用RT-PCR方法检测猪瘟细胞苗中污染牛病毒性腹泻病毒

参考GenBank中牛病毒性腹泻病毒（BVDV）和猪瘟兔化弱毒病毒（HCLV）序列，设计和建立了一种PCR检测方法，通过试验证明，所建方法能够对HCLV和BVDV进行鉴别诊断；用此方法对23个批次的猪瘟细胞苗进行检测，发现有5批疫苗污染BVDV，均为BVDVI型，污染率为21．74％。测定序列与BVDVOregonC24V株（AF091605）的核苷酸相似性为83．2％～83．5％，与NADL株（M31182）的核苷酸相似性为86．4％～86．7％。

李矮缩病毒RT-PCR方法建立及检测应用

以感病和健康指示植物GF305的总RNA为模板,进行cDNA的合成和PCR扩增,结果从感病材料中扩增出与预期的172bp大小一致的目的片段,而健康的材料无此扩增产物。对此PCR扩增产物克隆测序,进一步佐证了RT-PCR检测结果。经过多次试验验证该检测体系,都可得到很好的重演性,从而建立了李矮缩病毒快速、灵敏、准确的RT-PCR检测技术,并进行了实际应用。

猪轮状病毒TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法的建立

根据GenBank中登录的猪轮状病毒(PoRV)VP6基因序列特征,设计特异性的引物和探针,条件优化后,建立检测PoRV TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法.结果表明:建立的Taq Man实时荧光定量RT-PCR方法敏感性高,最低可检测192拷贝·μL^(-1);特异性强,对猪常见病原(如猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒、猪瘟病毒和猪流行性乙型脑炎病毒等)检测均为阴性;重复性好,扩增相关系数为0.999,其组内和组间变异系数分别为0.25%~1.26%和0.31%~1.49%.对临床收集的79份猪腹泻病料进行常规RT-PCR检测,检测出阳性样品4份,阳性率为5.06%(4/79);对这79份病料进行TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测,检测出阳性样品6份,阳性率为7.59%(6/79);同时,4份经RT-PCR检测为阳性的样品经TaqMan实时荧光定量RT-PCR方法检测均为阳性,符合率达100%.本研究建立的方法为PoRV早期感染诊断提供检测手段.

猪流感病毒H1、H3、N1、N2亚型分型RT-PCR方法的建立

根据GenBank中H1N1和H3N2亚型猪流感病毒(SIV)血凝素(hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(neuraminidase,NA)和M基因保守序列,分别设计合成了5对特异性引物,利用RT-PCR技术对SIV的型和亚型进行鉴定。结果表明,该方法的型RT-PCR可以检测出104 EID50病毒量所提取的RNA;H1、H3、N1和N2的亚型RT-PCR均可以检测出104 EID50病毒量所提取的RNA。除每对特异性引物所对应的亚型外,对其他亚型及猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CS-FV)的检测均为阴性,应用该方法对临床样品进行检测,其结果与病毒分离结果符合率为100%。结果表明,该方法特异性好、敏感性高,有望成为SIV的一种特异、敏感、快速的分型检测方法,为猪流感分子流行病学的调查奠定了良好的基础。

应用RT-PCR方法快速检测水泡性口炎病毒

针对水泡性口炎病毒 (VSV)的两种血清型设计了2对引物 ,建立RT-PCR方法 ,用于检测VSV。VSV接种细胞出现明显的细胞病变 ,经RT-PCR检测为阳性 ,而检测口蹄疫、猪水泡病均为阴性 ,说明引物具有较好的特异性。

