PCR-毛细电泳片段分析法检测毛细支气管炎病原的临床价值探讨

目的探讨PCR-毛细电泳片段分析法(PCR-CEFA)检测毛细支气管炎病原的临床应用价值。方法选取2018年1至12月温州医科大学附属第二医院、育英儿童医院儿科收治的因毛细支气管炎住院的≤24个月且喘息次数≤2次的患儿932例,采集患儿鼻咽分泌物,采用PCR-CEFA检测呼吸道合胞病毒(RSV)、鼻病毒(RV)、流感病毒(Flu)、副流感病毒(HPIV)、腺病毒(ADV)等8种病毒核酸;直接免疫荧光法(DFA)检测RSV、HPIV、Flu、ADV抗原;并收集患儿性别、年龄、既往喘息史、湿疹史、哮喘家族史、家族过敏性疾病史、总IgE、血嗜酸性粒细胞计数(B-Eos)等资料。比较两种方法、不同年龄组患儿病毒检出率及RSV组与RV组患儿流行病学资料及实验室检查结果。结果PCR-CEFA病毒检出率为88.2%,高于DFA的33.6%,差异有统计学意义(P<0.01)。PCR-CEFA对RSV、HPIV、Flu、ADV的检出率均高于DFA,差异均有统计学意义(均P<0.01)。以DFA为参照,PCR-CEFA检测RSV、HPIV、Flu、ADV的特异度均达80%以上。≤12月龄患儿RSV检出率高于>12~24月龄患儿,RV、ADV、HBoV检出率均低于>12~24月龄患儿,差异均有统计学意义(均P<0.05)。RV组患儿年龄、B-Eos升高比例均明显高于RSV组,差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论与DFA比较,PCR-CEFA病毒检出率更高,病毒检测种类更多,具有良好的特异度,有利于早期明确毛细支气管炎病原。

毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在ALRTI患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用对比观察

目的毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法在急性下呼吸道感染患儿咽拭子标本病原体诊断中的应用。方法急性呼吸道感染患儿65例(65份咽拭子标本),分别采用毛细管电泳片段分析法、荧光定量PCR法检测患儿咽拭子病原体,比较两种方法病原体检出率,并分析两种检测方法与金标准(Sanger测序法)检测结果的一致性。结果毛细管电泳片段分析法病原体检出率为52.3%(呼吸道合胞病毒21份、副流感病毒4份、衣原体病毒2份、腺病毒2份、鼻病毒2份、偏肺病毒3份、博卡病毒1份,其中1份为合胞病毒与鼻病毒混合感染),荧光定量PCR法病原体检出率为45.0%(呼吸道合胞病毒20份、副流感病毒3份、衣原体病毒2份、腺病毒1份、鼻病毒1份),两种方法病原体检出率比较,P>0.05。毛细管电泳片段分析法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为100.0%,阴性一致率为100.0%,准确率为100.0%;荧光定量PCR法与Sanger测序法检测结果阳性一致率为86.2%,阴性一致率为93.5%,准确率为90.0%。结论毛细管电泳片段分析法与荧光定量PCR方法病原体检出率无差异,但毛细管电泳片段分析法能检测出病原菌混合感染,且与Sanger测序法检测结果有高度一致性,有更高的临床应用价值。

成人流感样病例13种病原体检测情况及多重PCR毛细电泳片段分析法检测的临床应用

目的探究成人流感样病例中13种病原体分布情况及多重聚合酶链反应(PCR)毛细电泳片段分析法在病原体检测中的应用价值。方法收集2019年12月至2020年2月北方地区189份流感样病例咽拭子标本,采用多重RT-PCR与毛细电泳片段分析法联用技术得到病原体的检测结果。检测病原体包括甲型流感病毒(InfA)、人腺病毒(HADV)、博卡病毒(Boca)、人鼻病毒(HRV)、甲型流感病毒H1N1(2009)(InfA-H1N1)、季节性流感病毒(InfA-H3N2)、副流感病毒(HPIV)、人偏肺病毒(HMPV)、乙型流感病毒(InfB)、肺炎支原体(MP)、肺炎衣原体(CP)、冠状病毒(HCOV)、人呼吸道合胞病毒(RSV)13种病原体。结果189份流感样病例咽拭子标本中有180份(95.24%)检测出病原体,9份(4.76%)未检测出病原体。180份病原体阳性标本单一病原体150份(83.33%),多种病原体30份(16.67%);145份(80.56%)检测出流感病原体,35份(19.44%)检测出非流感病原体。3种最常见的单一病原体是InfA-H3N2(94份,49.74%),MP(26份,13.76%),InfA(16份,8.47%);3种最常见的多种病原体是InfA-H3N2合并MP感染(15份,7.93%),InfA合并MP感染(7份,3.70%),MP合并HRV感染(3份,1.59%)。结论2019年12月至2020年2月冬季我国北方地区的成人流感病毒主要以InfA-H3N2为主;非流感病毒也可引起流感样病例,以MP感染较多见;部分流感样病例可见混合感染。多重PCR毛细电泳片段分析法有助于全面了解成人流感样病例中病原体分布情况。

