Ras同源基因家族蛋白A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号通路调控缺血性卒中的研究进展

Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)是一种小的鸟苷三磷酸酶蛋白,在缺血性卒中发生发展过程中可激活Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)。RhoA/ROCK信号通路是缺血性卒中病理过程中的重要调节因子,调控该信号通路已成为促进缺血性卒中后神经细胞恢复和改善脑缺血-再灌注损伤的研究热点,然而目前RhoA/ROCK抑制剂仅有法舒地尔上市,其余仍处于研发或临床试验阶段。作者对RhoA/ROCK信号通路对缺血性卒中发挥的调控作用及机制进行总结,并对抑制剂及调控药物的应用进行阐述,旨在为缺血性卒中防治提供新的思路。

Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义

目的:探究Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)信号转导通路在膝骨性关节炎软骨组织中的表达及意义。方法:将取自因原发性膝骨性关节炎(KOA)行全膝关节置换术(TKA)去除的30例患者的膝关节软骨组织设为观察组,将同期行下肢离断术去除的25例患者的膝关节软骨组织设为对照组。比较两组标本外观形态,HE染色、番红O-固绿染色、电镜扫描结果。通过免疫组织化学(IHC)染色、免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测RhoA和ROCK蛋白及mRNA的表达变化。结果:观察组股骨髁软骨表面粗糙,缺损明显,呈溃疡状,染色不均匀,潮线不完整。对照组软骨面光滑平整,组织分层明显,颜色均匀。电镜扫描结果显示,观察组软骨组织毁损严重,结构不清;对照组表面光洁,软骨间质均匀。与对照组比较,观察组关节软骨组织中RhoA、ROCK蛋白及mRNA表达量高于对照组(均P<0.05)。结论:RhoA/ROCK信号转导通路中的RhoA、ROCK蛋白及mRNA在KOA患者关节软骨组织中表达明显高于行下肢离断术患者,提示RhoA/ROCK信号转导通路与KOA软骨退变具有相关性,可能对KOA的发生与发展起到了重要作用。

RhoA/Rho激酶信号通路与先天性尿道下裂发生的相关性研究

目的通过构建先天性尿道下裂模型和在体外培养雄性胎鼠尿道海绵体组织来探讨RhoA/Rho激酶信号通路在先天性尿道下裂发生中的作用。方法通过邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[di-(2-ethylhexyl)phthalate,DEHP]灌胃法建立先天性尿道下裂大鼠模型,处死大鼠获得尿道海绵体组织后,免疫组化检测RhoA和p-RhoA蛋白表达,荧光定量PCR(qPCR)检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平,Western blot检测各组大鼠尿道海绵体组织中RhoA,p-RhoA,MLCP(myosin light chain phosphatase),p-MLCP,MLC(myosin light chain),pMLC蛋白的表达情况。同时对胎鼠的尿道海绵体组织进行体外培养,使用RhoA/Rho激酶通路的抑制剂处理培养中的尿道海绵体组织,观察RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA的表达水平。结果成功构建了大鼠尿道下裂模型。免疫组化结果显示与对照组相比,先天性尿道下裂大鼠阴茎组织中p-RhoA表达明显增加。qPCR结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中RhoA、ROCK1、ROCK2mRNA表达水平明显高于对照组(均P<0.05)。Western blot结果显示,先天性尿道下裂大鼠尿道海绵体组织中p-RhoA、p-MLCP、p-MLC蛋白的表达水平较对照组均明显升高(均P<0.05)。体外培养尿道海绵体组织实验发现,RhoA/Rho激酶通路抑制剂可阻碍RhoA/Rho激酶信号通路激活,从而抑制RhoA、ROCK1、ROCK2的表达并减轻DEHP对雄性胎鼠尿道段组织正常发育的抑制作用。结论 RhoA/Rho激酶信号通路激活与先天性尿道下裂的发生有关,抑制RhoA/Rho激酶信号通路激活可降低RhoA、ROCK1和ROCK2表达从而促进尿道海绵体组织正常发育。

