Percoll法处理牛精子对体外受精胚胎发育的影响

牛冷冻精液解冻后，在Ｐｅｒｃｏｌ梯度液中４００ｇ离心２４ｍｉｎ，有效地获得了５７．８７％±８．０％的精子回收率；对照组上游法精子回收率仅为１５．８７％±１．９％（Ｐ＜０．０５）。Ｐｅｒｃｏｌ和上游２种方法分离的精子在受精液中８、１８ｈ后的活率，分别为６０％、１０％和７０％、２０％。２种浓度Ｐｅｒｃｏｌ法分离的精子对不同成熟处理的卵母细胞体外受精（ＩＶＦ）卵裂率的影响：精子最终浓度为２×１０６／ｍＬ时，成熟组Ⅰ（ＬＨ＋ＦＳＨ）和成熟组Ⅱ（ＰＭＳＧ＋ｈＣＧ）的卵裂率分别为５６．１９％和５８．１６％；精子最终浓度为５×１０６／ｍＬ时，２组的卵裂率分别为５９．３０％和６２．７７％，卵裂率在精子浓度不同组间及添加不同激素组间的差异不显著。本试验还研究了２种方法处理的精子对不同成熟处理组的卵裂率和囊胚率，用Ｐｅｒｃｏｌ法处理的精子（２×１０６／ｍＬ）在成熟组Ⅰ获得了５７．１６％的卵裂率和２５．５８％的囊胚率，而上游法分别为６１．９５％和１９．０２％，２种方法相差不显著（Ｐ＞０．０５）；在成熟组Ⅱ获得了６２．１８％的卵裂率和２４．７７％的囊胚率，而上游法分别为７１．１８％和２０．９６％，２种方法的卵裂率相差显著（Ｐ＜０．?

采用Percoll法分离、纯化鲫肝细胞

以Ⅳ型胶原酶消化法分离鲫(Carassius auratus)肝细胞,然后将其分成2组,一组不再经过进一步处理(即对照组);另一组再用Percoll液密度梯度离心纯化肝细胞(即实验组),然后将2组细胞接种于DMEM/F12培养基中培养10 d。在倒置显微镜下观察2组肝细胞的形态并绘制细胞生长曲线;采用台盼蓝染色法比较2组肝细胞的存活率;通过HE染色法在光镜下检测肝细胞的纯度;采用MTT比色法测定2组肝细胞的增殖率;收集肝细胞培养上清液检测白蛋白、尿素以及乳酸脱氢酶的水平以检测2组肝细胞功能。结果表明,对照组鲫肝细胞存活率为80.6%,纯度为83.2%;实验组肝细胞存活率和纯度明显高于对照组(P<0.05),分别为94.2%和95.1%。实验中发现,从开始接种到大部分肝细胞贴壁生长,实验组比对照组肝细胞的增殖明显加快(P<0.05)。白蛋白分泌功能、尿素合成能力及乳酸脱氢酶检测结果表明,实验组培养上清液中白蛋白分泌量、尿素合成能力明显高于对照组(P<0.05);而乳酸脱氢酶含量明显低于对照组(P<0.05)。结论认为,用Percoll梯度液分离纯化肝细胞,可提高肝实质细胞纯度和活力,适合体外原代培养。

