RAS基因相关性自身免疫淋巴增殖性疾病1例并文献复习

目的探讨RAS基因相关自身免疫淋巴增殖性疾病(Ras-associated autoimmune lymphoproliferative disorders,RALD)的临床特征及诊疗方法。方法分析2019年本院诊治的1例RALD患者的临床资料,以基因NRAS、KRAS或RALD为检索词,检索PubMed、中国知网、万方数据库2000年1月—2023年11月RAS基因变异相关文献并进行复习。结果患者因“发现血小板减少1.5年,反复发热1.5月”收住院。查体:轻度贫血貌,腹部膨隆,肝脏肋下5 cm,质韧,脾脏肋下3 cm。CD4-CD8-细胞的比例占淋巴细胞的2.3%。NK细胞脱颗粒功能下降。基因检测:存在NRAS基因2号外显子c.38G>A、p.G13D体细胞突变。共检索到RALD患者32例,其中NRAS基因体细胞突变致RALD有13例,KRAS基因体细胞突变致RALD有19例。32例RALD患者主要特征包括脾脏肿大,免疫性贫血,血小板减少,高丙种球蛋白血症,单核细胞增多,双阴性T细胞比例正常或轻度升高。结论RALD患者的临床特征为肝脾肿大、存在自身免疫现象等,基因分析有助于该疾病的诊断。

吸烟与肺癌p53及K-ras基因突变关系的研究进展

p53和K ras基因突变常见于肺癌,吸烟是引起p53和K ras基因突变的主要危险因素。吸烟 相关性肺癌基因突变以G→T为主,这在其它肿瘤及不吸烟者肺癌很少见。p53基因突变常发生于第157、 156、245、248、273密码子,K ras基因突变常发生于第12密码子,他们都是烟草致癌物的强结合位点。对吸烟 与p53、K ras基因突变关系的研究,在临床早期诊断及判断预后等方面均有应用价值。

佛波酯对人胃癌细胞Ha-ras基因启动子及启动子结合蛋白的影响

目的探讨佛波酯(PMA)对人胃癌细胞BGC-823 Ha-ras基因启动子活性及启动子结合蛋白活性的影响。方法通过RT-PCR和运用自行构建的真核表达载体prasEYFP转染细胞进行荧光细胞检测,并应用凝胶电泳移动检测S、outhwestern blotting等方法检测PMA(100μg/L)处理BGC-823细胞72和96 h后,对Ha-ras基因表达水平、Ha-ras基因启动子活性以及对Ha-ras启动子结合蛋白的影响。结果经PMA(100μg/L)处理72和96 h,与未处理细胞相比,BGC-823细胞中Ha-ras基因表达显著降低,Ha-ras基因启动子活性分别被抑制65.2%和71.8%;同时两个Ha-ras启动子结合蛋白活性也显著降低,经检测,其分子量分别约为18 kD,35 kD。结论PMA长期处理通过降低人胃癌细胞中Ha-ras启动子结合蛋白活性使Ha-ras启动子活性被抑制,从而在转录水平上调节Ha-ras基因表达。

卵巢癌中k-ras基因点突变及p53蛋白表达

目的 探讨k-ras基因点突变和p53蛋白表达在卵巢癌发生中的作用及致癌机制。方法 采用显微切割技术、半巢 式PCR RFLP技术和免疫组化染色检测55例卵巢癌及其交界性病变中的k-ras基因点突变和p53蛋白表达。结果 k ras基 因点突变率在黏液性腺癌(61.9%)明显高于浆液性腺癌(14.2%),在黏液性交界性腺瘤(61.5%)明显高于浆液性交界性腺 瘤(12.5%)。p53蛋白表达率在浆液性腺癌(80%)明显高于黏液性腺癌(52%),并随组织学分级而增高。结论 黏液性腺 癌主要通过腺瘤-交界性腺瘤-腺癌途径致癌,k-ras基因点突变是黏液性腺癌的早期事件,黏液性交界性腺瘤是黏液性腺癌 的癌前病变。浆液性腺癌主要通过生发上皮直接恶性转化形成,p53蛋白表达在浆液性腺癌的发生中起重要作用,是浆液性 腺癌的晚期事件。

