PCR-反向点杂交法在外阴阴道念珠菌病诊断及白念珠菌耐药基因突变检测中的应用

目的评价PCR-反向点杂交法用于念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测的应用价值。方法收集念珠菌性阴道炎患者及体检健康妇女分泌物各285份和50份。用生物梅里埃酵母菌鉴定卡进行菌种鉴定,用最低抑菌浓度(MIC)法(郑州安图真菌快速培养鉴定药敏试剂)进行药敏试验;采用PCR-反向点杂交法(深圳亚能念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测试剂)进行菌种鉴定和耐药基因突变检测;采用PCR及测序方法进行耐药基因的检测。分别以培养鉴定法、MIC法、核酸序列测定法为对比方法,评价PCR-反向点杂交法念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测的敏感性、特异性及准确性。结果与培养鉴定法相比,PCR-反向点杂交法检测6种念珠菌菌种的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率分别为95%、96%、96%、98%、97%以上,2种方法检测6种念珠菌(白念珠菌、光滑念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、克柔念珠菌和季也蒙念珠菌)结果的差异无统计学意义(χ~2值分别为0.44、0、0、0、0和0,P均>0.05),一致性较好(Kappa均>0.9)。与MIC法相比,PCR-反向点杂交法检测白念珠菌耐药的敏感性、特异性、阳性预测值、阴性预测值和总符合率分别为98%、88%、98%、88%和96%,2种方法检测结果的差异无统计学意义(χ~2=0.17,P>0.05),一致性较好(Kappa>0.8)。PCR-反向点杂交法与核酸序列测定法相比,对6种白念珠菌耐药基因突变位点的检测结果完全一致。结论PCR-反向点杂交法在念珠菌菌种鉴定及白念珠菌耐药基因突变检测上与培养鉴定法以及核酸序列测定法的一致性高,比传统检测方法更早期更快速,可应用于外阴阴道念珠菌病(VVC)的辅助诊断。

PCR-反向点杂交法检测乙型肝炎病毒的基因耐药变异与基因分型

目的探讨PCR-反向点杂交法用于检测HBV基因耐药变异与基因分型的可行性。方法采用PCR-反向点杂交法对89例慢性乙型肝炎患者的血清标本进行HBV基因耐药变异和基因分型检测;用DNA测序法对患者的HBV DNA进行测序,确定HBV的耐药变异与基因分型情况,评价PCR-反向点杂交法的准确性、灵敏度及临床应用价值。结果 89例标本经PCR-反向点杂交法检出变异株31例,其中rtL180M+rtM204V联合突变株15例,rtN236T突变株4例,rtM204I突变株9例,rtA181V突变株3例;野生株55例,阴性标本3例;HBV基因型中C基因型72例,B基因型14例。经测序确定PCR-反向点杂交法检测准确度、特异度均为100%。结论采用PCR-反向点杂交法检测HBV基因耐药变异与基因分型可靠、简便、经济、高效,适宜临床推广。

PCR荧光法与PCR-反向点杂交法检验人乳头瘤病毒对比分析

目的将PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验中,分析其检验结果。方法2014年4月~2017年4月本院收治的100例宫颈炎或是疑似人乳头瘤病毒感染的患者归入笔者研究目标,对100例患者都进行CR荧光法检验和PCR-反向点杂交法检验,统计2种不同检验方法的阳性检出合计值及两者检验结果的符合总计值。结果 PCR-反向点杂交法检验的人乳头瘤病毒阳性检出合计值与PCR荧光法检验对比,差异有统计学意义(P<0.05),PCR荧光法检验结果和PCR-反向点杂交法检验结果对比,阴性符合总计值、阳性符合总计值、总符合总计值分别是70.00%、93.02%、94.00%。结论 PCR荧光法和PCR-反向点杂交法用于人乳头瘤病毒检验都具有良好效果,且PCR-反向点杂交法检验的阳性检出率更高一些。

用PCR-反向点杂交法检测九江地区乙型肝炎病毒基因型

目的调查九江地区乙型肝炎病毒(hepatitis Bvirus,HBV)基因型的分布情况。方法采用PCR-反向点杂交法,对203例HBV DNA阳性患者HBV进行基因型分析。结果共检测了203例患者,成功分型199例,占98.03%。其中B型160例,占78.82%;C型24例,占11.82%;B、C混合型14例,占6.90%;D型1例,占0.49%。结论利用PCR-反向点杂交法技术可以较简便地对HBV进行基因型分析,分型成功率高,适用于临床检测;在九江地区人群中感染的HBV以B型为主,C型次之,其它型别极少见。

