RUNX1基因突变对成人急性髓细胞白血病的预后有不良影响

目的了解Runt相关的转录因子1(RUNX1)在急性髓系白血病(AML)中的突变率及分布情况;探索RUNX1基因突变与临床特征的相关性及其对患者预后的影响。方法收集158例初发AML患者的骨髓标本,提取骨髓基因组DNA,采用聚合酶链式反应技术(PCR)扩增目的基因片段,应用基因测序分析RUNX1基因突变情况。同时检测ASXL1、DNMT3A、TET2、FLT3、CEBPA、NPM1、IDH2、NRAS及c-KIT突变情况,分析其突变与RUNX1突变的关系。用Kaplan-Meier方法进行生存分析,并行Log-rank检验比较生存时间差异。结果158例初发急性髓系白血病患者中,共发现RUNX1突变19例,突变率为12.0%,其中A166G 9例,A142T 6例,A162L 4例。RUNX1基因突变组与野生型组的年龄差异有统计学意义(P<0.01),突变组患者年龄偏大,在M4和M5型中的发生率较高,较野生型组更易表达CD36、CD7。RUNX1突变发生于正常核型或预后中等风险核型的患者中,但差异均无统计学意义(P>0.05)。突变组的完全缓解率和生存率均低于野生型组(P<0.05),而两组在性别、初诊时白细胞计数、血红蛋白、血小板计数、骨髓原始细胞比例以及乳酸脱氢酶水平的差异无统计学意义(P>0.05)。结论RUNX1基因突变对AML患者的预后具有不良影响。

伴RUNX1基因突变急性髓系白血病患者临床特征的分析

目的:探讨急性髓系白血病(AML)患者中RUNX1基因及其伴随基因突变的发生率,并分析其临床特征及预后。方法:采用基因组DNA-PCR方法扩增RUNX1基因外显子,应用基因测序分析其基因突变,同时检测NPM1、DNMT3A、FLT3-ITD、IDH1/2、K/N-RAS、CEPBA、TET2、WT1伴随突变的情况,随访患者并判定疗效和预后。结果:171例AML患者中,17例检测存在RUNX1基因突变,突变率为9.9%。RUNX1基因突变类型为错义突变9例,框移突变4例,无义突变4例,突变组患者初诊时外周血白细胞数[3(1-101)×10^(9)/L]明显少于未突变组[26(1-298)×10^(9)/L](P=0.002),而突变组的血小板数为79(22-166)×10^(9)/L,明显高于未突变组[50(8-351)×10^(9)/L](P=0.010),突变组患者骨髓原始细胞比例37(0-72)%低于未突变组的53(0-98)%(P=0.020)。M0型患者RUNX1突变率55.6%,M4型患者13.6%,显著高于其他FAB亚型(P=0.003)。两组的年龄、性别、血红蛋白浓度、外周血单核细胞绝对值无明显统计学差异(P>0.05)。细胞遗传学预后中、高危组患者突变率分别为88.1%和89.7%,显著高于低危组,差异有显著统计学意义(P=0.018)。RUNX1与具体核型异常包括Trisomy 8、Del(7q)、t(8;21)、Inv(16)均无显著相关(P>0.05)。RUNX1基因突变与IDH1/2、N/K-RAS基因突变有显著相关性(P<0.01);RUNX1突变组化疗完全缓解率为37.5%,明显低于未突变组的79.4%(P=0.001);RUNX1基因突变组总生存率低于未突变组(P<0.05)。结论:伴RUNX1基因突变的AML患者具有独特的临床及生物学特点,RUNX1基因突变可以作为AML患者预后不良的分子学标志。

免疫性血小板减少症转化为RUNX1基因阴性的儿童急性巨核细胞白血病临床分析

目的分析免疫性血小板减少症转化为RUNX1基因阴性的儿童急性巨核细胞白血病患者资料,复习此类罕见病的文献资料,探讨该病的临床特征。方法选择安徽省儿童医院血液科2018年1~12月收治的2例急性巨核细胞白血病患儿为研究对象,回顾性分析患儿的临床资料及实验室检查结果。结果2例患儿既往经骨髓细胞学等检查诊断为免疫性血小板减少症(ITP),曾对激素、丙球显效或部分显效,其后因出血症状就诊,经骨髓MICM分型等检查,确诊为RUNX1基因阴性的急性巨核细胞白血病。结论反复血小板减少幼儿患者,应密切随访骨髓细胞学检查,并及时进行相关基因检测。

