旋毛虫钙网蛋白对小鼠巨噬细胞和大鼠PBMC免疫功能的影响

[目的]本文旨在研究旋毛虫钙网蛋白(TsCRT)对宿主免疫系统的影响。[方法]将原核表达纯化的重组旋毛虫钙网蛋白(rTsCRT)进行Western Blot验证;将rTsCRT与小鼠巨噬细胞共孵育,检测该蛋白对小鼠巨噬细胞增殖、NO释放和凋亡的影响;将rTsCRT与大鼠外周血单核细胞(PBMC)共孵育,检测该蛋白对大鼠PBMC转录因子和细胞因子的影响。[结果]Western blot结果显示,rTsCRT可以被感染旋毛虫的大鼠血清所识别;rTsCRT可促进小鼠巨噬细胞的增殖和NO的分泌,抑制小鼠巨噬细胞的凋亡;rTsCRT下调大鼠PBMC转录因子T-bet、Gata-3和PU.1的转录水平,上调Foxp3、Ahr、RORγt和Bcl-6的转录水平;rTsCRT上调大鼠PBMC细胞因子IFN-γ、IL-17、IL-10、TGF-β、Il-9和IL-22的转录水平,下调IL-4和IL-21的转录水平。[结论]旋毛虫钙网蛋白可刺激宿主产生Th1、Th17、Treg、Th9和Th22等多种类型的免疫反应,抑制Th2和Tfh免疫,对宿主免疫调节作用复杂。

乙型肝炎病毒感染患者PBMC表面PD-1、Caspase-9在不同病情阶段中临床表达意义

目的探究乙型肝炎患者不同阶段的外周血单个核细胞(PBMC)表面程序性死亡受体-1(PD-1)、半胱氨酸天冬氨酸酶-9(Caspase-9)水平,寻找其临床表达意义。方法选取湘潭市中心医院感染性疾病与肝病科2020年3月至2022年9月进行治疗的224例乙型肝炎患者,根据其病情阶段将所有患者分成乙型肝炎轻度组(n=83)、乙型肝炎中度组(n=76)和乙型肝炎重度组(n=65)。另取同期肝癌患者21例作为肝癌组,同期健康体检人员70例归入健康组。比较各组乙型肝炎患者肝功能指标,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平,统计分析不同病情阶段与PBMC表面PD-1、Caspase-9水平的关系以及其对于病情阶段的预测价值。结果乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌患者的谷草转氨酶(AST)、谷丙转氨酶(ALT)、乙型肝炎DNA(HBV-DNA)都显著高于健康组,乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组AST、ALT依次升高,并且各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组患者以及肝癌组患者PBMC表面PD-1、Caspase-9水平明显高于健康组(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎中度组、乙型肝炎重度组和肝癌组Caspase-9水平依次降低,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。乙型肝炎轻度组、乙型肝炎重度组和肝癌组PBMC表面PD-1依次升高,各组差异有统计学意义(P<0.05);中度组PD-1和轻度组差异无统计学意义(P>0.05)。PBMC表面PD-1与AST、ALT呈正相关,与HBV-DNA呈负相关,而Caspase-9水平与AST、ALT呈负相关,与HBV-DNA呈正相关,PBMC表面PD-1、Caspase-9水平联合检测重度乙型肝炎发展为肝癌的AUC值为0.911,敏感度为90.31%,特异度为89.63%。结论乙型肝炎患者不同阶段的PBMC表面PD-1、Caspase-9水平有显著差异,且两者表达水平与肝功能指标存在相关性,进行PD-1、Caspase-9的联合检测可以对重度乙型肝炎发展为肝癌进行预测。

