长链非编码RNA POT1-AS1在宫颈癌顺铂耐药中的作用研究

背景同步放化疗是晚期宫颈癌(cervical cancer,CC)的治疗方法,顺铂(cisplatin,CDDP)是目前临床化疗使用的主要药物之一,CDDP耐药的发生严重制约了其临床应用,因此针对CDDP耐药发生机制的研究对CC的治疗至关重要。目的探索长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)POT1-AS1在宫颈癌CDDP耐药中的作用。方法基于TCGA数据库,分析POT1-AS1在CC组织及正常组织中的表达情况,并分析POT1-AS1的表达量与预后的关系。采用CCK-8实验评估CDDP处理后的耐药细胞系和亲本细胞系、siPOT1-AS1组和siNC组的活力并测定相应的半抑制浓度(the half maximal inhibitory concentration,IC50)。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qPCR)检测POT1-AS1在耐药细胞系及相应亲本细胞系中的表达以及POT1-AS1表达与CDDP作用时间的相关性。克隆形成实验检测POT1-AS1对CDDP耐药细胞增殖情况的影响。PI/DAPI双染荧光用于评估POT1-AS1与CDDP诱导的细胞死亡的相关性。结果POT1-AS1在CC肿瘤组织中高表达,并与不良预后相关。耐药细胞系的细胞活力及IC50值显著高于亲本细胞系(P<0.001),POT1-AS1沉默组的细胞活力及IC50值显著低于阴性对照(negative control,NC)组(P<0.001),差异均有统计学意义。POT1-AS1在耐药细胞系中的表达显著高于亲本细胞系(P<0.001),且随着CDDP给药时间的延长而增加。沉默POT1-AS1后可显著抑制耐药细胞的增殖能力(P<0.01)。与NC组相比,POT1-AS1沉默组的CC耐药细胞死亡率显著增加(P<0.01),尤其是在加入CDDP作用后(P<0.01)。结论POT1-AS1与宫颈癌CDDP耐药密切相关,并通过抑制CDDP诱导的细胞死亡发挥促癌作用。

POT1-AS1在胃腺癌组织中的表达及其对细胞增殖的影响

目的探讨POT1-AS1在胃腺癌(GAC)组织中的表达及其对细胞增殖的影响。方法收集2016年6月至2018年12月在西安交通大学第一附属医院普通外科手术切除的80对GAC组织及其癌旁正常组织标本(所有患者术前未接受过放、化疗等辅助治疗)、正常人胃黏膜上皮细胞(GES-1)和GAC细胞株(BGC-823、MGC-803、MKN45、SGC-7901)。RT-PCR法检测并比较POT1-AS1在GAC组织与癌旁正常组织、正常人胃黏膜上皮细胞与GAC细胞系、sh-POT1-AS1质粒转染与未转染SGC-7901细胞中的mRNA相对表达量;CCK-8实验和平板克隆实验检测POT1-AS1敲低(即sh-POT1-AS1质粒转染)对SGC-7901细胞增殖能力的影响;Western blot法检测POT1-AS1敲低对SGC-7901细胞中细胞周期相关蛋白相对表达量的影响。结果POT1-AS1在GAC组织及细胞系中均呈高表达(均P<0.05)。sh-POT1-AS1质粒转染后,SGC-7901细胞中POT1-AS1 mRNA相对表达量明显低于未转染组(P<0.05)。POT1-AS1敲低后,SGC-7901细胞增殖能力明显减弱,SGC-7901细胞克隆数亦明显减少,SGC-7901细胞中细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、细胞周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)蛋白相对表达量均明显降低,而细胞周期蛋白依赖性激酶抑制因子1A(CDKI1A)蛋白相对表达量明显升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论GAC组织及细胞系中POT1-AS1 mRNA相对表达量均明显升高;在GAC细胞中敲低POT1-AS1可抑制CDK4、Cyclin D1蛋白表达并促进CDKI1A蛋白表达,进而抑制细胞增殖。