黄芪甲苷靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR通路激活肺泡细胞自噬治疗肺纤维化

目的探究黄芪甲苷-IV(Astragaloside IV,AS-IV)靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活自噬,抑制特发性肺纤维化(Idiopathic Pulmonary Fibrosis,IPF)发展进程的作用机制。方法通过气管注射10 mg·kg^(-1)博莱霉素造模小鼠IPF,分别以10、20、40 mg·kg^(-1) AS-IV及5 mg·kg^(-1)醋酸泼尼松连续治疗28 d。对肺样本进行伊红美蓝,马松染色,及透射电镜观察。实时荧光定量法(qRT-PCR)或蛋白免疫印迹法(Western blot)检测样本中miR-21、P62、Beclin^(-1)、LC3B、PTEN、PI3K、p-AKT、AKT、p-mTOR、mTOR等的表达。结果醋酸泼尼松及40 mg·kg^(-1) AS-IV可显著减少肺纤维组织增生与炎性细胞浸润,抑制嗜锇性板层小体变性,促进肺泡上皮细胞中自噬体的形成,显著上调LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比例与Beclin^(-1)、PTEN蛋白表达,下调P62、miR-21表达,并抑制mTOR与AKT的磷酸化。但AS-IV治疗对PI3K表达无明显影响。结论AS-IV通过靶向miR-21调控PTEN/AKT/mTOR信号通路激活,从而激活肺泡细胞自噬逆转IPF。

miR-132-3p靶向调控PTEN/Akt信号通路对缺氧/复氧诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响

目的研究miR-132-3p靶向调控第10号染色体缺失的磷酸酶基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对缺氧/复氧(H/R)诱导海马神经元HT22细胞损伤的影响。方法体外培养HT22细胞并随机分为对照组、H/R组、阴性对照(miR-132-3p mimics阴性对照+空载质粒)组、miR-132-3p mimics组(miR-132-3p mimics)、PTEN敲低组(PTEN siRNA质粒)、miR-132-3p mimics+PTEN过表达组(miR-132-3p mimics+PTEN过表达质粒),除对照组外,其余各组进行H/R处理,同时进行分组转染,然后采用qRT-PCR实验、免疫印迹法检测各组细胞miR-132-3p与PTEN/Akt通路相关蛋白表达;采用MTT法、TUNEL染色分别检测各组细胞增殖与凋亡情况;采用试剂盒测量各组细胞活性氧(ROS)、乳酸脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、白细胞介素(IL)-6、IL-18水平;采用免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关蛋白(Cleaved Caspase-3、Bax、Bcl-2)表达;采用双荧光素酶报告实验验证miR-132-3p对HT22细胞PTEN的靶向调控。结果与对照组相比,H/R组细胞miR-132-3p表达、p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。与H/R组相比,miR-132-3p mimics组、PTEN敲低组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力升高(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达降低(P<0.05);阴性对照组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与miR-132-3p mimics相比,miR-132-3p mimics+PTEN过表达组p-Akt/Akt、GSH-Px与SOD水平、Bcl-2蛋白表达、细胞活力降低(P<0.05),细胞凋亡率、PTEN mRNA与蛋白表达、ROS相对水平、LDH产生水平、IL-6与IL-18水平、Bax与Cleaved Caspase-3蛋白表达升高(P<0.05)。miR-132-3p可靶向下调HT22细胞PTEN表达。结论miR-132-3p可通过靶向下调PTEN表达而激活Akt信号,进而抑制H/R诱导的HT22细胞炎症与凋亡,缓解其细胞损伤。

葛根素通过PTEN/AKT通路促进结直肠癌细胞自噬和凋亡的机制研究

目的:探讨葛根素通过PTEN/AKT通路促进结直肠癌细胞自噬和凋亡的作用及机制。方法:培养结直肠癌细胞株HCT-116、SW480,用不同浓度葛根素处理后检测细胞活力,筛选出适合浓度的葛根素处理细胞,检测细胞克隆形成、迁移、侵袭及凋亡的变化,Western Blot检测PTEN/AKT通路及自噬和凋亡相关蛋白的表达。结果:与对照组比较,250~2 000μmol/L的葛根素均能显著抑制HCT116、SW480细胞株的细胞活力(P<0.01)。采用500、1 000μmol/L的葛根素处理HCT116、SW480细胞,与对照组比较,葛根素各组细胞的克隆形成能力、迁移率、侵袭能力均显著降低,凋亡率及PTEN、cleaved Caspae-3、Beclin1蛋白表达显著升高,Bcl-2、p-AKT蛋白表达显著降低(P<0.01)。结论:葛根素具有抑制结直肠癌细胞增殖、克隆形成、迁移、侵袭及促进自噬和凋亡的作用,其促进细胞自噬和凋亡的机制与提高PTEN表达进而抑制AKT通路激活有关。