肺癌K-ras基因突变与呼吸道合胞病毒感染关系的研究

目的 探讨肺癌K ras基因突变与呼吸道合胞病毒 (RSV)感染的关系。方法 应用反转录聚合酶链反应 (RT PCR)结合单链构象多态性分析 (SSCP)免疫组化和ELISA方法检测肺癌组织中RSV、K ras基因和血清sIgM抗体。结果 ①RT PCR显示17.9% ( 7/3 9)的肺癌标本中存在有RSV基因序列。②RSVRT PCR阳性的肺癌组织冰冻切片免疫组化显示RSV抗原在细胞浆呈弥漫性着色。③不经反转录反应直接作PCR扩增 ,则RSV阳性的标本不能观察到RSV特异的电泳区带。④SSCP电泳示 2 5 .6% ( 10 /3 9)的肺癌组织标本中K ras基因的第 12位密码子有突变。⑤肺癌组织RSV基因的检出与K ras基因突变结果经配对计数资料McNemar检验分析 ,χ2 =0 .3 6,P >0 .0 5。结论 肺癌组织内有RSV感染 ,可能和K ras基因的突变有关。

西妥昔单抗联合FOLFIRI双周方案在野生型K-Ras基因晚期结直肠癌患者中的Ⅱ期临床观察

目的探讨西妥昔单抗联合FOLFIRI双周方案治疗K-Ras基因野生型的晚期结直肠癌的疗效及安全性。方法收集2008年1月至2010年6月44例K-Ras基因野生型的晚期结直肠癌患者,采用西妥昔单抗联合FOLFIRI双周方案进行治疗。具体方案:西妥昔单抗500mg/m2静滴,2周1次;伊立替康180mg/m2静滴30～90min,d1;亚叶酸钙200mg/m2静滴2h,d1;氟尿嘧啶(5-FU)400mg/m2静推,d1;5-FU 2400mg/m2持续静滴46h。14天为1周期。每例患者至少接受4个周期化疗后评价疗效。不良反应按照NCI CTC 3.0标准评价。结果全组44例患者均可评价疗效,获CR 2例(4.6%),PR 22例(50.0%),SD 17例(38.6%),PD 3例(6.8%);有效率为54.6%,疾病控制率为93.2%。单因素分析显示,有效率与肿瘤原发部位有关,与性别、年龄、转移脏器个数、转移部位和ECOG评分无关,疾病控制率与临床病理特征均无关;Logistic多因素回归分析显示,原发部位是影响疗效的独立因素(P=0.0455)。44例患者的中位总生存时间(OS)为25.7个月(95%CI:20.5～34.6个月),中位无进展生存时间(PFS)为8.4个月(95%CI:6.3～11.7个月)。Cox多因素分析显示,ECOG评分为影响PFS的独立因素,而性别为影响OS的独立因素。毒副反应主要为皮疹、中性粒细胞减少和消化道反应,以1～2级为主。结论西妥昔单抗联合FOLFIRI双周方案治疗晚期结直肠癌疗效肯定,毒副反应可以耐受,值得临床推广。

突变k-ras基因重组腺病毒的构建

目的 利用细菌内同源重组法构建含 1 2密码子点突变的k ras基因重组腺病毒。方法 用限制性内切酶kpnⅠ +xhoⅠ从载体pcDNA3 k ras1 2 (Val)中切出 1 2密码子点突变的k ras基因片断 ,亚克隆至经同样酶切的腺病毒穿梭质粒pAdTrack CMV中 ,形成转移质粒pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val) ,将之PmeⅠ酶切线性化后与腺病毒基因重组质粒pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,抽提经鉴定含目的基因的重组体质粒 ,PacⅠ酶切后用脂质体转染 2 93细胞 ,包装成重组体腺病毒Ad k ras1 2 (Val)。采用PCR方法对重组体腺病毒进行鉴定 ,利用穿梭质粒pAdTrack CMV中带有GFP报告基因 ,对病毒滴度和感染效率进行监测。结果 利用CaCl2 法由pAdTrack CMV/k ras 1 2 (Val)和pAdEasy 1共转化大肠杆菌BJ51 83 ,可获得 2 5%左右的阳性重组体细菌克隆。PCR检测表明重组腺病毒已含有目的基因 ,滴度为 1 .2× 1 0 1 2 pfu/ml。结论 细菌内同源重组法构建腺病毒相比于传统的细胞内同源重组法 ,具有成功率高、方法简便、快捷、实验周期短的优点 。

