宫颈癌淋巴道转移模型的建立及Prox-1临床意义初探

目的建立小鼠宫颈癌淋巴道转移模型,初步探讨Prox-1的临床意义。方法将宫颈癌U27瘤株的单细胞悬液注入小鼠左爪垫,观察成瘤率、肿瘤生长及淋巴结转移情况。应用HE染色及CK免疫组化检测各级淋巴结中有无肿瘤转移;应用荧光定量PCR和Western blot检测肿瘤组织中VEGFR-3和Prox-1在mRNA及蛋白水平的表达情况。结果爪垫种植后成瘤率100%;淋巴结转移程度与接种时间显著相关;荧光定量PCR和Western blot结果显示,肿瘤组织中Prox-1 mRNA和蛋白在远处淋巴结转移组[(0.000173±0.000085),(0.1087±0.0499)]明显高于前哨淋巴结转移组[(0.000058±0.000022),(0.0120±0.0057)]及无淋巴结转移组[(0.000027±0.000010),(0.0038±0.0014)],3组两两比较差异有统计学意义(P<0.05),而VEGFR-3的mRNA和蛋白在前哨淋巴结组分别为(0.000147±0.000066)和(0.1236±0.0548),与远处淋巴结转移组[(0.000224±0.000100),(0.1607±0.0753)]及无淋巴结转移组[(0.000134±0.000044),(0.0824±0.0432)]比较均无显著性差异(P>0.05)。结论小鼠爪垫皮下注射可成功建立宫颈癌淋巴道转移模型;Prox-1是预测肿瘤淋巴结转移及抗肿瘤淋巴转移的敏感指标。

Prox-1在结直肠癌组织中的表达及意义

目的探讨结肠癌中Prox-1的表达与临床意义。方法选择2012年3月至2012年5月兰州军区兰州总医院肛肠科手术切除的结肠癌新鲜癌组织标本及癌旁正常组织标本41例,术前均未行放化疗,术后经病理证实,且有完整的临床、病理资料。采用RT-PCR法检测结肠癌患者肿瘤组织、正常组织中Prox-1的表达。结果结直肠癌组织中Prox-1的表达水平显著高于正常组织(P<0.05)。癌组织中Prox-1mRNA的表达水平与有无淋巴结转移组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。Prox-1在癌组织的表达与临床分期之间存在正相关,且有统计学意义(P<0.05)。根据该结果可以认为临床分期越高,Prox-1表达越高。结论结直肠癌组织中Prox-1的高表达与结肠癌的淋巴结转移有一定关系,检测该指标对于了解结直肠癌的淋巴管生成与淋巴结转移的关系及判定预后具有一定价值。

乳腺癌组织中LYVE-1和PROX-1的表达及临床意义

目的检测淋巴管内皮细胞透明质酸受体1(LYVE-1)和同源盒基因转录因子1(PROX-1)在人乳腺癌组织中的表达,探讨淋巴管密度在肿瘤淋巴结转移中的临床意义。方法收集80例乳腺浸润性导管癌和35例乳腺良性增生组织,采用免疫组织化学SP法检测LYVE-1和PROX-1的表达。结果乳腺癌组织中LYVE-1和PROX-1各自标记的淋巴管密度均明显高于乳腺增生组织,差异均有统计学意义(均P<0.01),且与肿瘤淋巴结转移密切相关,有淋巴结转移者均高于无淋巴结转移者(均P<0.01);PROX-1在癌细胞内的表达,不同的肿瘤病理学分级和临床分期之间差异均有统计学意义(均P<0.01)。结论乳腺浸润性导管癌组织中淋巴管生成增多,淋巴管密度与肿瘤淋巴结转移相关,PROX-1可能与乳腺癌发生、发展及淋巴结转移相关。

