基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响

目的 基于PARP1信号通路研究芒柄花素对糖氧剥夺/复氧复糖神经元细胞损伤的影响,为揭示运用锦鸡儿异黄酮治疗脑缺血再灌注损伤提供理论依据。方法 建立小鼠神经元细胞(HT22)糖氧剥夺/复氧复糖(OGD/R)模型,通过Western blot检测糖氧剥夺/复氧复糖不同时间HT22神经元细胞中PARP1和PARG表达情况,选择通路变化最佳时间点。分别使用芒柄花素、PARP1抑制剂(PJ34)和PARG抑制剂处理OGD/R后的HT22细胞,设置6个组,分别为对照组、对照组+芒柄花素组、OGD/R组、OGD/R+芒柄花素组、OGD/R+PJ34组、OGD/R+PARG抑制剂组。对照组HT22细胞正常培养,不进行OGD/R处理;采用免疫荧光、Western blot法检测各组细胞凋亡因子、相关蛋白表达水平。结果 在糖氧剥夺/复氧复糖3 h后,HT22细胞中PARP1通路激活最明显,在OGD/R 3 h条件下,芒柄花素、PJ34或PARG抑制剂处理后可提高E3泛素连接酶(Iduna),抑制PARP1、PARG通路蛋白表达,并降低AIF和P53表达,提高AKT蛋白磷酸化水平。结论 HT22小鼠神经元细胞在OGD/R条件下,芒柄花素可通过提高Iduna蛋白表达抑制PARP1/AIF/Akt信号通路减轻HT22小鼠神经元细胞损伤。

上皮性卵巢癌化疗耐药组织中PARP1与铁死亡的相关性及临床意义

目的研究上皮性卵巢癌化疗耐药组织中聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)与铁死亡的相关性及临床意义。方法选择2019年2月至2023年2月期间在安徽省阜阳市颍上县人民医院经病理诊断为上皮性卵巢癌的80例患者,接受铂类为基础的化疗≥4次并根据化疗效果分为化疗敏感组(n=31)和化疗耐药组(n=49)。采用免疫组化检测化疗前上皮性卵巢癌组织中PARP1的蛋白表达,采用荧光定量PCR检测化疗前上皮性卵巢癌组织中PARP1及铁死亡标志基因GPX4、SLC7A11、TfR1的mRNA表达,比较两组间PARP1、GPX4、SLC7A11、TfR1表达水平的差异。随访患者的无进展生存期(PFS)和总生存期(OS)。结果化疗前FIGO分期Ⅲ~Ⅳ期、CA125≥35 U/mL的上皮性卵巢癌组织中PARP1的高表达率高于FIGO分期Ⅰ~Ⅱ期、CA125<35 U/mL的上皮性卵巢癌组织,差异有统计学意义(χ^(2)=4.129、9.095,P<0.05);上皮性卵巢癌化疗耐药组织中PARP1、GPX4、SLC7A11的mRNA相对表达水平及PARP1蛋白高表达率均高于上皮性卵巢癌化疗敏感组织,TfR1的mRNA相对表达水平低于上皮性卵巢癌化疗敏感组织,差异有统计学意义(t=23.487、20.030、23.378、22.752,χ^(2)=5.905,P<0.05);上皮性卵巢癌中PARP1的mRNA相对表达水平与GPX4、SLC7A11的mRNA相对表达水平呈正相关(r=0.351、0.394),与TfR1的mRNA相对表达水平呈负相关(r=-0.364);与上皮性卵巢癌中PARP1低表达患者比较,上皮性卵巢癌中PARP1高表达患者的OS和PFS缩短,差异有统计学意义(χ^(2)=4.851、5.623,P<0.05)。结论PARP1高表达与上皮性卵巢癌化疗耐药、铁死亡减弱、生存预后不良相关。

