应用组培脱毒苗微型薯体系鉴定马铃薯不同品种的PSTV抗性研究

应用人工接种PSTV ,侵染健康脱毒组培扦插苗 ,建立了以微型薯产量为依据鉴定PSTV抗性的系统。该系统具有简便、快速。

PSTV与PVY的互作及其对马铃薯产量影响

本文分别在温室和田间条件下利用人工接种的方法研究了马铃薯纺锤块茎类病毒（ＰＳＴＶ）和ＰＶＹ在克新４号及Ｋｅｎｎｅｂｅｃ两品种上的相互作用．试验结果表明：在温室条件下ＰＳＴＶ和ＰＶＹ的复合接种均能在二品种上不同程度地产生条型坏死症状，而在田间未出现明显症状．ＰＳＴＶ与ＰＶＹ混合接种或ＰＳＴＶ接种一周后再接ＰＶＹ会促进ＰＶＹ增殖，植株内ＰＶＹ的浓度显著高于单独接种ＰＶＹ，但ＰＶＹ侵染后再接ＰＳＴＶ对ＰＶＹ的浓度无显著影响．ＰＳＴＶ和ＰＶＹ的工作对ＰＳＴＶ的浓度无显著影响．ＰＳＴＶ与ＰＶＹ复合侵染的三个接种类型都明显地降低平均单株产量和商品薯率，产量损失最大的处理为ＰＳＴＶ与ＰＶＹ混合接种，可导致克新４号减产４５．４％。

RNA聚合酶体外转录PSTV cDNA的研究

酵母RNA聚合酶Ⅱ虽能在体外忠实转录PSTV,但不能转录相应的cDNA。大肠杆菌RNA聚合酶不仅能转录PSTV,还可转录其cDNA。根据对转录产物的聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,Southern分子杂交以及非转录反应的排除实验确证:大肠杆菌RNA聚合酶转录PSTV cDNA 属于忠实性转录。本文首次提出 PSTVcDNA可以构成一个转录单位,其中含有能指导特异性转录起始的启动子区。证明此启动子区在Avall酶切后的132bp小片断上,很可能在5′端BamHl切点附近。

马铃薯类病毒与马铃薯Y病毒的互作及其对马铃薯产量的影响

分别在温室和田间条件下利用人工接种的方法研究了PSTV和PVY在克新4号品种上的相互作用。试验结果表明:在温室条件下PSTV和PVY的复合接种能在克新4号上产生条型坏死症状,而在田间未出现明显症状。PSTV与PVY混合接种或PSTV接种一周后再接PVY会促进PVY增殖,植株内PVY的浓度显著高于单独接种PVY,但PVY侵染后再接PSTV对PVY的浓度无显著影响。PSTV和PVY的互作对PSTV的浓度无显著影响。PSTV与PVY复合侵染的3个接种类型都明显地降低平均单株产量和商品薯率,产量损失最大的处理为PSTV与PVY混合接种,可导致克新4号减产45.4%。

芸苔素内酯复配剂对花生条纹病毒病的田间药效评价

花生条纹病毒病(Peanut Stripe virus,PStV)在我国北方花生产区普遍发生,严重影响花生的产量和品质,本文研究了芸苔素内酯(Brassinolide)和宁南霉素(Ningnanmycin)对PStV的控制作用和对花生生长的影响,结果表明:单独施用芸苔素内酯或宁南霉素对PStV均有一定防治效果,防效在35%左右,两者复配对PStV的控制效果(45.0%)均高于单剂芸苔素内酯(36.1%)和宁南霉素(34.5%)处理,对花生生长和产量的促进作用较明显,两者复配对花生产量提高(35.6%)优于单剂芸苔素内酯(13.8%)和宁南霉素(21.2%)处理。

马铃薯纺锤形块茎类病毒基因的化学合成与克隆

马铃薯纺锤形块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTV)是一种由359个核苷酸组成的植物类病毒。本文介绍用化学法合成PSTV基因的工作。将整个基因分成173、168和18bp 3个片段,对两个大片段分别进行克隆,最后得到含有PSTY基因的单链DNA。 首先,根据PSTV的核苷酸序列得到其cDNA,将整个cDNA分成A、B、C3段,分别为1-173、174-341和342-359。为了下一步将cDNA转录到RNA的研究,在每一个片段的3’