淋巴管生成因子LYVE-1及Prox-1在宫颈鳞癌组织的表达及意义

目的:探讨淋巴管生成因子LYVE-1及Prox-1的定量表达与宫颈癌淋巴结转移的相关性。方法:收集宫颈鳞癌手术标本24例,运用半定量RT-PCR技术对淋巴管生成因子LYVE-1和Prox-1进行分析,分别比较这两种因子在切除标本的肿瘤组织、癌旁组织中表达的差异。结果:Prox-1在肿瘤及癌旁组织表达分别为1.52±0.26和0.46±0.19,LYVE-1在肿瘤及癌旁正常组织的表达分别为1.37±0.21和0.56±0.12。Prox-1及LYVE-1在肿瘤组织的表达均高于癌旁组织(P均<0.01),与肿瘤的发生有关。并且它们的表达与淋巴结转移有相关性(P<0.01)。结论:Prox-1及LYVE-1表达升高与宫颈癌发生及淋巴结转移有一定关系,检测该指标对了解宫颈癌的侵袭和转移具有一定价值。

Prox-1与淋巴管新生和肿瘤转移的关系

侵袭和转移是恶性肿瘤的重要生物学行为之一,淋巴道转移是恶性肿瘤难以根治以及高病死率的主要原因,也是判断患者预后的主要指标。果蝇prospero同源异形盒蛋白1(prospero homeobox protein 1,Prox-1)在胚胎时期淋巴管形成过程中具有重要作用,可以作为淋巴管内皮细胞标志物,显示肿瘤新生淋巴管,并与肿瘤淋巴道转移密切相关。尽管Prox-1促进胚胎淋巴管形成机制的研究较为深入,但是在肿瘤淋巴管新生和淋巴道转移的作用机制方面仍有待于进一步探讨,Prox-1可能作为抑制肿瘤淋巴管新生和治疗肿瘤的新靶点,用于阻断肿瘤转移和改善患者预后。现就Prox-1与胚胎淋巴管形成、肿瘤淋巴管新生以及与肿瘤淋巴道转移关系的相关研究现状综述如下。

Prox-1和PCNA在人脑胶质瘤中的表达及意义

目的检测Prox-1和PCNA在胶质瘤细胞中的表达,探讨其与肿瘤恶性程度的关系。方法应用s-p免疫组织化学的方法检测65例胶质瘤和13例正常脑组织中的Prox-1及PCNA的表达,对实验数据进行统计学分析。结果 Prox-1和PCNA在正常脑组织中无表达,在肿瘤组织中的表达均随肿瘤病理级别的升高而增高,相关性分析显示二者的表达存在正相关。结论不同病理级别的胶质瘤中Prox-1、PCNA表达程度不同,高级别的胶质瘤中(Ⅲ、Ⅳ级)Prox-1、PCNA表达显著;而在低级别的胶质瘤中弱表达。Prox-1与PCNA的表达正相关。

子宫内膜癌灶及癌旁组织中LYVE-1、Prox-1表达的临床意义

目的:探讨淋巴管内皮透明质酸受体1(lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1,LYVE-1)、同源异型盒基因转录因子1(prospero-related homeobox 1,Prox-1)的表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系。方法:选取子宫内膜癌石蜡切片标本57例,留取新鲜子宫内膜癌组织及癌旁组织标本共38例。采用免疫组织化学、蛋白质印迹(Western blotting)、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(Realtime RT-PCR)检测LYVE-1、Prox-1在癌组织及癌旁组织中的表达,分析这2种蛋白在癌组织与癌旁组织中的表达差异与临床病理特征的关系。结果:(1)免疫组化显示,组织学分级Ⅰ级患者癌灶内的Prox-1阳性表达率高于Ⅱ级、Ⅲ级患者,差异有统计学意义(P<0.05);淋巴脉管间隙浸润(lymph vascular space invasion,LVSI)阳性患者癌旁组织的LYVE-1阳性表达率高于LVSI阴性者,差异有统计学意义(P<0.05);LVSI阳性、晚期患者子宫内膜癌旁组织Prox-1表达的阳性率升高,与LVSI阴性及早期患者比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Realtime RT-PCR及Western blotting检测显示,相对于无淋巴结转移组的癌旁组织,淋巴结转移组癌旁Prox-1蛋白表达量为1.250 0±0.008 2(P<0.05),LYVE-1蛋白表达量为1.860 0±0.012 4(P<0.05);相对于癌旁组织,淋巴结转移组癌组织中Prox-1 mRNA表达量为0.693±0.083(P<0.05),LYVE-1 mRNA表达量为0.42±0.16(P<0.05)。结论:LYVE-1、Prox-1可能是子宫内膜癌淋巴转移的潜在标志物,子宫内膜癌癌旁组织中淋巴管生成可能与淋巴转移有关。

