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绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体的构建及鉴定
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作者 陈云蕾 袁利明 +3 位作者 丁林玲 刘素平 袁伟琴 赛务加甫 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第13期52-58,共7页
为了构建绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体,并在人胚肾细胞(HEK-293T细胞)中筛选及鉴定载体干扰效果,试验采用Invitrogen BLOCK-iTTM RNAi Designer在线软件设计PLC-γ1基因的4条shRNA干扰序列(PLC-γ1-shRNA-1~4)和1条阴性对照序列(... 为了构建绵羊PLC-γ1基因shRNA慢病毒干扰载体,并在人胚肾细胞(HEK-293T细胞)中筛选及鉴定载体干扰效果,试验采用Invitrogen BLOCK-iTTM RNAi Designer在线软件设计PLC-γ1基因的4条shRNA干扰序列(PLC-γ1-shRNA-1~4)和1条阴性对照序列(PLC-γ1-shRNA-NC),将其分别克隆至慢病毒干扰载体pLentiLox3.7(pLL3.7)中构建PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,用其转染HEK-293T细胞,48 h后通过倒置荧光显微镜观察荧光蛋白表达情况,并利用实时荧光定量PCR法和Western-blot检测HEK-293T细胞中PLC-γ1基因和蛋白质的表达情况,筛选出干扰效率最高的PLC-γ1-shRNA干扰序列并计算慢病毒含量。结果表明:试验成功设计出PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体,大小为120 bp。PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体均具有较高的干扰效率,在倒置荧光显微镜下均可观察到绿色荧光蛋白表达,其中PLC-γ1-shRNA-2序列的干扰效率最高,其PLC-γ1基因和蛋白质的相对表达量最低,极显著低于PLC-γ1-shRNA-NC的干扰(P<0.01),慢病毒含量为1.1×10^(7)IU/mL。说明针对PLC-γ1基因筛选出的PLC-γ1-shRNA慢病毒干扰载体从基因和蛋白质水平上均能有效地抑制PLC-γ1的表达。 展开更多
关键词 SHRNA plc-γ1 绵羊 慢病毒 干扰
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人源性基因PLC-γ1中SH2-SH2-SH3结构域的克隆、表达及纯化
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作者 金玉莲 金宁一 +2 位作者 项泽萍 任云霞 陈庆森 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期9-13,共5页
利用RT-PCR技术将人源性PLC-γ1中的SH2-SH2-SH3结构域基因扩增并克隆到载体pGEX-2T中,经热激反应转化到大肠杆菌BL21菌株内,在低温(33℃)下、利用IPTG诱导表达构建的重组基因的高效表达体系,利用谷胱甘肽琼脂糖(sepharose)4B纯化得到... 利用RT-PCR技术将人源性PLC-γ1中的SH2-SH2-SH3结构域基因扩增并克隆到载体pGEX-2T中,经热激反应转化到大肠杆菌BL21菌株内,在低温(33℃)下、利用IPTG诱导表达构建的重组基因的高效表达体系,利用谷胱甘肽琼脂糖(sepharose)4B纯化得到高表达的重组蛋白。SDS-PAGE和Western blot检测表明,PLC-γ1的SH2-SH2-SH3结构域重组基因可在低温(33℃)条件下在E.coliBL21细胞中稳定完整表达,但是在较高温度下(37℃)会产生SH2-SH2-SH3结构域不完全表达的现象。上述研究结果为人源性重组基因PLC-γ1中SH2-SH2-SH3结构域的深入研究和广泛应用奠定了基础。 展开更多
关键词 人源性plc-γ1 SH2-SH2-SH3结构域 基因克隆 表达
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PLC-γ1的多克隆抗体制备及对绵羊早期胚胎发育作用的初步研究
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作者 刘欣杰 吴晓雪 +3 位作者 刘素平 袁利明 陈宁 赛务加甫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期3842-3855,共14页