HE、IHC和RT-PCR方法检测乳腺癌腋窝淋巴结转移的对照研究

目的 探讨检测乳腺癌腋窝淋巴结转移较敏感的方法。方法 应用常规HE染色法、细胞角蛋白19(CK19)作为单抗的免疫组化(IHC)SP染色及CK19 mRNA的逆转录聚合酶链反应(RT PCR)3 种方法检测20 例乳腺癌患者共239 个腋窝淋巴结的转移情况。结果 239 个腋窝淋巴结中,HE染色发现3 例患者7 个(2.9%,7/239)有癌转移,均位于level Ⅰ; IHC检测到7例患者13个(5.4%,13/239)有癌转移,其中11个位于level Ⅰ,2个位于level Ⅱ; RT PCR检测到14例患者52 个(21.8%,52/239)有癌转移,其中30 个位于level Ⅰ,22 个位于level Ⅱ。IHC和RT PCR检测证实,HE染色阳性的7 个淋巴结均有癌转移; IHC染色阳性的淋巴结均出现了PCR阳性扩增产物。HE、IHC及RT PCR 3 种检测方法对腋窝淋巴结微转移的检出率分别是0(0/232)、2.6%(6/232)及19.4%(45/232),P<0.05。结论 IHC及RT PCR是较HE检测淋巴结微转移更敏感的方法,而RT PCR较IHC更为敏感,能更准确地反映乳腺癌患者腋窝淋巴结的状况。

应用RT-PCR方法研究FSK88处理的UMR106细胞TGF-β_1的基因表达

FSK88是本实验宣从植物中提取纯化的二萜类活性物质,是一种诱导分化剂。以大鼠成骨肉瘤细胞(UMR106)为模型,分别用FSK88、RA、FR处理UMR106细胞,研究了FSK88处理的UMR106细胞TGF-β1的基因表达,结果与对照组相比,FSK88组TGF-β1的基因表达上调了23.18％。

RT-PCR方法检测胃癌微转移的研究进展

常规病理学方法难以很好地检测胃癌患者的区域淋巴结、外周血、骨髓及腹腔的微转移灶。近年来 ,应用逆转录聚合酶链反应技术 ,大大提高了微转移检测的敏感性和特异性 ,微转移病灶的诊断为肿瘤分期、预测预后。

单卵RT-PCR方法的优化和对牛卵母细胞中发育相关基因的表达研究

到目前为止 ,虽然许多动物如羊、牛、猪、鼠、兔、马、骡等均已克隆成功 ,但克隆技术普遍存在着克隆效率低、流产率高、畸胎、巨胎和死亡率高等问题 .为了较全面地探索其基因方面的原因 ,需要对大量的候选基因进行分析 .而利用传统的RT PCR方法从单个卵母细胞或胚胎中获得的RNA量不足以分析大量的基因 .为了解决这一问题 ,利用并优化了一套全新的扩增细胞中整体cDNA的方法 ,使微量材料进行大量的基因表达分析成为现实 .通过该方法研究了与发育相关的重要基因IL6、IFτ、CX4 3、PSMC3、oct4和DNMT1在牛卵母细胞中的表达 .IL6、IFτ和CX4 3的表达与前人报告的结果相同 ,而DNMT1和PSMC3在牛卵母细胞中表达情况此前未见报道 .

用RT-PCR方法检测颞叶癫癎患者脑内KCNJ4基因的表达

目的 观察颞叶癫患者和脑外伤对照患者编码内向整流钾通道蛋白的KCNJ4基因表达差异 ,探讨难治性颞叶癫可能的发病机制。方法 12例难治性颞叶癫患者手术切除的颞叶组织 ,10例急性脑外伤患者相应部位颞叶组织 ,用RT PCR方法检测KCNJ4基因表达。结果 颞叶癫患者与脑外伤对照患者相比 ,颞叶组织KCNJ4mRNA表达水平降低 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论 KCNJ4mRNA表达水平的下降 。

毛细管电泳RT-PCR方法在中国明对虾抗菌肽基因表达定量检测中的应用

建立了毛细管电泳RT-PCR检测基因表达谱的方法,并利用实时定量PCR技术对此方法进行基因表达定量的可靠性进行了验证.利用此新方法研究了弧菌和白斑综合征病毒(WSSV)感染对中国明对虾抗菌肽(penaeidin)基因mRNA表达的影响.结果表明,弧菌感染后对虾肽基因表达变化可分为三个阶段:迅速下调,缓慢回升,持续稳定.WSSV感染后对虾肽基因表达的变化显示出与弧菌感染组不同的变化趋势:迅速下调,迅速回升,再次下降.