褪黑素通过抑制PTEN/AKT/FOXO3a 通路遏制慢性应激下小鼠卵泡发育不良的机制

目的探究褪黑素通过抑制PTEN/AKT/FOXO3a通路在小鼠卵巢中的激活遏制慢性应激下小鼠卵泡发育不良的机制。方法选取60只6周龄雌性C57BL/6N小鼠,随机分为正常对照组、慢性应激组和褪黑素组,每组各20只。使用实验室称重仪记录小鼠的身体和卵巢的质量。通过酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)试剂盒检测小鼠血清激素水平。通过组织学分析计算小鼠卵巢不同阶段的卵泡数量。通过ELISA和实时定量聚合酶链式反应(real-timefluorescence quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测小鼠血清抗米勒管激素(anti-Müllerianhormone,AMH)的表达。通过蛋白印迹法检测磷脂酰肌醇-3-激酶(phosphatidylinositol-3-kinase)/蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)/叉头框转录因子3a(forkhead box transcription factor 3a,FOXO3a)信号通路的表达。通过PCR检测小鼠卵巢PI3K/AKT/FOXO3a的转录水平。统计学方法采用LSD-t检验、χ^(2)检验、单因素方差分析或重复测量资料方差分析。结果慢性应激组与正常对照组的初级卵泡数量[(174±30)个与(107±17)个,t=-148.098]、磷酸化张力蛋白同源物(p-phosphatase tensinhomolog deleted on chromosome ten,p-PTEN)蛋白(2.03±0.19与1.26±0.16,t=-32.207)、p-AKT蛋白(1.99±0.18与1.07±0.05,t=-70.021)、p-FOXO3a蛋白(2.18±0.20与1.18±0.11,t=-64.621)、皮质醇稳定蛋白(cortistatin,CORT)(137±12与83±7,t=-124.235)、促卵泡激素(follicle-stimulating hormone,FSH)[(13.1±1.9)IU/L与(8.2±1.6)IU/L,t=-25.388]比较,慢性应激组水平高于正常对照组(P值均<0.05)。慢性应激组与正常对照组的小鼠身体质量[(22.5±2.5)g与(28.4±4.7)g,t=12.906]、卵巢质量[(9±3)mg与(23±5)mg,t=45.302]、雌二醇水平[(36±8)μg/L与(75±10)μg/L,t=88.937]、雄激素水平[(0.13±0.01)μg/L与(0.20±0.02)μg/L,t=23.123]、促黄体生成素(luteinizing hormone,LH)水平[(3.2±0.3)IU/L与(4.6±0.5)IU/L,t=31.170]以及原始卵泡数量[(87±9)个与(143±27)个,t=111.829]、次级卵泡数量[(92±11)个与(150±21)个,t=130.837]和窦卵泡数量[(43±5)个与(96±8个),t=144.851]比较,慢性应激组低于正常对照组(P值均<0.001)。褪黑素组与慢性应激组的p-PTEN/PTEN(1.15±0.14与2.03±0.19,t=4.983)、p-AKT/AKT(1.21±0.13与1.99±0.18,t=-12.108)、p-FOXO3a/FOXO3a(1.35±0.17与2.18±0.20,t=-11.274)、CORT[(106±10)μg/L与(137±12)μg/L,t=-50.392]和FSH水平[(10.2±1.5)IU/L与(13.1±1.9)IU/L,t=-10.317]比较,褪黑素组低于慢性应激组(P值均<0.001)。褪黑素组与慢性应激组的小鼠身体质量[(26.5±4.1)g与(22.5±2.5)g,t=5.182]、卵巢质量[(17±5)mg与(9±3)mg,t=19.588]、雌二醇水平[(66±6)μg/L与(36±8)μg/L,t=20.485]、雄激素水平[(0.21±0.02)μg/L与(0.13±0.01)μg/L,t=6.458]、LH水平[(4.3±0.4)IU/L与(3.2±0.3)IU/L,t=6.924]以及原始卵泡数量[(125±15)个与(87±9)个,t=38.784]、次级卵泡数量[(137±16)个与(92±11)个,t=29.063]和窦卵泡数量[(76±6)个与(43±5)个,t=49.447]比较,褪黑素组高于慢性应激组(P值均<0.001)。结论褪黑素通过抑制PTEN/AKT/FOXO3a通路成员的磷酸化,升高小鼠血清AMH水平,最终减轻慢性应激诱导的小鼠卵巢原始卵泡丢失和卵泡发育不良。

