PDGF-α受体反义寡核苷酸对体外视网膜色素上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)对体外人视网膜色素上皮(humanretinal pigment epithelium,HRPE)细胞增殖和凋亡的作用。方法:使用阳离子脂质体lipofectamineTM2000将靶向PDGFR-α基因的ASODN转染至细胞株HRPE细胞,MTT法检测对HRPE细胞增殖的影响;Hoechst33258荧光染色观察凋亡细胞;流式细胞仪检测HRPE细胞的周期和凋亡率。结果:PDGFR-αASODN转染组细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于对照组(P<0.05)。结论:沉默PDGFR-α基因表达可显著抑制HRPE细胞的增殖,并能诱导其凋亡。

PDGF-α受体反义寡核苷酸治疗实验性增生性玻璃体视网膜病变

目的探讨血小板源性生长因子α受体(platelet-derived growth factor receptorα,PDGFR-α)反义寡核苷酸治疗实验性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的效果。方法选择健康成年有色家兔24只(48眼),右眼分别行玻璃体内注射人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,HRPE)稀释液(8只8眼,A组)、1.0与2.0μmol·L-1含PDGFR-α反义寡核苷酸及LipofectamineTM2000的HRPE细胞稀释液(各8只8眼,B组和C组)。左眼分别注射平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS)0.1 mL作为正常对照组。造模后1周、2周、3周、4周间接眼底镜观察PVR程度;处死动物后,进行组织病理学观察眼底改变及免疫组织化学染色观察切片着色情况。结果造模前后正常对照组兔眼玻璃体透明,视网膜结构清楚;造模后28 d,A组兔眼玻璃体内可见粗大增生的条索及视网膜脱离,B组和C组严重度低于A组。在造模后1周、2周,PVR分级在所有组之间差异均无统计学意义(均为P>0.05);在3周、4周时,B组和C组的PVR分级明显低于A组(均为P<0.05)。造模后4周,B组TRD发生率(50%)和C组TRD发生率(38%)与A组(100%)相比,差异均有统计学意义(均为P<0.05);B组与C组相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。组织病理学检查显示:造模后4周正常对照组全层结构清晰,A组兔视网膜内界膜粗糙、断裂或结构不清,各层结构欠清,神经节细胞水肿,出现空泡,数量减少,B组和C组严重度低于A组。免疫组织化学检查显示:A组视网膜全层细胞及增生的纤维组织内呈高强度棕黄色着色(++++),B组呈中等强度棕黄色着色(+++),C组呈较弱棕黄色着色(++);正常对照组视网膜表层神经节细胞、RPE内可见弱棕黄色着色(+)。结论 PDGFR-α反义寡核苷酸可降低PVR形成程度,这可能与下调视网膜细胞中PDGF-α浓度有关。

供转染的截短型PDGF-α受体高滴度腺病毒的制备及作用分析

目的 制备高滴度供转染的切除功能结构域的血小板衍生生长因子α受体 (truncatedPDGF αR)重组腺病毒 ,观察其在对平滑肌细胞增殖的影响。方法 通过基因重组技术 ,切除PDGF α受体功能结构域 ,将cDNA片段克隆入腺病毒载体 ,重组质粒导入病毒包装细胞 2 93扩增制备高滴度的腺病毒 ,感染大鼠主动脉平滑肌细胞 ,3 H TdR掺入法测定腺病毒对PDGF AA介导的增殖反应影响。结果 重组腺病毒滴度最高为 1.4× 10 5CFU/mL ;截短型PDGF α感染平滑肌细胞 ,PDGF AA介导的3 H TdR掺入减少。结论 制备高滴度供转染的截短型PDGF α受体腺病毒 ,感染平滑肌细胞后 ,PDGF AA介导的增殖反应减弱。