补硒治疗慢性肝病患者PBMC功能紊乱的临床价值

目的 探讨应用口服补硒方法纠正慢性肝病患者外周血单个核细胞 (PBMC)免疫功能紊乱的临床价值。方法 患者口服补硒 (2 0 0～ 30 0 μg·d-1) 8～ 12周后分离PBMC ,分别对比观察硒作用前后PBMC膜流动性、白细胞介素 2受体 (IL 2R)表达及其分泌IL 2活性、过氧化脂质丙二醛 (MDA)含量的变化 ,并结合体外PBMC培养实验结果 ,探讨其可能机制。结果 口服补硒治疗后 ,患者PBMC膜流动性、IL 2R表达及其分泌IL 2活性均显著提高 ,血中LPO含量显著减少 ,与未补硒组比较差别均有显著性意义 (P <0 .0 5 ;P <0 .0 1)。体外培养患者的PBMC外加硒作用后上述指标呈相似变化。结论 口服补硒可纠正慢性肝病患者PBMCIL 2系统的功能紊乱 ,其机制可能与抑制PBMC膜的脂质过氧化损伤 。

PBMC中HBV cccDNA与HBV宫内感染关系的研究

目的 :对外周血单个核细胞 (peripheralbloodmononuclearcells,PBMC)中乙型肝炎病毒 (HBV)共价闭合环状DNA (covalentlyclosedcircularDNA ,cccDNA)进行扩增 ,并对其产物直接测序鉴定 ,以证实PBMC为HBV肝外复制的场所 ,从而进一步证实PBMC感染为乙型肝炎宫内感染的途径之一。方法 :选择性PCR扩增PBMC中HBVcccDNA ,并对 1例阳性产物直接测序鉴定 ,测序结果与GeneBank中已知序列进行同源性比较。结果 :HBsAg阳性孕妇PBMCHBVcccDNA的检出率为 9 .93% ,新生儿PBMCHBVcccDNA的检出率为 4 . 5 8% ,PBMCHBVcccDNA与公布的已知序列的同源性为 10 0 %。结论 :PBMC为HBV肝外复制的场所 ,PBMC感染很可能是乙肝宫内感染的传播机制之一。

慢性乙型肝炎患者PBMCs中ROG、GATA3和T-bet mRNA水平及其意义

目的探讨慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(PBMC)中转录因子ROG、GATA3和T-bet m RNA水平变化及意义。方法收集135例慢性乙型肝炎患者(轻度45例、中度42例、重度48例)和15例健康志愿者(正常对照组)的外周血,分离单个核细胞,提取总RNA,用实时定量PCR的方法检测ROG、GATA3和T-bet m RNA水平。应用SPSS16.0软件进行统计分析。结果慢性乙型肝炎轻度、中度组和重度组患者外周血PBMCs中T-bet m RNA表达水平均明显高于健康对照组人群,组内比较差异均具有统计学意义(P<0.05)。慢性乙型肝炎重度组患者外周血PBMCs中ROG m RNA表达水平明显高于健康对照组人群、轻度组和中度组患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。而轻度组、中度组患者和健康对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。慢性乙型肝炎中度组和重度组患者外周血PBMCs中GATA3 m RNA表达水平明显高于健康对照组人群和轻度组患者,差异均具有统计学意义(P<0.05);而轻度组和健康对照、中度组患者和重度组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。慢性乙型肝炎轻度、中度组和重度组患者T-bet/GATA3比值明显高于健康对照组人群,差异均具有统计学意义(P<0.05);但3组之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。ROG表达水平与GATA3和T-bet/GATA3比值均无相关性(P>0.05)。结论 ROG、GATA3和T-bet在慢性乙型肝炎患者外周血PBMCs中表达水平上调,并参与疾病的发生和疾病进展。ROG在纠正和维持Th1/Th2的新平衡状态过程中起重要作用。