非小细胞肺癌患者K-RAS基因突变的研究

背景与目的最近研究显示存在K-RAS基因突变的非小细胞肺癌患者难以从辅助化疗中获益,并且对表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)酪氨酸激酶抑制剂(tyrosine kinase Inhibitors,TKIs)耐药。这些发现提示K-RAS基因突变情况可作为EGFR TKIs疗效的预测指标。本研究中分析了中山大学肿瘤防治中心非小细胞肺癌患者肺癌组织中K-RAS基因突变情况。方法收集52例非小细胞肺癌患者的新鲜组织标本,采用PCR技术扩增K-RAS基因,然后进行DNA测序并进行相应分析。结果在52例患者中,2例患者肿瘤组织中的K-RAS基因的12号密码子存在突变(2/52,3.8%)。统计学分析未发现K-RAS基因突变与性别、病理类型、吸烟情况以及肿瘤分化程度和分期间存在相互关系。结论非小细胞肺癌患者K-RAS基因突变率较低,与亚裔患者相近,而低于白种人患者。

3-氯-4-二氯甲基-5-羟基-2(5氢)-呋喃酮对L-02细胞DNA损伤与ras基因表达的影响

目的 研究饮水氯化消毒副产物 3 氯 4 二氯甲基 5 羟基 2 (5氢 ) 呋喃酮 (MX)对人胚肝细胞 (L 0 2 )DNA损伤与ras基因表达的诱导 ,初步探讨MX致癌的分子机制。方法 以L 0 2细胞作为靶细胞 ,应用彗星试验 (SCGE)和原位杂交试验 (ISH)研究MX诱导L 0 2细胞DNA损伤与ras基因表达。MX设 10、3 0、10 0和 3 0 0 μmol L 4个剂量 ,二甲基亚砜 (DMSO ,10mL L)为溶剂对照 ,H2 O2 (3 0 0 μmol L)和B(a)P(2 0 0 μmol L)分别为SCGE和ISH的阳性对照。 结果 与溶剂对照相比 ,3 0、10 0和 3 0 0 μmol L的MX能明显增加L 0 2细胞的DNA迁移度 (P <0 0 5 ,P <0 0 1,P <0 0 0 1) ;同时也明显增加ras基因表达水平 (P <0 0 0 1,P <0 0 0 1,P <0 0 1)。MX在 10～ 10 0 μmol L的浓度范围内 ,诱导的ras基因表达水平和DNA迁移度呈正相关 (r =0 79)。结论 饮水氯化消毒副产物MX可诱导L 0 2细胞DNA损伤与ras基因表达 ,ras基因表达水平可能与DNA损伤程度有关。

EGF对肝癌细胞及正常肝细胞内ras基因表达的影响

目的：揭示正常肝细胞和肝癌细胞对表皮生长因子（ｅｐｉｄｅｒｍａｌ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒ， ＥＧＦ）不同的应答能力，以及ＥＧＦ对两种不同细胞株内ｒａｓ基因表达的影响。方法：运用Ｗｅｓｔｅｒｎ免疫印迹技术对正常肝细胞株Ｌ－０２和肝癌细胞株Ｈｅｐ－Ｇ２中ｐ２１^(ｒａｓ)的表达进行比较分析。结果：在两种细胞株Ｌ-０２和Ｈｅｐ－Ｇ２中部检测到ｐ２１^(ｒａｓ)的表达。Ｈｅｐ－Ｇ２细胞的ｐ２１^(ｒａｓ)表达量在ＥＧＦ刺激前明显高于Ｌ－０２细胞，经ＥＧＦ刺激２周后，ｐ２１^（ｒａｓ）的表达量持续攀升，表达曲线陡峭。而Ｌ－０２在ＥＧＦ刺激下上升得比较缓慢，到第４周以后基本维持恒定的表达量。结论：正常肝细胞和肝癌细胞内ｒａｓ基因的表达都受ＥＣＦ的影响，但二者对ＥＧＦ的应答能力明显不同。肝癌细胞内ｒａｓ基因的高表达可能与细胞内缺乏有效的反馈机制有关，而ｒａｓ基因的表达持续升高可能是导致细胞增殖失控的一个重要原因。

PCR-SSP法和基因测序检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因第12位密码子点突变及其方式

