱导其凋亡。

p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的影响

目的:探讨p21基因转染人胃癌细胞系(BGC)对化疗药物的敏感性。方法:应用MTT摄入方法测定5-氟尿嘧啶、阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙对p21基因转染人胃癌细胞增殖抑制作用,并进行72 h观察。结果:p21基因转染人胃癌细胞对5-氟尿嘧啶最敏感,72 h抑制率为77.9%;其次为阿霉素、长春新碱、环磷酰胺、平阳霉素和替尼泊甙,其抑制率分别为62.7%、61.1%、59.3%、58.2%及45.9%。其敏感性与对照组相比差异有显著性(P<0.05),随时间延长而逐渐增加。结论:用MTT法检测p21基因转染人胃癌细胞对化疗药物敏感性的实验,即可以针对性指导临床对肿瘤敏感性化疗药物的选用,又可避免盲目用药而产生对机体免疫细胞的毒性作用。p21基因可提高对5-氟尿嘧啶的敏感性。

雷氏大疣蛛毒液对人肝癌HepG2细胞p21基因表达的影响(英文)

本文研究了雷氏大疣蛛毒液对人肝癌细胞株HepG2增殖抑制作用及其分子机制。采用XTT法观察到雷氏大疣蛛毒液剂量依赖抑制HepG2细胞增殖;流式细胞仪检测发现,经过雷氏大疣蛛毒液作用的HepG2细胞周期发生明显的选择性改变;RT-PCR方法检测到p21基因表达增强;Western blot检测发现,p21蛋白表达增加。结果提示,雷氏大疣蛛毒液抑制人肝癌细胞HepG2增殖的可能机制之一是使p21基因和蛋白表达增加,G2／M细胞周期被阻滞,从而诱导细胞凋亡。

p16、p21基因表达缺失在原发性肝癌中的临床意义

背景与目的:P16,P21蛋白是调控细胞周期的抑制蛋白,在调节细胞增殖中起非常重要的作用,其基因缺失,失活与多种肿瘤的发生,发展有关,本研究观察原发性肝癌中P16、P21蛋白表达及其基因缺失情况,探讨p16、p21基因表达缺失的临床意义。方法:采用回顾性分析方法,收集原发性肝癌42例,正常肝组织(距离癌组织≥2cm)36例,应用Western印迹试验、逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测肝癌和正常肝组织中P16、P21蛋白的表达和相应mRNA扩增情况。结果:在癌组织中,P16蛋白缺失率为24例(24/42,57.1%),正常肝组织中P16蛋白缺失率为13.9%(5/36);而相应组织中P21蛋白缺失率分别为45.2%(19/42)和19.4%(7/36)。两者在癌和正常肝组织中缺失差异均有显著性(P<0.05)。14例癌组织(38.9%,14/36)仅p16mRNA转录而未表达蛋白。P16、P21蛋白的低表达与肝癌大小、分化程度关系密切(P<0.05),而与是否有包膜、是否肝硬化等无关。结论:P16、P21蛋白的表达缺失与肝癌发生发展密切相关,两者可作为判断肝癌恶性程度的参考指标。

p21基因在牛卵成熟中的表达检测及其真核表达载体构建

本研究旨在检测p21基因在牛卵成熟过程中的表达,并构建其真核表达载体。首先利用RT-PCR和免疫荧光染色对不同成熟阶段牛卵内p21的mRNA和蛋白表达进行检测。然后从牛成纤维细胞中克隆了p21基因并构建pVenus-P21真核表达载体。经脂质体2000介导重组质粒pVenus-P21转染Hela细胞,通过荧光显微镜观察、RT-PCR检测,确认重组质粒在Hela细胞内的表达及定位。最后应用体外转录试剂盒将p21-venus体外转录为cRNA,并注射牛卵母细胞,荧光显微镜下观察其表达及定位。结果显示,在牛卵体外成熟过程中,各时期均存在p21基因mRNA及蛋白的表达。构建的真核表达载体pVenus-P21能够在Hela细胞中正确表达及定位。p21-venus cRNA显微注射牛卵后其融合蛋白也能实现准确定位,为研究P21在卵母细胞成熟以及胚胎发育过程中的作用奠定了基础。