IL-12、IL-7、IL-2体外协同诱导人PBMC增殖和PBMC杀瘤活性的实验研究

研究了重组ＩＬ１２、ＩＬ７、ＩＬ２协同对健康人外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）的体外增殖和杀瘤活性的影响。结果表明，高浓度ＩＬ２与低浓度ＩＬ２协同可引起ＰＢＭＣ明显增殖，若在该培养体系中加入低浓度的ＩＬ２，可使这种增殖效应显著增强。如果加大ＩＬ１２剂量时会产生更强的细胞毒活性，并呈现剂量依赖关系。在此培养条件下的培养上清中亦检出了较高水平的ＩＦＮγ。对培养３～１４ｄ的协同刺激细胞表型分析显示，ＣＤ５６抗原阳性细胞百分率呈递增趋势，提示ＣＤ５６＋的ＮＫ细胞构成了产生增殖和杀伤效应的主要细胞群体。

丙型肝炎病毒感染患者PBMC细胞因子的分泌水平

目的 :检测丙型肝炎病毒 (HCV)感染患者外周血单个核细胞(PBMC)体外培养后 ,培养上清中细胞因子分泌的水平 ,以反映HCV患者体内的免疫状况。方法 :患者PBMC培养上清中的细胞因子 (IL 2、IL 4、IL 10、IL 12、TNF γ、TNF α)采用ELISA进行检测。结果 :(1)HCV感染患者的PBMC培养 72h后 ,细胞因子检测结果表明 :与正常对照组相比较 ,HCV患者PBMC培养上清中TNF γ、IL 10和TNF α的水平明显升高 ,而没有检测到IL 2、IL 4、和IL 12的分泌产物。 (2 )轻、中度慢性肝炎 ,以及代偿期、失代偿期肝硬化患者间细胞因子的水平未见明显差异。结论 :(1)HCV感染患者体内细胞因子的分泌倾向于Th2型细胞因子占优势。 (2 )HCV感染患者PBMC分泌IL

人参皂甙与IL-2协同诱导PBMC对恶性脑胶质瘤细胞杀伤活性研究

目的 :探索提高恶性脑胶质瘤治疗效果的新途径。方法 :用人参皂甙 (ginsenodide ,GS)与白细胞介素 2 (IL - 2 )协同诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)制成GS -LAK细胞 ,用MTT法测定其对恶性脑胶质瘤细胞 (BT32 5 )的杀伤活性 ,并与LAK细胞相比较。结果 :效应细胞GS -LAK在增殖数量和杀伤恶性脑胶质瘤细胞活性等方面均优于LAK细胞 ,且IL - 2用量减少。结论 :采用GS -LAK细胞 ,可提高效应细胞的数量和活性 ,为恶性脑胶质瘤的免疫治疗打下了理论基础。

携带microRNA-383重组慢病毒的包装及其上调PBMCs中Foxp3mRNA的表达

目的包装携带microRNA-383(miR-383)的重组慢病毒,并观察其对正常人外周血单个核细胞(peripheral bloodmononuclear cells,PBMCs)中Foxp3 mRNA转录的影响。方法将4个串联的miRNA-383前体序列亚克隆入慢病毒转移载体pHAGE-CMV-MCS-IZsGreen,构建重组载体,命名为pHAGE-miR-383。将pHAGE-383、包装质粒psPAX2与包膜质粒pMD2.G共转染入HEK 293T细胞进行重组慢病毒包装。进而分别采用定量PCR和RT-PCR检测慢病毒miR-383和Mock感染48 h后细胞中的miR-383的表达和转录因子Foxp3 mRNA的转录水平。结果定量PCR证实携带miR-383的重组慢病毒包装成功,滴度为1×107 TU/ml。以MOI为5的慢病毒感染HEK 293T细胞后miR-383表达明显增多。RT-PCR结果显示,miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的表达。结论成功包装出含有miR-383前体序列的重组慢病毒,而且慢病毒miR-383能够上调PBMCs中Foxp3 mRNA的转录水平,为进一步研究其对调节性T细胞的调控作用奠定基础。