XRCC1、PARP1和APE1多态性与晚期非小细胞肺癌铂类药物化疗敏感性的关系

目的:探讨碱基切除修复系统(BER)3个重要基因——X线修复互补基因(XRCC1)、多(ADP核糖)聚合酶(PARP1)及脱嘌呤/脱嘧啶核酸内切酶(APE1)的单核苷酸多态性(SNPs)与晚期非小细胞肺癌(NSCLC)患者铂类药物化疗疗效的相关性。方法:对151例接受以铂类药物为基础化疗的晚期NSCLC患者进行临床疗效评价。采用TaqMan探针法对XRCC1G28152A(Arg399Gln)、XRCC1 C26304T(Arg194Trp)、PARP1 T2444C(Val762Ala)及APE1 T1349G(Asp148Glu)多态性位点进行基因型分析。比较不同基因型与铂类药物化疗效果之间的关系。结果:XRCC1 G28152A多态性与铂类化疗敏感性密切相关,GA杂合型患者临床受益率明显高于野生型,其化疗有效率为GG野生型的2.85倍(调整的OR=2.85,95%CI:1.291～6.277,P<0.05);至少携带1个变异等位基因A的患者(GA/AA)临床受益率为GG野生型携带者的2.48倍(调整的OR=2.48,95%CI:1.330～6.075,P<0.05)。XRCC1 26304位点及PARP1 2444位点的突变纯合基因型携带者,其化疗有效率都明显下降,XRCC126304的TT基因型有效率是CT/CC基因型的0.36倍(调整的OR=0.36,95%CI:0.040～3.298),PARP1 2444 CC基因型有效率是CT/TT基因型的0.37倍(调整的OR=0.37,95%CI:0.118～1.170),但均未见有统计学差异。未发现APE1 T1349G多态性与铂类化疗疗效之间存在关联。结论:BER修复通路XRCC1 G28152A多态性与晚期NSCLC患者铂类药物化疗临床受益相关,XRCC1 28152位点基因型检测有可能作为晚期NSCLC铂类化疗敏感性的预测指标。

白藜芦醇通过抑制PARP1促进胰腺癌对吉西他滨的化疗敏感性

目的探讨白藜芦醇对胰腺癌吉西他滨化疗耐药的影响及其可能的分子机制。方法吉西他滨持续低浓度递增诱导法筛选耐药细胞株,高通量RNA-seq分析差异表达基因并进行通路富集,彗星实验检测DNA损伤,Western blotting检测相关通路指标,Chou-Talalay计算药物联合协同指数,AutoDock预测小分子与蛋白质对接靶点。结果耐药细胞株较亲本细胞株DNA损伤修复相关通路活化,白藜芦醇加强吉西他滨诱导的DNA损伤(P<0.01),白藜芦醇可以抑制DNA损伤修复关键分子PARP1(poly ADP-ribose polymerase 1)表达并与吉西他滨发挥协同作用(CI<1),白藜芦醇与PARP1的CAT结构域存在预测对接靶点。结论白藜芦醇能够抑制化疗耐药关键分子PARP1,并促进胰腺癌对吉西他滨的化疗敏感性。

敲除OIP5-AS1基因通过miR-7-5p/PARP1轴增强非小细胞肺癌细胞的化学敏感性

目的探讨OIP5-AS1基因对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞化学敏感性的作用及分子机制。方法采用CCK-8法检测正常肺细胞系BEAS-2B、肺癌细胞系A549和顺铂耐药肺癌细胞A549/DDP的半抑制浓度(IC50)值。应用RT-qPCR检测OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的表达水平。生物信息学检测OIP5-AS1、miR-7-5p和PARP1的靶向关系,用荧光素实验进一步验证。Western blot法检测相关蛋白的表达;流式细胞术检测细胞凋亡情况;克隆形成检测细胞生长情况。结果A549/DDP细胞中IC50值最高,且OIP5-AS1高表达,miR-7-5p低表达。miR-7-5p是OIP5-AS1的靶向调节基因之一,且为负调控关系。敲除OIP5-AS1抑制A549/DDP细胞的生长并增强化学敏感性,促进A549/DDP细胞凋亡。敲除OIP5-AS1下调PARP1可以增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。结论OIP5-AS1通过上调miR-7-5p或下调PARP1,增强A549/DDP细胞的化学敏感性,抑制NSCLC的生长和凋亡。

三阴性乳腺癌与PARP1表达相关性的Meta分析

目的:评价PARP1(poly ADP-ribose polymerase 1)表达与三阴性乳腺癌的临床相关性。方法:计算机检索PUBMED、CNKI、万方数据库,同时辅助其他检索,收集所有关于PARP1在三阴性乳腺癌组织中表达关系的相关文献,应用Cochrane协作网Rev Man 5.2软件对满足条件的数据进行统计分析。结果:最终纳入5篇文献,共700例病人,其中三阴性乳腺癌331例,非三阴性乳腺癌369例。Meta分析结果显示:与非三阴性乳腺癌相比,PARP1在三阴性乳腺癌中的表达差异具有显著统计学意义(OR=3.24,95%CI:1.45~7.23,P=0.004)。结论:PARP1的表达与三阴性乳腺癌呈正相关关系,或可作为判断三阴性乳腺癌预后的指标,但仍需要大样本的随机对照试验进一步证实,三阴性乳腺癌患者常规检测PARP1具有一定的临床意义。