微小RNA-15a-5p通过RUNX1增强胶质瘤细胞对替莫唑胺的敏感性机制研究

目的探讨微小RNA-15a-5p(miR-15a-5p)影响胶质瘤细胞增殖、侵袭、迁移及胶质瘤细胞对替莫唑胺(TMZ)敏感性的机制。方法选取胶质瘤细胞H4、SHG-44、正常星形胶质细胞HA1800及TMZ耐药H4细胞,将miR-NC、miR-15a-5p mimics质粒分别转染至H4细胞,记为miR-NC组、miR-15a-5p组;将Vector、OE-RUNX1质粒分别转染至miR-15a-5p组细胞,并分别用400μmoL/L TMZ处理,分别记为miR-15a-5p+Vector组、miR-15a-5p+RUNX1组、TMZ+Vector组及TMZ+RUNX1组。miR-NC组、miR-15a-5p组细胞用400μmoL/L TMZ处理,记为TMZ+miR-NC组、TMZ+miR-15a-5p组。未进行任何处理的细胞设为Control组。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞增殖能力。采用Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力。采用荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞RUNX1 mRNA及miR-15a-5p表达水平。采用Western blot检测细胞RUNX1蛋白表达水平。采用TargetScan在线网站预测miR-15a-5p与RUNX1的结合位点。采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-15a-5p与RUNX1的靶向关系。结果H4、SHG-44细胞的RUNX1 mRNA及其蛋白表达水平高于HA1800细胞,H4、SHG-44细胞miR-15a-5p表达水平低于HA1800细胞,差异有统计学意义(P<0.0001)。与Control组比较,TMZ耐药H4细胞miR-15a-5p表达水平降低,差异有统计学意义(t=18.89,P<0.0001);与Control组比较,TMZ耐药H4细胞RUNX1 mRNA及其蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(t=34.11、18.07,P<0.0001)。上调miR-15a-5p、TMZ均可抑制细胞的增殖、侵袭及迁移,而上调miR-15a-5p联合TMZ可显著抑制细胞的增殖、侵袭及迁移。miR-15a-5p可负性调控RUNX1表达。RUNX1过表达可逆转上调miR-15a-5p、TMZ对胶质瘤细胞增殖、侵袭及迁移的抑制作用。结论miR-15a-5p负性调控RUNX1抑制胶质瘤细胞的增殖、侵袭、迁移,以及提高肿瘤细胞对TMZ的敏感性。

RUNX1基因突变在髓系肿瘤中的研究新进展

RUNX1基因突变在骨髓增生异常综合征(MDS)、急性髓细胞白血病(AML)等多种血液肿瘤中发生率较高,并且提示患者预后不良。近年研究结果显示,RUNX1突变在髓系肿瘤的发生、发展中起重要作用,是其第Ⅱ类致病基因。笔者通过RUNX1蛋白结构与功能、不同髓系肿瘤中RUNX1突变的发生情况、RUNX1突变的致病机制、伴RUNX1突变的不同髓系肿瘤患者的临床特点及治疗策略等方面,对RUNX1突变在髓系肿瘤中的临床及相关分子学研究的新进展进行阐述。