五皮饮对淋巴水肿小鼠Prox-1、VEGFR-3和LYVE-1表达的影响

目的:研究五皮饮对淋巴水肿小鼠的影响,并初步探讨其作用机制。方法:选择48只C57BL/6J雄性小鼠,依据随机数字表随机分成空白组,模型对照组,五皮饮高、中、低剂量组和呋塞米组,连续灌胃14 d,观察并记录小鼠尾部的水肿变化情况。灌胃结束后,处死小鼠并取出小鼠远端尾部组织进行检测。苏木精-伊红(hematoxylin-eosin staining,HE)染色法染色观察小鼠尾部横截面的病理学变化;免疫组织化学染色法检测小鼠尾部横截面中同源盒基因转录因子1(prospero homeobox protein 1,Prox-1)的表达水平;免疫组织荧光染色法检测小鼠尾部横截面中血管内皮生长因子受体3(vascular endothelial growth factor receptor-3,VEGFR-3)和淋巴内皮透明质酸受体-1(lymphatic vessel hyaluronan receptor-1,LYVE-1)的表达水平;Western blot法检测小鼠尾部组织中Prox-1、VEGFR-3和LYVE-1的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型对照组小鼠尾部直径显著增加,皮肤厚度明显增加,水肿区范围增多,毛细血管扩张明显;尾组织横截面切片Prox-1、LYVE-1和VEGFR-3的表达明显降低。与模型对照组比较,五皮饮高、中、低剂量组和呋塞米组小鼠尾部直径减少,水肿区范围变小,Prox-1、VEGFR-3和LYVE-1的表达降低,尤其是五皮饮高剂量组表现最为明显(P<0.05)。结论:五皮饮可以上调Prox-1、VEGFR-3和LYVE-1的表达,通过促进淋巴管新生,从而缓解淋巴水肿。

胃癌组织中CapG、Prox-1、TrkB的表达与胃癌淋巴结转移及预后的关系

目的探究胃癌组织中巨噬细胞加帽蛋白G(CapG)、同源盒基因转录因子1(Prox-1)、酪氨酸激酶受体B(TrkB)的表达与胃癌淋巴结转移及预后的关系。方法回顾性选取2018年1月至2020年12月安徽医科大学第三附属医院收治的100例胃癌患者作为研究对象,根据术前有无胃癌淋巴结转移将患者分为转移组(n=45)与未转移组(n=55)。术前对患者胃癌组织中CapG、Prox-1、TrkB表达情况予以检测,并对比转移组与未转移组阳性表达率。采用受试者工作特征(ROC)曲线对不同分子标志物表达情况对胃癌淋巴结转移及预后的影响进行分析。结果转移组CaPG、Prox-1、TrkB阳性表达率分别为84.44%、66.67%、75.56%,均显著高于未转移组(32.73%、12.73%、27.27%),差异均有统计学意义(P<0.05)。联合检测对胃癌淋巴结转移ROC曲线下面积高于单一指标检测,其中CapG、Prox-1、TrkB联合检测特异度最高,为97.42%,CapG联合TrkB敏感度最高,为89.52%;CapG、Prox-1、TrkB表达阳性患者生存率明显低于表达阴性患者,差异有统计学意义(P<0.05);CapG表达阳性是胃癌患者预后独立影响因素。结论胃癌组织中CapG、Prox-1、TrkB阳性表达提示患者存在胃癌淋巴结转移风险,预后差,生存率低,应予以高度重视。

