RBM20和MURC双基因杂合变异对心肌细胞结构和生物学特性的影响

目的探讨RNA结合基元蛋白20(RBM20)和肌肉相关卷曲螺旋蛋白(MURC)双基因杂合变异对人心肌细胞AC16(成人左心室心肌细胞系)结构和生物学特性的影响。方法构建对照组、空载组、野生组、MURC或RBM20单基因突变组、RBM20和MURC双基因突变组的心肌细胞AC16;采用Western blotting、免疫荧光染色和实时荧光定量PCR观察心肌细胞中RBM20和MURC定位、细胞表面积、骨架排列、骨架相关蛋白、细胞极性、细胞内钙浓度;采用流式细胞术检测心肌细胞凋亡;采用Ki-67染色检测心肌细胞增殖;采用划痕实验检测心肌细胞迁移。结果与RBM20或MURC单基因突变相比,RBM20和MURC双基因突变对心肌细胞结构和生物学特性影响更显著,表现为细胞表面积增大,细胞肥大相关基因肌球蛋白重链7和α肌动蛋白基因m RNA表达升高,骨架排列紊乱度升高,骨架蛋白β-tubulin和Vinculin荧光强度降低(均P<0.01);极性蛋白Part6荧光强度升高(P<0.05);心肌细胞凋亡率升高,增殖活性下降,迁移率增高,细胞内钙离子浓度升高(均P<0.01)。结论RBM20和MURC双基因杂合变异使心肌细胞结构及生物学特性发生改变,表现为细胞表面积增大,骨架排列紊乱,极性改变,凋亡率和迁移率升高,增殖活性和钙处理能力降低。

RNA结合基序蛋白20在心肌病中作用的研究进展

心肌病是异质性的心肌病变,表现为心肌结构和功能的异常,心肌病最终会导致心力衰竭甚至死亡。RNA结合基序蛋白20(RBM 20)在心肌中高度表达,是富含丝氨酸/精氨酸蛋白家族的一种,对RNA剪接体的组装和选择性剪接的调控过程起着重要作用,参与心肌病的发生、发展。RBM 20调控Titin、RyR 2、LDB 3、CaMKIIδ、CACNA1C等多种基因的选择性剪接,这些基因与心脏舒张功能、肌节组装、离子转运密切相关。该文将对RBM 20在心肌病中的作用和RBM 20调控机制进行综述,为心肌病的防治提供相应的理论参考。

RNA结合基元蛋白24通过调控HOTAIR表达抑制鼻咽癌细胞增殖

目的:探讨RNA结合基元蛋白24(RBM24)抑制鼻咽癌细胞增殖的可能机制。方法:分别在永生化鼻咽上皮细胞N5、NP69和鼻咽癌细胞CNE1中转染RBM24 siRNA构建敲低RBM24表达的细胞模型。建模后分别于1~5 d用CCK-8法检测细胞增殖活性,用实时荧光PCR法检测细胞HOX转录反义RNA(HOTAIR)的表达水平。结果:实时荧光PCR法检测结果表明敲低RBM24表达的细胞模型构建成功。第4天时RBM24敲低组的CNE1、N5细胞增殖率(分别为5.11±0.03和2.09±0.18)与相应的对照组细胞(分别为4.53±0.05和1.73±0.12)相比均升高(P均<0.05),且CNE1、N5细胞的HOTAIR m RNA表达水平(分别为67.54±1.87和7.81±1.90)较相应的对照组(1.00±0.21和1.00±0.19)亦升高,差异均有统计学意义(P均<0.05),而NP69细胞的增殖率和HOTAIR mRNA表达水平变化不明显(P均>0.05)。结论:RBM24可抑制鼻咽癌CNE1细胞和永生化鼻咽上皮N5细胞的增殖,其机制可能是通过抑制HOTAIR表达起作用。

SP-B基因内含子4区(CA)_n模体上SRp20蛋白结合位点的初步研究

目的探讨SP-B基因内含子4区第8号(CA)_n模体上可能存在的剪切蛋白结合位点,为进一步研究第8号(CA)_n模体影响SP-B mRNA剪切的机制提供实验基础。方法软件分析特定(CA)_n模体的潜在RNA结合蛋白,并合成含有特定蛋白潜在结合位点的模体RNA序列的探针及突变序列探针,用凝胶阻滞迁移(EMSA)技术研究相关(CA)_n模体的RNA序列与其潜在结合蛋白的相互作用。结果软件分析预测第8号(CA)_n模体上可能存在特定剪切蛋白SRp20的结合位点;EMSA实验中当抗体或突变探针竞争时特异性结合带(迁移带)均消失,显示第8号(CA)_n模体RNA序列上的"CAUC"能够与SRp20特异性结合。结论SP-B内含子4区第8号(CA)_n模体的保守序列上存在SRp20的特异性结合位点,从而可能影响SP-B mRNA剪切。