FISH信号类型和染色体核型分析在ETV6/RUNX1阳性B-ALL患儿中的诊疗价值评估

目的探讨FISH信号类型和染色体核型分析对ETV6/RUNX1阳性B系急性淋巴细胞白血病(B-acute lymphoblastic leukemia,B-ALL)的诊疗价值。方法收集164例ETV6-RUNX1融合阳性B-ALL患者的临床病理资料,对其染色体核型和FISH的结果进行回顾性分析。结果164例患者中FISH检出163例阳性,其中61例为经典阳性信号2F1R1G;102例为非经典信号,其中2F1G和1F1R2G信号类型最多,提示ETV6缺失;164例患者中有8例患儿未做染色体核型分析,31例患儿因无核分裂象未能进行染色体核型分析,可以进行核型分析的125例患儿中,正常核型106例,异常核型19例,且均未检出t(12;21)易位。结论FISH技术检测ETV6/RUNX1融合基因敏感度高,且多表现为包括ETV6缺失在内的非经典信号类型;染色体核型分析有助于发现复杂核型和超倍体,但不利于t(12;21)融合的检出。因此FISH信号类型和染色体核型分析在ETV6/RUNX1阳性B-ALL中具有不可或缺的作用。

伴有异常早幼粒样细胞的RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病1例报道

随着医学技术的发展,细胞遗传学和分子生物学检测成为急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)诊断、治疗和预后监测的重要方法。本研究回顾性分析1例骨髓和外周血中出现异常早幼粒样细胞的RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML患者病史、实验室检查结果,介绍其形态学的特殊之处和诊断过程,以提高临床及检验人员对此类疾病的认识。

SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞对造血干细胞增殖和趋化作用的研究

目的研究基质细胞衍生因子-1(SDF-1)/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞(MSCs)对造血干细胞(HSCs)增殖和趋化能力的作用。方法分离培养人脐带源性MSCs和人脐血源性CD34+干细胞。重组腺病毒pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP感染MSCs,免疫荧光显微镜下观察感染效率,ELISA方法检测上清液中SDF-1和RUNX1的表达。流式细胞仪检测感染了重组腺病毒的MSCs对CD34+干细胞的扩增倍数,Transwell试验测定CD34+干细胞的迁移指数。结果重组腺病毒感染人脐带源性MSCs后,第3天的转染效率和SDF-1/RUNX1的表达最高,第7天也有较高表达,两者比较差异无统计学意义(P>0.05)。感染重组腺病毒的MSCs和CD34+干细胞共培养第3、7、14天,B1、C1组较A1组CD34+干细胞显著扩增(P<0.05)。培养第7、14天,B1组中CD34+干细胞的扩增倍数显著高于C1组(P<0.05)。Transwell试验中,B2、C2组的迁移指数明显高于A2组(P<0.05),并且C2组的迁移指数明显高于B2组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的MSCs可促进CD34+干细胞的增殖和归巢。

RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病M2型预后的影响因素分析

目的 分析影响RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性的急性髓系白血病M2型(AML-M2)患者的预后因素。方法 回顾性分析阜阳市人民医院2016年10月至2022年8月收治102例AML-M2患者临床资料,将其中64例RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性患者设为阳性组,将38例RUNX1-RUNX1T1融合基因阴性患者设为阴性组,比较两组临床资料。采用Kaplan-Meier法,log-rank检验分析出对RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性患者总生存时间(OS)、无复发生存时间(RFS)有影响的因素,并应用Cox回归模型进一步分析影响预后的相关因素。结果 在RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性的AML-M2患者预后因素分析中,单因素结果显示,CD19阳性、诱导治疗后MRD下降>3个对数级、治疗后融合基因转阴是影响患者OS预后良好的因素(P<0.05),诱导治疗后MRD下降>3个对数级、融合基因转阴是影响患者RFS预后良好的因素(P<0.05);而白细胞≥20×109/L,C-Kit D816突变是影响患者OS和RFS预后不良的因素(P<0.05)。多因素生存分析显示,白细胞计数≥20×109/L、C-Kit D816突变、MRD下降>3个对数级、融合基因转阴是影响患者OS的影响因素;C-Kit D816突变、融合基因转阴是影响患者RFS的影响因素。结论 白细胞计数、C-Kit D816突变、MRD下降>3个对数级、融合基因转阴是影响RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML-M2患者预后的因素。