MiR-223通过靶向PARP1对氧化应激状态下人主动脉内皮细胞HAECs存活的影响

目的探讨miR-223通过靶向PARP1对氧化应激状态下人主动脉内皮细胞HAECs存活的影响及miR-223改善氧化应激来治疗高血压的潜能。方法 Target Scan预测靶向PARP1的潜在miRNAs;双荧光素酶报告实验检测miR-223对PARP1的靶向调节作用;q PCR和western blot检测miR-223对HAECs细胞中PARP1 mRNA和蛋白表达影响;用H2O2诱导人主动脉内皮细胞HAECs产生氧化应激,单细胞凝胶电泳、克隆形成实验和MTT分别检测miR-223对细胞DNA损伤、存活能力的影响。结果软件预测发现miR-223是PARP1的潜在miRNAs;双荧光素酶报告实验、q PCR及western blot均证实了miR-223对PARP1的靶向调控作用;过表达miR-223可通过降低PARP1表达促进H2O2诱导人主动脉内皮细胞HAECs氧化损伤,降低细胞存活能力。结论 miR-223通过靶向调节PARP1表达降低H2O2诱导后人主动脉内皮细胞HAECs存活,有可能成为高血压治疗的新靶点。

miR-221-3p靶向沉默PARP1对三阴乳腺癌细胞的化疗药物敏感性的影响

目的分析miR-221-3p通过PARP1调节三阴乳腺癌(TNBC)细胞化疗耐药的分子机制。方法收集行肿瘤切除术的TNBC患者标本,通过实时荧光定量PCR和Western blot检测癌旁组织、TNBC组织、TNBC化疗耐药组织和TNBC化疗敏感组织中miR-221-3p及其PARP1表达,取对数期MDA-MB-231细胞,将添加0.1μg/mL ADM的培养基加入细胞内,培养获得耐药的MDA-MB-231/ADM细胞。miR-221-3p inhibitor与inhibitor NC分别转染MDA-MB-231/ADM细胞,CCK-8法检测细胞药物敏感性,流式细胞仪分析细胞凋亡率,Western blot实验分析肿瘤细胞内Bax、Caspase-3、Caspase-9和Bcl-2蛋白的表达情况。TargetScan数据库预测miR-221-3p的潜在靶点,双荧光素酶报告基因实验分析miR-221-3p与PARP1之间的关系,Western blot实验检测下调miR-221-3p表达后PARP1、BRD7蛋白表达情况。PARP1 siRNA与siRNA NC分别转染MDA-MB-231/ADM细胞,分别利用CCK-8、流式细胞仪和Western blot检测细胞药物敏感性和凋亡情况。最后分析上调miR-221-3p通过PARP1对MDA-MB-231/ADM细胞药物敏感性和凋亡的影响。结果与癌旁组织相比,TNBC组织中miR-221-3p表达下调(P<0.01),PARP1表达上调(P<0.01);与TNBC化疗敏感组织相比,TNBC化疗耐药组织中miR-221-3p表达下调(P<0.01),PARP1表达上调(P<0.01)。下调了miR-221-3p表达抑制了MDA-MB-231/ADM细胞的药物敏感性,细胞凋亡率明显降低。miR-221-3p靶向PARP1,下调miR-221-3p促进了PARP1蛋白表达,而抑制了BRD7蛋白表达,PARP1 siRNA转染MDA-MB-231/ADM细胞后促进了BRD7蛋白表达和细胞凋亡,上调了细胞药物敏感性。而过表达miR-221-3p通过PARP1上调了细胞凋亡和药物敏感性。结论miR-221-3p靶向沉默PARP1增加TNBC细胞对化疗药物的敏感性。

