基于适配体-杂交链式反应比色检测生鲜牛乳中四环素类抗生素

)以特异性识别四环素类抗生素(TCs)的广谱型适配体为识别元件,结合杂交链式反应(HCR)信号放大策略,提出了一种TCs多残留比色检测方法,并优化了检测条件和进行了方法学考察。取40 nmol·L^(-1)生物素化检测探针(bio-DP)溶液加入到包被有亲和素的酶标板中,室温孵育后加入牛血清白蛋白(BSA)溶液,封闭反应1 h。加入生鲜牛乳样品稀释液,室温孵育20 min,如果样品中含有TCs,TCs与bio-DP的适配体序列结合,其发夹结构被打开。加入200 nmol·L^(-1)生物素化发夹DNA1(bio-H1)溶液和200 nmol·L^(-1)生物素化发夹DNA2(bio-H2)溶液,室温下进行HCR 40 min,从而形成具有多个重复单元的双链DNA(dsDNA)纳米线。加入辣根过氧化物酶(HRP)标记链霉亲和素(SA-HRP),室温孵育标记dsDNA。加入显色剂[含3,3′,5,5′-四甲基联苯胺(TMB)],HRP催化TMB生成蓝色物质,显色5~8 min后终止反应,在酶标仪中于450 nm测量上述体系的吸光度。结果显示,bio-DP对四环素、土霉素、金霉素和多西环素具有高特异性,和卡那霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、泰乐菌素、磺胺嘧啶和恩诺沙星等抗生素无交叉反应。四环素、土霉素、金霉素和多西环素的质量浓度总和在0.8~100μg·L^(-1)内与对应的吸光度总和呈线性关系,检出限(3s/k)为0.18μg·L^(-1)。对生鲜牛乳样品进行加标回收试验,TCs回收率为86.4%~106%,测定值的相对标准偏差(n=3)为2.5%~7.1%。方法应用于生鲜牛乳样品的分析,检测结果与国家标准方法GB 31658.6-2021差异不显著(P>0.05),检出的TCs总量也均未超标(GB 31650-2019)。与文献报道的其他方法相比,上述方法兼具简单、快速、检出限低、准确度高等优点,适用于食品中四环素类抗生素多残留的快速检测。

尿液基细胞荧光原位杂交检测对膀胱尿路上皮癌的诊断价值

目的探讨尿液基细胞学(LBC)靶向的荧光原位杂交(FISH)对膀胱尿路上皮癌(BUC)的诊断价值。方法回顾性收集2020年10月—2022年10月于首都医科大学附属北京天坛医院泌尿外科行膀胱镜检查的128例患者的临床资料。所有患者在行膀胱镜检查前进行尿核基质蛋白22(NMP22)检测、尿LBC检测与尿LBC靶向的FISH检测,以术后病理结果为标准,分析3种检查方法的灵敏度和特异度。结果NMP22、尿LBC与LBC靶向的FISH的灵敏度分别为61.11%、79.17%、82.46%,特异度分别为57.14%、73.21%、86.67%;NMP22、尿LBC的灵敏度在检测高级别BUC时优于低级别,差异有统计学意义(P=0.01,P=0.03);3种方法对肌层浸润性膀胱癌与非肌层浸润性膀胱癌检测的灵敏度比较,差异无统计学意义(P≥0.05)。结论尿LBC靶向的FISH对BUC诊断的灵敏度和特异度较高,尤其是对于低级别BUC,可以作为BUC早期筛查、诊断的重要方法。

象雄半细毛羊、藏系绵羊杂交F1代与其父本、母本品种的屠宰检测研究

该研究旨在比较象雄半细毛羊与藏系绵羊杂交F1代与其父本、母本品种在屠宰性能方面的差异,通过系统的屠宰检测,评估各品种在屠宰率、胴体重量和肉质等关键指标上的表现。结果表明,杂交F1代在一些关键屠宰性能指标上展现出了优于或等同于其父本、母本品种的表现,尤其在肉质方面表现出潜在的改良优势。该项研究不仅为肉用羊的品种改良提供了试验依据,也为满足市场对高质量羊肉的需求提供良好途径。