糖尿病大鼠肾组织中PTEN/AKT/mTOR通路对自噬的调控作用

目的:观察糖尿病大鼠肾组织中PTEN和自噬水平的变化,探讨糖尿病肾病中PTEN/AKT/m TOR通路对自噬的调控机制。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组(NC组)和糖尿病组(DM组),每组各8只。用链脲佐菌素复制DM大鼠模型。于成模后10周处死大鼠后测定相应生化指标和肾脏指数,免疫组化观察肾小管上皮细胞PTEN蛋白的表达部位;Western blotting法检测肾组织LC3、PTEN及PTEN/AKT/m TOR通路的变化;realtime PCR检测肾组织PTEN的mRNA表达水平。结果:DM组的血糖、24 h尿蛋白量和肾脏指数均显著高于NC组(P<0.05)。与NC组相比,DM组大鼠肾组织的LC3I和LC3II水平明显降低(P<0.05)。PTEN主要分布于肾小管上皮细胞中,DM组PTEN蛋白的表达水平明显低于NC组(P<0.05)。DM大鼠肾组织中,PTEN/AKT/m TOR通路的活性增高。结论:糖尿病大鼠肾脏组织中细胞自噬水平下降,而参与自噬调控的PTEN/AKT/m TOR通路活性升高,提示其自噬水平的变化可能受到PTEN/AKT/m TOR通路的调节。

DJ-1过表达通过PTEN/Akt通路促进人胃癌MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭与上皮间质转化

目的:探讨DJ-1基因过表达对人胃癌MGC803细胞增殖、迁移、侵袭与上皮间质转化(EMT)的影响及其机制。方法:利用基因转染技术构建DJ-1基因过表达MGC803细胞,实验分为MGC803、空载体和DJ-1过表达组。采用MTT、平板克隆形成、细胞划痕和Transwell实验分别检测DJ-1过表达对MGC803细胞增殖、克隆形成、迁移与侵袭的影响;qPCR和WB法检测DJ-1过表达对各组细胞DJ-1、PTEN、Akt、p-Akt、Snail、vimentin、E-cadherin、MMP-9与TIMP-3表达的影响,相差显微镜下观察MGC803细胞形态学的变化。裸鼠荷瘤实验检测DJ-1过表达对MGC803细胞移植瘤体内生长的影响。结果:成功构建DJ-1基因稳定过表达的MGC803细胞。与MGC803组和空载体组比较,DJ-1过表达组细胞的增殖能力与克隆形成数均显著增加(均P<0.05),细胞迁移距离明显增加、划痕距离明显缩短(均P<0.05),迁移与侵袭细胞数显著增多(均P<0.05),DJ-1 mRNA与蛋白表达明显上调、PTEN mRNA与蛋白表达下调(均P<0.05),Akt总蛋白各组比较无明显差异(均P>0.05),p-Akt蛋白表达明显上调(P<0.05),Snail、vimentin与MMP-9表达上调、E-cadherin与TIMP-3表达下调(均P<0.05)。相差显微镜下见长梭形细胞数目增多,圆形与椭圆形细胞减少,异型性更为明显。荷瘤裸鼠体内实验结果表明,与MGC803组相比较,DJ-1过表达组MGC803细胞移植瘤生长速度明显加快、移植瘤质量显著增加(均P<0.05)。结论:DJ-1过表达可通过PTEN/Akt通路在体内外抑制MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭与EMT。

