有氧运动对C57BL／6小鼠骨骼肌PPARδ表达和肌纤维类型的影响

目的:研究有氧耐力运动对骨骼肌PPARδ的表达及由此对肌纤维类型的影响,探讨骨骼肌对耐力训练产生适应性反应的生物学机制。方法:本研究选用雄性C57BL/6小鼠90只,分别随机分为3周(TC)、6周(SC)、9周(NC)对照组和3周(TE)、6周(SE)、9周(NE)运动组,建立无负重游泳训练模型,采用Northernblot、Westernblot,免疫荧光和mATPase染色分析各组骨骼肌PPARδ的表达及肌纤维类型的变化。结果:有氧运动各组骨骼肌PPARδ转录和翻译水平与各自对照组相比显著提高。mATPase染色结果表明各运动组运动后腓肠肌纤维类型百分比无显著改变。结论:有氧耐力运动可诱导骨骼肌PPARδmRNA和蛋白表达增强,但并未导致骨骼肌纤维类型的显著变化,提示PPARδ可能在骨骼肌对运动训练的适应性过程中发挥重要作用,而单纯运动并不能诱导肌纤维类型转变的发生,其可能是细胞内代谢和外界干预因素共同作用的结果。

小鼠PPARδ腺病毒载体的构建及其在INS-1细胞中的表达

目的构建含有小鼠过氧化物酶增殖激活受体δ(peroxisom e proliferate activated receptor delta,PPARδ)基因的重组腺病毒表达载体。方法通过KpnⅠ和EcoRⅤ双酶切,从pCDNA3.0-mPPARδ载体中得到含有小鼠PPARδ全长编码序列的片段,将mPPARδ与pAdtrack-CMV相连接并用Pm eⅠ线性化后,转化含有pAdeasy骨架质粒的细菌B J5183,在细菌内同源重组后得到pAd-mPPARδ质粒。pAd-mPPARδ经PacⅠ线性化后用L ipofectam ineTM2000转染HEK293细胞,包装得到含PPARδ基因的病毒重组子,将病毒重组子在HEK293细胞中扩增后,反复冻融得到滴度较高的含PPARδ的病毒液。将收集的病毒液感染INS-1细胞,绿色荧光观察GFP和W estern b lot检测PPARδ蛋白的表达。结果成功构建了含有小鼠PPARδ基因的重组腺病毒载体,病毒滴度为1.5×1010pfu/m。l重组腺病毒感染后可使INS-1细胞PPARδ蛋白表达明显增加。结论该重组腺病毒载体的构建为研究PPARδ基因在胰岛细胞中生物学功能提供了一定的工作基础。

过氧化物酶体增殖物激活受体δ＋294T／C基因多态性与冠心病的关系

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体δ(PPARδ)+294T/C基因多态性与冠心病的关系。方法运用聚合酶链式反应及限制酶切片段长度多态性技术分析无血缘关系汉族人群[82例正常对照者(NC),120例冠心病(CHD)患者]的PPARδ+294T/C基因多态性,分析基因型频率、等位基因频率,并对不同基因型患者冠心病的危险性进行评价。结果两组间基因型分布有显著性差异(P<0.05);CHD组TC+CC基因频率及C等位基因频率均明显高于NC组(P<0.05);C等位基因携带(TC+CC)者冠心病危险性高于TT基因型(C等位基因携带者OR:3.16,95%CI:1.39～7.14)。结论PPARδ+294T/C基因多态性与冠心病之间有重要的相关性,C等位基因携带可能是冠心病的一个的危险因素。

BRAF、TERTp、RAS、RET/PTC、PAX8/PPAR在甲状腺癌中的研究进展

甲状腺结节是内分泌系统的常见病,判别甲状腺结节的良恶性对患者的预后评估有着极其重要的意义。甲状腺细针穿刺抽吸检查对甲状腺结节性质的判断具有重要意义,但仍存在一定的局限性。随着对甲状腺癌分子机制研究的深入,相关基因突变检测有助于判定甲状腺结节的性质及对甲状腺癌进行危险分层评估。BRAF和RAS基因突变是甲状腺癌中研究较为成熟的分子标志物,对甲状腺癌诊断及预后有较高的评估价值。TERTp、RET/PTC、PAX8/PPARγ等相关基因的研究近年来逐渐增多,其为甲状腺癌的早期诊断、预后评估提供了更多的参考。

Blockage of PPARδ increases the expression of inflammatory factors in 3T3-L1 cells stimulated with TNFα

Objective： To investigate the role of peroxisome proliferator-activated receptors δ （PPARδ） in inflammatory reaction and its possible mechanism in adipocyte. Methods：Lentivirus-mediated RNA interference （RNAi） was used to block the expression of PPARδ in 3T3-L1 cells. In order to induce inflammation in 3T3-L1, cells were stimulated with tumor necrosis factor-α（TNFα, 20 ng/ml） for 4 h. The expression of PPARδ, nuclear factor κB （NFκB） and C reactive protein （CRP） were determined by Western blot analysis. Results：The expression of PPARδ was reduced by 80% after RNAi. Blockage of PPARδ promoted the expression of CRP and NFκB in cells stimulated with TNFα but had no effect on normal cells. Conclusion： PPARδ is involved in inflammatory reaction in adipocyte. Blockage of PPARδ can promote the inflammation mediated by inflammatory factors and increase the expression of NFκB and CRP in 3T3-L1 cells stimulated with TNFα.

过氧化物酶体增殖物激活受体δ激动剂在肾小管上皮细胞炎性反应中的作用

过氧化物酶体增殖物激活受体（PPARs）有3种异构体：PPARα、PPAR8和PPARr、作为转录N子的PPARs，通过酬前特定的目的基因的表达，影响脂代谢、糖代谢稳念、细胞分化、免疫反应、炎性反应和肿瘤等[1-2]。

人PAX8与PPARγ的融合基因(PPFP)的克隆及其重组质粒的构建

目的探讨人PAX8/PPARγ融合基因(PPFP)表达质粒在甲状腺上皮细胞中的表达及作用。方法从含有PAX8基因和PPARγ基因的质粒克隆模板PAX8-pOTB7及PPARγ-pCMV-SPORT6中,利用PCR方法调取目的基因PAX8和PPARγ,将PAX8和PPARγ定向连接后克隆到pEGFP-C1载体上,构建融合基因的真核表达质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ,在大肠杆菌E.coli DH5α中转化并提取质粒,通过PCR和测序、分析比对验证PPFP融合基因后,将真核表达载体pEGFP-C1-PAX8/PPARγ的质粒用脂质体包合并转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1,通过RT-PCR和Western blot鉴定PPFP融合基因于靶细胞内在mRNA和蛋白水平上的表达。结果构建的质粒通过鉴定证实正确;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后,经验证显示PPFP融合基因在mRNA和蛋白水平上顺利表达。结论成功克隆了PPFP融合基因并构建其重组质粒pEGFP-C1-PAX8/PPARγ;该质粒转染人正常甲状腺上皮细胞Nthy ori 3-1后可顺利表达PPFP蛋白,为进一步研究PPFP基因致瘤作用的分子机制提供了实验基础。