银屑病患者骨髓HPP-CFC集落形成及p21基因启动子甲基化的研究

目的:研究银屑病患者骨髓高增殖潜能集落形成细胞(HPP-CFC)集落形成能力及集落细胞p21基因启动子甲基化状态,探讨银屑病患者骨髓造血前体细胞的活性。方法:密度梯度离心法分离银屑病患者及正常对照骨髓单个核细胞,培养于含SCF+GM-CSF+IL-3+IL-6细胞因子组合的甲基纤维素半固体培养基,培养14天时计数HPP-CFC集落,然后收集集落。提取纯化集落细胞DNA,经亚硫酸盐修饰后,采用甲基化特异性PCR(MSP)检测HPP-CFC集落细胞p21基因启动子甲基化状态。结果:(1)在甲基纤维素半固体培养基中,银屑病患者骨髓HPP-CFC集落数显著低于正常对照组,且集落形态较小;(2)正常对照骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率较高,而银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因启动子甲基化阳性率低于正常对照组。结论:银屑病患者骨髓造血前体细胞活性有异常;银屑病患者骨髓HPP-CFCp21基因甲基化降低可能与其相对较低的HPP-CFC集落形成能力密切相关。

腺病毒介导的p21基因联合顺铂对胃癌的作用

目的 探讨腺病毒介导的p2 1基因在人胃癌细胞株SGC 790 1中的表达及其对肿瘤细胞生长和荷瘤小鼠的作用。方法 采用腺病毒载体携带周期控制基因p2 1转染人胃癌细胞株 ,用流式细胞仪技术测定p2 1基因对SGC 790 1细胞周期的影响 ,并与CDDP联合应用 ,观察p2 1基因和 /或CDDP对SGC 790 1细胞株和荷瘤小鼠的作用。结果 腺病毒介导的p2 1基因可在胃癌细胞株SGC 790 1中过度表达 ,使胃癌细胞株S期含量下降 ,抑制其生长 (抑制率为 80 % ) ,并可诱导胃癌细胞的凋亡 ;p2 1基因联合CDDP作用使SGC 790 1细胞G2 /M含量明显下降 ,并可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长 ,且联合作用比单一用药作用更明显。结论 腺病毒介导的p2 1基因可抑制人胃癌细胞株的生长 ,抑制瘤体的生长 ,结合化疗药物作用更强 ,为临床应用提供了依据。

腺病毒介导的p21基因联合顺铂对胃癌细胞的影响

目的 :探讨腺病毒介导的 p2 1WAF1/CIP1基因 (p2 1基因 )在人胃癌细胞系SGC 790 1中的表达及其联合顺铂化疗对胃癌细胞生长和荷瘤小鼠的作用。方法 :采用腺病毒载体携带p2 1基因感染人胃癌细胞系 ,用流式细胞仪测定 p2 1基因对SGC 790 1细胞周期的影响 ,并与DDP联合应用 ,观察p2 1基因和 (或 )DDP对SGC 790 1细胞系和荷瘤小鼠的作用。结果 :腺病毒介导的 p2 1基因可在胃癌细胞系SGC 790 1中过度表达 ,使胃癌细胞系S期含量下降 ,抑制其生长 ,并可诱导胃癌细胞的凋亡 ;p2 1基因联合DDP作用使SGC 790 1细胞G2 /M含量明显下降 ,并可抑制荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长 ,且联合作用比单一用药作用更明显。结论 :腺病毒介导的p2 1基因可抑制人胃癌细胞系的生长 ,抑制瘤体的生长 ,结合化疗药物其作用更强 。

ras p21基因蛋白产物在胃肝样腺癌细胞内表达的研究

目的：探讨胃肝样腺癌及普通型胃癌ｐ２１基因蛋白产物表达情况，进一步判断肿瘤的恶性程度。方法：应用免疫组化ＡＢＣ法，对２８例胃肝样腺癌进行检测。结果：２８例胃肝样腺癌ｐ２１基因表达阳性率９６．４％，其中染索状１８例，团块状１０例。其阳性表达明显高于普通型胃癌。结论：检查胃肝样腺癌ｐ２１基因蛋白产物表达。