应用PCR-反向点杂交法检测β-地中海贫血基因点突变

目的对疑似β-地中海贫血的4例患者进行基因诊断。方法针对β-珠蛋白基因上17个位点突变,使用特异性带有生物素标记的引物进行PCR扩增,扩增产物与固定在膜条上的寡核苷酸探针进行杂交,并通过一系列显色反应,明确检测样品在17个位点是否发生了突变,以及是否为突变纯合子或杂合子。结果 1号和2号患者均为CD17M(A→T)/N,βEM(GAG→AAG)/N双重杂合子;D3号患者为IVS-Ⅱ-654M(C→T)/N杂合子;D4号患者为IVS-Ⅱ-654M/IVS-Ⅱ-654M(C→T)纯合子。结论利用PCR-反向点杂交法技术,能对β-地中海贫血患者进行基因诊断,对其产前诊断、临床治疗以及携带者检出具有重要意义。

基于PCR-反向点杂交法对江西地区分枝杆菌感染状况分析

目的了解江西地区分枝杆菌感染流行现状,为临床防治提供科学依据。方法运用PCR-反向点杂交法对345例可疑分枝杆菌感染患者不同标本进行分枝杆菌核酸检测。结果 345份标本中共检出68例阳性(阳性率为19.7%),其中结核分枝杆菌复合群(MTC)59例(占86.76%),非结核分枝杆菌(NTM)8例(占11.77%),混合感染(MTC/MIN)1例(1.47%);NTM感染中检测出5种,分别为偶发/猪分枝杆菌(MFO)、戈登分枝杆菌(MGO)、胞内分枝杆菌(MIN)、龟分枝杆菌脓肿亚肿(MAB)、蟾蜍分枝杆菌(MXE),其中以MIN为主,占5.88%;不同标本中分枝杆菌检出率不同,痰液、灌洗液、分泌物、胸水中分枝杆菌检出率分别为:31.5%、20.3%、16.0%、4.7%。结论江西地区分枝杆菌感染主要以MTC为主,且多为单一感染。

PCR-反向点杂交法检测凉山州乙型肝炎病毒基因型

目的调查凉山州乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)基因型的分布情况。方法采用PCR-反向点杂交法(polymerase chain reaction-reverse dot blot,PCR-RDB)对44例HBV DNA阳性患者HBV进行基因型分析,并选取6例健康人作为对照。结果共检测了44例患者,成功分型38例,占86.36%,其中B型23例,占52.27%,C型13例,占29.55%,B、C混合型1例,占2.27%,未知型7例,占15.91%。结论利用PCR-RDB可以简便地对HBV进行基因型分析,分型成功率较高,适用于临床检测。在凉山州乙型肝炎人群中感染的HBV以B型为主,C型次之,其他型别极少见。

PCR-反向点杂交法在HPV分型中的临床应用

分析HPV分型中应用PCR-反向点杂交法的实际效果。方法 将本院2020年8月至2022年11月2940例应用PCR-反向点杂交法检测HPV分型的门诊、住院患者作为研究对象,对数据进行统计,分析HPV分型分布情况。结果 2940例女性经PCR-反向点杂交法检出HPV阳性501例(检出率:17.04%)、HPV单型阳性377例(检出率:12.82%)、HPV2型以上阳性124例(检出率(4.22%)、纯低危型阳性54例(检出率1.84%)、高危型阳性447例(检出率:12.50%)、高危型在HPV阳性中占比89.22%;HPV高危型阳性分布情况中以HPV-52(141/2940,4.80%)、HPV-51(58/2940,1.97%)、HPV-53(56/2940,1.90%)、HPV-16(54/2940,1.83%)、HPV-58(50/2940,1.70%)阳性率相对较高;2940例女性中HPV阳性占比最高的是31-40岁年龄段(占比率达34.33%),21-50岁是HPV阳性的高危人群,总共占比率高达79.24%。结论 通过HPV分型检测,可确定HPV感染的型别、区分单一感染与多重感染、区分持续感染与一过性感染患,对于预防宫颈癌变、提高预后效果有重要意义;PCR-反向点杂交法在确定HPV分型中具有极高的应用价值,可依据受检者感染的基因类别,明确受检者感染风险,进行进一步检查、复查,对持续高危型感染者进行早期治疗,在预防宫颈癌中具有积极意义。