马铃薯纺锤块茎类病毒株系鉴定

以加拿大的马铃薯纺锤块茎类病毒(Potato spindle tuber viroid,PSTV)强毒、中毒和弱毒株系样品作对照,用改进的往返—聚丙烯酰胺凝胶电泳方法,鉴定了发生在我国北方种植的马铃薯上的PSTV株系类型。从60个马铃薯品种488个样品中,所有检测到的PSTV的电泳迁移率与加拿大的弱毒株系迁移率相同。表明所有检测到的PSTV都属弱毒株系。首次明确发生在我国北方种植的马铃薯上的PSTV以弱毒株系为主要类型。没有分离到强毒株系或其它株系。

应用聚合酶链式反应扩增和光敏生物素标记的cDNA探针检测马铃薯纺锤块茎类病毒

以含马铃薯纺锤块茎类病毒(potato spindle tuber viroid,PSTV)RNA的总核酸为模板,加入人工合成的互补DNA引物,用反转录酶合成PSTV cDNA;在聚合酶链式反应系统中,用两个PSTV特异性引物进行cDNA扩增,用以制备光敏生物素标记的PSTV cDNA探针。用此探针进行斑点杂交检测含PSTV的马铃薯核酸提取液和汁液均出现阳性杂交信号,而健康马铃薯的核酸提取液和汁液的结果均为阴性。光敏生物素标记探针检测纯化PSTV的灵敏度可达5pg;检测感染PSTV的马铃薯块茎汁液的可测出最高稀释度为1:400。

芝麻品种(系)对花生条纹病毒抗性鉴定

1986、1990—1992年4年,采用田间自然诱发和人工接种方法共鉴定212份芝麻品种(系)对花生条纹病毒的抗性。结果表明,品种(系)间抗性差异显著,发现3个高抗品种,2个发病较轻的品系,参试10个芝麻推广品种均不抗病。

花生条纹病毒病和黄瓜花叶病毒病种子带毒和田间发病情况研究

花生条纹病毒(Peanut stripe virus,PStV)和黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)是影响山东花生生产的两种重要病毒。本研究选取小花生品种花育20号和大花生品种花育36号/花育22号,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)对山东省5个地区的样品进行两种主要病毒的检测。结果表明:花生两种主要病毒病在山东省5个地区都可以检测到,各地区种子带毒率和发病率存在明显差异,小花生种子的带毒率普遍高于大花生,田间发病率也普遍高于大花生,两种病毒存在复合侵染的情况。

单酶法RTP-CR检测马铃薯纺锤块茎类病毒

根据Taq酶既有聚合酶活性又有反转录酶活性的特点 ,探索了只在Taq酶单独作用下完成RT PCR反应的条件 ,以达到对马铃薯纺锤块茎类病毒 (PSTV)的快速检测。结果表明 ,反转录阶段退火温度在 37℃、循环数不少于 10次的情况下 ,PCR扩增能得到一条相关特异带。经过嵌合式PCR证明 ,这条带为PSTV的特异带。与其他检测方法相比 ,用单酶法RT PCR检测PSTV步骤简单 。

芝麻病毒病研究进展

芝麻是世界上重要的优质油料作物之一,近些年病毒病频发且呈加重趋势,给芝麻安全生产带来了严重威胁。国内外对芝麻病毒病的研究主要集中在发生危害调查、病原鉴定、发生流行规律及防治方法等方面。芝麻病毒病的症状复杂,病原种类较多,国内主要有花生条纹病毒(PSt V)和芜菁花叶病毒(Tu MV),国外报道较多的为豇豆蚜传花叶病毒(CABMV),其他在芝麻上发现的病毒还有西瓜花叶病毒(WMV)、芝麻坏死花叶病毒(SNMV)等。通过分析影响芝麻病毒病流行的因素,根据目前防治方法的研究结果,总结了可行的防治策略。

开封地区花生病毒病及流行规律研究

1988—1991四年调查说明,花生矮化病毒(PSV.)引起普通花叶病害,花生条纹病毒(PStV)引起轻斑驳病害是开封花生两种主要病毒病。PSV通过花生种传,测定自花生普通花叶病株收集近4000粒种子,PSV种传率0.025％。刺槐花叶树是花生上PSV另一个初浸染源。PSV开封刺槐分离物(R_3、R_4)在鉴别寄主上反应和血清学性质上和PSV-Mi相一致,但引起花生病害症状较PSV—Mi轻。开封市农科所一带刺槐花叶病树率平均30.7％。四年病害流行程度差异显著。1988和1991年花生生长季雨量少,蚜虫发生量大,分别为PSV严重和中度流行年。1989和1990年雨水较多,蚜虫发生少,病害显著减轻。