SDF-1/RUNX1融合蛋白腺病毒载体的构建及滴度测定

目的构建SDF-1/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,并测定其滴度,为研究SDF-1/RUNX1融合蛋白介导的间充质干细胞对造血干细胞定向募集的作用打下基础。方法全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段,并在其两端添加限制性酶切位点XhoI及EcoRI,经测序验证基因序列是否正确。采用分子克隆技术构建pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体,转染入293A细胞中进行包装,采用免疫法测定腺病毒滴度。结果全基因合成SDF-1-(GlySer)3-RUNX1片段经测序验证基因序列正确,长约3 000bp。将其连接至目的载体pIRES2-EGFP,构建出含有SDF-1-(GlySer)3-RUNX1基因序列的GFP共表达质粒编号为B。以B质粒为模板,扩增出带attB1和attB2位点的SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-EGFP片段,长约4 300bp。采用BP重组系统将上述目的片段重组到载体pDONR221,构建出BP重组质粒C。再采用LR重组系统将目的序列重组到腺病毒载体pAD/CMV/v5-DEST上,构建出pAD-SDF-1-(GlySer)3-RUNX1-IRES-GFP腺病毒载体。经293细胞包装后,采用免疫法测定腺病毒滴度为1.03×1011 ifu/mL。结论成功构建出SDF-11/RUNX1融合蛋白腺病毒表达载体,且腺病毒滴度较高,有利于后续试验。

合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治AML患儿预后影响因素分析

目的:探讨合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治急性髓系白血病(AML)患儿预后影响因素。方法:回顾性分析本院2009年1月-2017年1月收治合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治AML患儿41例临床资料,记录基线临床特征、累积复发、无事件生存及总生存情况,并通过χ^2检验和Cox回归模型评价预后影响因素。结果:41例患儿行诱导方案化疗后首个疗程和第2个疗程完全缓解率分别为82.93%(34/41)和97.56%(40/41);中位无事件生存时间和总生存时间分别为30和31个月。首个疗程达完全缓解患儿无事件生存率和总生存率显著高于未达完全缓解患儿(P<0.05);男性患儿无事件生存率显著高于女性患儿(P<0.05);发病年龄<10岁患儿总生存率显著高于≥10岁患儿(P<0.05)。第2次诱导缓解后RUNX1-RUNX1T1基因表达水平是患儿累积复发率、无事件生存率及总生存率影响因素(P<0.05);Cox回归模型多因素分析显示,第2次诱导缓解后RUNX1-RUNX1T1基因表达下降<3 log是影响患儿无事件生存率和总生存率独立危险因素(P<0.05);同时RUNX1-RUNX1T1基因表达下降3 log水平后升高>1 log水平患儿累积复发率显著高于≤1 log水平患儿(P<0.05)。结论:合并t(8;21)/RUNX1-RUNX1T1^+初治AML患儿行规范化疗后临床预后良好,RUNX1-RUNX1T1基因表达水平与AML患儿复发及远期生存密切相关。

微量残留病监测在ETV6/RUNX1阴性和阳性急性B淋巴细胞白血病患儿预后中的意义

目的探讨微量残留病(MRD)监测在ETV6/RUNX1融合基因阴性、阳性急性B淋巴细胞白血病(B-ALL)患儿预后中的意义。方法收集2018年1月—2021年6月郑州大学附属儿童医院234例B-ALL患儿临床资料,其中ETV6/RUNX1融合基因阳性78例(阳性组)、阴性156例(阴性组)。比较阳性组和阴性组无复发生存期(RFS)差异;统计2个组诱导化疗第15天、第33天和巩固治疗开始前(第12周)MRD检测结果,分别记为MRD1、MRD2、MRD3;分析2个组组内MRD1、MRD2、MRD3在B-ALL患儿预后中的意义。结果与阴性组比较,阳性组RFS延长(P=0.029)。在阴性组内,MRD1阴性和阳性患儿RFS差异无统计学意义(P>0.05);MRD2、MRD3阴性患儿RFS均长于MRD2、MRD3阳性患儿(P<0.05);MRD3阳性是B-ALL患儿预后的独立影响因素(比值比值为=3.678,95%可信区间为1.254~10.785,P=0.018)。在阳性组内。MRD1、MRD2阴性和阳性患儿RFS差异无统计学意义(P>0.05);MRD3阴性患儿RFS长于MRD3阳性患儿;多因素分析结果显示,MRD3阳性并非患儿RFS的独立影响因素(P>0.05)。结论监测MRD对ETV6/RUNX1融合基因阴性B-ALL患儿预后的意义更大,建议持续监测;对于ETV6/RUNX1融合基因阳性患儿,MRD监测意义较弱,临床可根据实际情况决定是否采用。