ZNF638/NP220同源蛋白及其生物学作用的研究进展

一些具有锌指结构域的蛋白质可以识别特定的靶RNA分子并与之结合,在细胞中参与或介导重要的生物学作用,这一发现拓展了人们对锌指蛋白专职转录调控并且高度依赖于特异结合靶DNA序列的认知。ZNF638/NP220及其同源蛋白Matrin3和RBM20是一类在生物进化中相当保守的特殊锌指蛋白,定位于细胞核基质的核斑中,含有特殊的蛋白结构域,可以特定靶向RNA分子,在细胞的转录调控和RNA加工的不同阶段发挥作用,特别是RNA转录和剪接事件的偶联以及改变RNA分子的成熟和稳定性等方面。本文将对近年来有关ZNF638同源蛋白成员的发现、结构、分子机制及其在细胞分化、胚胎发育、病毒的感染等生命过程中调控作用的研究进展进行总结讨论。

RNA结合基序蛋白20相关心肌病的研究进展

扩张型心肌病(DCM)是临床常见的原发性心肌病之一,是造成心脏性猝死的重要原因,至今已报道51个相关致病基因。不同基因导致的DCM亚型具有特异性临床特征与遗传异质性。其中RNA结合基序蛋白20(RNA-binding motif protein 20,RBM20)编码心肌特异性mRNA剪接调节因子,是DCM明确致病基因之一。RBM20基因相关DCM具有遗传外显率高、发病年龄早、心脏猝死率高等严重临床表现。其独特的致病分子机制也显示出其作为心力衰竭潜在治疗靶点的可能性。本文将对RBM20相关DCM的发病机理、分子遗传学、临床特征与治疗进行进展性综述,对于DCM亚型的研究强调了基因检测在心血管精准医疗中的重要性。

扩张型心肌病与肌联蛋白靶基因突变的研究

扩张型心肌病(Dilated Cardiomyopathy, DCM)是一种严重危害人们身体健康和生活质量的疾病,其发病隐匿,进展缓慢,初期临床症状不明显,早期诊断较为困难!患者一旦出现明显的临床症状,病情往往已进入不可逆阶段。因此,寻找出一种有效的早期诊断方法,以及尽早建立起一级预防机制显得极其重要!通过研究和探讨与扩张型心肌病相关的肌联蛋白(titin)及RNA结合蛋白20 (RBM20),探讨其突变序列位点,早期干预,能够为扩张型心肌病患者的早期诊断提供重要的依据,具有广阔的应用前景。

miR-21通过抑制A20促进小鼠RAW264.7细胞NF-κB和NLRP3的表达

目的探讨调控微小RNA21(miR-21)表达对脂多糖(LPS)刺激下RAW264.7细胞中核因子κB(NF-κB)及含pyrin结构域核苷酸结合寡聚结构域样受体家族蛋白3(NLRP3)表达的影响及机制。方法RAW264.7细胞给予100 ng/mL LPS刺激24 h后,采用实时荧光定量PCR检测miR-21表达水平;转染miR-21抑制物或模拟物调节RAW264.7细胞miR-21的表达水平,并给予LPS刺激,实时定量PCR检测其对白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-1β的mRNA表达的影响,Western blot法检测对NF-κB、NLRP3蛋白及NF-κB抑制分子锌指蛋白A20表达的影响。结果LPS刺激RAW264.7细胞后,miR-21表达明显升高。上调miR-21表达后,IL-6、TNF-α、IL-1β、NF-κB、NLRP3表达均上升,下调miR-21表达后,IL-6、TNF-α、IL-1β、NF-κB、NLRP3表达均下调。miR-21靶向抑制A20表达。结论miR-21促进RAW264.7细胞NF-κB、NLRP3表达,其机制可能与靶向抑制A20有关。

突变基因在扩张型心肌病中作用的研究进展

扩张型心肌病(DCM)的病死率极高,发病后病情以不可逆方向快速进展。目前DCM仍没有远期缓解的治疗方案,但基因治疗逐渐成为未来DCM治疗的主要手段。因此,明确DCM致病相关突变基因的分子生物学机制成为DCM研究的重点。本文针对DCM致病相关基因突变的研究进展进行综述。