乳腺癌淋巴管LYVE-1和PROX-1表达程度与肿瘤淋巴转移的关联性分析

目的观察乳腺浸润性导管癌患者肿瘤组织中乳腺癌淋巴管LYVE-1和PROX-1的表达程度与肿瘤淋巴转移的关联性。方法选择乳腺浸润性导管癌患者90例为实验组,以60例乳腺良性病变患者为对照组,检测实验组患者肿瘤组织LYVE-1和PROX-1的水平,与对照组患者组织的LYVE-1和PROX-1的水平进行比较;将实验组患者按转移、复发情况进行分类,观察LYVE-1和PROX-1表达与肿瘤淋巴转移的关系。结果实验组患者肿瘤组织的LYVE-1和PROX-1阳性淋巴管密度(LVD)明显高于对照组,实验组患者中有淋巴转移患者的LYVE-1和PROX-1阳性LVD明显高于无淋巴转移患者,差异具有统计学意义(P<0.05);LYVE-1和PROX-1阳性LVD之间无相关性;logistic回归分析,LYVE-1和PROX-1是肿瘤转移的相关因素,对LYVE-1、PROX-1与转移的关系绘制ROC曲线,AUC分别为0.716、0.672;按ROC曲线分析所得诊断临界值进行分组,随访观察一年,LYVE-1、PROX-1阳性LVD升高患者,淋巴转移率较高。结论乳腺浸润性导管癌患者肿瘤组织LYVE-1和PROX-1表达与淋巴管生成有关,表达程度高的患者更易发生淋巴转移。

结肠癌Prox-1表达与淋巴管密度的关系及其临床意义

目的观察分析原发性结肠癌中转录因子Prox-1的表达与淋巴管密度(lymphatic vessel density,LVD)的关系,探讨其临床意义。方法对我院收治的50例结肠癌患者的癌旁非癌组织和正常大肠组织,采用逆转录-聚合酶链反应法检测Prox-1表达情况,采用免疫组化SP法检测对应组织中LVD。结果癌旁非癌组织中Prox-1表达水平显著高于正常组织(t=6.232,P<0.05);癌旁非癌组织LVD显著高于正常组织(t=8.627,P<0.05);癌旁非癌组织Prox-1的表达水平与LVD呈正相关(r=0.621,P<0.05),在浸润深度(t=3.310,P<0.05)、TNM分期(t=3.341,P<0.05)及淋巴转移(t=2.689,P<0.05)上差异有统计学意义。结论结肠癌癌旁非癌组织中Prox-1的表达水平较高,且与淋巴转移、浸润深度及TNM分期有关,可作为结肠癌预后判断的有效预测因子之一。

Prox-1在肿瘤发生发展中的研究进展

增殖、侵袭和转移是恶性肿瘤的重要生物学特征。果蝇Prospero同源异型盒蛋白1(prospero homeobox protein 1,Prox-1)是胚胎时期淋巴管生成及发育过程中最基本的调控因子,是淋巴管内皮细胞特异性标记物,与肿瘤淋巴道转移密切相关。研究表明,Prox-1与多种肿瘤如中枢神经系统、甲状腺、原发性肝、胃、胰腺、结直肠、乳腺、血液系统肿瘤及其他肉瘤等的发生发展密切相关。在不同的肿瘤中,根据生物学特性,Prox-1可表现为激活因子或阻遏因子。现就Prox-1的生物特性及其与各种肿瘤发生发展的关系进行综述。