旨在通过构建PLC-γ1真核过表达载体并制备其多克隆抗体,为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供基础数据。本研究以实验室保存的Puc57-P2A-Flag-PLC-γ1菌株为模板设计引物并引入HindⅢ、AgeⅠ酶切位点,利用... 旨在通过构建PLC-γ1真核过表达载体并制备其多克隆抗体,为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供基础数据。本研究以实验室保存的Puc57-P2A-Flag-PLC-γ1菌株为模板设计引物并引入HindⅢ、AgeⅠ酶切位点,利用PCR扩增并纯化P2A-Flag-PLC-γ1基因,将其连入pcDNA3.1-EGFP载体,进行转化,通过菌液PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染HEK-293T细胞24 h,分为control组、空载组和PLC-γ1过表达组,通过显微镜观察细胞荧光,实时荧光定量PCR(qPCR)及Western blot(WB)检测转染后细胞中PLC-γ1的表达情况;Anti-Flag免疫磁珠纯化PLC-γ1蛋白;以10月龄的新西兰大白兔(健康状态良好,体重约50 kg,n=2)为对象制备多克隆抗体,间接ELISA法测定多克隆抗体效价,WB鉴定其特异性。通过显微注射重组质粒及离子霉素(Ion)结合6-DMAP孤雌激活卵母细胞,qPCR及WB检测PLC-γ1在卵裂后不同时期(2细胞期、4细胞期、8细胞期、桑椹胚期)的绵羊早期胚胎细胞中的表达情况。结果显示,成功构建真核过表达载体;转染24 h后,与空白对照及阴性对照相比,过表达组PLC-γ1表达量明显升高(P<0.01);WB结果显示成功获得并纯化PLC-γ1蛋白,大小为149 ku;测得PLC-γ1多克隆抗体效价为1∶12 800,并可与PLC-γ1蛋白发生免疫反应。将重组质粒注射到绵羊MⅡ期卵母细胞胞质中,qPCR及WB结果显示PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达。综上所述,本研究成功构建了PLC-γ1真核过表达载体并制备了其多克隆抗体,通过显微注射技术将重组质粒注入卵母细胞并实现表达,证明PLC-γ1在绵羊早期胚胎发育各时期均有表达,且具有作为新的卵母细胞激活因子的潜能。既为探索绵羊PLC-γ1基因对卵母细胞激活作用及早期胚胎发育的影响提供了科学依据,也为进一步提升绵羊的繁殖性能奠定基础。 展开更多
关键词 plc-γ1 真核过表达 蛋白纯化 多克隆抗体 早期胚胎
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绵羊PLC-γ1基因真核表达载体的构建及鉴定
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作者 袁利明 陈云蕾 +3 位作者 刘素平 丁林玲 吴兰 赛务加甫 《石河子大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2023年第4期441-448,共8页
目的旨在构建携带红色荧光蛋白(RFP)报告基因的绵羊PLC-γ1非融合性真核表达载体。方法在原有PUC57-PLC-γ1克隆载体基础上,对目的片段N端前加入P2A序列和3个连续Flag序列后使用HindⅢ酶和SalⅠ酶双酶切获得P2A-3×Flag-PLC-γ1片段... 目的旨在构建携带红色荧光蛋白(RFP)报告基因的绵羊PLC-γ1非融合性真核表达载体。方法在原有PUC57-PLC-γ1克隆载体基础上,对目的片段N端前加入P2A序列和3个连续Flag序列后使用HindⅢ酶和SalⅠ酶双酶切获得P2A-3×Flag-PLC-γ1片段,将其连接至pDsRed2-C1载体获得重组质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1;然后采用Lip 2000转染试剂将该重组质粒转染至HEK-293T细胞,最后利用荧光显微镜、qRT-PCR、Western blot、免疫共沉淀(IP)和免疫荧光(IF)法鉴定重组质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1的表达及亚细胞定位情况。结果双酶切和测序结果显示质粒pDsRed2-C1-P2A-3×Flag-PLC-γ1构建成功,观察到红色荧光;免疫荧光的亚细胞定位检测出PLC-γ1蛋白在细胞质中表达;qRT-PCR和Western blotting法均能检测出PLC-γ1表达,与对照组有显著性差异(P>0.01);免疫共沉淀也纯化分离出含有Flag标签的PLC-γ1蛋白。结论本研究成功构建绵羊PLC-γ1基因的真核表达载体,在P2A肽作用下实现目的蛋白PLC-γ1与DsRed2的表达,构建的载体可用于研究PLC-γ1在早期胚胎发育中的作用。 展开更多
关键词 P2A肽 plc-γ1 绵羊 HEK-293T细胞 Flag标签
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PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达分析
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作者 袁利明 陈云蕾 +1 位作者 刘欣杰 赛务加甫 《黑龙江畜牧兽医》 北大核心 2023年第19期53-56,61,137,共6页
为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、... 为了探索PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官和淋巴组织中的表达差异,试验随机选取6月龄健康的哈萨克绵羊雌雄各5只,进行屠宰,采集样本采用实时荧光定量PCR方法对PLC-γ1基因在哈萨克绵羊不同器官(脾脏、肺脏、胰腺、肾脏、心脏、肝脏、睾丸、卵巢、子宫)及淋巴组织(颈前淋巴、肩前淋巴、网胃淋巴、瓣胃淋巴、瘤胃淋巴、肠系淋巴、十二指肠淋巴、腹股沟淋巴、空肠淋巴和回盲淋巴)的表达规律进行研究。结果表明:哈萨克绵羊胰腺PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他器官(P<0.01),卵巢PLC-γ1基因的相对表达量显著高于肾脏和子宫(P<0.05),其余器官PLC-γ1基因相对表达量均差异不显著(P>0.05);十二指肠淋巴PLC-γ1基因的相对表达量显著高于瓣胃淋巴(P<0.05),瓣胃淋巴PLC-γ1基因的相对表达量极显著高于其他淋巴组织(P<0.01)。说明PLC-γ1基因在哈萨克绵羊各系统器官和淋巴组织中均有表达,并且在胰腺、卵巢、十二指肠淋巴、瓣胃淋巴中的表达明显,对机体免疫、生殖和消化等方面具有重要作用。 展开更多