ADAMTS9基因联合去甲氧基姜黄素对肝癌细胞侵袭迁移及PI3K/PTEN/AKT信号的影响

目的探讨过表达带有血小板凝血酶敏感蛋白样模体的解联蛋白金属蛋白酶(ADAMTS)9基因或去甲氧基姜黄素(DMC)单独或联合对肝癌细胞侵袭迁移及磷脂酰肌醇3-激酶/第10号染色体同源缺失性磷酸酶-张力蛋白/蛋白激酶B(PI3K/PTEN/AKT)信号的影响。方法 Western印迹检测肝癌(HepG2)、MHCC 97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9的蛋白表达。将MHCC97-H细胞分为对照组、pcDNA3.1-ADAMTS9组、DMC组和pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组4个处理组,其中pcDNA3.1-ADAMTS9的转染参照LipofectamineTM 2000转染说明,收集处理48 h的细胞,CCK8法、Transwell小室分别检测细胞活力及侵袭和迁移能力。Western印迹检测ADAMTS9、增殖细胞核抗原(PCNA)、基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9、PI3K、PTEN和p-AKT的蛋白表达。结果肝癌HepG2、MHCC97-L和MHCC97-H细胞中ADAMTS9表达均有不同程度的降低,与正常肝细胞HL-7702比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组DAMTS9的蛋白表达显著高于对照组(P<0.05)。pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于对照组,PTEN蛋白表达显著高于对照组(P<0.05),而pcDNA3.1-ADAMTS9+DMC组细胞活力、侵袭和迁移能力及PCNA、MMP-2、MMP-9、PI3K和p-AKT的蛋白表达均显著低于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组,PTEN蛋白表达显著高于pcDNA3.1-ADAMTS9组和DMC组(P<0.05)。结论过表达ADAMTS9及DMC均可抑制肝癌细胞活力、侵袭和迁移能力,两者联用对细胞抑制作用更明显,机制可能与下调PCNA、MMP-2和MMP-9及PI3K/PTEN/AKT信号通路有关。

miR-21对H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡及PTEN/AKT通路的影响

目的探讨miR-21对H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞凋亡以及PTEN/AKT通路的影响。方法体外培养人视网膜色素上皮细胞系ARPE-19,实验分为四组:空白对照组、阴性对照组、H2O2组、H2O2+miR-21mimics组,使用q-RT-PCR法检测各组ARPE-19细胞中miR-21表达,流式细胞术检测各组细胞凋亡率,Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Caspase-3以及人第10号染色体缺失的磷酸酶(phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,PTEN)、磷酸化AKT蛋白表达。结果与空白对照组和阴性对照组相比,H2O2组和H2O2+miR-21 mimics组miR-21表达量(1.14±0.23、2.18±0.44)、SOD水平[(5.49±1.10) U·L^-1、(14.28±2.86) U·L^-1]、Bcl-2蛋白含量(0.34±0.07、0.62±0.12)、p-PI3K表达水平(0.46±0.09、0.68±0.13)、p-AKT水平(0.53±0.11、1.16±0.13)均显著降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05),而活性氧自由基(reactive oxygen species,ROS)水平(30.58±7.96、23.25±5.67)、MDA水平[(3.95±0.79)mol·L^-1、(2.13±0.43)mol·L^-1]、凋亡率[(25.48±5.10)%、(17.63±3.52)%]、PTEN蛋白表达(0.59±0.12、0.43±0.11)、Bax表达(0.73±0.15、0.49±0.10)、Caspase-3蛋白表达(0.85±0.17、0.42±0.08)均显著升高,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。与H2O2组相比,H2O2+miR-21 mimics组miR-21表达量、SOD水平、Bcl-2蛋白表达、p-PI3K及p-AKT蛋白表达均显著升高(均为P<0.05),ROS水平、MDA水平、细胞凋亡率、PTEN蛋白表达、Bax及Caspase-3蛋白表达均显著降低(均为P<0.05)。结论上调miR-21可能通过激活PTEN/AKT信号通路抑制H2O2诱导的视网膜色素上皮细胞细胞凋亡。

过表达CBX7调控PTEN/Akt信号通路干预上皮-间充质转化抑制胃癌细胞迁移、侵袭

目的探讨染色体盒蛋白同源物7(CBX7)对胃癌细胞上皮-间充质转化(EMT)、迁移、侵袭的影响及相关作用机制。方法将CBX7过表达质粒和阴性对照质粒、CBX7 siRNA和阴性对照siRNA转染至体外培养的人胃癌细胞SGC7901。采用qRT-PCR和Western blot法检测细胞中CBX7的mRNA和蛋白表达,CCK-8法检测细胞增殖情况,细胞划痕实验检测细胞迁移情况,Transwell小室检测细胞侵袭情况,Western blot法检测细胞中EMT相关蛋白和磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)/蛋白激酶B(Akt)信号通路相关蛋白表达。结果与pcDNA-NC组比较,pcDNA-CBX7组SGC7901细胞存活率、迁移率及侵袭数均显著下降/减少,细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、PTEN蛋白表达量均显著升高,N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达量、p-Akt/Akt均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05)。与si-NC组比较,si-CBX7组SGC7901细胞存活率、迁移率及侵袭数均显著升高/增加,细胞中E-cadherin、PTEN蛋白表达量均显著下降,N-cadherin、Vimentin蛋白表达量和p-Akt/Akt均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论过表达CBX7可通过抑制EMT进程抑制胃癌细胞迁移、侵袭,其作用机制可能与调控PTEN/Akt信号通路有关。