阿伐替尼桥接异基因造血干细胞移植治疗伴有KIT突变的复发/难治性RUNX1-RUNX1T1阳性急性髓系白血病7例疗效分析

目的探讨阿伐替尼桥接异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗伴KIT突变复发/难治性RUNX1-RUNX1T1阳性急性髓系白血病(AML)的疗效。方法对2019年6月至2023年6月期间在苏州大学附属第一医院接受阿伐替尼桥接allo-HSCT治疗的7例伴RUNX1-RUNX1T1融合基因与KIT突变的复发/难治性AML患者进行回顾性研究。结果7例AML患者中男1例,女6例,中位年龄37(18~56)岁。7例患者均伴有KIT突变(D816V突变阳性5例,D816Y突变阳性2例)。难治患者2例,复发患者5例(均为骨髓复发)。所有患者移植前至少完成1个疗程阿伐替尼治疗。4例患者在阿伐替尼治疗后获得完全缓解(CR),6例患者KIT基因突变转阴,1例患者KIT基因突变负荷较前下降。全相合无关供者移植3例,单倍体移植4例。所有患者均接受改良Bu/Cy预处理方案。移植后所有患者均顺利植入,复查骨髓象均达CR且微小残留病(MRD)转阴,5例患者融合基因转阴。移植后2例患者死于感染。结论阿伐替尼桥接allo-HSCT对于伴有KIT-D816突变的RUNX1-RUNX1T1阳性AML患者可能是一种有效、安全的治疗新策略。

1例急性髓系白血病治疗缓解后继发急性早幼粒细胞白血病的诊断与治疗

目的总结1例RUNX1::RUNX1T1阳性急性髓系白血病(AML)治疗缓解后继发PML::RARA阳性急性早幼粒细胞白血病(APL)患者的诊治方法。方法回顾性分析1例RUNX1::RUNX1T1阳性AML治疗缓解后继发PML::RARA阳性APL患者的临床资料,并复习相关文献。结果患者中年男性,因全血细胞减少就诊。髓系白血病融合基因筛查示RUNX1::RUNX1T1阳性,明确诊断为RUNX1::RUNX1T1阳性AML。患者经过诱导缓解和巩固治疗后RUNX1::RUNX1T1转阴,缓解期大于2年,疾病复发时髓系白血病融合基因筛查示PML::RARA阳性,诊断为PML::RARA阳性APL,经37 d三氧化二砷联合维甲酸诱导分化治疗达到骨髓象缓解。结论RUNX1::RUNX1T1阳性AML患者缓解后发生继发性APL临床罕见,容易漏诊,确诊主要依靠髓系白血病融合基因筛查;其发病原因可能与药物毒性诱导克隆改变有关,采用三氧化二砷及维甲酸治疗效果较好。

慢性粒细胞白血病中相关融合基因的研究进展

研究证实,慢性粒细胞白血病(CML)中BCR/ABL融合基因具有极高的酪氨酸激酶活性,通过改变作为BCR/ABL催化底物的一些关键调节蛋白的磷酸化状况,激活多种信号转导途径,可致疾病的发生。除此之外,NUP98-HOXA9及RUNX1-EVI1等融合基因在CML病程中亦发挥重要作用,但具体机制尚未明了。本文就CML中相关融合基因的研究进展作一综述。