关键词 哈萨克绵羊 plc-γ1基因 器官 淋巴 表达
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PLC-γ1对PDGF介导的细胞内钙流的影响 被引量:1
6
作者 杨霖 罗深秋 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2001年第2期93-94,共2页
磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)可催化PIP2生成DAG和IP3,后二者被认为是细胞内第二信使。其中IP3可使细胞内钙库的Ca2+释放到胞浆。应用无内源性PLC-γ1小鼠成纤维细胞株,观察在血小板生长因子PDGF作用下细胞内钙流的产生情况,发现缺失PLC-γ1... 磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)可催化PIP2生成DAG和IP3,后二者被认为是细胞内第二信使。其中IP3可使细胞内钙库的Ca2+释放到胞浆。应用无内源性PLC-γ1小鼠成纤维细胞株,观察在血小板生长因子PDGF作用下细胞内钙流的产生情况,发现缺失PLC-γ1的细胞与正常细胞都出现细胞内钙动员。但前者钙流产生较后者值小且峰值出现较晚。这意味着PLC-γ1在PDGF作用下成纤维细胞内钙流的产生过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其它途径代偿。 展开更多
关键词 磷酸脂酶C-γ1 血小板生长因子 钙离子
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PLC-γ1对血小板生长因子介导的细胞增殖的影响
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作者 杨霖 罗深秋 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第7期485-487,F002,共4页
目的 观察磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)对血小板生长因子(PDGF)介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC-γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况(包括细胞内钙离子动员及DNA合成),并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC-γ... 目的 观察磷酸脂酶C-γ1(PLC-γ1)对血小板生长因子(PDGF)介导的细胞增殖的影响。方法 应用无内源性PLC-γ1小鼠成纤维细胞株,观察在PDGF作用下细胞增殖情况(包括细胞内钙离子动员及DNA合成),并与正常细胞株对照。结果 缺失PLC-γ1的细胞与正常细胞DNA合成显著增强,均出现细胞内钙动员;但PLC-γ1-/-细胞DNA合成时间显著延长,钙流较PLC-γ1+/+值小且峰值出现较晚(P<0.01)。结论 PLC-γ1在PDGF作用下成纤维细胞的增殖过程中有重要作用,当其缺乏时功能可被其他途径代偿。 展开更多
关键词 磷酸脂酶C-γ1 血小板生长因子 细胞增殖
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蛋白激酶C介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导热休克蛋白70表达 被引量:1
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作者 李治纲 桂莉 +3 位作者 郭家智 李树德 孙俊 陆地 《昆明医学院学报》 2009年第3期1-4,8,共5页
目的研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcg1-/)-及野生型PLC-γ1基因(plcg1+/)+小鼠胚胎成纤维细胞为模型,West... 目的研究蛋白激酶C(PKC)是否介导磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70(HSP70)表达的信号转导通路.方法以基因敲除方法建立的缺失PLC-γ1基因(plcg1-/)-及野生型PLC-γ1基因(plcg1+/)+小鼠胚胎成纤维细胞为模型,Western免疫印迹-增强化学发光法检测高温诱导时PLC-γ1的磷酸化激活,PKC激酶检测试剂盒测定PKC激活程度,并以酶联免疫吸附(ELISA)法及MTT法测定PKC抑制剂白屈莱红碱(chelerthrine chloride,CH)和激活剂佛波醇-12-豆蔻酰-13乙酸(phorbol 12-myristate 13-acetate,PMA)对HSP70表达及细胞热耐力的影响.结果plcg1+/+细胞经高温处理,PLC-γ1出现磷酸化激活、PKC活性显著增强(P<0.01);plcg1-/-细胞PKC活性也有所增强,但明显低于plcg1+/+细胞(P<0.01).PKC抑制剂或激活剂能增强或降低两种细胞热耐力,对高温引起的两种细胞HSP70合成都有明显抑制或促进作用.结论蛋白激酶C可介导磷脂酶C-γ1参与高温诱导成纤维细胞热休克蛋白70表达的信号传递. 展开更多
关键词 磷脂酶C-γ1 热休克蛋白70 缺失plc-γ1基因小鼠成纤维细胞 蛋白激酶C