不同手法针刺足三里穴对人PBMC的STAT5信号转导途径的作用

目的研究不同手法针刺对外周血单核细胞(PBMC)细胞信号转导子和转录活化子(STAT5)mRNA和DNA的结合能力的影响。方法将30例健康受试者分补法针刺组(补足三里)、泻法针刺组(泻足三里)、正常对照组各10例。采集外周血经Ficoll-Hypaque梯度离心获得PBMC,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)进行STAT5mRNA半定量检测;凝胶阻滞电泳(EM-SA)分析PBMC中STAT5与DNA结合活性。结果补法针刺足三里穴可显著提高人PBMC的STAT5mRNA基础转录水平和STAT5与特定DNA的结合能力(P<0·01),但泻法针刺足三里穴的试验结果与健康人正常水平无显著性差异(P>0·05)。结论补法针刺免疫调节作用有细胞因子及JAK/STAT信号转导途径的参与,但影响STAT5mRNA转录水平及DNA结合的原因并不明了。

耐力训练及补充中药多糖对大鼠PBMC分泌细胞因子和血清中细胞因子含量的影响

目的:探讨6周耐力训练及补充多糖提取物对大鼠血清中3种细胞因子水平和PBMC分泌3种细胞因子能力的影响。方法:120只雄性Wistar大鼠随机分为6组:耐力训练+黄芪多糖组、耐力训练+牛膝多糖组、单纯耐力训练组、安静+黄芪多糖组、安静+牛膝多糖组、安静对照组。大鼠进行6周递增负荷游泳训练后,观察大鼠血清中IL-2、IL-4、IL-10水平的改变以及外周血单个核淋巴细胞(PBMC)分泌IL-2、IL-4、IL-10能力的变化。结果:长期耐力训练后可造成大鼠血清IL-下降、IL-4、IL-10升高,PBMC分泌IL-4能力增高,表明长期耐力训练后Th1和Th2两型细胞的功能失衡。6周耐力训练同时补充黄芪多糖和牛膝多糖提取物能防止大鼠血清IL-2的明显下降及IL-4、IL-10升高;防止大鼠PBMC分泌IL-4的明显增高结论:长期耐力训练能引起辅助T细胞(Th)两个亚型Th1和Th2两型细胞功能失衡,这可能是长期耐力训练引起运动性免疫低下的原因之一。牛膝多糖和黄芪多糖提取物对耐力训练大鼠Th1和Th2型细胞平衡有一定的调节作用。

慢性乙型肝炎PBMC凋亡及淋巴细胞亚群的检测

目的 :了解慢性 /慢性重型乙型肝炎外周血淋巴细胞激活诱导细胞死亡 (AICD)现象的存在情况、各免疫细胞的状况、AICD与淋巴细胞状况的关系 ,以探讨乙型肝炎慢性化和重型化的机制。方法 :利用慢性、慢性重型乙型肝炎病人和健康献血员外周血单个核细胞 (PBMC)在PHA P刺激下培养 72h ,通过流式细胞仪检测PBMC的凋亡情况 ;采用流式细胞仪结合全自动血液分析仪对慢性、慢性重型乙型肝炎病人及正常对照组外周血各淋巴细胞亚群进行检测。结果 :慢性乙型肝炎组PBMC凋亡率高于慢性重型乙型肝炎组 ( P<0 0 1) ,高于正常对照组 ( P <0 0 1)。慢性乙型肝炎组总淋巴细胞百分率高于慢性重型乙型肝炎组 (P <0 0 1) ,慢性重型乙型肝炎组淋巴细胞数低于正常对照组 (P <0 0 1) ;CD3 +、CD3 +CD4 +细胞数低于正常对照组 (P <0 0 1) ,低于慢性乙型肝炎组 (P <0 0 5 ) ;CD3 +CD8+细胞数低于正常对照组 (P <0 0 5 ) ,低于慢性乙型肝炎组 (P <0 0 5 )。单核细胞百分率高于正常对照组 (P <0 0 1) ,高于慢性乙型肝炎组 (P <0 0 5 )。结论 :慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞活化与凋亡共存 ,慢性重型乙型肝炎患者外周血淋巴细胞消耗严重 ,AICD参与乙型肝炎慢性化、重型化的发生机理。