PCR-荧光法与PCR-膜杂交法在检测HPV-DNA中的比较分析

分析PCR-荧光法与PCR-膜杂交法在检测HPV-DNA中的比较。方法 选取HPV-DNA检测的女性患者114例,时间为2020年7月-2022年7月。所有患者在明确细胞学诊断的基础上,分别采用PCR-荧光法和PCR膜杂交法检测HPV-DNA,比较各组HPV-DNA阳性率。结果 细胞学诊断结果显示,所选114例患者中,85例细胞正常,29例细胞异常。其中15例为ASC-H,12例为低级别鳞状上皮增生,1例为 HSIL,1例为 HSIL。、SCC(宫颈鳞癌)1例。HPV-DNA检测结果显示,细胞正常组与细胞异常组相比,用PCR-荧光染色及PCR-膜杂交方法对大肠癌的检出率,经统计学处理,均有统计学意义, P<0.05。PCR-荧光和PCR-膜杂交分别为12.94%和28.24%,二者相比,有显著差异,P<0.05。细胞异常组中,PCR-荧光和PCR-膜杂交分别为93。10%和96 5%,P>0.05。结论 在HPV-DNA检测当中,PCR核酸扩增检测技术的灵敏度、特异度都比较高。其中PCR-荧光法在临床筛查诊疗当中应用价值更高,PCR-膜杂交法在非高危性HPV检测及科研方面优势更明显。临床上对于HPV诊断可采取细胞学检查与HPV-DNA检测联合应用的方法,可以使准确性大大提高,为临床提供充分依据。

DNA芯片制作原理及其杂交信号检测方法

文章讨论了DNA芯片的制作原理和杂交信号的检测方法。依其结构 ,DNA芯片可分为两种形式 ,DNA阵列和寡核苷酸微芯片。DNA芯片的制作方法主要有光导原位合成法和自动化点样法。DNA芯片与标记的探针或DNA样品杂交 ,并通过探测杂交信号谱型来实现DNA序列或基因表达的分析。适应于DNA芯片的发展 ,同时出现了许多新型的杂交信号检测方法。主要有激光荧光扫描显微镜、激光扫描共焦显微镜、结合使用CCD相机的荧光显微镜、光纤生物传感器、化学发生法、光激发磷光物质存储屏法、光散射法等。

用SSR分子标记检测杂交油菜秦优7号的种子纯度

杂交油菜中的主要杂株类型是母本不育株和父本恢复株。通过对100对SSR引物筛选,获得1对可将杂交油菜秦优7号及其父母本区分开来的SSR引物SA82,扩增产物杂交种表现为父母本的互补带型,在30 g/L的琼脂糖凝胶上显带清晰稳定。通过简化油菜DNA提取方法、优化反应体系、重复使用琼脂糖凝胶等,建立了适用于杂交油菜秦优7号种子纯度检测的SSR技术系统。经对大量油菜杂交种个体进行验证,证明该方法具有很好的重复性、准确性和可靠性,同时具有快速、经济的特点,可用于杂交油菜种子纯度的实际检测。

陆地棉品种SSR标记的多态性及用于杂交种纯度检测的研究

:用 48对 SSR引物对 30个棉花栽培品种和4个高优势杂交种的亲本进行了多态性筛选 ,结果只有 2 7对引物检测到了多态性。应用SSR3442、SSR2 4 95、SSR3347和 SSR1 2 31标记 ,区分了湘杂 2号、皖杂 40、中棉所 2 8、南抗 3号的F1杂种和它们的亲本以及其它栽培品种 ;

应用RT-PCR、斑点杂交法和SDS-PAGE检测水稻黑条矮缩病毒

用RT PCR技术、PCR标记的探针点杂交和SDS PAGE检测了生产上严重危害玉米和水稻的水稻黑条矮缩病毒(RBSDV)。由RT PCR扩增的RBSDV第 7片段第 92 1～ 14 11碱基作探针 ,用PCR法DIG标记后点杂交 ,可以从 10 0ng玉米病叶中检测到RBSDV ,灵敏度是RT PCR的 1/10 ;10 %SDS PAGE只能检测到从 1g玉米病叶中提取的病毒dsRNA ,但对江苏玉米田间分离的不同的RBSDV样品电泳发现 ,该病毒基因组dsRNA有差异 。

用微卫星DNA标记对我国杂交水稻主要恢复系遗传差异的检测分析

选用分布于水稻 (OryzasativaL .) 12条染色体上的 2 5对SSR(Simplesequencerepeats)引物 ,分析了生产中广泛应用的 35个杂交水稻恢复系。在 35个杂交水稻恢复系材料间共检测出 6 5个等位基因 (alleles) ,平均每对SSR引物可检测到 2 6个等位基因。PIC(Polymorphismindexcontent)值的变动范围为 0 .2 0 6～ 0 .6 82 ,平均值为 0 .4 14。聚类分析表明 ,我国杂交水稻恢复系资源比较丰富 ,但其遗传差异较小 ,遗传背景单一 ,从而在很大程度上限制了我国水稻杂种优势的利用。

