荧光定量PCR法与培养法检测解脲支原体结果比对分析

目的通过比较荧光定量PCR法(qPCR)和培养法在解脲支原体(UU)检测中的符合率,为临床解脲支原体检测方法的选择提供参考依据。方法收集近期就诊于该院112例患者的生殖道分泌物标本,分别采用qPCR法与培养法检测UU。结果在112例标本中,UU培养法阳性53例,阳性率为47.32%,qPCR法阳性61例,阳性率54.46%(χ2=1.143,P=0.285>0.05)。61例qPCR法阳性的UU浓度范围1.60×10^(3)-1.04×10^(7)copy/mL,其中10^(3)copy/mL 12例(19.7%),10^(4)copy/mL 15例(24.6%),10^(5)copy/mL 22例(36.1%),10^(6)copy/mL 9例(14.7%),10^(7)copy/mL 3例(4.9%)。培养法阴性而qPCR法阳性病例9例,qPCR法测定浓度范围10^(3)~10^(5)copy/mL。结论qPCR法检测UU的阳性率略高于培养法,两种方法不符合结果的UU测定浓度分布在10^(3)-10^(5)copy/mL之间。

PCR法检测乙肝DNA准确性的主要影响因素分析

研究PCR法检测乙肝DNA准确性的主要影响因素。方法 本文观察对象均选自河池市第三人民医院乙型肝炎病毒感染患者当中,共抽选100例,样本抽选时间段介于2024年2月至2024年7月间。以上患者均接受PCR法检测,遵照临床诊断结果(金标准),对影响PCR法测定乙肝DNA准确性的相关因素展开分析。结果 PCR法检测阳性占比为91.00%,阴性占比为9.00%。结果 呈阴性患者的实验室环境不佳、标本抗凝血、标本储存不合理、核酸提取方法不当、仪器准备不当、试剂质量不佳占比均高于阳性患者,P<0.05。结论 PCR法检测乙肝DNA具有较高的准确性,但是若存在检验样本储存不当、抗凝血、核酸提取方法不合理等情况,可能对检验结果的准确性产生影响,需落实相应的管控对策,以保证试验结果的准确性,将病症误诊和漏诊率减少。

胶体金法与实时荧光定量PCR法检测甲乙型流感病毒的应用价值

目的 探讨胶体金法与实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测甲乙型流感病毒的应用价值。方法 选取2023年1月至2023年12月我中心进行检测的80例流感患者,均行胶体金法和PCR法检测,比较两种方法检查所用时间和检查结果。以综合检查结果为金标准,分析两种方法与金标准结果的一致性。结果 胶体金法检查所用时间(15.46±3.82)min短于PCR法(180.28±32.09)min,差异有统计学意义(P<0.05)。80例流感患者经综合检查发现甲型44例、乙型36例;胶体金法检出甲型42例、乙型31例,检出率为91.25%;PCR法检出甲型43例、乙型34例,检出率为96.25%。两种方法诊断效能对比,差异无统计学意义(P>0.05)。胶体金法、PCR法检查结果与金标准结果一致性均极好(Kappa=0.891、0.938,P<0.05)。结论 胶体金法、PCR法鉴别诊断甲、乙型流感病毒的准确度、灵敏度及特异度均较高,与临床综合检查结果一致性均较好,胶体金法检查所用时间更短,临床应用时可灵活选择检测方法,为临床鉴别诊断提供便利。

结核杆菌检验中涂片抗酸染色法与荧光定量PCR法的价值对比

目的比较涂片抗酸染色法与荧光定量聚合酶链式反应(PCR)法在检验结核杆菌中的价值,为肺结核诊断提供依据。方法选取2021年8月至2023年8月本中心就诊的60例疑似肺结核患者,采集患者痰液标本,分别采用荧光定量PCR法、涂片抗酸染色法对其进行检测,并将痰培养所得结果作为本研究的“金标准”,就两种检测方法的具体诊断效能(特异度、准确度与灵敏度、阳性预测值、阴性预测值)进行对比。结果在疑似肺结核患者60例当中,通过痰培养确诊肺结核患者38例,所占比重为63.33%;荧光定量PCR法诊断阳性36例,涂片抗酸染色法为34例。荧光定量PCR法检测的特异度(95.45%)、准确度(93.33%)、灵敏度(92.11%)、阳性预测值(97.22%)、阴性预测值(87.50%)均较涂片抗酸染色法(68.18%、70.00%、71.05%、79.41%、57.69%)高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论采用荧光定量PCR法对结核杆菌进行检测,其在诊断肺结核方面的效能,优于涂片抗酸染色法,更具适用性。