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绵羊磷脂酶C-γ1基因克隆及生物信息学分析 被引量:5
9
作者 袁利明 胡广东 +4 位作者 刘欣杰 吴晓雪 刘素平 陈宁 赛务加甫 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2021年第6期1883-1893,共11页
本研究旨对绵羊磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)基因预测序列进行筛选鉴定,获取PLC-γ1基因序列并对其生物信息学进行分析。根据GeneBank(登录号:NC_040264.1)及Ensembl(登录号:ENSOARG00000001700.1)给出的绵羊PLC-γ1的4种不同预测的转录本的编... 本研究旨对绵羊磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)基因预测序列进行筛选鉴定,获取PLC-γ1基因序列并对其生物信息学进行分析。根据GeneBank(登录号:NC_040264.1)及Ensembl(登录号:ENSOARG00000001700.1)给出的绵羊PLC-γ1的4种不同预测的转录本的编码区(CDS)区进行BLAST对比,在非同源区内两端设计引物,从绵羊卵巢提取总RNA并转录成cDNA,运用RT-PCR方法扩增该特异性片段,胶回收后测序,经BLAST比对筛选出和与该片段一致基因序列。根据筛选序列的引物,运用LA Taq(GC Buffer)高保真酶对绵羊PLC-γ1基因进行PCR扩增,胶回收产物连接PUC57-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞,挑选单克隆进行测序。利用生物信息学技术对该基因及编码的氨基酸序列进行分析。结果显示,试验成功扩增出非同源片段330 bp,经BLAST对比分析,预测的转录本X3预测序列与其一致,连接PUC57-T载体,经测序成功扩增3870 bp的绵羊PLC-γ1基因。绵羊PLC-γ1基因与山羊关系紧密,与牛、马、猪等家畜具有较强的进化关系,蛋白分子式为C_(6582)H_(10160)N_(1812)O_(1962)S_(58)。理论分子质量为147.9 ku,存在于细胞质内,且不具备跨膜性,无信号肽,为亲水性弱酸不稳定蛋白。该基因N、C端GC含量偏高,分别达80%、70%以上,具备SH2、SH3、C2等高度保守结构域,二级结构中α-螺旋、延伸链、β-转角、无规则卷曲占比分别为36.46%、16.14%、5.04%和42.36%,磷酸化位点有112个,Y428、Y509和S514为关键磷酸化位点。本研究结果为绵羊PLC-γ1蛋白表达研究提供了理论依据,对研究新疆地方品种羊的胚胎发育、提高受精率等具有重要意义。 展开更多
关键词 绵羊 磷脂酶C-γ1(plc-γ1)基因 生物信息学分析
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牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的变化 被引量:3
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作者 李隽 胥春 +1 位作者 郝轶 刘晓峰 《上海口腔医学》 CAS CSCD 2011年第4期337-341,共5页
目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载不同时间,通过... 目的:观察机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载不同时间,通过流式细胞仪对细胞进行PLC-γ1水平检测。采用SPSS13.0软件包对数据进行方差分析。结果:在加载牵张应变初期,细胞内的PLC-γ1水平维持较低水平;随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内的PLC-γ1水平逐渐升高。50min时,PLC-γ1水平达到各应变组的最高值(P<0.01)。随着加载时间的继续延长,60min时,各应变组的PLC-γ1水平都显著下降(P<0.01)。结论:牵张应变可引起细胞内PLC-γ1水平的变化。 展开更多
关键词 人牙周膜细胞 磷脂酶C-γ1 机械牵张应变
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绵羊磷脂酶C-γ1对绵羊卵母细胞体外成熟的影响
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作者 刘欣杰 吴晓雪 +3 位作者 刘素平 袁利明 陈宁 赛务加甫 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期3459-3469,共11页
卵母细胞成熟率可作为衡量体外培养卵母细胞质量和发育能力的指标。本研究旨在探讨PLC-γ1是否参与了绵羊卵母细胞的体外成熟及其影响。将绵羊卵母细胞在含有不同浓度的U73122(PLC抑制剂))及m^(-3)M3FBS(PLC激活剂)的成熟培养液中进行培... 卵母细胞成熟率可作为衡量体外培养卵母细胞质量和发育能力的指标。本研究旨在探讨PLC-γ1是否参与了绵羊卵母细胞的体外成熟及其影响。将绵羊卵母细胞在含有不同浓度的U73122(PLC抑制剂))及m^(-3)M3FBS(PLC激活剂)的成熟培养液中进行培养,每个浓度150个细胞,重复试验3次,统计细胞成熟率、卵裂率及桑葚胚率以供筛选出PLC-γ1的最佳抑制及促进浓度。