TCAB1和PinX1在癌症中的相关研究进展

端粒酶通过在染色体末端增加端粒重复来支持肿瘤细胞的增殖。然而,其低丰度和有限的表达模式限制了我们对这个重要的酶的了解。PIN2/TRF1相互作用端粒酶抑制剂1(PinX1)是一种位于人类染色体8p23的新型克隆基因,在维持端粒长度和染色体稳定性方面起着至关重要的作用。它已被证明参与大多数恶性肿瘤的肿瘤发生和进展。端粒酶卡扎尔体蛋白1(TCAB1)是新发现的端粒酶关键核心蛋白组分,属于WD40家族同源物。近年来研究证实,TCAB1与肿瘤的发生发展及预后等生物学行为密切相关。因此,PinX1和TCAB1可能是人类癌症新的潜在诊断生物标志物和治疗靶点,可能在不同的人类癌症中发挥不同的作用。

Plk1磷酸化修饰PinX1对宫颈癌HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响

目的:探讨有丝分裂激酶Plk1通过磷酸化修饰PinX1调控宫颈癌HeLa细胞有丝分裂及凋亡的作用。方法:运用酵母双杂交、免疫共沉淀、谷胱甘肽-S转移酶沉降实验了解Plk1与PinX1在体内外是否能够相互结合采用;采用体内外磷酸化实验明确Plk1是否能够磷酸化修饰PinX1;采用免疫荧光染色及流式细胞术检测PinX1磷酸化对HeLa细胞有丝分裂及凋亡的影响。结果:Plk1与PinX1在体内外均能结合;Plk1在体内外均可磷酸化修饰PinX1;过量表达PinX1的非磷酸化突变体能够阻碍HeLa细胞的有丝分裂进程;过量表达PinX1的磷酸化突变体导致细胞凋亡的增加(F=76554.133,P<0.001)。结论:Plk1与PinX1相互结合并通过磷酸化修饰PinX1阻碍细胞有丝分裂进程及促进细胞凋亡。

苦参碱对A549细胞增殖和PinX1 mRNA表达的影响

目的探讨苦参碱对A549细胞增殖和PinX1mRNA表达的影响。方法用不同浓度的苦参碱作用A549细胞48h,流式细胞仪检测增殖指数,RT-PCR检测PinX1 mRNA表达。结果随着苦参碱浓度的增加(0mg/ml、0.5mg/ml,1.0mg/ml、1.5mg/ml、2.0mg/ml),A549细胞增殖指数(PI)逐渐下降(34.35±1.26、18.34±1.01、13.38±1.02、8.47±0.86、7.01±0.75),PinX1mRNA表达逐渐增强(PinX1/β-actin相对灰度值0.42、0.81、1.44、2.05、2.53),二者呈明显负相关(r=-0.89,P<0.05)。结论苦参碱呈浓度依赖性抑制A549细胞的增殖可能与增强PinX1mRNA的表达有关。

PinX1和hTERT在基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌、日光性角化病皮损中的检测

目的检测基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1和人端粒酶逆转录酶hTERT的水平。方法用免疫组化SP法分别检测PinX1和hTERT蛋白在30例基底细胞癌、25例皮肤鳞状细胞癌、21例日光性角化病及17例正常皮肤组织中的表达。结果 PinX1蛋白在基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中的阳性表达率明显低于正常组,差异有统计学意义(P均<0.05);基底细胞癌与日光性角化病、鳞状细胞癌组织PinX1蛋白阳性表达率差异无统计学意义(P均>0.05);鳞状细胞癌组织PinX1蛋白阳性表达率低于日光性角化病,差异有统计学意义(P<0.05)。hTERT蛋白在基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中的阳性表达率明显高于正常组,差异有统计学意义(P均<0.05);基底细胞癌、皮肤鳞癌及日光性角化病组织之间hTERT蛋白阳性表达率差异均无统计学意义(P均>0.05)。基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病组织中PinX1和hTERT蛋白的阳性表达呈负相关(r=-0.451,P<0.05)。结论 PinX1和hTERT蛋白参与了基底细胞癌、皮肤鳞状细胞癌及日光性角化病的发生、发展。二者在抑制细胞凋亡方面可能存在拮抗作用。