抗酸染色法、PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法在结核分枝杆菌诊断中的研究

目的:比较抗酸染色法、PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法在诊断结核分枝杆菌感染中的价值。方法:选取解放军总医院第八医学中心2024年1月-2024年4月80例疑似结核的样本,其中包括疑似肺结核及疑似肺外结核。80例样本在制成石蜡样本后同时采用抗酸染色法、PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法进行结核分枝杆菌的检测。结果:PCR-反向点杂交法检出率63.6%,PCR-荧光探针法检出率59.1%,抗酸染色检出率25.0%,PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法检出率均高于抗酸染色法,且P<0.05;PCR-反向点杂交法和PCR-荧光探针法的阳性检出率基本一致。抗酸染色法具备检测成本低,实验时间短的特点,但仅仅根据形态学无法明确判断是否为结核分枝杆菌感染;PCR-反向点杂交法检测成本高于抗酸染色法,实验时间长于抗酸染色法和PCR-荧光探针法;PCR-荧光探针法检测成本适中,但相较于PCR-反向点杂交法检测时间更短。结论:PCR-荧光探针法检出率高,操作快速,简单,费用适中,对于样本量较多的医院具有良好的临床应用价值。

FFPE组织HPV检测中PCR-反向点杂交技术的应用:两种核酸提取方法的比较

目的比较两种不同核酸提取方法在人乳头瘤病毒(HPV)亚型检测中的应用,为实验室选择相应的核酸提取方法来获得有效的HPV结果提供依据。方法收集25例浸润性宫颈癌福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织标本,采用粗提法和纯化法两种核酸提取方法提取DNA标本,并通过检测DNA浓度、纯度及内参β-Globin来评估DNA质量。将提取的DNA经PCR扩增后,应用PCR-反向点杂交法检测HPV亚型,分析两种提取方法HPV检测结果的有效性及一致性。结果两种提取方法均能获得适量的DNA用于HPV检测,粗提法较纯化法可获得较高的DNA浓度(P<0.05),但存有一定有机物及蛋白质污染。纯化法较粗提法获得的DNA纯度更高(P<0.05)。将粗提法和纯化法提取的DNA用于检测HPV感染,总HPV阳性率分别为92%和96%。采用粗提法提取的DNA标本高危型HPV(HR-HPV)阳性率低于纯化法(92%vs.96%),但单一型HPV16阳性率高于纯化法(44%vs.36%);与纯化法相比,粗提法提取的DNA无法检测出更多型别的混合感染,而FFPE组织标本经纯化法分离后可检测出HPV33、HPV53、HPV58等多型别感染。结论采用粗提法和纯化法进行FFPE组织核酸提取,均可获得足量DNA用于HPV亚型检测,且HR-HPV阳性率达90%以上。粗提法具有操作简便、耗时较短、成本较低等优势,能够获得有效的HPV结果,但对于HPV多型别感染的检测表现欠佳。

应用PCR-反向斑点杂交法快速检测和鉴定医学重要真菌

目的 建立一种以PCR为基础的的检测和鉴定医学重要真菌的方法。方法 将白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌、光滑念珠菌、克柔念珠菌、季也蒙念珠菌、都柏林念珠菌和新型隐球菌的种特异性探针加尾后固定于硝酸纤维素膜上 ;用标记生物素的真菌通用引物扩增经提取的各真菌DNA ,与固定在膜上的探针杂交。结果 所用的真菌通用引物可扩增12种临床常见的真菌DNA ,扩增片段长度在 35 0bp左右。 8种特异性探针分别与上述真菌PCR扩增产物杂交 ,结果表明 8种探针具有高度的特异性。通过 39例临床标本和 2 5例临床分离菌株的检测 ,PCR -反向杂交法与真菌培养法的结果基本一致 ,且鉴定时间也由传统培养鉴定方法约需 1周的时间缩短至 2天。结论 该方法可快速、正确地将 8种临床常见真菌鉴定到种水平 ,如经大量临床标本的检测验证 ,可望在临床微生物实验室开展。

PCR反向点杂交技术与DNA测序法检测HPV的对比研究

目的通过PCR反向点杂交技术检测人乳头瘤病毒(HPV),并采用DNA测序法对此方法进行验证,比较两种检测方法的一致性,为临床使用PCR反向点杂交技术进行HPV DNA检测提供准确依据。方法采用PCR反向点杂交技术和DNA测序法对喀什地区第一人民医院妇科门诊收集的27例HPV感染患者进行检测,将两种检测方法得到的检测结果进行比对。结果采用PCR反向点杂交技术和DNA测序法得到的检测结果一致,27例样本中阳性检出率100.0%,其中高危型检出率为85.2%,低危型检出率为14.8%,多重型别感染率为25.9%。结论两种HPV检测方法的结果符合率100.0%,PCR-反向点杂交技术检测结果准确度高,可以为临床诊断提供准确可靠的依据。