基于荧光PCR法的RASSF1A基因甲基化定性检测方法开发

目的:使用高通量测序法辅助开发RAS相关区域家族1A(Ras-Association Domain Family 1A,RASSF1A)基因甲基化定性检测试剂盒(荧光PCR法)。方法:提取37例肺癌血浆样本DNA进行亚硫酸氢盐修饰转化,使用高通量测序方法检测样本的亚硫酸氢盐转化效率和RASSF1A基因CpG位点的甲基化水平,之后使用荧光PCR法检测样本RASSF1A基因的甲基化状态。结果:高通量测序显示样本DNA的平均转化效率为99.47%;根据CpG位点甲基化水平的双向聚类分析结果,筛选出第26~30号CpG位点作为荧光PCR法的检测位点,以甲基化水平5%作为阈值线,ΔCt Cut-off值为9,得出两种检测方法对37例样本的测定结果一致。结论:本研究借助高通量测序技术成功构建基于荧光PCR法的RASSF1A基因甲基化定性检测方法,操作简便、成本低、效率高,适用于临床RASSF1A基因甲基化状态常规化检测。

胶体硒法HIV快速检测与实时荧光定量PCR法检验的一致性研究

目的:探究胶体硒法人类免疫缺陷病毒(HIV)快速检测与实时荧光定量PCR法检验的一致性。方法:选取2020年1月—2021年1月到艾滋病自愿咨询检测(VCT)门诊就诊的987例患者为研究对象,均接受胶体硒法、实时荧光定量PCR法检验,以免疫印迹法为金标准,比较不同检测方式的诊断效能、不同检测方式之间检验的一致性,对比不同方式对“窗口期”弱阳性抗体检测情况及不同检测方式的一致性。结果:987例疑似HIV高感染风险患者中,经免疫印迹法检测发现,373例阳性,614例为阴性;胶体硒法与实时荧光定量PCR法比较无统计学差异(P>0.05)。胶体硒法诊断结果与免疫印迹法诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.539),等级为中度;实时荧光定量PCR法与免疫印迹法诊断结果之间具有一致性(Kappa值=0.872),等级为高度;经免疫印迹法检测45份“窗口期”弱阳性抗体实时荧光定量PCR法检测43例阳性,胶体硒法检测42例阳性,实时荧光定量PCR法的灵敏度、准确度均显著高于胶体硒法(P<0.05)。胶体硒法与实时荧光定量PCR法胶在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差(Kappa值=0.357)。结论:胶体硒法与实时荧光定量PCR法对HIV检测的效果具有一致性,实时荧光定量PCR法准确性略高;胶体硒法与实时荧光定量PCR法在“窗口期”弱阳性抗体诊断结果中的一致性较差,实时荧光定量PCR法在“窗口期”弱阳性抗体血清检测中具有较高的检测价值。

传统方法、荧光定量PCR法、LAMP法检测痰液标本中肺炎链球菌的价值

目的:分析传统方法、荧光定量聚合酶链反应(PCR)法、环介导恒温扩增技术(LAMP)法检测痰液标本中肺炎链球菌的价值。方法:选取2022年1月—2023年7月医院收治的100例肺炎患者,均按相同方法严格采集患者的痰液标本后,采用痰培养法、荧光定量PCR法、LAMP法检测肺炎链球菌,分析不同检测方法的检测价值。结果:100例肺炎患者痰液标本经痰细菌培养法、荧光定量PCR法、LAPM法检测结果比较,差异无统计学意义(P>0.05),与痰细菌培养法相比,荧光定量PCR法、LAPM法对肺炎链球菌检测一致性高(Kappa=0.826、0.830,P<0.05)。以痰细菌培养法作为金标准,荧光定量PCR法、LAPM法对肺炎链球菌检测价值比较,无统计学差异(P>0.05)。结论:传统方法、荧光定量PCR法、LAMP法检测痰液标本中肺炎链球菌均有较高价值。