贝母素乙调节RhoA/ROCK信号通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的 探讨贝母素乙调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对膝骨关节炎(knee osteoarthritis, KOA)大鼠软骨损伤的影响。方法 以碘乙酸钠(MIA)法制备KOA大鼠模型,随机分为模型组、贝母素乙(3.5 mg/kg)组、贝母素乙(3.5 mg/kg)+LPA(RhoA激活剂,1 mg/kg)组,每组10只,另选10只大鼠为对照组。机械刺激法和热辐射法检测大鼠膝关节疼痛症状;检测大鼠关节肿胀度、膝关节宽度并以步态评分评测其关节功能;透射电镜检测大鼠膝关节软骨细胞超微结构;TUNEL染色检测大鼠关节软骨细胞凋亡比;酶联免疫吸附(ELISA)法检测大鼠血清和关节液促炎因子白细胞介素(IL)-18、单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)水平;免疫印迹检测各组大鼠关节软骨组织凋亡(Cleaved caspase-3、Bax)和RhoA/ROCK通路相关蛋白表达。结果 贝母素乙可降低KOA大鼠关节肿胀度、膝关节宽度、步态评分、软骨细胞凋亡比、血清及关节液IL-18、MCP-1水平、软骨组织Cleaved caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK1蛋白表达,升高机械痛阈值、热痛阈值(P<0.05);LPA可减弱贝母素乙对KOA大鼠关节软骨损伤的改善作用。结论 贝母素乙可通过抑制RhoA/ROCK信号激活而抑制KOA大鼠关节炎症反应和关节软骨细胞凋亡,减轻软骨损伤。

桃叶珊瑚苷调节RhoA/ROCK信号通路对胶质母细胞瘤细胞活力和上皮间质转化的影响

[目的]研究桃叶珊瑚苷(AU)对胶质母细胞瘤(GBM)细胞活力和上皮间质转化(EMT)的影响,并对其作用机制进行探讨。[方法]将U87细胞随机分为对照组、AU低浓度组、AU中浓度组、AU高浓度组、Y-27632组、AU高浓度+Y-27632组。细胞计数器试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell小室实验检测细胞迁移和侵袭,蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测基质金属蛋白酶(MMP)2、MMP9、波形蛋白(Vimentin)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、神经钙黏蛋白(N-cadherin)、Ras同源基因家族成员A(RhoA)、Rho相关卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)1、ROCK2表达。构建GBM裸鼠模型,随机分为裸鼠对照组、AU组、Y-27632组、AU+Y-27632组,测量肿瘤质量与体积,免疫组化法检测移植瘤组织RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。[结果]GBM细胞活力随着AU浓度的升高而逐渐降低(P<0.05),选择U87作为后续实验细胞,选择10、25、50μmol/L浓度作为AU后续实验浓度。与对照组比较,AU低、中、高浓度组和Y-27632组细胞活力、迁移和侵袭细胞数、MMP2、MMP9、N-cadherin、Vimentin、RhoA、ROCK1、ROCK2表达显著下降,凋亡率、E-cadherin表达显著升高(P<0.05),其中高浓度AU和Y-27632组共同处理的细胞变化更显著(P<0.05)。AU和Y-27632均能抑制移植瘤质量和体积,降低RhoA/ROCK信号通路蛋白表达(P<0.05)。[结论]AU能抑制GBM细胞活力、迁移侵袭和EMT,促进细胞凋亡,其作用机制可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