p21基因与哺乳动物器官再生相关性研究进展

自然界中很多低等无脊椎动物及有尾目两栖动物都存在组织或附属器官再生现象,而哺乳动物中这种能力却是少见的。近年来随着具有器官再生能力的MRL试验小鼠的发现,越来越多的试验证实哺乳动物也具有器官再生能力,这为临床上的损伤修复和肢体再生带来了新希望。组织、器官的再生离不开细胞增殖,细胞增殖离不开细胞周期,p21蛋白作为细胞周期的重要调控因子,在最新研究中发现,普通试验小鼠敲除p21基因后具有了同MRL试验小鼠一样的器官再生能力,确定了p21蛋白与再生有着密切联系。文章对p21基因与哺乳动物再生的关系作一综述。

野生型P53基因诱导血管平滑肌细胞P21基因表达

为研究野生型P53基因导入诱导血管平滑肌细胞P21基因的表达，探讨P53基因调节细胞周期进程的作用机理，体外培养了人脐动脉平滑肌细胞。将野生型P53基因导入细胞后，应用逆转录－聚合酶链反应半定量测定P21mRNA水平，以免疫组织化学法观察P21蛋白表达的变化，并用流式细胞术分析细胞周期。结果发现，正常生长的血管平滑肌细胞中P21mRNA水平较低，用免疫组织化学法检测不到P21蛋白。野生型P53基因导入并在平滑肌细胞中表达后，显著增加了P21mRNA水平，在免疫组织化学检测中呈现很强的阳性显色反应、引起平滑肌细胞停滞在G0／G1期。以上结果提示，野生型P53基因通过诱导P21基因表达调控血管平滑肌细胞周期。

p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达

以E9日龄至E14日龄昆明种正常小鼠胚胎为材料,利用质粒扩增的、地高辛标记的基因探针在组织切片上进行DNA-mRNA分子原位杂交,研究了p21基因在小鼠胚胎发育过程中的表达.结果表明:p21基因从E10日开始参与小鼠胚胎发育,其表达特异性随着胚胎发育进程逐渐增强,与它在细胞周期中的负调控作用相一致.p21基因表达强度较稳定,与其mRNA稳定有关.

腺病毒介导p21基因转染抑制人血管平滑肌细胞增殖的研究

目的 研究抗增殖性p21基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞(HVSMC)的增殖抑制作用及其作用机制。方法 通过腺病毒介导将外源性p21基因转入HVSMC,通过免疫印迹法(Western blot)检测p21基因的表达,原位末端标记法(TUNEL)、DNA片段梯度分析及流式细胞分析(FCM)观察靶细胞的细胞周期变化及凋亡,利用酶联免疫光度仪分析靶细胞的增殖抑制情况。结果 Western blot结果显示p21基因转染后的HVSMC可高水平表达p21蛋白,而另两组无表达。感染后5 d,Adp21组的细胞数为0.275 5±0.01(525 nm波长下吸光度A值),AdlacZ组为0.340 9±0.02,空白组为0.347 5±0.02,Adp21组较另两组的差异有统计学意义(P<0.01)。TUNEL、DNA片段梯度分析及FCM检测均提示靶细胞发生了凋亡。FCM检测还发现明显的细胞周期阻滞现象,Adp21组G0-G1期细胞比例为66.23％,S期细胞比例为10.18％,而另两组G0-G1期和S期细胞比例分别为:47.73％、30.56％和45.31％、32.34％。结论 复制缺陷性腺病毒在体外可有效介导外源性p21基因转染HVSMC,转染后的细胞除发生细胞周期阻滞外还出现明显的凋亡,其生长增殖受到抑制。