Pinx1在口腔鳞癌中的表达及意义

目的:研究Pinx1在口腔鳞状细胞癌(OSCC)中的表达及意义。方法:免疫组织化学染色检测Pinx1在60例OSCC和20例正常口腔黏膜组织(NOM)中的表达情况。结果:Pinx1在NOM上皮中高表达,高表达率为100.00%,在OSCC中高表达率为65.00%,Pinx1高表达率明显低于NOM(P<0.05),随着分化程度的降低,Pinx1表达呈降低趋势(P<0.05),伴有淋巴结转移的病例中Pinx1表达水平显著低于不伴有淋巴结转移的OSCC(P<0.05),Pinx1的表达情况与患者性别年龄无关。结论:Pinx1可能与OSCC的发生、发展及转移有关。

宫颈鳞癌组织中HPVE6与野生型p53和PinX1表达的关系及其临床意义

目的探讨宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁及正常宫颈组织中HPV E6、野生型p53及Pin X1表达及其关系。方法收集第三军医大学大坪医院野战外科研究所妇产科2013年3月至2014年2月17例宫颈鳞癌患者宫颈鳞癌、宫颈鳞癌癌旁组织,选取10例正常宫颈组织作为对照。采用Real-Time PCR、Western blot、免疫组织化学方法检测3组组织中HPV E6、野生型p53和Pin X1的mRNA、蛋白的表达及分布。结果宫颈鳞癌组织中mRNA及蛋白水平结果均显示HPV E6的表达水平显著高于癌旁组织(P<0.01),而野生型p53和Pin X1的表达水平明显低于癌旁及正常组织(P<0.05)。相关性分析提示:宫颈鳞癌组织中野生型p53(R=-0.605,P<0.01)和Pin X1(R=-0.496,P<0.05)表达水平的下降与HPV E6的表达水平升高存在负相关,野生型p53与Pin X1的表达呈正相关(R=0.824,P<0.01)。结论宫颈鳞癌组织中HPV E6表达上调与野生型p53、Pin X1的表达负相关,Pin X1的表达与野生型p53密切相关,HPV E6可能通过抑制野生型p53、Pin X1导致宫颈鳞癌的发生、发展。

白血病细胞中端粒酶抑制因子Pinx1的表达与端粒酶活性关系的研究

目的:研究端粒酶抑制因子Pinx1在急性白血病细胞中的表达和在急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中的表达改变,分析其表达与端粒酶逆转录酶hTERT表达的关系,以了解白血病细胞中Pinx1对端粒酶的作用及可能机制。方法:荧光定量RT-PCR检测30例急性白血病细胞中Pinx1与hTERTmRNA的表达,进一步在ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中检测Pinx1及hTERTmRNA表达,分析两者之间的相关性。结果:Pinx1在急性白血病细胞中的表达(0·00312,5·42×10-4-0·024)明显高于正常人骨髓单个核细胞(7·89×10-4,0-0·00863,P<0·01),与hTERT的表达呈正相关(r=0·296,P<0·05)。Pinx1表达随NB4细胞分化逐渐下降,与hTERT呈正相关(r=0·900,P<0·05)。结论:Pinx1虽然为端粒酶活性的抑制因子,但在白血病细胞中与端粒酶活性的调控方向一致,提示Pinx1的表达改变可能是继发于hTERT的一种负反馈反应,目的是保持端粒酶活性的稳定,具体机制尚待进一步研究。

PinX1调控PI3K/Akt信号通路影响口腔鳞癌HSC6细胞的增殖、侵袭和凋亡

目的:探讨人Pin2结合蛋白X1(PinX1)对口腔鳞癌(OSCC)HSC6细胞增殖、侵袭和凋亡的影响及其机制。方法:免疫组织化学方法检测Pin X1蛋白在人OSCC组织中的表达情况。免疫印迹法检测HSC6细胞和人正常口腔上皮HOEC细胞中PinX1蛋白的表达。CCK-8法、Transwell实验、流式细胞术检测过表达PinX1对HSC6细胞增殖、凋亡和侵袭的影响。免疫印迹法检测p-PI3K和p-Akt蛋白的表达。结果:人OSCC组织中Pin X1表达率低于癌旁组织(P<0.05)。HSC6细胞中PinX1蛋白表达低于HOEC细胞(P<0.05)。过表达PinX1后HSC6细胞活力、侵袭细胞数、p-PI3K和p-Akt蛋白表达显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05)。激活PI3K/Akt信号通路能逆转PinX1过表达对HSC6细胞增殖、侵袭和凋亡的影响(P<0.05)。结论:PinX1通过抑制PI3K/Akt信号通路抑制口腔鳞癌HSC6细胞增殖、侵袭并促进其凋亡。