沉默Ku70后PARP1参与DNA双链断裂修复

目的研究碱基切除修复途径(base excision repair,BER)关键因子PARP1在Ku70缺失的条件下是否参加DNA双链断裂(double-strand break,DSB)的修复。方法针对人类Ku70构建编码shRNA序列的重组表达载体并转染细胞,建立Ku70蛋白表达沉默的细胞株。以高效的DNA双链断裂诱导剂刺孢霉素calicheamycin诱导DSB形成,在Ku70沉默或联合PARP1抑制剂条件下,通过结晶紫染色法检测DSB对细胞存活率的影响,以及Western blot检测H2AX的磷酸化状态。根据与染色质相互作用的差别,分段提取细胞蛋白组分,Western blot检测PARP1在各组分的分布变化。结果细胞Ku70蛋白水平在Ku70 shRNA干扰后显著下调。Ku70沉默和PARP1抑制剂明显降低细胞在calicheamycin处理后的存活率(P<0.01),两者有明显协同效应。在Ku70沉默的细胞诱导DSB后,PARP1主要分布在与染色质紧密结合的组分。结论在Ku70缺陷时,PARP1可与染色质结合,且抑制其功能影响细胞生存,说明PARP1可能参与了不依赖于Ku的DNA双链断裂修复的替代途径。

沉默Ku70促进PARP1、ligase3和XRCC1在DNA双链断裂染色质聚集

目的研究碱基切除修复途径(base excision repair,BER)关键因子PARP1、ligase3和XRCC1在Ku70缺失的条件下与DNA双链断裂(double-strand break,DSB)所在染色质的结合及抑制PARP1所产生的影响。方法采用可经药物诱导Ku70 shRNA的细胞株,以高效的DNA双链断裂诱导剂刺孢霉素calicheamicin诱导DSB。分离不同组分蛋白联合稳定同位素标记定量差异蛋白组分析法鉴定Ku70下调后在损伤染色质聚集增多的蛋白,Western blot进行验证并检测PARP1抑制剂DIQ对其染色质聚集的影响。结果在药物Doxy作用下,Ku70明显下调,其余蛋白的表达不受影响。稳定同位素标记定量蛋白组学方法鉴定出PARP1、ligase3和XRCC1在Ku70下调后在损伤染色质聚集增多。Western blot进行了验证并显示PARP1、ligase3和XRCC1在损伤染色质的聚集随DSB程度增加而增加。施加PARP1抑制剂DIQ,随着DIQ浓度的上升,ligase3在损伤染色质的聚集逐渐减少。结论沉默Ku70后,PARP1、ligase3和XRCC1在DSB染色质聚集增加,这种聚集与DSB程度变化一致,并且ligase3的染色质聚集具有一定程度的PARP1依赖性。

PARP1在膀胱癌细胞增殖和侵袭中的作用及其机制

目的:探究PARP1在膀胱癌(bladder cancer,BCa)细胞增殖和侵袭中的作用及其相关分子机制。方法:使用小干扰RNA(siRNA)沉默BCa细胞系5637和T24中的PARP1;通过MTT实验检测5637或T24细胞阴性对照(Vector)和5637或T24细胞PARP1敲低细胞系(si PARP1)的增殖能力;进一步通过Transwell侵袭实验检测5637或T24细胞Vector和5637或T24细胞si PARP1的侵袭能力,并通过Western blot实验检测5637或T24 Vector和5637或T24 si PARP1中侵袭相关蛋白[基质金属蛋白酶9 (matrix metallopeptidase 9,MMP9)]的蛋白水平变化;通过下载和分析TCGA数据库,探究BCa中PARP1 mRNA与MMP9 mRNA的相关性。结果:PARP1的下调可以抑制BCa 5637和T24细胞的增殖和侵袭能力,且可以下调MMP9的蛋白表达水平;在BCa中,PARP1 mRNA与MMP9 mRNA的表达呈正相关(PARP1 vs MMP9:r=0. 105 4,P=0. 033 4)。结论:PARP1参与了膀胱癌的发生和发展过程,可作为膀胱癌潜在的治疗靶点。

小细胞肺癌分子标志物PARP1的研究进展

小细胞肺癌是一个侵袭性强的恶性肿瘤,其转移性和治疗效果均与非小细胞肺癌不同。肺癌的临床预后的改善,越来越多的与建立在致病机制基础上的分子标志物的靶向治疗有关。虽然已知小细胞肺癌有很多基因变异,但尚未明确某些分子靶向治疗能够延长小细胞肺癌的生存期。近年来,研究发现PARP1可以作为治疗小细胞肺癌患者的潜在靶点,小细胞肺癌对PARP抑制剂有显著的敏感性。本文主要就PARP1作为分子靶向治疗基因在小细胞肺癌中的研究进展进行详细总结。

PARP1及其抑制剂在肿瘤中的研究进展

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶[Poly(ADP-ribose) polymerase-1,PARP1]参与DNA损伤修复过程,在DNA损伤修复通路中扮演重要的角色;虽然PARP1抑制剂的作用机制尚未完全明确,但其发挥的肿瘤抑制作用为肿瘤的治疗带来了新希望.我们对PARP1及其PARP1抑制剂在肿瘤中的作用机制及研究进展做一个简单的综述.