基于PTEN/AKT通路变化探讨脾虚内环境与肝癌干性的关系

目的:通过观察脾虚肝癌小鼠PTEN/AKT通路变化及其对肝癌干性的影响,探讨脾虚内环境与肝癌的关系。方法:C57BL/6小鼠随机分为空白组、脾虚组、肝癌组和脾虚肝癌组,观察肝癌小鼠的体重和肿瘤体积变化,分选癌组织CD 133^(+)细胞并检测其增殖、迁移和侵袭能力,同时用RT-PCR技术检测肝脏和癌组织Oatp2b1、PTEN、AKT、CD133 mRNA的表达情况。结果:脾虚肝癌组小鼠肿瘤体积、体重明显大于肝癌组(P<0.01),脾虚肝癌组小鼠CD 133^(+)细胞增殖、迁移和侵袭能力明显增强(P<0.05)。Oatp2b1 mRNA在脾虚肝癌组小鼠癌组织中的表达升高(P<0.01),肝组织中表达降低(P<0.01)。与肝癌组相比,脾虚肝癌组小鼠癌组织CD133、AKT mRNA表达明显升高(P<0.01),PTEN mRNA表达降低(P<0.05)。结论:脾虚机体内环境发生变化且有利于肝癌的发展,其机制可能是脾虚内环境变化致PTEN/AKT信号通路失调进而促进肝癌细胞干性能力发挥。

微小RNA-92a靶向PTEN/Akt信号通路对鼻咽癌细胞增殖与凋亡的影响

目的探讨微小RNA-92a(miR-92a)通过靶向PTEN/Akt信号通路对鼻咽癌HONE1细胞增殖与凋亡的调控作用。方法采用Lipofectamine脂质体法向HONE1细胞转染miR-92a抑制剂(miR-92a组)和阴性对照(NC组),设不行转染的HONE1细胞为对照组。转染成功后用实时荧光定量PCR(QPCR)检测miR-92a在不同细胞组中的表达情况;MTT法检测各组细胞的增殖率;流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率;Western blotting实验检测PTEN/Akt信号通路中PTEN和p-Akt蛋白的表达量。结果转染48 h miR-92a组与对照组和NC组相比,miR-92a的表达量明显降低(P<0.05),而对照组和NC组的差异无统计学意义(P>0.05)。miR-92a组转染24、48、72、96 h的细胞增殖率分别为(84.51±2.74)%、(77.21±3.55)%、(62.07±3.57)%和(49.25±4.15)%,其中72、96 h的细胞增殖率低于对照组和NC组(P<0.05);miR-92a组转染48 h的细胞凋亡率为(46.12±1.79)%,高于对照组的(6.99±0.72)%和NC组的(8.42±0.81)%,差异有统计学意义(P<0.05);miR-92a组转染48 h PTEN和pAkt蛋白的表达水平分别为0.61±0.12和0.37±0.09,对照组分别为0.41±0.11和0.73±0.14,NC组分别为0.39±0.08和0.68±0.07,与对照组和NC相比,miR-92a组细胞的PTEN表达升高,p-Akt表达降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论通过抑制miR-92a的表达来抑制鼻咽癌细胞增殖且促进其凋亡,可能是通过负调控PTEN/Akt信号通路来实现的。

长链非编码RNA KUCG1通过MAGEA11调节PTEN/AKT/mTOR途径促进ccRCC舒尼替尼的耐药性

目的:探究长链非编码RNA(lncRNA)KUCG1在肾癌舒尼替尼耐药中的作用。方法:qPCR检测舒尼替尼耐药的肾癌细胞KUCG1表达变化。CCK-8、侵袭实验和流式细胞术分析KUCG1对肾癌细胞增殖、侵袭、凋亡和耐药性的影响。Western blot分析KUCG1对PTEN/AKT/mTOR通路的影响。qPCR检测KUCG1周围基因变化,并研究MAGEA11对肾癌细胞生物学行为的影响。结果:与正常肾癌细胞相比,耐药的肾癌细胞KUCG1表达明显下降。体外试验结果显示,KUCG1表达下调后细胞增殖、侵袭和耐药性增强,凋亡受抑制。KUCG1表达下调可抑制PTEN表达,激活AKT/mTOR通路。KUCG1下调可通过上调其周围MAGEA11表达,抑制PTEN表达,激活AKT/mTOR通路。MAGEA11下调后肾癌细胞增殖、侵袭能力下降,凋亡增强。结论:KUCG1表达下调通过上调MAGEA11表达调节PTEN/AKT/mTOR通路,促进ccRCC舒尼替尼耐药,有望成为ccRCC分子靶向药物耐药的预后标志物和潜在治疗靶点。