PCR荧光法与PCR-反向斑点杂交法检验人乳头瘤病毒比较观察

目的观察比较PCR-反向斑点杂交法(PCR-RDB)与PCR荧光法在HPV(人乳头瘤病毒)中的检验效果。方法选择我院2011年1月至2014年1月收集的女性宫颈脱落细胞样本共251例,分别行PCR-RDB检测和PCR荧光法对HPV进行检测,比较两种方法检测结果。另将两种方法检测8种HPV结果均显示为阳性的患者设为观察组,其余患者设为对照组,病理检测作判定标准,比较组间阳性率。结果 PCR荧光法检测阳性率为36.65%(92/251);PCR荧光法检测阳性率为40.24%(101/251);两种方法检测8种高危HPV一致率为79.68%(200/251),观察组行TCT检测和组织病理活检结果 ,病变率为42.31%(22/52)。对照组病变率为10.77%(14/130)。两者相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 PCR-RDB检测和PCR荧光法在HPV检测中具有较好的一致性,采用高危型HPV检测能有效筛查宫颈癌。

反向点杂交法检测中国人N-乙酰化酶基因型

目的 建立快速方便的反向点杂交法 (RDB)检测中国人N 乙酰化酶 (NAT2 )基因型。方法 采用PCR法扩增生物素标记的DNA片段 ,与固定在尼龙膜上的等位基因特异性寡核苷酸探针进行杂交 ,通过非同位素法显色检测杂交结果 ,分析NAT2 5种主要突变位点。用本法对 4 8名肺结核患者NAT2基因型进行了分析。结果 RDB法与等位基因特异扩增法结果完全一致。 4 8名肺结核患者NAT2 5、 6、 73种突变型等位基因的基因频率分别为 1 0 4 %、2 2 9%和 15 6 %。野生型纯合子、杂合子和突变型纯合子分别为 33 3%、5 4 2 %和 12 5 %。结论 RDB法检测NAT2基因型准确、方便 ,适用于指导临床合理用药。

反向点杂交法快速诊断人乳头瘤病毒的基因型

人乳头瘤病毒(HPV)是迄今已被肯定的少数DNA肿瘤病毒之一,在女性下生殖道肿瘤中的检出率高达90％以上。HPV的DNA检测和分型对女性生殖道肿瘤的病因学和癌情预报具有重要意义。HPV异质性很大。

用反向点杂交法进行β－地贫的基因诊断

用反向点杂交法进行β－地贫的基因诊断郑克勤，李永全，周汝滨，廖霞，陈小萍（广东医学院医学遗传研究室，湛江５２４０２３）β－地中海贫血是广东省最常见、危害最大的遗传病之一。由于β－地贫具有高度的分子病理异质性，在中国人群中已发现有１８种基因突变类型［１...

反向点杂交法在β-地中海贫血基因诊断中的应用

目的应用反向点杂交法(RDB)对样本进行β-地中海贫血基因诊断,评价反向点杂交法对β-地中海贫血基因的诊断效能。方法使用反向点杂交法对1294例疑似地中海贫血病例(材料包括外周血、羊水和脐带血)进行β-地贫基因诊断,并对其中10例进行测序;对其中890例与血液学试验指标进行比较。结果用RDB方法,1294例样品中有558例β地中海贫血。在558例基因诊断阳性病例中共发现了21种突变,涉及到14个突变位点。前6位的突变位点从高到低依次排列为CD41-42(41.2%)、IVS-2-654(25.6%)、TATAbox-28(13.8%)、CD17(7.2%)、CD26(2.0%),CD71-72(1.4%)。与RDB比较,将临界值定为MCV≤80fL或MCH≤26Pg,脆性≤60%,HbA2﹥3.8%,则敏感度分别为98.49%,89.17%,95.47%;特异性为68.97%,72.82%,77.08%。结论与血液学方法比较,RDB具有快速、准确的优点,适用于普通人群的β-地中海贫血分子检测和产前诊断。

荧光定量PCR法联合反向点杂交法鉴定分枝杆菌菌种类型的效果

目的探讨荧光定量PCR法联合反向点杂交法用于分枝杆菌菌种鉴定的效果。方法采用荧光定量PCR法和反向点杂交法鉴定抗酸染色阳性疑似肺结核患者的感染菌种类型。结果276份痰液标本中有结核分枝杆菌(MTB)268例,非结核分枝杆菌(NTM)8例,细菌学鉴别结果和荧光定量PCR法完全一致;反向点杂交法鉴定NTM 8例(2.9%)4种,经基因测序验证结果完全一致。结论荧光定量PCR法联合反向点杂交法进行分枝杆菌菌种鉴定可作为NTM实验室早期诊断手段。