人PBMC不同途径转输SCID小鼠后表型及杀伤活性的动态观察

肿瘤生物治疗的核心是调整机体的免疫状态,发挥识别和攻击肿瘤细胞的作用。在众多的动物体内模拟实验中,60年代以前,采用鼠源肿瘤-鼠源免疫系统(鼠-鼠模式)。60年代以后,由于单纯Ｔ淋巴细胞缺乏的裸鼠问世,出现了人源肿瘤-鼠源免疫系统(人-鼠模式)。80年代以后,Ｔ、Ｂ淋巴...

哮喘患儿PBMC产生IL-4、IL-6和IL-10水平及意义

哮喘是儿童反复发作的常见疾病，因其诱因多，机制复杂，给防治带来很大困难。近有学者提出Ｔ辅助细胞亚群（Ｔｈ１和Ｔｈ２）功能失衡与哮喘发病密切相关［１］，我们拟通过测定哮喘患儿外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）产生Ｔｈ２类细胞因子的能力，进一步阐明Ｔｈ细胞功能...

天花粉蛋白对人PBMC分泌细胞因子水平及离子通道的影响

目的：研究天花粉蛋白对正常人外周血单个核细胞（PBMC）分泌细胞因子水平及其对T淋巴细胞离子通道的影响，揭示其免疫调节作用机理。方法：用放射免疫分析法检测天花粉蛋白对PBMC在植物血凝素-M（PHA－M）刺激下分泌IL-2、IL-6水平的影响；用膜片钳技术检测天花粉蛋白对T淋巴细胞膜电压依赖性钾通道的影响。结果：天花粉蛋白促进正常人PBMC在PHA－M刺激下分泌IL-2和IL-6；增大T淋巴细胞膜电压依赖性钾通道的电流强度。结论：天花粉蛋白可通过增大T淋巴细胞膜上电压依赖性钾通道电流强度及促进PBMC分泌IL-2和IL-6，增强机体免疫功能。

IL-12对狼疮肾炎PBMC中信号传递分子STAT_3、STAT_4的作用

目的 :为了探讨IL 12对狼疮肾炎PBMC发挥生物学作用的细胞内信号传递机制。方法 :采用MTT、免疫沉淀、免疫印迹等方法 ,检测IL 12对PBMC增殖及STAT3、STAT4的作用 ,并比较在狼疮肾炎活动期、静止期的差别。结果 :发现与正常人对照及静止期相比 ,IL 12对活动期PBMC不需要IL 2的预诱导 ,可促进PBMC增殖并在短时间内激活STAT3、STAT4,而IL 2对STAT4无作用。结论 :表明IL 12对PBMC的作用可通过STAT3、STAT4途径发挥 ,活动期PBMC存在异常活化 ,这可能是IL

丙型病毒性肝炎患者PBMC mIL-2R的表达

目的 探讨丙型病毒性肝炎患者膜白介素 2受体 (mIL 2R)表达水平及其在丙肝转归中的作用。方法 用PCR和生物素 链霉亲和素法对 78例丙肝患者外周血单个核细胞 (PBMC)分别进行HCV RNA和植物血凝素诱导前后mIL 2R的检测。结果 丙肝患者PBMC静息期和诱导期mIL 2R表达水平分别为 (2 .94± 0 .88) %、(31.5 3± 3.38) % ,与正常对照相比 ,差异有显著性 (P <0 .0 1)。其中 ,急性丙肝患者静息期和诱导期mIL 2R表达水平分别为 (3.2 5± 0 .94 ) %、(32 .82± 3.84 ) % ,慢性丙肝患者静息期和诱导期mIL 2R表达水平分别为 (2 .77± 0 .84 ) %、(30 .97± 3.16 ) % ,两者相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。PBMC内HCV RNA(+)者静息期和诱导期mIL 2R表达水平分别为 (2 .37± 1.16 ) %、(30 .4 1± 4 .0 1) % ,PBMC内HCV RNA(- )者静息期和诱导期mIL 2R表达水平分别为 (3.2 1± 0 .80 ) %、(32 .15± 3.0 9) % ,两者相比差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论 丙肝患者体内mIL 2R水平降低 ,与丙肝的慢性化程度似有一定关系 ;HCV侵入PBMC后可进一步抑制mIL