Percoll法处理对人精子运动参数的影响

为观察来源于３种不同精液标本精子运动参数的差异及其Ｐｅｒｃｏｌ处理后的变化，本文对新收集的正常精液精子（Ⅰ组），少精及弱精症精子（Ⅱ组）及正常精液冻融精子（Ⅲ组）各１０份，分别于Ｐｅｒｃｏｌ处理前后用电子计算机精液分析仪（Ｃｏｍｐｕｔｅｒａｓｉｓｔｅｄｓｅｍｅｎａｎａｌｙｓｅｒ）进行运动特性分析，记录ＭＯＴ、ＶＳＬ、ＶＣＬ、ＬＩＮ、ＡＬＨ、及ＶＡＰ６项参数，其结果进行统计学分析。Ｐｅｒｃｏｌ处理后，各组精子６项参数值均较处理前提高，差异具有统计学意义（Ｐ＜０．０５～０．００１）。处理前Ⅰ组与Ⅱ、Ⅲ组除ＶＳＬ无显著差异外，余５项参数值均有显著差异。Ⅲ组的ＡＬＨ，ＶＣＬ最高，其它参数Ⅰ组最高。Ｐｅｒｃｏｌ处理后差异值降低。Ｐｅｒｃｏｌ处理后精子运动６项参数值均提高；异常精液精子运动特性与正常精液精子有明显差异；正常精子冷冻复苏后其ＶＣＬ及ＡＬＨ明显提高。

Percoll非连续梯度法分离未成年绵羊精原细胞的研究

为探索一种简单可行的分离未成年绵羊精原细胞的方法,采用0.3%的胰蛋白酶消化新鲜采集的4～6月龄未成年绵羊睾丸组织,制备单细胞悬浮液,经Percoll非连续梯度法离心分离,得到自下而上3条清晰的细胞带,用流式细胞仪对各层细胞进行倍性和抗体染色鉴定.结果表明:第一层细胞中的精原细胞含量达到了76.76%,形态良好,活率高于96%.表明试验中所采用的分离方法对未成年绵羊睾丸精原细胞的分离效果较好,所得细胞可用于进一步的研究.

Percoll梯度离心法分离牛X精子及配种试验

用改良Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度柱离心分离牛精子，并将分离后富含Ｘ精子的底层精液进行配种实验。结果发现，底层精子活率正常，含Ｆ小体的Ｙ精子仅１０．２％。将其鲜精直接配种母牛１３头；冻精配种８１头。鲜精组产仔率８４．６％，冻精组为７２．８３％，与对照组比较无差异。母犊出生率，鲜精组为８１．８０％，冻精组为７１．１８％，分别比对照组提高３６．３８％与２５．７８％（Ｐ＜０．０１）。结果表明，此分离方法可提供富含Ｘ精子的精液；应用于人工配种。

大鼠生精细胞分离方法的研究

目的:建立一种简单、有效的哺乳动物睾丸生精细胞分离方法。方法:采用研磨-Percoll法、单一酶-研磨-Percoll法、组合酶法制备成熟期前大鼠睾丸生精细胞,分析比较其细胞总数、分离所需时间和细胞纯度,以及检测细胞培养前后的存活率。结果:组合酶法得到的睾丸生精细胞总数最多、分离所需时间最短;获得的细胞含杂质最少、细胞存活率最高;细胞培养48h后的存活率高,与其他两种分离方法比较有显著性差异(P<0.05)。结论:用组合酶法能在较短时间内获得数量较多的、比较纯化和存活率较高的生精细胞。

两种不同方法处理牛分离精子对体外受精效果的影响

本试验旨在探讨采用2种不同方法处理牛分离精子对精子活力、浓度及体外受精(IVF)效果的影响。将体外培养成熟卵母细胞随机分为2组,与分别用洗涤法和Percoll法处理牛分离精子进行IVF,并观察处理后各组的精子活率、浓度和IVF后囊胚发育率。结果显示,洗涤法和Percoll法处理后精子活力和IVF后的囊胚发育率均无显著差异,但采用洗涤法处理后分离精子浓度极显著高于Percoll法,可显著提高分离精子利用效率,且方法简便、经济,应优先选择使用。