转录因子Prox-1对大肠癌中淋巴管生成的作用

目的 探讨大肠癌中转录因子Prox-1的表达及对淋巴管生成、淋巴结转移的作用。方法 采用RT-PCR检测大肠癌正常组织、癌交界组织、癌组织中Prox-1的表达；用免疫组织化学sP法测定淋巴管密度（1ymphatic vascular density，LVD）。结果大肠癌组织、癌交界组织中Prox-1的表达水平均显著高于正常组织（P〈0．05）。癌交界组织中Prox-1的表达水平在DukesA＋B期和C＋D期、有无淋巴结转移之间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。正常组织与癌交界组织的LVD比较差异有统计学意义（P〈0．05）；癌交界组织中LVD在DukesA＋B期和C＋D期、有无淋巴结转移之间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。癌交界组织中Prox-1mRNA的表达水平与LVD呈正相关（r=0．54，P=0．018）。结论Prox-1的过度表达诱导淋巴管内皮细胞的分化、生成；Prox-1是预测肿瘤淋巴转移影响的有效因子之一，但不是独立因子；在进行预测时应选用癌交界组织。

Prox-1与Ki-67在原发性胆囊癌中的表达及意义

目的 :探讨Prox-1与Ki-67在原发性胆囊癌癌组织中的表达及临床意义。方法 :用免疫组化法检测原发性胆囊癌患者癌组织、胆囊良性病变患者胆囊组织中Prox-1及Ki-67的表达,比较两种蛋白表达的差异,并分析Prox-1及Ki-67的表达与胆囊癌患者临床病理因素和预后的关系。结果 :转移组的胆囊癌组织中Prox-1表达阳性率明显高于无转移组的和对照组;无转移组Prox-1表达阳性率与对照组比较差异无统计学意义。转移组的胆囊癌组织中Ki-67表达阳性率和无转移组比较无明显差异;转移组和无转移组Ki-67表达阳性率明显高于对照组。两种蛋白的表达与患者的性别、年龄无明显关系;胆囊癌组织中Prox-1与Ki-67表达相关性不明显。结论 :原发性胆囊癌患者胆囊癌组织中Prox-1和Ki-67的阳性表达率明显增高,且Prox-1的表达强度与分化程度及淋巴结转移有关。Prox-1参与了胆囊癌的发生、发展,对胆囊癌患者的预后评估具有重要意义。

大肠癌VEGFR-3与Prox1的相关性研究

目的探讨VEGFR-3和Prox1在大肠癌组织、正常黏膜组织和淋巴结中的表达及其相互关系。方法采用实时定量RT-PCR检测63份直肠癌远端肠壁组织,156枚系膜淋巴结,配对肿瘤组织和邻近正常黏膜组织各13份的VEGFR-3,Prox1的表达。结果VEGFR-3和Prox1的mRNA含量中位数在肿瘤远端肠壁组织分别为22.08和544.97,两者有明显相关性(r=0.716,P=0.000 1)。在淋巴结分别为33.81和439.16,两者有明显相关性(r=0.618,P=0.000 1)。在肿瘤组织分别为0.65和5877,两者没有相关性(r=-0.280,P=0.353)。结论VEGFR-3与Prox1在正常肠壁组织和系膜淋巴结的新生淋巴管形成中可能有协同作用,但在肿瘤组织不存在协同关系。