杂交油菜种子纯度的RAPD检测研究

在简化油菜DNA提取方法的基础上,建立了适用于杂交油菜种子纯度检测的RAPD技术分析系统,从814条随机引物中筛选获得了2条可同时稳定区分CM S杂交油菜品种秦优7号及其亲本的引物;经过大量的不同来源油菜个体的验证,证明了该方法具有很好的重复性、准确性和可靠性;与酯酶同工酶法比较,发现利用RAPD技术能够检测酯酶同工酶法难以鉴别的杂交种及其亲本系.因此,选择合适引物、建立良好的反应体系、简化DNA提取程序、降低分析成本等,可使RAPD技术实用化.

膜杂交多重检测技术在HPV基因分型中的应用

目的 应用膜杂交多重检测技术进行人乳头瘤病毒（HPV）基因分型诊断，以了解HPV亚型的感染状况。方法采用膜杂交多重检测技术对深圳地区不同年龄段就诊妇女4419例进行23种HPV基因亚型检测。结果4419例标本共检出HPV亚型感染阳性者897例，阳性率为20．3％；其中高危型感染649例，低危型感染183例，混合感染65例，分别占总阳性的72.4％，20．4％和7．2％。不同年龄组的HPV亚型感染检出率差异明显，〈20岁，20～35岁，36～50岁和〉50岁年龄组的HPV亚型感染阳性率分别为2.3％，70．1％，22．0％，5．6％；各年龄组低危型和高危型感染阳性率分别为0．9％和1．4％，17、0％和53．1％，5、3％和16、7％，0和5．6％。结论膜杂交多重检测技术在HPV感染基因分型中的应用具有高度特异性、敏感性，可为临床HPV感染诊断和宫颈癌的监测及预防提供可靠的实验依据。

PCR-Dotblot杂交法直接检测临床病原菌的报告

目的为了寻找临床病原菌系统，检测和鉴别的有力手段。方法用真细菌保守的１６ＳｒＲＮＡ基因为模板，以ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的方法检测临床病原菌。结果它将１６ＳｒＲＮＡ基因的广谱性和变异性并存之特点和ＰＣＲ－Ｄｏｔｂｌｏｔ杂交的敏感性结合起来，对该法的建立进行了探讨，并初步用于临床感染的检测。结论为细菌通用检测法的建立提供了基础。

利用RAPD技术检测杂交稻种子纯度(Ⅰ)──汕优63与其三系DNA扩增产物的区别

本文应用30个引物对我省主栽水稻组合汕优63其及相应的不育系、恢复系、保持系的基因组进行了随机扩增多态性分析。从中筛选出6个引物能够在杂种和双亲之一中形成明显的多态性差异。

利用SRAP标记快速检测西瓜杂交种子纯度

【目的】以设施、露地兼用西瓜杂交品种早佳(84-24)及其父本、母本为试验材料,利用SRAP分子标记技术进行DNA指纹图谱构建,筛选出能够快速检测西瓜早佳(84-24)杂交种子纯度的SRAP标记。【方法】选取28对SRAP引物,对供试西瓜品种早佳(84-24)及其父、母本的基因组DNA进行扩增,筛选出扩增多态性好、条带清晰、稳定的SRAP引物作为候选标记,利用100粒杂交种子进行纯度检测准确性验证。【结果】28对供试引物中有22对引物在F1及其父、母本之间扩增出多态性条带,多态性比率为78.6%,其中有1对为父本显示,母本缺失的显性SRAP引物(Me6F/Em2R)。用显性引物(Me6F/Em2R)对100粒西瓜杂交种子进行纯度检测,经聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,纯度为99.0%,与田间形态学鉴定结果(99.1%)基本一致。【结论】利用SRAP标记(Me6F/Em2R),结合聚丙烯酰胺凝胶电泳检测,可以对西瓜杂交种早佳(84-24)的纯度进行快速、准确鉴定。SRAP分子标记技术在西瓜杂交种子纯度室内快速检测中有很大的应用前景。