OSCC组织中的Pinx1、CD44v6蛋白的表达及其意义

目的口腔鳞状细胞癌(OSCC)组织中的Pinx1(PIN2码/TRF1相互作用蛋白X1)、CD44拼接变异体6(CD44v6)蛋白的表达及其临床意义。方法选取我院2014年6月-2016年12月收集的68例OSSC组织(OSCC组)、正常口腔黏膜组织34例(对照组),采用免疫组化染色检测两组标本中的Pinx1蛋白、CD44v6蛋白表达水平,并分析在不同分化程度、临床分期、淋巴结转移的OSCC组织中的表达差异。结果OSCC组标本中的CD44v6蛋白、Pinx1蛋白阳性表达率分别为66.18%、61.76与对照组的8.82%、94.12%比较差异具有统计学意义(P<0.05);Pinx1蛋白阳性表达的低分化患者占比、Ⅲ期+Ⅳ期患者占比、发生淋巴结转移患者占比均低于Pinx1蛋白阴性表达的OSCC患者(P<0.05);CD44v6蛋白阳性表达中低分化患者占比、发生淋巴结转移患者占比均高于CD44v6蛋白阴性表达的OSCC患者(P<0.05)。结论Pinx1蛋白、CD44v6蛋白在OSCC组织中表达变化显著,并且与肿瘤病理学特征具有一定的相关性。

Pinx1表达与端粒酶活性及肿瘤的关系

Pinx1作为端粒酶抑制剂,也是最近发现的一种新型肿瘤抑制因子。通过对内源性端粒酶抑制基因Pinx1与端粒酶、端粒相关蛋白在肿瘤中的表达以及Pinx1在肿瘤演进过程中的作用及临床意义进行一系列的研究,发现肿瘤中Pinx1表达下降与端粒酶活性增高密切相关,且端粒酶活性增高的程度与肿瘤的预后相关。现对近年来Pinx1基因的最新研究进展,特别是该基因表达与端粒酶活性在肿瘤发生、发展中的作用,作一综述和分析。

PinX1是抑癌基因吗?

端粒及端粒酶在肿瘤的永生化和演进中起着重要作用。PinX1是一种新基因,它是潜在的抑癌基因,其产物是端粒酶的强力抑制剂。然而,另外也有研究表明PinX1不是抑癌基因。本文就近年来有关该基因的研究进展作一综述。

PinX1基因在肾癌组织的表达及临床意义

目的分析抑癌基因PinX1在肾癌中的表达,探讨PinX1在肾癌发生、发展和预后中的作用及临床意义。方法应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测56例肾癌组织中内源性端粒酶抑制基因PinX1及端粒酶催化亚基(hTERT)的mRNA表达水平,同时应用免疫组化方法检测PinX1蛋白表达水平,分析PinX1表达与肾癌分期、分级及临床特征之间的关系。结果 PinX1表达与肾癌组织分化、临床分期和淋巴转移之间有显著相关性(P<0.05),与hTERT表达呈负相关。PinX1在肾癌和癌旁表达具有显著性差异(P<0.05)。肾癌分期分级越高,PinX1表达越低,有淋巴结转移的PinX1表达要低于无淋巴结转移(P<0.05)。结论 PinX1的下调可能与肾癌形成、转移过程中端粒酶激活及维持机制有关。检测PinX1的表达水平对评价肾癌恶性程度、转移潜能和预后评估均有重要的临床价值。

PinX1基因真核表达载体的构建及其在Hek293细胞中的表达

目的确定PinX1在转染该基因的真核细胞Hek293内的表达定位。方法采用RT-PCR技术从HepG2中扩增PinX1,克隆入真核表达载体pcDNA3-vsv,重组质粒转染Hek293细胞,免疫细胞化学法检测蛋白质的表达。结果从HepG2细胞中获得PinX1基因,成功构建真核表达载体pcDNA3-PinX1-vsv,将其转染Hek293细胞后,免疫细胞化学法检测结果表明PinX1在细胞核内表达。结论成功获得PinX1基因,转染后在Hek293细胞核内表达,为探索PinX1在端粒、端粒酶调控中的作用机制奠定基础。