自体可溶性肿瘤抗原协同IL-2诱导外周血PBMC增殖及杀瘤

探讨自体可溶性肿瘤抗原（ＴＳＡ）与ＩＬ┐２共同诱导ＰＢＭＣ增殖及杀瘤作用。方法分三组用ＡＰＡＡＰ法观察细胞表型，ＭＴＴ法测定细胞增殖及杀瘤活性（靶细胞为ＭＮＫ４５系人胃低分化腺癌细胞）。结果培养第７天ＴＳＡ（１０μｇ／ｍｌ）协同ＩＬ┐２诱导ＰＢＭＣ增殖显著高于单独ＩＬ┐２诱导（Ｐ＜０．０１）。且ＣＤ＋８及ＣＤ＋２５表达率增高，差异有显著性（Ｐ＜０．０１０，当效／靶比为８０∶１时ＩＬ┐２诱导的ＰＢＭＣ杀瘤活性为４８．６％，而１０μｇ／ｍｌＴＳＡ协同诱导ＰＢＭＣ杀瘤活性为８６．３％。结论为研究ＴＡＫ细胞提供了实验依据。

PPA制剂对人PBMC分泌细胞因子水平的影响

目的 探讨绿脓杆菌菌毛制剂 (PPA)对正常人外周血单核细胞 (PBMC)分泌细胞因子水平的影响 ,了解该制剂的免疫作用。方法 采用ELISA法 ,测定PPA刺激下 ,体外培养的正常人PBMC分泌IL -2 ,IFN -γ和IL -10的水平变化。结果 培养上清液中刺激组IL -2 ,IFN -γ和IL -10含量分别为 ( 163 74± 2 3 5 1)pg/ml ,( 92 4 12± 2 14 3 2 )pg/ml和 ( 3 3 76± 9 83 )pg/ml,而对照组则分别为 ( 3 0 80± 14 42 )pg/ml ,( 4 6 80± 15 2 9)pg/ml和 ( 4 1 61± 10 75 )pg/ml。刺激组IL -2和IFN -γ含量明显增高 ,而IL -10的含量则下降 ,其差异均有显著性 (P <0 0 1)。结论 PPA能促进Th1细胞因子的产生 ,抑制Th2细胞因子的分泌 ,能有效增强机体的细胞免疫功能。

不同病期支气管哮喘血清及PBMC条件培养液IL-8、TNF-α变化

目的：探讨ＩＬ－８、ＴＮＦ－α在儿童支气管哮喘发病中的作用。方法：采用酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）检测３５例发作期、１８例稳定期哮喘患儿血清及外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）条件培养液中ＩＬ－８、ＴＮＦ－α水平。结果：哮喘发作期血清ＩＬ－８及ＴＮＦ－α明显增高，随病情缓解逐渐降低，达到或接近对照组水平。与对照组比较，哮喘发作期、稳定期ＰＢＭＣ条件培养液ＩＬ－８、ＴＮＦ－α水平显著增高；无论发作期抑或稳定期哮喘患儿ＰＢＭＣ经ＰＨＡ刺激所产生的ＴＮＦ－α、均显著高于未加ＰＨＡ刺激所产生的水平，而ＰＢＭＣ产生的ＩＬ－８则无类似变化。结论：儿童哮喘存在ＩＬ－８、ＴＮＦ－α合成或释放失调。