qPCR检测0.5μmol·L^(-1)U73122及0.5μmol·L^(-1)m^(-3)M3FBS处理后48 h的卵母细胞中PLC-γ1、BAK、BAX、CASP 3、CASP 8、P 53、BCL 6基因mRNA水平表达情况,Western blot检测0.5μmol·L^(-1)U73122及0.5μmol·L^(-1)m^(-3)M3FBS处理后48 h的卵母细胞中PLC-γ1、BAK、BAX、CASP3、CASP8、P53、BCL6蛋白的表达情况。每个浓度150个细胞,重复试验3次。在绵羊卵母细胞中,0.5μmol·L^(-1)U73122是促进成熟的最佳浓度,0.5μmol·L^(-1)m^(-3)M3FBS是抑制成熟的最佳浓度。0.5μmol·L^(-1)U73122处理组卵裂率和囊胚率均显著低于对照组。0.5μmol·L^(-1)m^(-3)M3FBS处理组卵裂率和囊胚率均显著高于对照组。通过qPCR检测结果显示,与对照组相比,U73122组中BAK、BAX、CASP 3、CASP 8、P 53基因mRNA表达量显著上升,PLC-γ1、BCL 6基因mRNA表达量显著下降;m^(-3)M3FBS组则与之相反。Western blot结果显示,与对照组相比,U73122组中BAK、BAX、CASP8蛋白表达量显著增多,PLC-γ1、BCL6蛋白表达量显著减少,P53和CASP3蛋白表达量无明显变化。m^(-3)M3FBS组中PLC-γ1、BCL6蛋白表达量显著增多,BAX、CASP3、P53蛋白表达量显著减少,BAK、CASP8蛋白表达量无明显变化。综上所述,本研究表明PLC-γ1在绵羊卵母细胞的体外成熟培养中发挥重要作用,其可调节卵母细胞的成熟以及早期胚胎的发育能力。 展开更多
关键词 plc-γ1 绵羊卵母细胞 U73122 m-3M3FBS
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子痫前期血清通过PLCγ1促进脐血管平滑肌细胞PKC-α活性及胶原的表达
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作者 蒋荣珍 滕银成 +4 位作者 黄亚绢 顾京红 马莉 李明 周月娣 《现代妇产科进展》 CSCD 2014年第2期113-116,共4页
目的:探讨子痫前期(PE)血清激活血管平滑肌细胞蛋白激酶C-α(PKC-α)及前胶原Ⅰ表达是否由磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信息分子介导。方法:原代培养脐静脉内皮细胞(HUVEC)与脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),体外建立HUVEC与HUASMC共培养体系,用PE血... 目的:探讨子痫前期(PE)血清激活血管平滑肌细胞蛋白激酶C-α(PKC-α)及前胶原Ⅰ表达是否由磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)信息分子介导。方法:原代培养脐静脉内皮细胞(HUVEC)与脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),体外建立HUVEC与HUASMC共培养体系,用PE血清处理共培养HUASMC细胞。MTT法检测HUASMC细胞活力;Annexin VFITC-流式细胞仪检测HUASMC凋亡;Western blot法检测PLC-γ1(磷酸化)、PKC-α(包膜/胞浆比值)活性以及前胶原Ⅰ表达。siRNA沉默PLC-γ1表达后,观察PE血清对共培养HUVEC细胞PKC-α活性及前胶原Ⅰ表达的影响。结果:PE血清可促进共培养HUASMC细胞PLC-γ1磷酸化、PKC-α膜转位及前胶原Ⅰ的表达(P<0.05);siRNA沉默HUASMC细胞PLC-γ1蛋白表达可逆转PE血清引起的PKC-α膜转位及前胶原Ⅰ的表达(P<0.05)。结论:PE血清通过PLC-γ1-PKC-α信息途径促进HUASMC前胶原Ⅰ的表达,可能在胎盘血管病理过程中起着重要的作用。 展开更多
关键词 子痫前期 平滑肌细胞 磷脂酶C-γ1 蛋白激酶C-Α 血管病变
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牵张应变作用下人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平变化的实验研究
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作者 李隽 胥春 +1 位作者 郝轶 刘晓峰 《口腔材料器械杂志》 2014年第1期30-34,共5页
目的观察人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平在机械牵张应变作用下的变化。方法通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。并于加载后10 min、2... 目的观察人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平在机械牵张应变作用下的变化。方法通过原代和传代培养,获得性状稳定的人牙周膜细胞,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。并于加载后10 min、20 min、30 min、40 min、50 min和60 min,通过流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内PLC-γ1水平的变化。应用SPSS13.0软件包对数据进行统计分析。结果流式细胞仪检测发现:加载初期,细胞内的PLC-γ1水平维持在较低水平,随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内PLC-γ1水平逐渐升高。50 min时PLC-γ1水平达到了各个应变组的最高值(P<0.01),60 min时各应变组的PLC-γ1水平都有所下降(P<0.01)。激光扫描共聚焦显微镜检测发现:各组都有PLC-γ1的表达,其中50 min加载组表达相对较强。结论机械牵张应变可以引起人牙周膜细胞内PLC-γ1表达量发生改变。 展开更多