PARP1在结直肠癌的表达及对SW620增殖与凋亡的影响

目的探究PARP1在结直肠癌的表达情况及其与癌临床病理特征的关系,以及结肠癌细胞株SW620、Lo Vo细胞PARP1的表达,分析其对结直肠癌细胞株SW620增殖与凋亡的影响。方法应用免疫组化检测39例结直肠癌组织及癌旁正常组织中PARP1的表达;实时荧光定量PCR(QPCR)检测结直肠癌细胞株SW620、Lo Vo、结肠正常黏膜细胞中PARP1的表达;转染PARP1基因sh RNA表达载体后,MTT检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡情况,QPCR、Western blotting分别检测cyclin D1及Caspase-3的基因与蛋白的表达情况。结果PARP1在结直肠癌组织中的阳性表达率为71.8%,显著高于癌旁正常组织的20.5%(P<0.05)。PARP1在结肠癌细胞株SW620、Lo Vo的表达显著高于正常结肠黏膜细胞。转染PARP1基因sh RNA后,PARP1水平明显减低,SW620细胞增殖能力减弱,凋亡能力增强。结论 PARP1在结直肠癌中高表达,可促进结直肠癌细胞增殖,抑制细胞凋亡。

PARP1在黑色素瘤发生发展及治疗中的作用研究进展

多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(Poly-ADP-ribosomal Polymerase 1,PARP1)是DNA损伤修复的关键酶。黑色素瘤是最具侵袭性的皮肤恶性肿瘤,但对晚期黑色素瘤尚无有效的治疗方法。目前的研究显示PARP1不但与黑色素瘤的发生发展关系密切,而且PARP抑制剂可以单独或者联合放疗、化疗以及靶向药物在黑色素瘤的临床治疗中发挥重要作用。本文针对PARP1与黑色素瘤的研究进展进行综述,从而为黑色素瘤发病机制研究以及临床治疗提供帮助。

PARP1基因抑制对卵巢癌细胞增殖及耐药性的影响

目的研究PARP-1基因在卵巢癌化疗耐药发生中的作用以及PARP-1小干扰RNA对紫杉醇耐药卵巢癌细胞增殖的影响。方法使用紫杉醇刺激紫杉醇耐药卵巢癌细胞SKOV3/TAX及敏感细胞SKOV3,应用小干扰RNA(siRNA)技术抑制PARP-1基因的表达;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)方法检测紫杉醇单独以及联合PARP siRNA对卵巢癌细胞增殖的影响。结果 SKOV3/TAX细胞中PARP-1表达高于SKOV3细胞;紫杉醇可以减少SKOV3细胞中PARP-1的表达和抑制细胞的增殖,而对SKOV3/TAX细胞无明显作用;PARP-1 siRNA可以明显增强紫杉醇对卵巢癌细胞增殖的抑制作用,逆转SKOV3/TAX细胞对紫杉醇的耐药性。结论 PARP-1在卵巢癌细胞表达水平与耐药性密切相关;PARP-1基因抑制可以增强紫杉醇对SKOV3增殖的抑制,逆转SKOV3/TAX对紫杉醇的耐药性。

DENND2D通过调控PARP1对非小细胞肺癌细胞系H1299中顺铂细胞毒性的影响

目的:检测肺癌细胞系H1299细胞中DENN/MADD domain containing2D(DENND2D)基因过表达对顺铂细胞毒性的影响,并初步探讨其机制。方法:应用瞬时和稳定转染两种方法使H1299细胞外源过表达DENND2D基因,以空载体组作为对照组,应用CCK-8比色法检测不同浓度顺铂作用下H1299细胞的存活情况,据此计算出IC值。利用Western blot方法检测外源过表达50DENND2D的H1299细胞多聚ADP核糖聚合酶[poly(ADP-ribose)polymerase-1,PARP1]的表达情况。利用顺铂处理外源过表达DENND2D的H1299细胞,并检测不同处理时间点(0、1、2、4和8h)H1299细胞多聚ADP核糖[poly(ADP-ribose),PAR]的表达情况。结果:顺铂对外源过表达DENND2D基因的H1299细胞毒性明显高于空载体组(IC值降低,P<0.05)。外源过表达DENND2D的50H1299细胞PARP1蛋白和PAR蛋白的表达均比空载体对照组低,且空载体对照组PAR的表达随时间推移呈上升趋势,而外源过表达DENND2D组则呈下降趋势。结论:DENND2D可能通过对PARP1的调控增强了顺铂对肺癌细胞系H1299的细胞毒性。