芍药苷调节RhoA/ROCK信号通路对实验性自身免疫性葡萄膜炎小鼠Th17/Treg免疫平衡的影响

目的探讨芍药苷调节Ras同源基因家族蛋白A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对实验性自身免疫性葡萄膜炎(experimental autoimmune uveitis,EAU)小鼠辅助性T淋巴细胞17(Th17)/调节性T细胞(Treg)免疫平衡的影响。方法随机选出10只小鼠作为正常对照组,其余小鼠构建EAU模型,将造模成功小鼠随机平分为模型组、芍药苷组(10 mg·kg^(-1)芍药苷)、RhoA/ROCK信号通路激活剂溶血磷脂酸(LPA)组(25μmol·L^(-1)LPA)、芍药苷+LPA组(10 mg·kg^(-1)芍药苷+25μmol·L^(-1)LPA),每组10只。模型组和正常对照组给予等量生理盐水,给药每天1次,持续14 d。眼前节临床表现评分评估炎症严重程度;HE染色观察眼球组织病理形态;ELISA法检测血清中炎性因子转化生长因子-β(trarsforming growth factor beta,TGF-β)、白细胞介素10(IL-10)、白细胞介素17(IL-17)、白细胞介素23(IL-23)水平;流式细胞术检测脾脏Th17/Treg细胞水平;Western Blot法检测维甲酸相关核孤儿受体γt(RORγt)、叉头状转录因子3(Foxp3)以及RhoA/ROCK信号通路蛋白表达。结果正常对照组小鼠无虹膜、结膜血管舒张充血,与正常对照组比,模型组小鼠出现虹膜血管舒张充血,前房、虹膜、睫状体和视网膜内均有大量炎性细胞膨胀,眼前节临床表现评分、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、RhoA、ROCK1蛋白水平明显升高(P<0.05),IL-10和TGF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3水平明显下降(P<0.05)。与模型组比,芍药苷组小鼠虹膜血管充血症状明显缓解,眼前节临床表现评分、IL-17和IL-23含量、Th17细胞水平、Th17/Treg、RORγt、RhoA、ROCK1蛋白水平明显降低(P<0.05),IL-10和TGF-β含量、Treg细胞水平、Foxp3水平明显升高(P<0.05);而LPA加重了眼部损伤(P<0.05),逆转了芍药苷对EAU小鼠的改善效果(P<0.05)。结论芍药苷可通过下调RhoA/ROCK信号通路调节EAU小鼠Th17/Treg免疫平衡减轻EAU小鼠葡萄膜炎。

紫草素对糖尿病周围神经病变大鼠的治疗作用及对腺苷酸活化蛋白激酶/核因子E2相关因子2信号通路的影响

目的:探究紫草素对糖尿病周围神经病变(DPN)大鼠的治疗作用及对腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)/核因子E2相关因子2(Nrf2)信号通路的影响。方法:构建DPN模型,将建模成功的48只大鼠随机分为模型组、紫草素低剂量组、紫草素高剂量组和甲钴胺片组,每组12只。另取12只大鼠作为对照组。紫草素低、高剂量组大鼠分别给予12.5、25 mg/kg紫草素灌胃,甲钴胺片组大鼠给予0.14 mg/kg甲钴胺片灌胃,对照组和模型组大鼠给予等体积0.9%氯化钠溶液灌胃,每日给药1次,连续8周。观察各组大鼠坐骨神经病理学变化。检测大鼠坐骨神经感觉神经传导速度(SNCV)和运动神经传导速度(MNCV),血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β,坐骨神经超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平。结果:对照组大鼠坐骨神经结构正常;模型组大鼠坐骨神经髓鞘变薄,出现白色结缔物质,间隙加宽,可见明显炎症细胞浸润;紫草素低、高剂量组大鼠坐骨神经病变程度依次减轻;甲钴胺片组和紫草素高剂量组大鼠坐骨神经病理学变化无明显差异。与对照组比较,坐骨神经SNCV和MNCV、血清SOD水平以及坐骨神经AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平显著降低,血清TNF-α、IL-6及坐骨神经MDA水平显著升高(均P<0.05)。与模型组比较,坐骨神经SNCV和MNCV、血清SOD水平以及坐骨神经AMPK、Nrf2 mRNA和蛋白水平依次升高,血清TNF-α、IL-6及坐骨神经MDA水平依次降低(均P<0.05)。甲钴胺片组和紫草素高剂量组上述各项指标比较差异无统计学意义(均P>0.05)。结论:紫草素能抑制DPN大鼠炎症反应和氧化应激,保护大鼠坐骨神经,其机制可能与激活AMPK/Nrf2信号通路有关。