双重RT-PCR方法检测花生条纹病毒和黄瓜花叶病毒

为了建立花生条纹病毒(PStV)和黄瓜花叶病毒(CMV)的双重RT-PCR检测方法,根据Gen-Bank中登陆的PStV和CMV的核苷酸保守序列分别设计特异性引物,以感病叶片总RNA反转录物为模板,建立了双重RT-PCR反应体系,并对双重RT-PCR的特异性和灵敏性进行了验证。结果表明:此方法能够特异地从感染PStV和CMV的样品中扩增出PStV(300bp)和CMV(1054bp)2个条带,与实验设计相符;扩增产物测序结果表明,PStV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为93%～99%,CMV扩增产物与GenBank中其它株系或分离物的核苷酸序列同源性为90%～99%,证明了检测结果的准确性;该方法特异性良好,灵敏性与单一扩增相同,能够特异、灵敏、准确地检测花生CMV和PStV。

Digoxigenin(DIG)标记RNA探针检测侵染花生的Potyviruses

以花生条纹病毒(PStV)和花生斑驳病毒(PMV)克隆cDNA为模板,体外转录合成Digo-xgenin(DIG)标记PStV—I_9、PStV-I_(131)、PStV—I_(57-7)和PMV—A_(15)四种RNA探针。在点杂交反应中,PStV—I_9RNA探针能检测出0.25ng提纯PStV和花生病汁液62500倍稀释液中PStV。PMV—A_(16)RNA探针能检测到0.67ng提纯PMV和菜豆病汁液5120倍稀释液中PMV。两种病毒RNA探针均有高度特异性。PStV—I_(57-7)和PStV—I_(131)两种RNA探针具有与PStV—I_9RNA探针相同敏感性,但特异性稍差。

朊病毒——一类新的病原物

1982年,美国病毒学家S.B.Prusiner发现羊瘙痒病是蛋白质侵染引起的病害,称谓Prion(Protein infection的缩写)或Virino,暂译为朊病毒。这一发现使生物学家感到震惊,因为它与现行的“生物中心法则”——即DNA→RNA→蛋白质之依赖关系——背道而弛。这在生物学理论上十分重要,在实践上可能解决许多疑难疾病的问题。

山东省花生病毒的RT-PCR检测

应用RT—PCR方法检测了2008-2009年在山东各地采集的153个花生病叶样品，检测到花生条纹病毒（Peanut stripe virus，PStV）、黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus，CMV）和花生斑驳病毒（Peanut mottle virus，PeMoV）。PStV的检出率最高，为48．4％，在山东各花生产区均有发生；CMV的检出率为19．0％，在泰安、青岛、潍坊、聊城和临沂等地有发生；CMV与PStV的复合侵染率为9．2％。PeMoV目前仅在青岛地区发现。

电子显微镜技术在鉴定筛选马铃薯无毒核心材料中的应用

应用免疫电镜和负染法检测马铃薯试管苗中的微量病毒。试验表明,二者都具有很高的灵敏度,复合血清免疫电镜检出率比负染法高出7.4个百分点,从而在原有基础上提高试管苗的无毒化。

防止马铃薯脱毒种薯的病毒再侵染和类病毒的危害

采用6个茎尖培养脱毒马铃薯品种，用春播、夏播、夏选、夏拔、原种等方法通过7年处理，6年田间鉴定试验，结果显示：春播留种促进马铃薯病毒加重，尤其明显的是促进束顶型和矮生型的类病毒的发生和发展；连续多年春播使出苗率降低，连续7年处理出苗率为19％～49％．夏播留种是防止马铃薯病毒病和类病毒简而易行的好方法，尤其是在夏播留种田中拔除病株或选择健康单株混合留种的方法效果更佳．夏播留种应该选择高度抗病毒病的品种克新一号和克新三号，在田间连续7年夏播种植＋单株混合选，各种病毒病和类病毒发病率都为0％，能与网室内生产的脱毒原种相比美，

盐酸普罗帕酮注射液治疗阵发性室上性心动过速46例疗效观察

目的:观察盐酸普罗帕酮注射液治疗阵发性室上性心动过速(PSVT),明确盐酸普罗帕酮注射液对PSVT的疗效。方法盐酸普罗帕酮注射液首剂70mg稀释后缓慢静脉注射,PSVT终止时停止用药。如无效可于10~15 min内重复上述用药剂量,但总量不超过210 mg。结果盐酸普罗帕酮注射液对PSTV有效为91.30%。结论盐酸普罗帕酮注射液对PSVT有明确疗效。