关键词 人牙周膜细胞 磷脂酶C-γ1 机械牵张应变
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转录因子HBP1通过负调控磷脂酶C-γ1基因表达抑制宫颈癌细胞的迁移 被引量:4
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作者 汪军梅 刘宇娟 +4 位作者 薛俊慧 曹正意 蒋卫 李慧 张晓伟 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1455-1463,共9页
HMG盒转录因子1(HMG box transcription factor 1,HBP1)作为一个肿瘤抑制因子,具有双重转录因子活性,通过激活或抑制细胞生长相关基因(p16,p21或DNMT1)的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)是磷脂酶C... HMG盒转录因子1(HMG box transcription factor 1,HBP1)作为一个肿瘤抑制因子,具有双重转录因子活性,通过激活或抑制细胞生长相关基因(p16,p21或DNMT1)的表达,抑制肿瘤细胞的增殖。磷脂酶C-γ1(phospholipase C-γ1,PLC-γ1)是磷脂酶C家族的成员,在许多肿瘤细胞PLC-γ1表达升高,与肿瘤细胞的增殖和迁移密切相关。本研究通过生物信息学预测发现PLC-γ1可能是HBP1的下游靶分子;在宫颈癌细胞HeLa中分别过表达和敲低HBP1后,荧光定量PCR及Western印迹检测证明,过表达HBP1,PLC-γ1 mRNA水平下调至49%,蛋白质相对表达量下调至48%(P<0.01);反之,敲低HBP1,PLC-γ1 mRNA水平上调2倍,蛋白质相对表达量上调2倍(P<0.01);双荧光素酶报告基因结果证实,HBP1转录抑制PLC-γ1启动子活性;染色质免疫沉淀结果证实,细胞内HBP1与PLC-γ1启动子结合;细胞划痕实验48 h结果显示,HBP1组划痕面积改变率低于对照组约19%(P<0.05),“HBP1+PLC-γ1”组与HBP1组相比划痕面积改变率增加约17%(P<0.05);Transwell迁移和侵袭实验发现,HBP1组与对照组相比穿过膜的细胞数量分别减少约90和68(P<0.01),“HBP1+PLC-γ1”组与HBP1组相比穿过膜的细胞数量分别增加约89和47(P<0.01),划痕和Transwell实验结果表明,HBP1下调PLC-γ1表达抑制了宫颈癌细胞的迁移和侵袭能力。上述所有结果表明,PLC-γ1是HBP1下游的靶基因,HBP1可以直接结合PLC-γ1基因的启动子,在转录水平抑制PLC-γ1基因的表达,从而抑制宫颈癌细胞的迁移和侵袭。该研究初步阐明了HBP1调控PLC-γ1的分子机制及其在宫颈癌细胞迁移中的作用,为确定宫颈癌治疗的有效分子靶点提供了实验依据。 展开更多
关键词 HMG盒转录因子1 磷脂酶C-γ1 宫颈癌细胞
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亚低温对脑缺血-再灌注损伤后PLC-γ 1mRNA的影响 被引量:2
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作者 杨金伟 郭建辉 李力燕 《解剖科学进展》 CAS 2014年第4期309-311,314,共4页
目的探讨脑缺血-再灌注(I/R)损伤后PLC-γ1mRNA的表达变化及亚低温对脑损伤的保护作用。方法 70只雄性SD大鼠随机分为正常组、脑缺血-再灌注组(I/R)、亚低温组(SHP组),I/R、SHP组又分为24h、36h、72h亚组,每组10只动物。采用RT–PCR技... 目的探讨脑缺血-再灌注(I/R)损伤后PLC-γ1mRNA的表达变化及亚低温对脑损伤的保护作用。方法 70只雄性SD大鼠随机分为正常组、脑缺血-再灌注组(I/R)、亚低温组(SHP组),I/R、SHP组又分为24h、36h、72h亚组,每组10只动物。采用RT–PCR技术检测各时间点脑皮质中PLC-γ1mRNA的表达。结果正常组、I/R组、SHP组脑皮质中均有PLC-γ1mRNA的阳性表达,I/R组的阳性表达水平随损伤时间的延长逐渐下调,SHP组各时间点脑皮质PLC-γ1mRNA表达水平均高于I/R组。结论亚低温的脑缺血-再灌注损伤的保护作用可能与上调PLC-γ1mRNA表达相关。 展开更多
关键词 亚低温 脑缺血–再灌注 plc-γ1 大鼠
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启膈散及其拆方抑制人食管癌细胞裸鼠移植瘤作用的机理研究 被引量:9
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作者 司富春 《中国中医基础医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期451-453,共3页
关键词 启膈散 食管癌细胞 荷瘤裸鼠 plc-γ1
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肺炎支原体BALB/c小鼠支气管肺泡灌洗液中IFN-γ、IL-4、IL-5、IL-10表达和气道阻力的变化 被引量:8
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作者 张晗 焦绪勇 +4 位作者 尚云晓 王莉 何梦博 韩晓华 王桂珍 《解剖科学进展》 CAS 2014年第3期240-245,共6页