PDGF-α受体反义寡核苷酸对增殖性玻璃体视网膜病变的影响

目的:研究PDGF-α受体反义寡核苷酸对实验性增殖性玻璃体视网膜病变(PVR)的防治作用。方法:选择PDGFR-αASODN/lip2000比值1∶1、1∶2.5、1∶5制备复合物转染至HRPE细胞中24 h后注射入家兔玻璃体腔。PVR模型健康成年有色家兔24只随机分为人视网膜色素上皮(HRPE)细胞稀释液组(A组)、1.0与2.0μmol/LPDGFR-αASODN脂质体转染的RPE细胞稀释液组(B组和C组),每组8只眼。间接眼底镜观察PVR程度;组织病理学观察眼底改变;免疫组织化学染色观察PDGFA浓度。结果:当PDGFR-αASODN/lip2000比值为1∶2.5时,HRPE细胞最佳转染效率。B组和C组PVR程度、组织病理学改变、免疫组织化学染色PDGFA浓度低于A组,C组比B组更低。结论:PDGF-α受体反义寡核苷酸能够抑制实验性增殖性玻璃体视网膜病变的发生发展。

RNA干扰抑制PDGF-α受体对人视网膜色素上皮细胞增殖的影响

目的:探讨针对血小板源性生长因子α受体(PDGFR-α)的RNA干扰(RNAi)对体外培养的人视网膜色素上皮(h RPE)细胞增生的影响。方法:PDGFR-αsh RNA转染h RPE细胞48h后,MTT检测h RPE细胞的增殖,并计算转染物对细胞的抑制率,RT-PCR和Western blot检测h RPE细胞中PDGFR-α基因m RNA和蛋白的表达,流式细胞仪分析h RPE细胞的细胞周期。结果:h RPE细胞增殖明显受到抑制且呈剂量依赖性(P<0.05);PDGFR-α基因m RNA和蛋白的表达明显下调(P<0.05);G1期细胞百分比明显升高。结论:PDGFR-αsh RNA可沉默h RPE细胞中PDGFR-α基因m RNA和蛋白的表达,抑制细胞增殖。

PDGFR-α反义寡核苷酸对晶状体上皮细胞增殖的影响及机制初探

目的观察血小板源性生长因子-α受体反义寡核苷酸(PDGFR-αASODN)对体外培养兔晶状体上皮细胞N/N1003A增殖的影响,并探讨其作用机制。方法使用阳离子脂质体LipofectamineTM2000将PDGFR-αASODN转染入N/N1003A细胞,MTT法检测细胞的增殖活性,RT-PCR法检测PDGFR-αmRNA的表达,相差显微镜和透射电镜观察细胞形态和超微结构改变;流式细胞仪检测细胞的周期和凋亡率。结果 PDGFR-αASODN处理后,N/N1003A细胞增殖明显受到抑制,且呈剂量依赖性(P<0.05);PDGFR-αmRNA表达明显下调(P<0.05);透射电镜观察到细胞出现典型的凋亡特征;细胞凋亡率显著升高(P<0.05),同时细胞阻滞于G1期。结论 PDGFR-αASODN可沉默兔晶状体上皮细胞中PDGFR-α基因表达,抑制细胞增殖,并能诱导细胞凋亡,为应用PDGFR-αASODN预防后囊膜混浊提供实验依据。

靶向PDGFR-α mRNA的RNA干扰抑制实验性增生性玻璃体视网膜病变

目的:观察血小板源性生长因子-α受体(platelet-derived growth factor receptor,PDGFR-α)mRNA的RNA干扰抑制实验性增生性玻璃体视网膜病变(proliferative vitreoretinopathy,PVR)的效果。方法:选择PDGFR-αshRNA/lip2000比值1:1、1:2、1:3(其中PDGFR-αshRNA分别为2μg、3μg和4μg)制备复合物转染至人视网膜色素上皮细胞(human retinal pigment epithelium,HRPE)中,24h后分别取0.1mL注射到家兔玻璃体腔。选取健康成年有色家兔40只随机分为平衡盐溶液(balanced salt solution,BSS)组(N组),含lipofeetamine^(TM)2000的HRPE细胞稀释液组(A组),取最佳转染效率的1.0、1.5与2.0μmol/L含PDGF-α受体的shRNA及lipofeetamine^(TM)2000的HRPE细胞稀释液组(B、C和D组),每组8眼,右眼为实验眼。间接眼底镜观察PVR程度,免疫组织化学染色进行切片着色情况观察及组织病理学观察眼底改变。结果:PDGFR-αshRNA/lip2000比值1:2时,HRPE细胞最佳转染效率;B组、C组和D组PVR程度、组织病理学改变、免疫组织化学染色PDGFR-α浓度低于A组,D组比B组和C组更低。结论:PDGF-α受体mRNA的RNA干扰对实验性PVR形成有抑制作用。