RT-PCR方法检测儿童细菌感染

姚开虎副研究员非常高兴邀清到意大利佛罗伦萨大学附属Anna Meyer儿童医院Chiara Azzari教授来北京儿童医院做学术访问，在您的“侵袋性细菌感染的分子学诊断：一个有川的临床一具”的报告中谈到采用分子诊断方法评估意大利肺炎链球菌疾病负担的工作，这些经验对中国开展相关工作具有很好的借鉴意义。

检测绵羊源爱知病毒D型荧光RT-PCR方法的建立和应用

绵羊源爱知病毒D型(ovine Aichivirus D)是在国内绵羊中新发现的病毒,本研究根据绵羊源Aichivirus D 3D基因序列设计检测引物,通过反应体系和条件优化,成功建立了检测绵羊源Aichivirus D的TB Green染料法荧光RT-PCR方法,该方法特异性和稳定性良好,灵敏度高。对2020年4月―2021年5月采集自四川6个场253份绵羊粪便样本(健康羊的133份,腹泻羊的120份)进行检测,结果该病毒的平均检出率为8.7%,场阳性率为66.7%。其中,腹泻粪便样本中绵羊源Aichivirus D阳性率(17.5%)显著高于非腹泻粪便样本中绵羊源Aichivirus D阳性率(0.75%,P<0.001)。表明绵羊源Aichivirus D可能是引起以上地区绵羊腹泻的病原。从绵羊源Aichivirus D的阳性样本中成功克隆出大小为1422 bp的13个完整的绵羊源Aichivirus D 3D基因,其核苷酸相似性为99.4%~100.0%。遗传演化分析发现这13株绵羊源Aichivirus D 3D基因与本实验室前期研究上传的绵羊源Aichivirus D 3D基因共同聚为单独的一个大支。本研究为绵羊源Aichivirus D的分子检测提供了一种新的方法和基础流行病学数据。

人类流感病毒的多重RT-PCR方法分析

目的对人类流感病毒的多重RT-PCR方法的应用进行分析探讨。方法对40份疑似swineH1N1的临床标本采用多重RT-PCR方法进行检测,将检测结果进行统计分析,同时对该方法的特异性以及敏感性进行了评价。结果多重RT-PCR方法能够同时分析A型流感病毒M基因203bp、B型流感病毒M基因296bp。特异性实验表明多重RT-PCR法没有检测出存在非特异扩增的PCR产物,并且该方法在40份标本中检测出新甲型H1N1阳性标本4份(10.0%),季节性H1N1亚型2份(5.0%),H3N2亚型12份(30.0%)。结论多重RT-PCR方法具有快速、敏感性强、特异性强等优势,值得推广。

RT-PCR方法在诊断儿童ARI上优于传统病毒培养方法

病毒引起的急性呼吸道感染(ARI)作为儿科常见病多发病,其病原分离检定多采用组织培养法。纽约Rochester大学医学院Geoffrey A等经过实验研究和比较发现,用逆转录-聚合酶链式反应法(RT-PCR)可以使病毒检出率增加1倍。

中小型猪场可用RT-PCR方法检测猪瘟病毒

事实表明猪瘟（CSF）仍然是当前规模化养猪场需要重要防范的传染病。鉴于目前猪瘟的流行现状，对猪瘟进行净化的猪场仍然需要使用猪瘟疫苗．而疫苗使用的效果需要检测抗原和抗体水平。然而现有抗体检测方法无法区分免疫抗体和野毒抗体，在诊断上存在较大的误区。因而抗原检测最具有说服力。