RUNX1-RUNX1T1融合基因定量监测在儿童急性髓系白血病中的应用价值

目的研究RUNX1-RUNX1T1融合基因定量监测在伴t（8；21）／RUNX1-RUNX1T1阳性的儿童急性髓系白血病（AML）中的预后评估价值。方法2005年8月至2016年1月北京大学人民医院收治的伴t（8；21）／RUNX1-RUNX1T1阳性AML患儿共81例，所有患儿于初诊时、治疗结束后在北京大学人民医院应用实时荧光定量PCR（qPCR）方法检测RUNX1-RUNX1T1基因拷贝数，采用Kaplan—Meier曲线评估患儿的累积复发率（CIR）、无事件生存（EFS）率和总体生存（OS）率，COX回归模型评估预后因素。结果以初诊时RUNX1-RUNX1T1基因定量水平为基线，将治疗后基因定量水平是否比诊断时下降3个对数级（3log）为界，第2次诱导缓解治疗结束后，下降≥3log者（51例）与〈3log者（28例）相比：5年EFS分别为82．4％及57．6％（χ2=7．454，P〈0．01），5年OS率分别为93．6％及59．3％（χ2=9．703，P〈0．01），差异均有统计学意义。COX多因素回归分析显示，第2次诱导缓解结束后RUNX1-RUNX1T1基因下降是否〉3log水平是影响患儿EFS[风险比（HR）=4．223，95％置信区间（CI）：1．507-11．836，P〈0．01]与OS率的独立危险因素（HR=5．002，95％CI：1．282～19．516，P〈0．05）。定期监测RUNX1-RUNX1T1基因，81例患儿中有63例患儿监测6次以上基因定量，将基因定量下降3log后又上升了1log水平的患儿分为A组（10例），其余患儿分为B组（53例），A组和B组CIR比较差异有统计学意义（46．7％比4．7％，P〈0．01）。结论通过qPCR方法检测RUNX1-RUNX1T1基因拷贝数，可以判断伴t（8；21）／RUNX1-RUNX1T1阳性AML患儿的治疗效果，预测患儿的复发及评估长期预后，具有极大的临床应用价值。

二代测序检测克隆性基因突变对RUNX1-RUNX1T1阳性急性髓系白血病的预后价值

目的探讨基于二代测序检测技术下的克隆性基因突变对第1次完全缓解(CR1)状态下接受高剂量化疗或自体造血干细胞移植(强化巩固治疗)的RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病(AML)预后的影响。方法收集2011年7月至2017年8月在苏州大学附属第一医院CR1状态下接受强化巩固治疗的79例RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML患者的临床资料,通过Kaplan-Meier曲线、Cox回归模型分析临床因素及突变基因对患者总生存(OS)和无病生存(DFS)时间的影响。结果在79例患者中,检出C-KIT、FLT3、CEBPA、DNMT3A基因突变者分别为25例(31.6%)、6例(7.6%)、8例(8.9%)、1例(1.3%),其中C-KIT exon17及C-KIT exon8突变分别为19例(24.1%)、5例(6.3%),FLT3-ITD突变为5例(6.3%)。初诊白细胞计数越高,患者的OS时间越短(P=0.030),合并C-KIT exon17突变患者的OS时间(P=0.010)和DFS时间(P=0.006)明显缩短,合并FLT3-ITD基因突变患者的OS时间(P=0.048)和DFS时间(P=0.071)缩短。多因素分析显示合并C-KIT exon17和FLT3-ITD突变均为影响患者预后的独立因素。结论在接受强化巩固治疗的RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML患者中,C-KIT exon 17、FLT3-ITD基因突变提示预后较差,这将对细化患者危险度分层、个体化治疗、评估预后有指导意义。