四川省杂交稻亲本及32份抗源抗稻瘟病基因的检测分析

利用与稻瘟病抗性基因紧密连锁的分子标记进行分子标记辅助选择对于培育抗稻瘟病水稻品种有重要意义。利用与抗稻瘟病基因Pi-9、Pi-2、Pi-kh和Pi-km紧密连锁的分子标记检测分析52份(23份恢复系和29份不育系)杂交水稻亲本材料,结果表明:52份亲本材料中都不含有抗稻瘟病基因Pi-9和Pi-2(Pi-Z5),6份可能含有抗稻瘟病基因Pi-km,5份可能含有抗稻瘟病基因Pi-kh。32份抗源的检测结果表明:32份抗源中都不含有抗稻瘟病基因Pi-9,12份含有Pi-2(Pi-Z5),3份可能含有抗稻瘟病基因Pi-km,6份可能含有抗稻瘟病基因Pi-kh。

DNA在纳米金标上的组装、杂交、检测与银增强

利用电化学方法进行DNA的杂交检测.将目标ss-DNA固定在玻碳电极表面,使其与纳米金标记的互补DNA发生杂化反应,通过银增强试剂(该种试剂可以使银在纳米金表面沉积,达到信号增强的效果)在纳米金上沉积银,形成银包金的核壳结构.在酸性介质中沉积的银被氧化释放,以离子状态存在于溶液中.用阳极溶出伏安法(ASV)检测银离子从而达到间接检测目标DNA的目的.测定结果表明,ss-DNA的浓度在100～1 000 pmol·L^(-1)范围内有非常好的线性关系,检测限为10 pmol·L^(-1).

核酸分子杂交技术鉴别和检测家蚕微孢子虫的研究

为了将家蚕微孢子虫 (N .b .)从蚕业生产中流行的 10多种病原性微孢子虫中鉴定出来 ,并对其发病程度进行检测 ,用PCR技术合成了一段 317bp的DNA片段 ,将其克隆到大肠杆菌E .coliDH5α中 ,并大量制备该片段 ,用地高辛 (DIG)标记成探针 ,经点杂交和Southern杂交检测 ,发现该片段为N .b .所特有。该探针为N .b的特异性检测探针 ,灵敏度可达 1ngDNA水平。对蚕业生产上的带毒蚕蛾和蚕卵的模拟检测证明 ,该DIG探针可将N .b发病初期的带毒蚕蛾和蚕卵检出 。

IBDV逆转录-聚合酶链反应和核酸杂交检测方法的研究

以建立的传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）和核酸杂交检测方法，检测了细胞培养物、病理组织、粪便和饲料中的ＩＢＤＶ，并与ＩＢＤＶ夹心ＥＬＩＳＡ、琼脂扩散试验（ＩＤ）和病毒分离方法进行了平行比较试验。结果表明，ＲＴ－ＰＣＲ和核酸杂交检测方法具有高度的敏感性和特异性，是深入研究ＩＢＤ流行病学。

杂交鳢(斑鳢♀×乌鳢♂)弹状病毒TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

为了建立一种能在临床上快速、准确检测杂交鳢弹状病毒(HSHRV)的TaqMan实时荧光定量PCR方法,利用PCR技术扩增HSHRV-C1207 G蛋白的全长序列,构建重组质粒,作为荧光定量PCR的标准品,根据HSHRV-C1207 G蛋白的保守序列,设计合成了一对能特异性扩增143 bp片段的引物和TaqMan探针,以标准品为模板建立HSHRV的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法,并对该方法的灵敏度、可重复性和特异性进行评价。结果显示:建立的荧光定量PCR检测方法标准曲线有较好的线性关系,相关系数(R2)为0.999,斜率为-3.290;荧光定量PCR最低可以检测到10个病毒核酸分子拷贝,而传统PCR方法最低可检测到1×103个拷贝;38个平行样品重复性实验组内变异系数为0.84%;对其他6种水产养殖常见病毒均无扩增反应。应用该方法对采集的21份患病鳢样品进行检测,其中18份为阳性,与细胞分离和电镜观察结果相同;以传统PCR方法检测同样的样品,仅13份为阳性。本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法灵敏度高、特异性强,能较好的用于临床HSHRV的检测,对病毒病原定量检测与杂交鳢弹状病毒病的快速诊断具有重要意义。

应用原位杂交方法检测感染组织中念珠菌

为了探索原位杂交在感染组织中鉴定念珠菌种属的应用,采用探针O20对实验小鼠白念珠菌感染组织和可疑念珠菌感染的临床组织病理标本进行了原位杂交检测,并与PAS染色和免疫组织化学染色进行了对照。结果显示探针O20可特异性检出组织中白念珠菌和热带念珠菌,与PAS染色和免疫组织化学染色一致。由此可见,原位杂交为组织中确定真菌和鉴定真菌种属提供了新的可靠方法,有助于临床诊断和流行病学研究。