黑色素瘤细胞外泌体通过Prospero同源异形盒蛋白1调控肿瘤淋巴转移机制的研究

目的探讨黑色素瘤外泌体(melanoma exosomes,MM-ex)携带的果蝇Prospero同源异形盒蛋白1(prospero homeobox protein 1,Prox-1),在调控淋巴管内皮细胞(lymphatic endothelial cells,LECs)增殖、迁移以及生成具有转移肿瘤细胞功能淋巴管过程中的作用。方法采用慢病毒转染实验构建低表达Prox-1黑色素瘤细胞株(MM^(shProx-1))。采用试剂盒法获取MM和MM-ex^(shProx-1)的外泌体(MM-ex和MM-ex^(shProx-1))。采用免疫荧光检测、蛋白质印迹法检测、细胞增殖及细胞迁移实验,观察MM-ex及MMex^(shProx-1)对LECs生物学特性的影响。采用免疫组化(IHC)法检测2015年9月至2021年4月江苏大学附属医院收治的32例皮肤黑色素瘤病理标本中Prox-1及淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lymphatic vessel endothelial hyaluronic acid receptor-1,LYVE-1)的表达情况,统计微淋巴管密度(microlymphatic vessel density,MLVD),并分析Prox-1及MLVD与黑色素瘤生物学特性的相关性。结果细胞实验:MM-ex促进淋巴管内皮细胞增殖及迁移,促进了淋巴管的成形。MM-ex^(shProx-1)对LECs无增殖及迁移的影响,对淋巴管成形无促进作用。临床研究:免疫组化的结果表明Prox-1、LYVE-1在黑色素瘤组织及肿瘤周围组织中的阳性表达率显著高于正常皮肤组织。Prox-1信号在黑色素瘤淋巴结转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达率[87.50%(14/16)、79.17%(19/24)]明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组[37.50%(6/16)、12.50%(1/8)](均P<0.05)。LYVE-1在黑色素瘤转移组和Ⅲ期及Ⅳ期肿瘤组的表达(9.30±4.65、5.15±1.72)明显高于无淋巴结转移组和Ⅰ期及Ⅱ期肿瘤组(5.66±1.69、5.30±1.65,均P<0.05)。Prox-1、LYVE-1的表达情况均与病人的年龄、性别无关(均P>0.05)。结论MM-ex通过Prox-1促进LECs的增殖及迁移,在肿瘤淋巴管再生中起到重要作用。Prox-1、LYVE-1及MLVD与黑色素瘤淋巴转移及预后呈明显相关性,为皮肤黑色素瘤的早期淋巴转移及预后提供一个新的判断指标,也为皮肤黑色素瘤的临床治疗提供新的方法和策略。

针刺损伤后修复中的淋巴样结构

目的观察正常及损伤后小鼠脊髓中淋巴管的分布及特点,探讨脊髓损伤修复过程中有无淋巴管的参与。方法成年雄性KM小鼠39只,小鼠随机分为两组:正常组6只和损伤组33只。将损伤组小鼠随机分为术后1 d组、术后3 d组、术后5 d组、术后7 d组和术后14 d组,每组6只。损伤组部分小鼠针刺损伤后死亡3只,后随机补充样本。正常组不损伤脊髓,损伤组采用针刺法制备脊髓损伤。通过免疫组织化学方法检测脊髓中淋巴管内皮细胞的分布,观察正常及针刺损伤后小鼠脊髓中淋巴管内皮细胞标记物同源异型盒基因转录因子1(prox-1)、淋巴管内皮细胞透明质酸受体-1(lyve-1)、平足蛋白(podoplanin)以及血管内皮细胞标记物CD34的表达情况。通过对脊髓样本进行免疫荧光染色,观察lvye-1/prox-1、lyve-1/podoplanin及CD34/prox-1的共表达情况,探讨新生淋巴管内皮细胞的来源。结果正常成年小鼠脊髓中存在淋巴管样结构,并呈节段性分布,横向走行于白质与灰质间;针刺损伤处的脊髓出现新生淋巴管样结构,同时表达prox-1、podoplanin、lyve-1和CD34;脊髓损伤处瘢痕化后,新生的淋巴管样结构消失。结论正常成年小鼠脊髓中存在节段性横向分布的淋巴管样结构;脊髓损伤处重建过程中有新生淋巴管样结构的参与,新生淋巴管内皮细胞可能来源于周围既存的淋巴管或血管内皮细胞。

肿瘤淋巴管生成及其调控机制研究进展

恶性肿瘤对人体健康危害极大．肿瘤细胞通过其无限制生长、浸润转移、分泌有害细胞因子及不受免疫攻击而使机体致病。在浸润转移过程中．微脉管系统的作用不容忽视。以往对肿瘤微血管的研究已比较深入．近年来随着淋巴内皮细胞特异性标记物的发现和对淋巴管生成的分子机制的研究．