实时荧光PCR法血清分型与全面生化反应对沙门氏菌的临床检验价值

目的:分析实时荧光PCR法血清分型与全面生化反应对沙门氏菌的临床检验价值。方法:选取医院2021年1月—2023年6月期间收治的疑似为沙门氏菌感染的患者100例,将患者粪便标本采用全面生化反应检验法,以传统微生物检验法为对照,比较两种检验方法的检出率;再分别采用传统玻片血清凝集分型法和实时荧光PCR法血清分型将鉴定出的沙门氏菌进行血清学分型,通过统计学分析方法比较两种分型方法的符合率。结果:全面生化反应检验诊断沙门氏菌的检出率(62.00%)较微生物检验法(54.00%)高,但差异无统计学意义(P>0.05);全面生化检验对沙门氏菌的诊断敏感度为95.08%、阴性预测值为92.11%,均高于微生物检验法的81.97%、76.09%,差异有统计学意义(P<0.05)。与传统玻片血清凝集分型检验相比,分子血清分型试剂盒检验对沙门氏菌血清学分型的检出符合率高(Kappa值=0.842)。全面生化反应检验、实时荧光PCR法血清分型的检验时间均短于微生物检验法、玻片血清凝集法(P<0.05)。结论:沙门氏菌临床检验中全面生化反应检验与实时荧光PCR法血清分型检验均有一定价值,若将两种方法联合应用可快速检出沙门氏菌,且能对细菌进行准确分型。

荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果分析

目的分析浅析荧光实时定量PCR法检测流感病毒核酸的质控结果。方法在2021年5月至2022年11月期间,120例流感病毒感染样本进行研究。对这些样本的流感病毒RNA进行了核酸抽提,并利用PCR实时荧光定量技术进行检测以评估其效果。结果运用该技术检测到乙型流感病毒44例,甲1型40例,以及甲3型36例。所有检测结果均符合分子生物学操作的质控标准,合格率达到100.0%。结论实时核酸PCR技术在临床流感病毒检测中被广泛应用。PCR实时荧光定量检测法在流感病毒核酸检测中的表现精确且迅速,适宜作为应对突发公共卫生事件的首选检测手段。

乙肝肝炎病毒检测中荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光的对比分析

探析荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光在乙肝肝炎病毒检测中的应用效果。方法 选用96例疑似乙肝患者,均进行荧光定量PCR法与时间分辨免疫荧光病毒检测,以细菌培养作为金标准,比较不同检测手段的阳性检出率、检验结果及检测效能。结果 荧光定量PCR法的检测符合率、灵敏度,高于时间分辨免疫荧光法,而特异度低于时间分辨免疫荧光法。结论 荧光定量PCR法和时间分辨免疫荧光两种方法各有优缺点,适用于不同的检测环境和需求。在实际应用中,需要根据检测要求和实际情况进行选择,确保有效性和准确性。

PCR法定性检测食用油脂中转基因成分

食用油脂 (尤其是精炼油 )被认为几乎不含DNA和蛋白质等生物大分子。针对食用油脂中DNA含量极低、破坏严重的特点 ,成功地建立了食用油脂中DNA提取方法 ,并从中检测出玉米、大豆内源基因 (IVR、Lectin)以及外源抗虫基因 [CryIA(b) ]和抗除草剂基因 (EPSPS) ,为油脂进行核酸类生物性检测提供了一种简捷有效的方法。

单菌落PCR法直接快速鉴定重组克隆

利用单菌落PCR法直接筛选含有GFP、LTB-ST外源基因的重组克隆,阳性克隆可以扩增出目的条带,和质粒PCR扩增的结果一致。同时,单菌落PCR法也可应用于重组质粒转化后的农杆菌的筛选,单菌落PCR法的扩增结果和农杆菌液扩增的结果一致。结果表明,单菌落PCR法是一个有效简便的鉴定重组阳性克隆的方法。

多引物对巢式PCR法检测HBV基因型的流行病学分析

目的:掌握我国北方地区乙型肝炎病毒(HBV)感染者HBV基因型分布情况,为了解其流行病学及临床意义提供基础. 方法:首先采用巢式PCR法对801份血清进行HBV DNA检测,其中包括154份健康人血清、594份HBV感染的各类肝病患者及53例抗HCV阳性血清标本.再采用HBV A- F六个主要基因型特异性多引物对巢式PCR法对HBV DNA 进行基因型检测及分析. 结果:在801例血清标本中有464例(57.9%)检测到HBV DNA,其中154名健康人血清阳性率为8.4%(13/154), 594例不同临床表现的乙肝患者血清HBV DNA总检出率为74.4%(442/594),二者相比差异显著(P<0.01);抗HCV阳性血清中检出HBV DNA占17%(9/53).464例HBV DNA阳性标本中,HBV基因型检出率分别是:A型为5.2%(24/464), B型为7.1%(33/464),C型为77.2%(358/464),D型2.4% (11/464),未检出E和F型,但尚有14例(3%)同时检出B型和C型,有24例未检出型别.急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化、原发肝癌各不同临床表现组间基因型分布无统计学差异. 结论:结果看出,我国北方地区感染的HBV基因型存在A、B、C、D四个型别,其中C型为主(77.2%),各临床表现组基因型分布也均以C型为主,组间无统计学差异.