厦门市1846例呼吸道病原检测分析

目的通过对呼吸道病原多重核酸检测结果进行分析,了解2019年3—8月厦门市呼吸道病原的流行规律,为临床疾病诊治提供依据。方法利用PCR毛细管电泳片段分析法,对1846份呼吸道感染患者咽拭子进行12种常见呼吸道病原的检测,计算检出各种呼吸道病原的阳性率和混合感染情况,比较不同月份、年龄患者常见呼吸道病原检出阳性率的差异性。结果在1846份样本中,呼吸道常见12种病原总阳性率为65.2%,其中肺炎支原体和腺病毒检出阳性率最高,分别为24.4%和24.1%。混合感染389例,占总阳性检出病例的32.3%。按月份分析,3—8月份总阳性数呈上升趋势,但不同病原有不同的流行规律。按年龄组分析,不同的病原流行规律不同。结论肺炎支原体和腺病毒为厦门市呼吸道感染的主要病原体。呼吸道病原的检出存在时间和年龄的差异。呼吸道病原体多重核酸检测在临床的应用,有助于呼吸道感染患者的早期诊治。

丽水市十三项呼吸道病原体感染情况及特点分析

目的了解丽水市呼吸道病原体感染情况及流行病学特征,为呼吸道传染病诊疗与防控提供科学依据。方法回顾性分析2020年3月至2021年12月丽水市人民医院收治的4035例呼吸道感染患者13项呼吸道病原体PCR毛细电泳核酸检测结果,并分析病原体感染分布特征。结果呼吸道病原体感染患者阳性检出率为32.24%(1301/4035),检出率前5位分别是HRV(16.60%)、HRSV(7.09%)、HPIV(2.87%)、HMPV(2.21%)、HADV(1.96%)。混合感染阳性占比为7.61%(99/1301),Boca病毒(76.0%)与Ch(46.15%)易与其它病原体形成混合感染。不同性别呼吸道病原体感染率差异无统计学意义(P>0.05)。虽然不同季节呼吸道病原体整体感染率差异无统计学意义(P>0.05),但HRV好发于春秋两季,而HPIV在春秋两季感染率较低,春季HRSV感染率较低,HADV在夏秋两季感染率较低,HMPV在冬季较为流行。未成年人呼吸道病原体感染率较高,HRSV、HRV、HPIV、HADV和Boca主要发生于未成年人组,InfB和HMPV在未成年和青年人群感染率都较高。结论未成年人群是呼吸道病原体易感人群,应加强未成年人呼吸道传染病防控。

HPV核酸检测及基因分型试剂盒的性能验证及评价

目的对某公司生产的人乳头瘤病毒(HPV)核酸检测及基因分型检测试剂盒(PCR毛细电泳片段分析法)进行性能验证。方法用PCR-反向点杂交技术对待应用的检测HPV亚型试剂盒的准确性、重复性、最低检出限、交叉特异性及抗干扰能力等性能指标进行性能验证及评价。结果该试剂盒采用的PCR毛细电泳片段分析法检测的30例HPV样本中有6例结果不一致,经一代测序验证,与PCR毛细电泳片段分析法检测的结果一致,符合率为100%;重复性和最低检出限均符合要求;解脲支原体、沙眼衣原体、淋球菌和白色念珠菌与该HPV核酸检测及分型试剂盒不存在交叉反应;抗干扰物质对其检测结果无明显影响;与PCR-反向点杂交技术对比,该HPV试剂盒检测对HPV总体阳性率无显著性差异,而对HPV单一感染及多重感染的检出率有差异。结论HPV核酸检测及基因分型试剂盒(PCR毛细电泳片段分析法)性能参数评估合格,可以满足临床样本的检测需求。

镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的研究

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法,检测了10μmol/L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况,结果表明:10μmol/L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA,并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。

微小按蚊A、C的PCR和同工酶鉴别比较研究

目的比较PCR和同工酶两种鉴别微小按蚊A、C亲缘种的方法。方法将现场采集后经形态初步鉴定为微小按蚊的样本,经PCR产物酶切片段长度多态性分析(PCR-RFLP)与乌头按蚊和杰普尔按蚊区分,等位基因特异扩增法(PCR-ASA)进一步鉴别微小按蚊A和C。再将用此方法鉴别后的微小按蚊羽化24h内单只虫体样本,采用垂直平板聚丙烯酰胺凝胶电泳,加以辨别区分。结果经测序验证,PCR方法可以简单明确地将微小按蚊A、C加以鉴别。几种用于鉴别的同工酶中,只有酯酶(EST)同工酶对微小按蚊A、C具鉴别意义。结论对于微小按蚊A、C的鉴别,PCR方法明显优于同工酶方法。

冠心病患者血同型半胱氨酸与脂蛋白a关系研究

同型半胱氨酸（Hcy）的测定方法有高效液相色谱法、荧光偏振免疫测定、离子色谱法、高效毛细血管电泳法和酶免疫分析法。以上所述方法，有的仪器和试剂昂贵．分析成本高，有的操作步骤复杂，费时费力，从而限制了Hcy项目的常规检测。近年来出现的循环酶法可利用自动生化分析仪．其测定结果稳定、操作简单，为普及这项检测创造了良好的条件。本文对门诊和住院患者分别用循环酶法同时测定同型半胱氨酸和脂蛋白a（Lp（a））的水平。旨在探讨冠心病患者Hcy水平及其与Lp（a）关系。

基因突变的检测

1985年以前对基因中显著的缺失、插入、重排,可以用Southern杂交法来鉴定。一些小的变异,包括单碱基改变,只有当它们位于限制性内切酶的切点上时,方可被检出(如RFLP,限制性片段长度多态性)。如果这些小的变异不是位于限制性内切酶的切点上,那么只有对整个的基因进行顺序测定,当然,这是费时费力的。