宫颈癌中端粒酶抑制因子PinX1基因变异位点分析

目的探讨端粒酶抑制因子PinX1(Pin2/TRF1-interacting protein X1)在宫颈癌细胞系、正常宫颈组织标本、宫颈癌组织标本中的变异情况。方法采用3种宫颈癌细胞系(加以3种淋巴瘤细胞系、1种乳腺癌细胞系作为参照)、28例正常宫颈组织及52例宫颈癌组织标本。提取基因组DNA为模板,PCR扩增PinX1基因全部7个外显子及其部分侧翼序列,PCR纯化产物直接测序从而检测PinX1基因的变异情况,SPSS统计学软件进行数据分析。结果于宫颈癌细胞系中发现3个突变位点,于52例宫颈癌组织中发现5个变异位点,其中位于第7外显子的Ser254Cys(23.1%)及位于第2内含子的IVS2+18 G→A(51.9%)变异率与正常宫颈组织相比有显著差异(P<0.05),位于第2内含子的1个变异位点IVS2+64 C→A(9.3%)为首次报道。结论在宫颈癌中,可能存在PinX1基因的变异新位点,对PinX1基因变异的研究,可能为宫颈癌的诊断、防治和个体化诊疗提供潜在的新靶标。

PinX1可通过Mad1/c-Myc途径抑制端粒酶活性

目的探讨PinX1基因抑制端粒酶活性可能的新机制。方法设计针对靶基因的干扰序列和阴性对照序列,应用脂质体法导入胃癌细胞中,G418筛选出抗性克隆;结合前期已建立稳定表达PinX1基因的细胞系,检测各细胞系中PinX1、Mad1及c-Myc的表达;应用流式细胞技术检测转染入PinX1基因后,胃癌细胞凋亡的改变。结果转染入PinX1基因后,Mad1的水平发生上调性改变;反之,抑制PinX1基因的表达后,Mad1的水平发生下调性改变;而c-Myc的变化与之相反。转染入PinX1基因后,胃癌细胞发生早期凋亡的改变。结论PinX1基因能通过Mad1/c-Myc抑制端粒酶活性。

基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1、hTERT的表达及意义

目的分析基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1及hTERT的表达,探讨PinX1、hTERT在基底细胞癌、鳞状细胞癌发生、发展中的作用。方法应用实时定量PCR检测13例基底细胞癌、22例鳞状细胞癌组织中PinX1、hTERT mRNA表达水平,应用免疫组化SP法检测PinX1蛋白和hTERT蛋白在30例基底细胞癌、46例鳞状细胞癌组织中的表达。结果基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1 mRNA表达水平均低于正常组,基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中hTERT mRNA表达水平均明显高于正常组,PinX1蛋白在基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中的阳性表达率明显低于正常组,hTERT蛋白在基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中的阳性表达率明显高于正常组,差异均有统计学意义(P<0.05);基底细胞癌、鳞状细胞癌组织中PinX1蛋白和hTERT蛋白的阳性表达呈负相关(r=-0.460,P<0.05)。结论 PinX1和hTERT参与了基底细胞癌、鳞状细胞癌的发生、发展,二者在基底细胞癌、鳞状细胞癌细胞凋亡方面可能存在拮抗作用。

端粒酶抑制因子PinX1基因在鼻咽癌细胞中的表达及作用效应分析

目的探讨PinX1基因在鼻咽癌细胞中的表达及其作用效应分析。方法构建包含全长人PinX1基因序列的质粒载体pEGFP-C3-PinX1及PinX1的小干扰RNA,PinX1-FAM-siRNA。脂质体法转染人鼻咽癌5-8 F细胞,采用RT-PCR检测PinX1基因和端粒酶催化亚单位(hTERT)mRNA的表达;分别采用Stretch PCR、MTT及流式细胞仪检测肿瘤细胞端粒酶活性、增殖能力及凋亡改变。结果成功构建PinX 1基因质粒载体及合成其小干扰RNA。转染鼻咽癌5-8 F细胞后,PinX1 mRNA的表达水平显著提高,hTERT mRNA的表达水平下降了2 9.9%,端粒酶活性显著降低,肿瘤细胞增殖能力受到抑制,诱导鼻咽癌细胞凋亡率从未转染的19.27%±0.76%增加至转染后的49.73%±2.70%(P<0.05);转染PinX1基因的小干扰RNA(PinX1-FAM-siRNA),结果显示PinX1 mRNA的表达水平下降70%,而鼻咽癌5-8 F细胞的增殖能力、端粒酶活性和hTERT的表达以及细胞凋亡率未受到显著影响。结论外源PinX1基因可在鼻咽癌细胞中高表达,显著抑制该肿瘤细胞中端粒酶活性及其hTERT mRNA表达,抑制鼻咽癌细胞增殖并诱导肿瘤细胞凋亡增加。沉默鼻咽癌细胞中PinX1基因后,PinX1基因的抑制性功能相应地受抑制。施加正反调节因素后的结果表明PinX1基因是一个潜在的端粒酶活性抑制剂,可能通过靶向抑制端粒酶途径来影响肿瘤的发生发展,本研究将为鼻咽癌的靶向基因治疗开辟新领域。