华蟾素对非小细胞肺癌细胞株A549细胞增殖及PTEN/AKT/mTOR信号通路表达的影响

目的:观察华蟾素对肺癌细胞A549及PTEN/AKT/mTOR信号通路蛋白表达的影响。方法:在培养肺癌细胞株NCI-A549中分别加入不同浓度的华蟾素,应用细胞计数试剂盒-8检测24、48、72 h后细胞增殖活力,Ki67及EdU检测72 h细胞增殖活力,免疫印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白以及磷酸化第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白的同源基因(phosphorylated-phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome ten,p-PTEN)蛋白表达。结果:0.2μg/mL华蟾素作用于A549细胞株48 h后显示明显抑制增殖作用(P<0.01),0.8μg/mL华蟾素处理12 h后均具有不同程度抑制增殖作用(P<0.05~P<0.01)。不同浓度华蟾素作用于细胞72 h后,p-PI3K、p-AKT、p-mTOR、p-S6、p-PTEN表达量均较对照组下降(P<0.05~P<0.01),而PI3K、AKT、mTOR、S6及PTEN表达量与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。结论:华蟾素可能通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路蛋白磷酸化,抑制肺癌细胞A549的增殖。

淫羊藿苷对肾癌OS-RC-2细胞增殖、迁移、凋亡及PTEN/AKT通路的影响

目的:探讨淫羊藿苷对肾癌OS-RC-2细胞增殖、迁移、凋亡的影响,以及对磷酸酶、张力蛋白同源物(PTEN)/蛋白激酶B(AKT)通路的影响。方法:设OS-RC-2细胞组、顺铂组(40μg/ml)和淫羊藿苷低、高浓度组(20、40μg/ml)。培养72 h后,测定各组肾癌OS-RC-2细胞存活率、迁移能力和凋亡率,PTEN、AKT的mRNA、蛋白表达水平。结果:与OS-RC-2细胞组比较,顺铂组和淫羊藿苷低、高浓度组细胞存活率降低,迁移距离缩短,PTEN、AKT的mRNA、蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与顺铂组比较,淫羊藿苷低浓度组细胞存活率升高,迁移距离延长,PTEN、AKT的mRNA、蛋白表达水平升高,凋亡率降低;淫羊藿苷高浓度组细胞存活率降低,迁移距离缩短,PTEN、AKT的mRNA、蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。与淫羊藿苷低浓度组比较,淫羊藿苷高浓度组细胞存活率降低,迁移距离缩短,PTEN、AKT的mRNA、蛋白表达水平降低,凋亡率升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:淫羊藿苷能够抑制肾癌OS-RC-2细胞增殖和迁移,促进肾癌OS-RC-2细胞凋亡,其机制可能与淫羊藿苷降低肾癌OS-RC-2细胞PTEN、AKT的mRNA、蛋白表达,进而抑制PTEN/AKT通路的激活有关。

MicroRNA-21通过PTEN/Akt通路介导前列腺素E_2促进胃癌细胞的增殖

背景:已有研究证实前列腺素E_2(PGE_2)可促进肿瘤细胞的增殖,microRNA-21(miR-21)可抑制肿瘤细胞增殖,但信号通路尚不明确。目的:探讨miR-21介导PGE_2促进胃癌细胞增殖的潜在作用机制。方法:体外培养胃癌AGS细胞,分为对照组、PGE_2组、anti-miR-21组、PGE_2+anti-miR-21组,以WST-1比色法检测细胞生存率,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR法检测miR-21 mRNA表达。以Akt特异性抑制剂哌立福辛干预AGS细胞,检测其对细胞增殖的影响,蛋白质印迹法检测PTEN/Akt蛋白表达。结果:与对照组相比,PGE_2组AGS细胞生存率显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05),miR-21 mRNA表达显著升高(P<0.05)。与PGE_2组相比,anti-miR-21组、PGE_2+anti-miR-21组细胞生存率显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),miR-21 mRNA表达显著降低(P<0.05)。以哌立福辛干预后,AGS细胞生存率显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05),PTEN蛋白表达明显上调,p-Akt蛋白表达明显下调。结论:miR-21通过PTEN/Akt通路介导了PGE_2促进胃癌细胞增殖的作用,可能成为防治胃癌的新靶点。