PARP1对NFATs的调控在病理性心肌肥大中的作用

目的 探究多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶1(PARP1)与活化T细胞核转录因子3(NFATc3)、NFATc4在病理性心肌肥大中的调控关系及其机制。方法 采用异丙肾上腺素(ISO)刺激原代心肌细胞24 h,在细胞水平建立心肌肥大模型;SD大鼠皮下注射ISO,在动物水平建立心肌肥大模型。使用核蛋白抽提试剂盒分离胞质和胞核蛋白,免疫印迹法检测相应蛋白的出入核及蛋白表达水平变化;利用免疫荧光,检测NFATc3、NFATc4的亚细胞定位;采用腺病毒感染的方法进行PARP1过表达,通过转染小干扰RNA进行PAPR1的敲低。结果 在细胞及动物水平上,ISO成功建立心肌肥大模型,均观察到ISO引起NFATc3和NFATc4在细胞核的聚集增加;同时,ISO可致PARP1的PAR化酶活性上升;单独过表达PARP1可诱导NFATc3和NFATc4入核增加,敲低PARP1抑制了ISO引起的入核增加,而给予PARP1抑制剂3AB则可一定程度逆转NFATc3和NFATc4的入核转位。结论 ISO可能通过诱导PARP1酶活性的上调,进而促进NFATc3和NFATc4的转位入核,从而诱导心肌肥大的发生。

PARP1在氧化应激诱导的DNA损伤及其修复过程中的作用

活性氧自由基（ROS）在代谢或炎症过程中定期产生,它的产生与抗氧化防御不平衡形成了氧化应激。氧化应激导致DNA损伤和促进炎症反应〔1,2〕。聚腺苷酸二磷酸核糖聚合酶-1（PARP1）作为DNA损伤的分子感受器,在氧化应激诱导DNA损伤时被激活,活化的PARP1介导碱基切除修复复合物参与受损DNA的修复。1 PARP1的结构及其功能1.1 PARP1的结构PARP1基因位于染色体1q41-42区。

PCV2复制起始区DNA互作蛋白的筛选及PARP1蛋白对病毒复制的调控

旨在筛选PK-15细胞中与猪圆环病毒2型(porcinecircovirustype2,PCV2)复制起始区(originofreplication,Ori)互作的细胞蛋白谱,并初步探究PARP1蛋白对PCV2复制的调控。利用DNA-proteinpulldown结合LC-MS/MS方法筛选PCV2复制起始区DNA互作蛋白;对互作蛋白进行GO分析以及KEGG通路富集分析,并绘制蛋白互作网络图。在对互作蛋白进行分析的基础上,选择聚(ADP-核糖)聚合酶1(PARP1)蛋白,开展了深入研究。构建了PARP1蛋白以及PCV2复制蛋白Rep真核表达质粒,并利用DNA-proteinpulldown及DNAIP试验验证PARP1蛋白与PCV2Ori的互作;通过Co-IP试验,研究了PARP1蛋白与PCV2Rep蛋白的互作;在细胞中过表达或沉默PARP1蛋白,通过qPCR方法检测对PCV2复制的影响。本研究共鉴定到130种可能与Ori互作的宿主蛋白,其中,与DNA功能相关的蛋白共有45种,主要涉及宿主DNA损伤修复及DNA复制功能;验证了PARP1蛋白与PCV2基因组Ori以及Rep蛋白互作。用siRNA沉默PARP1蛋白表达后,PCV2基因组复制效率显著下降,瞬时过表达PARP1蛋白,PCV2基因组复制效率显著提高。综上所述,本研究筛选到130种可能与PCV2Ori互作的细胞蛋白,发现PARP1蛋白可结合PCV2基因组Ori及Rep蛋白并促进PCV2的复制,为PCV2药物靶点选择及PCV2复制起始过程研究奠定了基础。