实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌

目的建立实时荧光PCR法检测鼠伤寒沙门氏菌的方法。方法基于鼠伤寒沙门氏菌II型限制酶基因,设计引物及Taqman探针,利用实时荧光PCR进行特异性、灵敏性及模拟样品的检测实验。结果特异性探针可从25种血清型沙门氏菌(共49株)及11株阴性对照菌株中检测出全部的11株鼠伤寒沙门氏菌。以鼠伤寒沙门氏菌梯度稀释菌液DNA为模板进行实时荧光PCR实验,菌株模板浓度与Ct值呈良好线性关系,线性系数(R2)为0.998,扩增效率90%,最低检测浓度300cfu/mL。对已接种鼠伤寒沙门氏菌的4种模拟样品同时进行实时荧光PCR检测和传统方法鉴定,两者结果一致。结论此方法特异、灵敏、准确,适于食品中鼠伤寒沙门氏菌的检测。

PCR法检测耐热耐酸菌条件的优化

以耐热菌为研究对象 ,对PCR法快速检测耐热菌的扩增条件 :Taq酶浓度、Mg2 +浓度、退火温度、循环温度 /时间、循环次数 5个方面进行了优化。最终得到PCR反应最佳条件 :5 0 μL扩增体系中 ,Taq酶浓度 2U/mL、Mg2 +浓度 2 0mmol/L、退火温度 5 8℃。扩增程序 :94℃预变性 4min后进入PCR循环 ,即 94℃ /3 0S -5 8℃ /3 0S -72℃ /3 0S ,循环 3 5次 ,72℃下延伸 5min。

PCR法检测水牛乳中致病性大肠杆菌O157:H7的研究

针对大肠杆菌O157:H7型菌株的志贺祥毒素Stx I和Ⅱ基因的特异序列设计并合成两对引物,确定了大小为350 bp和262 bp的检测引物都具有较强的特异性。其中采用Stx I引物结合PCR技术可直接检测水牛乳中大肠杆菌O157:H7,灵敏度高,检出限为8.58×103m L^(-1),总的检测时间可控制在24 h内可完成,使得水牛乳中的大肠杆菌O157:H7的检测能够快速、准确、灵敏的进行。

改良的甲基化特异PCR法在人宫颈癌Hela细胞检测中的应用

目的介绍一种CpG岛甲基化分析方法,即甲基化特异PCR法(methylation-specific PCR,MSP)以及对该方法的改良。方法用亚硫酸氢盐修饰被测DNA后,进行甲基化与非甲基化特异PCR的扩增,并对MSP法进行改良。应用该法分析人宫颈癌Hela细胞中RASSF1A、p16基因5'CpG岛甲基化状态。结果发现人宫颈癌Hela细胞中有RASSF1A、p16基因的甲基化,改良后的MSP更容易获得较好的效果。结论MSP法是一种较为简便、灵敏和具特异性的甲基化检测方法,改良后该方法更加简便可行。

利用直接原位PCR法探讨柯萨奇B3病毒与心肌炎的病原学关系

目的 探讨柯萨奇 B3病毒 (CVB3 )感染与急性心肌炎的病原学关系。方法 应用生物素标记的核苷酸直接掺入法 ,建立了直接法原位逆转录 -聚合酶链式反应 (RT-PCR)技术 ,分别对感染的 He L a细胞、病毒性心肌炎鼠心肌样本及临床心肌炎的心肌活检标本中的 CVB3进行检测。结果 病毒感染的 He L a细胞可见阳性信号 ,细胞呈蓝紫色 ,而未感染的 He L a细胞无阳性信号 ,细胞不着色。在 CVB3感染的病毒性心肌炎小鼠心肌组织中可检测到病毒 RNA的存在。 16例病理学及临床诊断为心肌炎的患者心肌组织中 ,7例检测到 CVB3 RNA,而 16例正常心肌标本中均为阴性。结论