蛋白激酶CβⅡ (PKCβ2)抑制剂LY333531减少心肌梗死后心肌肥大细胞浸润

目的探讨蛋白激酶CβⅡ(PKCβ2)特异性抑制剂LY333531对心梗后心衰大鼠心肌组织中肥大细胞浸润的影响。方法利用左冠状动脉降支(LAD)结扎制备大鼠心梗模型,将手术4周后出现心衰的大鼠分为对照组和LY333531治疗组,分别给予生理盐水和LY333531处理6周,同时设置假手术组。检测各组大鼠体质量和各项心功能指标,采用天狼星红染色观察心肌组织胶原沉积情况,甲苯胺蓝染色观察肥大细胞密度,ELISA检测血清中组胺和白细胞介素4(IL-4)的含量。结果与假手术组大鼠相比,手术后4周心衰大鼠(生理盐水组和LY333531组)左心室短轴缩短率(FS)显著减少,左心室收缩末期内径(LVESD)、左心室舒张末期内径(LVEDD)以及左心室后壁厚度(PWT)明显增加;心肌组织可观察到胶原沉积、肥大细胞浸润,血清中组胺和IL-4的含量增加。与生理盐水对照组相比,经LY333531治疗6周后,FS、LVESD以及PWT明显改善;但是LVEDD的改善无显著性差别,胶原蛋白沉积降低约50%,心肌组织肥大细胞数减少,血清中组胺和IL-4的含量降低。结论使用LY333531选择性抑制PKCβ2能够通过抑制心肌炎症反应,改善心梗后心力衰竭模型大鼠心脏功能和抑制病理性心肌重塑。

PKCβ1和PKCβ2在早期胃癌中的表达

目的:观察PKC β1和PKC β2 在早期胃癌癌组织及其癌周不典型增生和肠上皮化生中的表达。方法:对42例早期胃癌胃全切标本的癌组织、癌旁不典型增生、肠上皮化生及正常胃黏膜进行PKC β1和PKC β2免疫组织化学染色。结果:正常胃黏膜上皮颈部散在PKC β1阳性细胞,黏膜表面上皮细胞及幽门腺PKC β1和 PKC β2阴性;胃底腺壁细胞和主细胞PKC β1和 PKC β2呈强阳性。胃黏膜内淋巴滤泡中心区PKC β1强阳性,PKC β2阴性;相反,淋巴滤泡帽带区PKC β1阴性,而PKC β2强阳性。胃癌、癌旁不典型增生、肠上皮化生PKC β1的表达明显增强,而PKC β2的表达无明显增强。肠型胃癌PKC β1的表达明显高于弥漫型。PKC β1的表达与早期胃癌的浸润深度无关。结论:PKC β1在胃黏膜腺上皮颈部和淋巴滤泡中心的强阳性表达提示PKC β1可能与细胞的增生活性有关;胃癌及癌前病变中PKC β1的表达增强显示PKC β1参与了胃癌的癌变过程,并可能在癌变早期发生改变。

PKCβ1、PKCβ2和P53在结肠癌、腺瘤中的表达

目的观察PKCβ1、PKCβ2和P53在结肠肿瘤及其相应正常腺体中的表达情况。方法回顾分析23例结肠癌、20例结肠腺瘤的临床病理资料,并对相应组织及瘤周正常结肠黏膜进行PKCβ1、PKCβ2和P53等免疫组化染色。结果PKCβ1表达在结肠癌与腺瘤和正常黏膜差异显著,表达率和表达强度依次递减;PKCβ2在三者的表达率均低且相互间差异不显著;P53主要表达于中低分化的结肠癌及伴有中重度不典型增生的腺瘤,且结肠癌中的表达显著高于结肠腺瘤,正常黏膜不表达P53。结论PKCβ1可能与结肠黏膜上皮增生有关,可能参与了结肠的癌变过程,并可能在癌变早期发生改变;P53在判断良恶性方面具有重要意义。