MDS铁过载小鼠模型建立及鉴定

目的:建立一种MDS铁过载小鼠模型,研究铁过载对MDS的影响。方法:通过逆转录病毒,将外源突变基因RUNX1-S291fs插入小鼠骨髓单个核细胞基因组,然后移植给经60Coγ射线照射的C57BL/6小鼠。8周后,腹腔注射铁剂,建立MDS铁过载小鼠模型。移植24周后,取小鼠外周血、骨髓、股骨、肝脏和脾脏进行鉴定:对外周血和骨髓细胞行瑞氏染色观察形态特征;对股骨、肝脏和脾脏组织行HE染色检测病理变化;对肝脏、脾脏和骨髓行普鲁士蓝染色观察铁沉积情况;应用流式细胞术检测小鼠骨髓细胞抗原表达情况;对骨髓单个核细胞和脾组织蛋白行免疫印迹实验,确认RUNX1-S291fs基因转入并表达蛋白。移植后对小鼠定期监测血常规指标和移植细胞嵌合率。结果:相比空白质粒对照小鼠,RUNX1-S291fs突变小鼠外周血白细胞计数、血红蛋白水平和血小板计数均降低;外周血和骨髓细胞显示病态造血;肝脏和脾脏明显增大;在股骨、肝脏和脾脏可见组织结构异常;骨髓细胞表面抗原表达异常;骨髓细胞和脾组织有RUNX1-S291fs蛋白表达。相比生理盐水对照小鼠,铁剂注射小鼠普鲁士蓝染色可见骨髓、肝脏和脾脏组织有明显铁沉积。结论:注射铁剂的RUNX1-S291fs突变组小鼠合并有MDS和铁过载的病理特征,成功构建了MDS铁过载小鼠模型,为研究铁过载对MDS的影响奠定了基础。

RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病临床特征及预后分析

目的分析RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性急性髓系白血病(AML)患者的临床特征及预后。方法收集并回顾性分析运城市中心医院2012年1月至2018年2月收治的25例RUNX1-RUNX1T1阳性AML患者临床资料,包括患者性别、年龄、血常规、流式细胞术(FCM)、细胞遗传学结果及RUNX1-RUNX1T1融合基因表达水平等资料,采用Kaplan-Meier法进行生存分析。结果 25例患者中4例失访,中位总生存(OS)时间为15.6个月(3.0~29.3个月)。21例患者均检出t(8;21)染色体异常,11例伴有其他染色体异常。5例患者获完全缓解(CR)停止治疗后,复查融合基因定量提示升高,但FCM及骨髓穿刺均未提示复发,而1~6个月后再次复查FCM及骨髓穿刺均提示复发,再行诱导缓解治疗。Kaplan-Meier生存分析显示,年龄、初诊白细胞计数、血红蛋白、血小板计数与OS时间均无关(均P>0.05);性别及是否1个疗程治疗达CR是OS时间的影响因素(均P<0.05)。1个疗程达CR者中位OS时间为18.2个月,1个疗程未达CR者中位OS时间为8.9个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论性别及是否1个疗程达CR对RUNX1-RUNX1T1融合基因阳性AML患者的OS有影响。融合基因表达水平检测比FCM检测能够更早地监测复发。

RUNX1突变急性髓系白血病的分子学特点分析

目的:探讨RUNX1突变急性髓系白血病(AML)的分子学特点及其与部分临床参数的相关性。方法:采用高通量DNA测序技术联合PCR及Sanger测序法检测30例RUNX1突变AML患者与211例RUNX1野生型AML患者的50余种髓系肿瘤基因突变。结果:①与RUNX1野生型患者比较,RUNX1突变AML患者中M0亚型的比例更高(10.0%vs0.9%,P<0.05),细胞遗传学分组中预后良好组的比例更低(0vs 15.9%,P<0.05)。②RUNX1突变AML患者具有更高的SRSF2(6.7%vs0,P<0.05)突变发生率,更低的NPM1(3.3%vs28.9%,P<0.01)及CEBPA突变发生率(3.3%vs21.3%,P<0.05)。③30例RUNX1突变AML患者中90.0%伴有额外基因突变,与RUNX1野生型患者比较,RUNX1突变AML患者中具有2种基因突变的比例更低,≥3种以上基因突变的比例更高(P<0.05)。④30例RUNX1突变AML患者中,与DNMT3A野生型患者比较,伴有DNMT3A突变的患者年龄更大,共存基因突变个数更多(P<0.05)。⑤初次诱导化疗后,RUNX1突变及野生型AML患者的缓解率分别为53.3%及75.0%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:RUNX1突变AML患者具有独特的分子生物学特征,并与部分临床参数相关,完全缓解率明显降低。与RUNX1野生型患者比较,RUNX1突变AML患者在基因突变个数及突变谱系上有一定的差异。