二氢青蒿素通过调控PTEN/Akt信号通路对肝癌HepG-2细胞增殖的影响

目的:探讨不同浓度的二氢青蒿素(DHA)对肝癌HepG-2细胞生长的影响,以及影响其增殖可能的作用机制。方法:体外培养人肝癌细胞HepG-2,将实验分成加药实验组和空白对照组。加药组加入不同浓度的二氢青蒿素(25μM、50μM、100μM、150μM、200μM)干预。利用CCK8法检测不同浓度的二氢青蒿素对肝癌HepG-2细胞增殖抑制的情况,采用Westernblot检测细胞内PTEN/Akt信号通路中PTEN、Akt、CyclinD1、P27相关蛋白的表达情况。结果:由CCK8的结果得出的结果,二氢青蒿素可以抑制肝癌HepG-2细胞的生长,并呈一定的浓度和时间依赖性抑制。二氢青蒿素处理48h后,通过Westernblot的结果显示,PTEN、P27表达量升高,CyclinD1和Akt表达量降低(P<0.05)。结论:二氢青蒿素抑制肝癌细胞HepG-2的增殖可能与抑制PTEN/Akt信号通路,阻滞细胞生长周期有关。

Notch/PTEN/AKT信号通路在跑台运动减轻db/db小鼠肾纤维化中的作用及机制研究

目的:探讨运动对2型糖尿病模型db/db小鼠肾损伤的保护作用及机制。方法:将8周龄的雄性db/db小鼠随机分为4组:db/db组(n=8)、db/db+跑台运动(Exe)组(n=7)、db/db+Exe+Notch抑制剂二苯并氮䓬(DBZ)组(n=7)和db/db+DBZ组(n=6);同月龄雄性m/m小鼠作为阴性对照(Con)组(n=10)。db/db+DBZ组和db/db+Exe+DBZ组小鼠进行DBZ干预(灌胃8周,每周5 d,0.04 mg/kg),db/db+Exe组和db/db+Exe+DBZ组小鼠进行跑台运动(运动8周,每周5 d;db/db+Exe+DBZ组小鼠在灌胃2 h后进行运动)。HE染色和PAS染色评价肾组织形态学变化;Masson染色观察肾组织纤维化程度;试剂盒检测血尿素氮(BUN)和血清肌酐(SCr)水平;Western blot检测肾组织纤维化指标、Notch/PTEN/AKT信号通路相关蛋白和自噬相关蛋白的表达。结果:(1)与Con组相比,db/db组小鼠体重和血糖显著升高(P<0.01),运动干预后显著降低(P<0.05)。(2)与Con组相比,db/db组小鼠BUN和SCr水平显著升高(P<0.01),组织学染色显示肾组织损伤加重,运动干预后BUN和SCr水平均显著降低(P<0.01),肾组织损伤减轻。(3)Western blot结果显示,与db/db组相比,db/db+Exe组I型胶原(Col-I)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达显著减少(P<0.05),Col-Ⅲ和转化生长因子β_(1)(TGF-β_(1))表达有下降趋势,免疫荧光显示小鼠肾脏中α-SMA、Col-I和纤连蛋白荧光染色阳性信号显著减弱;db/db+DBZ组TGF-β_(1)蛋白表达下降(P<0.01);db/db+Exe+DBZ组Col-I、α-SMA、Col-Ⅲ和TGF-β_(1)蛋白表达有下降趋势,但差异无统计学意义。(4)与db/db组相比,db/db+Exe组和db/db+DBZ组Notch1、Hes1和Hey1表达水平及p-AKT/AKT比值均显著降低(P<0.05),PTEN蛋白表达上调(P<0.05),而db/db+Exe+DBZ组Notch1、Hes1、Hey1和p-AKT/AKT蛋白表达无显著差异,PTEN蛋白显著升高(P<0.01)。(5)与db/db组相比,db/db+Exe组和db/db+DBZ组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值显著升高(P<0.01),p62表达显著减少(P<0.01);db/db+Exe+DBZ组LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值升高(P<0.01),p62表达无显著差异。(6)与db/db+DBZ组相比,db/db+Exe组Hey1蛋白下调(P<0.05);与db/db+Exe组相比,db/db+Exe+DBZ组PTEN蛋白上调(P<0.01)。结论:运动减轻db/db小鼠肾功能损伤和肾纤维化,其机制可能与其抑制Notch/PTEN/AKT信号通路而促进细胞自噬有关。