PKCβ_2途径抑制药物LY333531延缓高糖诱导心肌纤维化的实验研究

目的观察高糖对心脏成纤维细胞增殖及活化的影响及PKCβ2途径抑制剂LY333531的干预作用。方法将大鼠心脏成纤维细胞在正常糖或高糖环境下培养,检测两组细胞的增殖数量、胶原蛋白的合成及PKCβ2蛋白的表达,并检测使用LY333531干预后心脏成纤维细胞增殖及活化指标的变化。结果高糖可使PKCβ2蛋白表达增加,并能增加心脏成纤维细胞的增殖及Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的合成,LY333531阻断PKCβ2途径后可减少成纤维细胞增殖的数量及减少胶原蛋白的合成。结论LY333531作为干预药物抑制PKCβ2途径可以在一定程度上延缓高糖诱导的心肌纤维化过程。

白香丹胶囊及白芍提取物对过表达5-HTR2C诱导的海马神经元中PKC的影响

目的:根据前期对愤怒模型大鼠基因芯片研究,构建大鼠5-HTR2C过表达海马神经元,研究白香丹胶囊及君药白芍提取物对5-HTR2C及PKCα/β2的影响,为阐明白香丹胶囊调整愤怒情绪的作用机制提供科学依据。方法:采用基因工程技术,构建5-HTR2C真核表达载体,应用电转染技术,使5-HTR2C在大鼠原代神经元中过量表达,建立5-HTR2C体外高表达的细胞模型,结合中药血清药理学,制备白香丹胶囊和白芍提取物的含药血清,以氟西汀为阳性对照药,干预转染后的神经元,提取各组蛋白后,Western-blot技术检测5-HTR2C及PKCα/β2中相应基因的蛋白表达。结果:与正常组相比,5-HTR2C转染组中5-HTR2C的蛋白表达显著升高(P <0. 001),PKCα的蛋白表达显著下降(P <0. 001),P-PKCα的蛋白表达显著升高(P <0. 001),PKCβ2的蛋白表达显著下降(P <0. 001),P-PKCβ2的蛋白表达显著升高(P <0. 001);与5-HTR2C过表达组相比,白香丹、白芍提取物及氟西汀干预组中5-HTR2C的蛋白表达均显著下调(P <0. 01,P <0. 01,P <0. 05),PKCα的蛋白表达均显著上调(P <0. 05,P <0. 01,P <0. 01),P-PKCα的蛋白表达显著下降(P <0. 001,P <0. 01,P <0. 05),PKCβ2的蛋白表达均显著上调(P <0. 001,P <0. 01,P <0. 05),PPKCβ2的蛋白表达显著下降(P <0. 001,P <0. 001,P <0. 01)。结论:白香丹胶囊能够调整5-HTR2C高表达引起的PKCα/β2及其磷酸化水平的异常变化,且作用比氟西汀稍强,充分显示了整体调节的优势。但是,作为其中主要组分的白芍提取物无显著的调节作用,推测白香丹胶囊其他组分-香附酮及丹皮酚在愤怒致病治疗中也有一定的作用,需进一步研究。

补肾与健脾方对骨质疏松症大鼠干预作用及下丘脑PKC蛋白表达的影响

目的:探索骨质疏松症的病理机制,比较补肾与健脾中药干预骨质疏松症的作用。方法:摘除大鼠卵巢建立骨质疏松症模型,给予补肾、健脾中药灌胃3个月,Western blotting法检测指标。结果:与正常组比较,骨质疏松症模型空白组骨密度明显下降(P<0.01),下丘脑中PKCα与PKCβ2蛋白表达显著增加(P<0.01)。与模型空白组比较,补肾中药高剂量组骨密度显著增加(P<0.01);补肾、健脾中药均可下调模型大鼠下丘脑中PKCα与PKCβ2蛋白表达(P<0.01)。结论:补肾中药防治骨质疏松症的作用优于健脾中药;骨质疏松的发生可能与脑PKC的变化有关,补肾中药对其有调节作用优于健脾中药。

补肾益髓方对骨质疏松症大鼠肾PKC蛋白表达的影响

目的:探索骨质疏松症的病理机制以及补肾益髓中药的防治作用。方法:手术摘除大鼠双侧卵巢建立骨质疏松症模型,给予干预因素补肾、健脾中药等灌胃3个月,取材并应用Western blotting法检测指标。结果:实验大鼠肾组织PKCα及PKCβ2蛋白表达情况,正常组与假手术组无差异;与正常组相比较,低剂量组无差异,而其他各组均存在显著差异(P<0.01);与低剂量组相比较,正常组及假手术组无差异,模型组及其他各用组均存在显著差异(P<0.01);与高剂量组相比,其他各组均存在显著差异(P<0.01)。