目的检测人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因点突变及其突变方式,明确基因治疗靶点的碱基序列。方法针对K-ras基因第12位密码子点突变方式(CGT、GTT、GAT)设计顺序特异性引物(SSP),对人胰腺癌细胞株Patu 8988进行聚合酶链反应(PCR),扩增产物经12%非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳后判断该细胞株有无K-ras基因点突变及其突变方式。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因,扩增产物直接进行基因序列测定。结果PCR-SSP法检测人胰腺癌细胞株Patu 8988存在K-ras基因点突变,突变方式为GGT→GTT,其结果与基因序列测定完全相符。结论明确了人胰腺癌细胞株Patu 8988 K-ras基因第12位密码子点突变方式(GGT→GTT),为胰腺癌的下一步基因治疗研究打下了坚实的基础;PCR-SSP方法检测K-ras基因点突变简便、快速、经济且特异性高,有望在临床上成为早期诊断和鉴别诊断胰腺癌的实用检测方法。

ras基因突变与人类肿瘤

自八十年代发现ras基因以来,科学家们对ras基因激活在肿瘤发生发展中的作用作了深入的研究。目前已在多种人类肿瘤中发现ras基因的激活,激活的主要方式是点寒变。ras基因突变在肿瘤发生的分子机制中起到了十分重要的作用,所以ras基因突变的研究已成为目前研究的焦点之一。

连黛片对大鼠溃疡性胃癌ras基因点突变的影响

用醋酸注射法造成大鼠胃溃疡模型 ,再以MNNG灌胃诱发胃癌 ,观察连黛片对胃癌形成及对ras基因点突变的影响 ,结果表明 ,连黛片可减少MNNG对ras的甲基化 ,抑制ras点突变及过表达 ,降低溃疡性胃癌的发生率。

Ras基因家族在二羟环氧苯并(a)芘恶性转化细胞中的表达研究

目的检测环境致癌物苯并(a)芘代谢物二羟环氧苯并芘(BPDE)对人支气管上皮细胞Ras基因家族表达的影响。方法以正常人支气管上皮细胞为对照组,经BPDE恶性转化人支气管上皮细胞为实验组,分别利用RT-PCR、Western blot和免疫细胞化学方法,检测Ras基因家族在mRNA和蛋白水平表达变化。结果RT-PCR实验表明,BPDE恶性转化细胞H-Ras、K-Ras和N-Ras mRNA表达水平分别是正常细胞的2.237、1.254和3.616;Western blot实验显示,H-Ras、K-Ras和N-Ras蛋白表达量分别是正常细胞的1.273倍、1.547和1.600倍;免疫细胞化学实验表明,恶性转化细胞H、K和N-Ras蛋白表达明显强于正常细胞。结论BPDE诱发人支气管上皮细胞恶性转化存在H-Ras、K-Ras和N-Ras基因过表达。

ras基因在肿瘤发生、发展及诊断中的作用研究进展

ras基因家族包含3种功能性基因，即H-ras、N-ras、K-ras，3种基因内部的核甘酸序列相差较大，但均含有1个5′非编码外显子和4个编码外显子，编码的产物相对分子质量为21000的G蛋白单体，称为p21蛋白（ ras蛋白）。 ras蛋白主要调节细胞的分化增殖，被称为细胞信号网络传递中的“分子开关”。 ras基因是原癌基因，其被激活后就成为了具有致癌活性的癌基因。其激活方式主要有3种，即基因的点突变、基因大量表达以及基因的插入及转位。其中最常见的就是点突变，约30％的人类恶性肿瘤存在ras基因的点突变。最常见是K-ras 的点突变，其次是N-ras、H-ras；常见的突变位点是12、13、61密码子，其中又以第12位密码子突变最常见。在不同类型肿瘤中存在不同的ras 基因突变。胰腺癌、结直肠癌、子宫内膜癌、胆管癌和肺癌中普遍存在K-ras基因突变，黑色素瘤和髓系恶性肿瘤常为N-ras基因突变所致，而肝癌、甲状腺癌和膀胱癌常见H-ras基因突变。现将ras基因在肿瘤发生、发展及诊断中的作用研究进展综述如下。