目的通过建立肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠的模型,探讨MP感染后小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子(IFN-γ和IL-4、IL-5和IL-10)的含量变化及其对气道阻力的影响。方法 50只BALB/c小鼠随机分为MP感染组(MP组)和PBS对照组(N组),每组2... 目的通过建立肺炎支原体(MP)感染BALB/c小鼠的模型,探讨MP感染后小鼠支气管肺泡灌洗液(BALF)中炎性因子(IFN-γ和IL-4、IL-5和IL-10)的含量变化及其对气道阻力的影响。方法 50只BALB/c小鼠随机分为MP感染组(MP组)和PBS对照组(N组),每组25只,分别于接种后第3d、7d、14d、21d和30d从各组中取5只鼠,取肺脏制作病理切片,HE染色观察病理组织学变化;RT-PCR对模型进行鉴定;ELISA试剂盒检测BALF中IFN-γ、IL-4、IL-5和IL-10含量;同时用肺功能仪测定各组小鼠肺的吸气阻力、呼气阻力和顺应性。结果 MP感染小鼠后IFN-γ、L-4、IL-5和IL-10的含量较N组明显升高(<0.05);吸气阻力、呼气阻力较N组增加(<0.05),顺应性降低较N组增加(<0.05),第7天时达高峰,随后下降30天恢复正常。结论 MP感染BALB/c小鼠后气道阻力增加、顺应性降低,炎性因子过表达。 展开更多
关键词 肺炎支原体 BALB C小鼠 炎性因子 气道阻力
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Spermine protects intestinal barrier integrity through ras-related C3 botulinum toxin substrate 1/phospholipase C-γ1 signaling pathway in piglets 被引量:2
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作者 Guangmang Liu Xiaomei Xu +6 位作者 Caimei Wu Gang Jia Hua Zhao Xiaoling Chen Gang Tian Jingyi Cai Jing Wang 《Animal Nutrition》 SCIE CSCD 2022年第1期135-143,共9页
Weaning stress can cause tight junctions damage and intestinal permeability enhancement,which leads to intestinal imbalance and growth retardation,thereby causing damage to piglet growth and development.Spermine can r... Weaning stress can cause tight junctions damage and intestinal permeability enhancement,which leads to intestinal imbalance and growth retardation,thereby causing damage to piglet growth and development.Spermine can reduce stress.However,the mechanism of spermine modulating the intestinal integrity in pigs remains largely unknown.This study aims to examine whether spermine protects the intestinal barrier integrity of piglets through ras-related C3 botulinum toxin substrate 1(Rac1)/phospholipase C-g1(PLC-γ1)signaling pathway.In vivo,80 piglets were categorised into 4 control groups and 4 spermine groups(10 piglets per group).The piglets were fed with normal saline or spermine at 0.4 mmol/kg BW for 7 h and 3,6 and 9 d.In vitro,we investigated whether spermine protects the intestinal barrier after a tumor necrosis factor a(TNF-a)challenge through Rac1/PLC-γ1 signaling pathway.The in vivo study found that spermine supplementation increased tight junction protein mRNA levels and Rac1/PLC-γ1 signaling pathway gene expression in the jejunum of piglets.The serum D-lactate content was significantly decreased after spermine supplementation(P<0.05).The in vitro study found that 0.1 mmol/L spermine increased the