干预DAG-PKC信号转导通路对糖尿病大鼠心肌细胞JNK1和IRS1基因表达的影响

目的干预二酰甘油-蛋白激酶C(DAG-PKC)信号转导通路后观察JNK1、IRS1等在糖尿病大鼠心肌中的表达情况。方法采用HE染色,masson染色、电镜观察大鼠心肌的病理变化,应用免疫组化、Real-Time PCR检测PKCβ2、JNK1及IRS1在大鼠心肌的表达情况。结果糖尿病模型组PKCβ2、JNK1、p-JNK、IRS1表达明显高于对照组,干预DAG-PKC信号转导通路后明显下调其表达水平。结论 DAG-PKC通路可能是通过G蛋白受体和胰岛素受体途径的共同信号点JNK1影响下游的信号传导而导致糖尿病心肌病的发生发展,DAG-PKC-JNK1-IRS1-Akt/PKB-mTOR-p70S6K1等一系列信号位点可能是DAG-PKC信号转导通路引起糖尿病心肌病可能的潜在途径。

蛋白激酶Cs在咪达唑仑舒张自发性高血压大鼠主动脉平滑肌中的作用和机制

目的探讨蛋白激酶Cs(protein kinase C,PKCs)在咪达唑仑舒张自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)主动脉平滑肌中的作用和机制。方法利用离体血管环张力测定系统,观察咪达唑仑对SHR和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠主动脉平滑肌的舒张作用。分别用PKCs广谱抑制剂GF109203X(GF)、PKCβ2特异性抑制剂LY333531(LY)和PKCθ假底物(PKCθpseudo-substrate inhibitor,PPS)预孵育后,观察咪达唑仑舒张幅度的变化。利用Western blot检测咪达唑仑对SHR主动脉平滑肌中PKCβ2磷酸化水平的影响,以及咪达唑仑、LY、GF和PPS对SHR主动脉平滑肌中钙敏感通路蛋白磷酸化水平的影响。结果咪达唑仑浓度依赖性地舒张SHR和WKY的主动脉平滑肌。GF明显抑制了咪达唑仑对SHR和WKY主动脉平滑肌的舒张幅度。LY和PPS对咪达唑仑舒张WKY主动脉平滑肌的幅度没有明显影响,而LY明显抑制了咪达唑仑舒张SHR主动脉平滑肌的幅度。咪达唑仑明显抑制了SHR主动脉平滑肌中NE诱导的PKCβ2磷酸化水平的升高。咪达唑仑、LY和GF均明显抑制了SHR主动脉平滑肌中NE诱导的钙敏感通路蛋白磷酸化水平的升高。结论咪达唑仑通过抑制PKCβ2介导的钙敏感通路,引起SHR主动脉平滑肌的过度舒张反应。

糖尿病大鼠心肌细胞Caveolin-3与PKCβ_2蛋白表达及其相互作用关系

目的:研究糖尿病大鼠心肌细胞小窝蛋白(Caveolin-3,Cav-3)与蛋白激酶C(PKC)β2蛋白的变化并探寻两者的相互作用关系。方法:20只SD雄性大鼠[(250±10)g]随机分为正常对照组(Control)与糖尿病组(Diabetes),分离纯化心肌细胞。Western blot检测Cav-3,PKCβ2蛋白表达水平;免疫共沉淀、免疫荧光与共聚焦观察及Caveolins成分蛋白分析Cav-3与PKCβ2的相互作用关系。结果:与Control组比较,Diabetes组大鼠心肌细胞pPKCβ2表达水平增加而Cav-3表达水平降低。免疫共沉淀结果显示糖尿病促进PKCβ2与Cav-3形成蛋白复合体,免疫荧光与共聚焦观察发现高糖促使PKCβ2向Cav-3蛋白转位增加,进一步Caveolins成分蛋白分析发现PKCβ2共表达于Cav-3蛋白。结论:糖尿病心肌细胞PKCβ2活化水平增加及Cav-3表达水平降低,Cav-3可能参与了糖尿病心肌PKCβ2活化信号向下游分子的的转导。