p53和p21基因蛋白表达与胃癌侵袭力的关系

采用免疫组织化学方法研究了６８例胃癌中癌细胞ｐ５３和ｐ２１基因蛋白表达与癌细胞侵袭力的关系。结果表明：６８例胃癌中有３６例ｐ５３基因蛋白染色阳性（５２．９％），４８例ｐ２１基因蛋白染色阳性（７０．６％）；浸润于浆膜层和肌层的癌细胞ｐ５３蛋白染色的阳性程度明显高于粘膜层癌细胞（Ｐ＜０．０５）；浸润性生长的癌细胞中ｐ５３和ｐ２１蛋白阳性程度均明显强于膨胀性生长的癌细胞（Ｐ＜０．０５）；淋巴结转移病例的癌细胞其ｐ５３和ｐ２１蛋白染色阳性率（分别为５４．３％和７３．９％）与无淋巴结转移的病例（分别为５０．０％和６３．６％）无显著性差异（Ｐ＞０．０５）；有淋巴结转移的病例中，原发癌ｐ５３蛋白阳性强度与转移癌正相关（γ＝０．６８，Ｐ＜０．０１）。结果提示：ｐ５３和ｐ２１基因蛋白染色阳性程度较高的胃癌细胞具有较强的侵袭力。

P21基因rs3176352位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌发病风险无关

目的研究P21基因rs3176352位点多态性与东北地区汉族女性子宫内膜癌之间的关系。方法通过测序及限制性片段长度多态性聚合酶链反应方法，对263例子宫内膜癌患者及315例健康人外周血DNA的P21基因rs3176352位点进行基因型分型。结果rs3176352位点c等位基因频率在病例组与对照组中无显著差异（P=0．492）。rs3176352位点CC基因型频率在病例组和对照组中分别为0．114和0．098。多因素logistic回归分析提示，cc基因型与GG基因型相比，患子宫内膜癌的风险无明显增加（OR=1．226，95％CI：0．698～2．153，P=0．479），经校正后仍无显著差异（P=0．406）。并且rs3176352位点不同基因型与子宫内膜癌分化程度无明显联系（P=0．743）。结论在东北地区汉族女性中。P21基因rs3176352位点的多态性与子宫内膜癌的发生风险无明显关联。

p21基因转染人肝癌SMMC-7721细胞对化疗药物敏感性的研究

目的探讨p21基因转染人肝癌SMMC-7721细胞（7721细胞）对化疗药物的敏感性，深入研究p21基因对肝癌细胞的治疗作用。方法应用磷酸钙介导p21基因转染人肝癌7721细胞；通过G418筛选稳定表达细胞株并扩大培养；采用MTT法检测肿瘤细胞增殖速度；流式细胞术检测细胞周期变化。结果经过3～4w G418筛选得到稳定表达的细胞株，p21基因稳定转染并联合化疗药物应用可明显抑制7721细胞的体外增殖，细胞周期明显改变，细胞从G1期到G2期发生阻滞。结论提示转染外源p21基因联合化疗药物可使7721细胞周期阻滞于G1期，并可抑制肿瘤细胞增殖。

水牛p21基因在卵母细胞体外成熟过程中的表达及其真核表达载体构建

旨在检测p21基因在水牛卵母细胞体外成熟过程中的表达变化,并克隆摩拉水牛p21基因CDs序列,构建真核表达载体。收集体外成熟培养不同时期(0、6、12、24h)和不同形态[有第1极体(first polar body,PB1)PB1和无PB1]的水牛卵母细胞,通过RT-qPCR检测其p21mRNA相对表达量。同时利用RTPCR技术从摩拉水牛卵巢颗粒细胞中扩增出p21基因编码序列,插入pEGFP-N1真核表达载体中,构建出重组质粒。将重组质粒pEGFP-N1-p21转染水牛颗粒细胞,并于培养24h和48h后观察转染细胞的荧光表达情况。收集转染48h后的颗粒细胞,通过RT-qPCR检测p21mRNA相对表达量。结果显示,成熟培养6h的卵母细胞p21mRNA表达量显著高于成熟培养0、12、24h的表达量(P<0.05),有PB1的卵母细胞中p21mRNA的表达量显著高于无PB1的卵母细胞(P<0.05);重组质粒pEGFP-N1-p21转染颗粒细胞后,有绿色荧光蛋白表达,且与转染pEGFP-N1和空白组相比,pEGFP-N1-p21转染组的p21mRNA表达量显著升高。结果表明,在体外成熟培养过程中均能检测到水牛卵母细胞p21mRNA表达量,成功构建了摩拉水牛p21基因真核表达载体,为下一步研究p21基因在水牛卵母细胞成熟和胚胎发育过程中的功能和调控奠定了基础。