两种分离脐血间充质干细胞的方法比较

背景:目前分离脐血间充质干细胞的方法很多,尚没有确定一种为最有效的方法。目的:寻找一种最为可靠的脐血间充质干细胞分离方法。方法:应用Percoll分离液法和羟乙基淀粉沉降法对脐血进行分离得到单核细胞,在含体积分数15%新生牛血清的DMEM/F12培养基中进行培养并传代。观察不同分离方法脐血单核细胞的回收率,每次传代的时间和细胞增值速度,培养过程中间充质干细胞形态的变化情况,并用流式细胞仪检测第3代细胞表面标志物CD90、CD44、CD34的表达。结果与结论:与Percoll分离液法相比羟乙基淀粉沉降法获得的单核细胞多,单核细胞回收率高(P<0.01),第1次传代时间短(P<0.01)。然而两种方法获得的细胞经培养在形态的变化和表面标志物CD90、CD44、CD34的表达上差异并无显著性意义(P>0.05)。所以羟乙基淀粉沉降法的分离效率较高,培养时间短,但是并不能获得质量较高的脐血间充质干细胞。

适合膜片钳试验的一种外周血嗜酸性粒细胞分离法

目的建立一种从人群外周血中分离出适合膜片钳试验的外周血嗜酸性粒细胞(EOS)分离方法,并在分离的细胞上观察其K+-ca2-通道特性。方法采用改良的不连续密度梯度法分离EOS,用膜片钳单通道记录法记录K+-ca2-通道电流。结果外周血EOS的回收率为(48.2±6.9)%、存活率>99%、纯度为(90.5±1.6)%。EOS形态完整,可检测到其膜上的K+-ca2-通道。结论该法能短时间内从外周血中分离出高存活率、无细胞损伤的EOS,是一种适于膜片钳试验中分离外周血EOS的方法。

基于密度梯度法分离纯化的改良培养新生小鼠心肌细胞方法研究

目的基于Percoll不连续密度梯度法分离纯化心肌细胞,建立一个快速稳定提取新生小鼠心肌细胞的原代培养方法。方法在无菌状态下取C57BL/6乳鼠心室,用低浓度Ⅱ型胶原酶消化,通过调整温度、消化方式、离心时间及转速,采用Percoll密度梯度法分离纯化心肌细胞。观察不同时间心肌细胞形态;用0.4%台盼蓝染色检测细胞存活率及细胞数量;采用免疫荧光染色法检测心肌肌钙蛋白I(cTnI)表达情况,鉴定心肌细胞及其纯度。结果5次培养结果显示,心肌细胞的平均存活率为(93.12±0.75)%,纯度为(96.36±0.60)%,细胞生长状态良好,可以贴壁自发搏动。结论采用本方法能获得产量、存活率及纯度很高的新生小鼠原代心肌细胞,耗时较短,是一种理想的分离纯化原代心肌细胞的方法,可满足后续各种实验要求。

体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞定向分化肝样细胞

目的观察骨髓间充质干细胞体外诱导分化为肝样细胞。方法自大鼠的股骨中提取骨髓细胞,利用 Percoll 法行骨髓间充质干细胞分离、纯化。取第3代的骨髓间充质干细胞,应用肝细胞生长因子(HGF)20ng/ml 表皮生长因子(EGF)1.5μg/ml 联合诱导。两周后免疫荧光染色及逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)鉴定诱导后细胞白蛋白的 mRNA 的表达。结果诱导分化一周骨髓间充质干细胞变为圆形,两周后免疫荧光染色可见肝细胞标志物 CK18和白蛋白表达,RT-PCR 检测有白蛋白的 mRNA 的表达。结论骨髓间充质干细胞体外诱导能定向分化为肝样细胞。

甘薯叶绿体分离及其DNA提取

为建立高效的甘薯叶绿体分离方法,比较了2种叶绿体分离方法,即高盐-低pH法和Percoll密度梯度法.研究显示,2种方法都能分离得到完整、纯净的叶绿体.再用CTAB法可从纯叶绿体中提取DNA,用2种方法分离的叶绿体DNA经分光光度计检测,高盐-低pH法和Percoll密度梯度法A260/A280数值分别为1.81和1.89,高盐-低pH法分离得到的叶绿体DNA产率更高,鲜质量分数为270 ng/g;Percoll密度梯度法分离得到的叶绿体DNA产率较低,鲜质量分数为90 ng/g.该研究为深入探究甘薯叶绿体基因组结构、功能等提供基础.