端粒相关蛋白PinX1和磷酸化激酶Aurora A的相互作用

目的:鉴定端粒相关蛋白PinX1与有丝分裂期极光激酶(Aurora A)的相互作用及其功能,进一步研究PinX1调控参与细胞有丝分裂期的具体机制。方法:以pGBKT7-PinX1为诱饵对人HeLa细胞cDNA文库进行筛选,对筛选到的结果进行测序分析;构建Aurora A原核及真核表达质粒;采用免疫共沉淀及蛋白质体外沉降实验进行相互结合研究;采用体内磷酸化实验验证Aurora A是否能磷酸化修饰PinX1;免疫荧光染色实验检测Aurora A与PinX1是否存在共定位。结果:酵母双杂交结果发现了3个新的PinX1相互作用蛋白;免疫共沉淀及体外沉降实验证实PinX1与Aurora A存在相互结合;免疫荧光染色实验证实PinX1与Aurora A在细胞内存在共定位;磷酸化实验证实Aurora A能够磷酸化修饰PinX1。结论:Aurora A是一个新的PinX1结合蛋白;Aurora A能够磷酸化修饰PinX1;PinX1可能通过Aurora A磷酸化修饰参与细胞有丝分裂期调控。

PinX1基因过表达对神经胶质瘤细胞增殖的影响

目的：探讨PinX1基因过表达对神经胶质瘤细胞株增殖的影响及其分子作用机制。方法利用pEG-FP－C3－PinX1过表达质粒和pEGFP－C3对照组质粒，分别转染神经胶质瘤U87和U251细胞，CCK8细胞增殖实验分析PinX1过表达后对2种神经胶质瘤细胞增殖的影响，流式细胞仪分析2种神经胶质瘤细胞周期的变化， Western blot检测PinX1蛋白c、yclin 家族蛋白、CDK抑制剂蛋白及人端粒酶逆转录酶（ hTERT）的表达水平。结果转染pEGFP－C3－PinX1过表达质粒可以有效增加神经胶质瘤U87和U251细胞中PinX1蛋白的表达，PinX1过表达后抑制细胞的增殖，PinX1过表达后下调hTERT的表达，提高 p27的表达，降低cyclin D1和cyclin E的表达，使细胞周期停滞在G1期。结论 pEGFP－C3－PinX1过表达质粒可以有效地提高神经胶质瘤U87和U251细胞中PinX1的表达，PinX1过表达后可能通过影响cyclins、CDK抑制剂蛋白以及hTERT的表达从而使细胞周期停滞在G1期，最终显著抑制神经胶质瘤细胞的增殖。

原发性肝细胞肝癌中PinX1的表达及其临床意义

目的探讨Pin2/TRF1结合蛋白X1(Pin X1)在原发性肝细胞肝癌中的表达及其临床意义。方法收集我院43例原发性肝细胞肝癌患者的癌和癌旁正常组织以及病例资料,通过实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)检测Pin X1的m RNA表达水平,并分析表达差异与临床病理特征及患者预后的关系,卡方检验分析率的差异,应用Kaplan-Meier法进行生存分析,Cox风险比例回归模型筛选预后影响因素。结果在43对癌和癌旁正常组织标本中,29例(67.4%)肝癌组织中的Pin X1 m RNA呈低表达,而相应的癌旁组织只有14例(32.6%)呈低表达,差异具有统计学意义(P<0.05);Pin X1 m RNA表达水平与患者年龄具有相关性,生存分析和Cox单因素、多因素风险比例回归模型表明癌组织中Pin X1 m RNA低表达是肝癌患者总生存期的独立预后因子(HR=5.057,P=0.005;HR=3.761,P=0.006)。结论 Pin X1可能是原发性肝细胞肝癌中潜在的抑癌基因,其表达下调在肝癌的发生发展过程发挥重要作用,并可能成为判断肝癌患者预后的重要的生物学指标。