miR-21通过PTEN/AKT通路抑制白血病细胞K562的迁移和增殖

目的 miR-21在多种肿瘤中的研究已有大量文献报道,但其对白血病细胞迁移和增殖的影响及其可能机制尚未完全阐明,文中旨在探讨抑制miR-21对白血病K562细胞迁移和增殖能力的影响及可能的作用机制。方法将miR-21 inhibitor用LipofectamineTM2000转染K562细胞,荧光定量PCR检测miR-21的表达水平;Transwell迁移实验和Cell Counting Kit-8(CCK-8)法测细胞迁移和增殖变化;Western blot检测PTEN、AKT、磷酸化AKT(p-AKT)蛋白表达变化。结果抑制miR-21表达后K562细胞的迁移和增殖能力均受到明显抑制;抑制miR-21能明显增强PTEN蛋白和减低p-AKT蛋白表达水平,对AKT蛋白水平无明显影响。结论抑制miR-21表达可能通过调控PTEN/AKT通路抑制白血病K562细胞迁移和增殖。

miR-21调控PTEN/Akt信号通路抑制肝癌HepG2细胞增殖的实验研究

目的探讨miR-21对于肝癌HepG2细胞增殖的调控作用及其相关的信号通路。方法分别采用miR-21mimic和miR-21inhibitor上调和下调肝癌HepG2细胞中miR-21的表达量。在不同时间点(0h、24h和48h)对肝癌HepG2细胞的增殖水平使用MTT法进行检测。在干预4h后,使用qPCR法对细胞中miR-21和PTEN mRNA水平进行检测;并对PTEN和Akt蛋白水平及Akt磷酸化(phospho-Akt)水平使用western blot进行检测。结果与对照组相比较,给予miR-21mimic干预的HepG2细胞活性呈时间依赖性增加,差异均有统计学意义(P均<0.05)。与对照组相比较,给予miR-21inhibitor干预的HepG2细胞活性呈时间依赖性降低,差异均有统计学意义(P均<0.05)。在干预4h后与对照组相比较,miR-21mimic干预的HepG2细胞miR-21mRNA和Akt磷酸化水平明显增加而PTEN mRNA和蛋白表达水平明显降低,差异均有统计学意义(P均<0.05);同时与对照组相比较,miR-21inhibitor干预的HepG2细胞miR-21mRNA和Akt磷酸化水平明显降低而PTEN mRNA和蛋白表达水平明显增加,差异均有统计学意义(P均<0.05)。结论该基础研究表明miR-21可能可以通过PTEN/Akt信号通路对肝癌HepG2细胞的增殖产生关键性的调控作用。并通过抑制miR-21的表达具有抗肝脏肿瘤的价值,为进一步肿瘤临床治疗提供思路。

罗格列酮通过PI3K/PTEN/Akt通路抑制人肝癌HepG2细胞增殖

目的研究罗格列酮对人肝癌HepG2细胞增殖与细胞周期的影响,通过检测相关蛋白的表达变化,探讨其可能机制。方法不同浓度罗格列酮作用于HepG2细胞,MTT法测定细胞增殖抑制率,流式细胞术检测细胞周期的变化,Western blot法检测PTEN、pAkt、S期激酶相关蛋白2(Skp2)及P27kip1蛋白表达变化,RT-PCR检测PTEN、Skp2及P27kip1mRNA表达变化。结果罗格列酮可明显抑制HepG2细胞的增殖,呈现时间和浓度依赖性(P<0.05);G0/G1期HepG2细胞比例明显升高,S期细胞比例明显降低(P<0.05)。Western blot结果显示罗格列酮可下调HepG2细胞中pAkt和Skp2蛋白的表达,上调PTEN和P27kip1蛋白表达(P<0.05)。RT-PCR结果显示罗格列酮可明显上调PTEN mRNA的表达,下调Skp2mRNA的表达,而P27kip1mRNA表达无明显变化。结论罗格列酮可抑制HepG2细胞的增殖,造成G0/G1期阻滞,其机制可能与罗格列酮经PI3K/PTEN/Akt信号通路参与Skp2及P27kip1蛋白的调控有关。