小分子干扰RNA特异性抑制人胰腺癌细胞株PANC-1突变型K-ras基因表达的探讨

目的:研究小分子干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)对人胰腺癌细胞株PANC-1中突变型K-ras基因表达的抑制作用。方法:构建真核表达载体pSilencer3.1-K-rasv12,转染PANC-1细胞后应用RT-PCR及Westernblot检测突变型K-ras基因mRNA及蛋白质表达变化;噻唑蓝(MTT)测定细胞生长曲线;流式细胞仪测定细胞凋亡率。结果:测序证实siRNA真核表达载体构建成功。RT-PCR光密度比值结果空载体组、阴性对照组、实验组分别为:95.3%±2.5%、97.6%±2.8%、40.1%±3.1%,差异有统计学意义(P<0.05);Westernblot灰度比值结果空载体组、阴性对照组、实验组分别为:96.1%±2.2%、98.5%±2.0%、36.5%±3.2%,差异有统计学意义(P<0.05);实验组细胞生长受到明显抑制,凋亡率较对照组明显升高(P<0.05)。结论:pSilencer3.1-K-rasv12能有效抑制突变型K-ras基因在人胰腺癌细胞株PANC-1中的表达,抑制细胞生长,诱导细胞凋亡,为肿瘤的生物学治疗提供了新的方法。

EGFR和KRAS基因在结直肠癌中的研究进展

结直肠癌（colorectal cancer,CRC）是最常见的消化道肿瘤之一,也是全球第3位常见的恶性肿瘤,每年大约有100万新发病例,其中25%的患者会发生明显转移,而转移性CRC患者的5年生存率不到10%。随着人民生活水平的不断提高,人们生活方式、饮食习惯和饮食结构的改变以及人口老龄化日益加剧,全球CRC的发病率明显上升。

Ras基因及其信号转导通路与皮肤肿瘤关系

Ras基因是人类肿瘤中一种常见的癌基因,约有30%的恶性肿瘤存在Ras基因的点突变。皮肤肿瘤是一种常见的肿瘤,Ras基因及其信号转导通路的异常与皮肤肿瘤的发生、发展密切相关。文中就Ras基因及其信号转导通路与皮肤肿瘤关系作一综述。

氯化饮水有机提取物诱导人胚肝细胞(L-02)DNA损伤与RAS基因表达的研究

目的 研究武汉市主要水源D湖氯化饮水有机提取物对人胚肝细胞 (L 0 2 )DNA损伤与RAS基因表达的诱导 ,探讨氯化饮水有机提取物诱导遗传损伤的分子机制。方法 以L 0 2细胞作为靶细胞 ,应用单细胞凝胶电泳试验 (SCGE)测定DNA链断裂及用原位杂交试验 (ISH)测定RAS基因表达。氯化饮水有机提取物设 0 16 7、1 6 7、16 7、16 7水样ml ml培养液 4个剂量 ,DMSO(10ml L)为溶剂对照 ,B(a)P(2 0 0 μmol L)为阳性对照。结果 与溶剂对照相比 ,氯化饮水有机提取物在较高剂量组 (16 7和 16 7L L水样培养液 )能引起DNA链断裂程度的明显增加 ;不同浓度的氯化饮水有机提取物均可使RAS基因表达水平明显增加。氯化饮水有机提取物在 0 16 7、1 6 7、16 7L L水样培养液的浓度范围内 ,其RAS基因表达水平和DNA迁移度呈高度正相关 (r=0 99)。结论 氯化饮水有机提取物可诱导L 0 2细胞DNA损伤与RAS基因表达 。

nm23-H_1及ras基因在人乳腺癌组织中的表达及其与淋巴转移的关系

目的 探讨乳腺癌组织中 nm2 3- H1及 ras基因的表达及其与淋巴结转移的关系。方法应用免疫组化方法检测 76例乳腺组织中 nm2 3- H1及 ras基因的表达情况 ,随访患者 5年生存率。结果 nm2 3- H1表达与乳腺癌组织分化及淋巴结转移负相关 ( P<0 .0 2 5 ,P<0 .0 5 ) ,nm2 3- H1及rasp2 1表达负相关 ( P<0 .0 5 ) ,nm2 3- H1阳性者较 rasp2 1阳性者五年生存率高 ( P<0 .0 1 )。结论 nm2 3- H1及 rasp2 1是评估乳腺肿瘤患者预后的良好指标 。