levels of tight junction protein expression,Rac1/PLC-γ1 signaling pathway and transepithelial electrical resistance,and decreased paracellular permeability(P<0.05).Further experiments demonstrated that spermine supplementation enhanced the levels of tight junction protein expression,Rac1/PLC-γ1 signaling pathway and transepithelial electrical resistance,and decreased paracellular permeability compared with the NSC-23766 and U73122 treatment with spermine after TNF-a challenge(P<0.05).Collectively,spermine protects intestinal barrier integrity through Rac1/PLC-γ1 signaling pathway in piglets. 展开更多
关键词 SPERMINE Intestinal barrier Rac1/plc-γ1 signaling pathway Intestinal integrity
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牵张应变对人牙周膜细胞内磷脂酶C-γ1水平的影响 被引量:1
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作者 李隽 胥春 +1 位作者 郝轶 刘晓峰 《临床口腔医学杂志》 2012年第11期643-647,共5页
目的:观察在机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的HPDLCs,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载于不同的时间段,通... 目的:观察在机械牵张应变作用下,人牙周膜细胞(HPDLCs)内磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)水平的变化。方法:通过原代和传代培养,获得性状稳定的HPDLCs,使用动态机械应变细胞加载仪对细胞进行1%、10%和20%动态牵张应变加载。加载于不同的时间段,通过流式细胞仪和激光扫描共聚焦显微镜对细胞进行PLC-γ1水平的检测。应用SPSS 13.0软件对数据进行方差分析。结果:使用流式细胞仪对细胞内PLC-γ1水平检测发现:加载初期,细胞内的PLC-γ1水平维持在较低水平,随着牵张应变加载时间的延长,牙周膜细胞内PLC-γ1水平逐渐升高。50 min时PLC-γ1水平达到了各个应变组的最高值(P<0.01)。随着加载时间的继续延长,60 min时各应变组的PLC-γ1水平都有所下降(P<0.01)。激光扫描共聚焦显微镜检测发现:对照组和动态加载组都有PLC-γ1的表达,但加载50 min组表达相对较强。结论:机械牵张应变可以引起HPDLCs内PLC-γ1水平的变化。 展开更多
关键词 人牙周膜细胞 磷脂酶C-γ1 机械牵张应变
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子痫前期血清通过PLCγ1-IP_3R信息途径促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子聚集
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作者 蒋荣珍 滕银成 +4 位作者 黄亚绢 顾京红 马莉 李明 周月娣 《中国优生与遗传杂志》 2014年第5期77-80,共4页
目的探讨子痫前期血清对脐动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度变化的影响以及磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)-三磷酸肌醇受体(IP3R)信息途径对其的调控作用。方法体外建立内皮细胞与平滑肌细胞共培养体系,子痫前期血清处理共培养细胞,MTT检测平滑肌... 目的探讨子痫前期血清对脐动脉血管平滑肌细胞内钙离子浓度变化的影响以及磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)-三磷酸肌醇受体(IP3R)信息途径对其的调控作用。方法体外建立内皮细胞与平滑肌细胞共培养体系,子痫前期血清处理共培养细胞,MTT检测平滑肌细胞活力,Western blot检测PLC-γ1(磷酸化)、三磷酸肌醇受体(IP3R)活性,Fluo-3/AM检测平滑肌细胞内钙离子浓度,PLC-γ1siRNA沉默平滑肌细胞PLC-γ1表达后,观察子痫前期血清对共培养平滑肌细胞IP3R及细胞内钙离子浓度变化的影响。结果子痫前期血清可促进共培养平滑肌细胞PLC-γ1、IP3R磷酸化及钙离子浓度,平滑肌细胞PLC-γ1沉默可逆转子痫前期血清引起的共培养平滑肌细胞内IP3R活性及细胞内钙离子增加。结论子痫前期血清通过PLC-γ1-IP3R信息通路促进脐动脉平滑肌细胞内钙离子增加,PLC-γ1-IP3R激活引起平滑肌细胞内钙离子增加可能在子痫前期血管平滑肌细胞病理过程中起重要作用。 展开更多
关键词 子痫前期 平滑肌细胞 磷脂酶C-γ1 三磷酸肌醇 钙离子内聚
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