益母草碱调节RhoA/ROCK信号通路对冠心病大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响

目的:研究益母草碱(Leo)通过调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关的卷曲螺旋激酶(ROCK)信号通路对冠心病(CHD)大鼠主动脉内皮细胞损伤的影响及机制。方法:将造模成功的75只CHD大鼠随机分为模型组(CHD组)、Leo低、中、高剂量组(Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组)和Leo高剂量组+RhoA激活剂LPA组(Leo-H+LPA组),每组15只。Leo-L、Leo-M、Leo-H组分别灌胃15、30、60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,Leo-H+LPA组灌胃60mg·kg^(-1)·d^(-1)的Leo,另需腹腔注射1mg·kg^(-1)·d^(-1)的LPA,Control组和CHD组以相同方式给予等量生理盐水,均连续干预4周。超声心动图测定心功能指标;全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)水平;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、一氧化氮(NO)、内皮素1(ET-1)、内皮细胞特异性分子-1(EMS1)、血管内皮细胞粘附分子1(VCAM-1)水平;苏木精-伊红(HE)染色观察主动脉内皮损伤;流式细胞仪检测主动脉内皮细胞凋亡;免疫印迹法(Western blot)检测RhoA/ROCK信号通路相关蛋白表达。结果:与Control组相比,CHD组主动脉壁增厚且染色不均匀,细胞膨大,排列紊乱,内皮粗糙;左室舒张末期内径(LVEDD)、左室收缩末期内径(LVESD)、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达显著升高(P<0.05),左室射血分数(LVEF)、缩短分数(FS)、HDL-C、NO水平显著降低(P<0.05)。与CHD组相比,Leo-L组、Leo-M组、Leo-H组主动脉染色均匀,动脉壁结构清晰,细胞排列紧密且形态较正常,内膜较平滑;LVEDD、LVESD、TC、TG、LDL-C、IL-6、TNF-α、ET-1、VCAM-1和EMS1水平、细胞凋亡率及RhoA、ROCK1和ROCK2蛋白表达逐渐降低(P<0.05),LVEF、FS、HDL-C、NO水平逐渐升高(P<0.05)。Leo-H+LPA组逆转了Leo对CHD大鼠的保护作用(P<0.05)。结论:Leo可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善CHD大鼠心功能,降低血脂,抑制炎症,进而减轻CHD大鼠主动脉内皮细胞损伤。

RhoA相关信号通路的表达对COPD大鼠气道重塑的影响

目的观察正常对照组大鼠、COPD模型组大鼠及地塞米松治疗组大鼠肺组织中RhoA mRNA及蛋白含量的变化,探讨RhoA信号通路在COPD大鼠气道重塑中的作用。方法将60只雄性大鼠随机分为3组,每组各20只,采用烟熏加脂多糖的方法建立COPD大鼠模型,造模成功后,用免疫组化法测定各组大鼠肺组织RhoA蛋白的表达量,Real-time PCR法检测各组大鼠RhoA mRNA含量。结果与正常对照组比较,COPD模型组大鼠RhoA mRNA的表达增高(P<0.05),与COPD模型组比较,地塞米松治疗组RhoA mRNA的表达降低(P<0.05);免疫评分结果显示:与正常对照组比较,COPD模型组大鼠RhoA蛋白阳性表达率增高(P<0.05),地塞米松组RhoA蛋白阳性表达率降低(P<0.05)。结论 RhoA信号通路在大鼠气道重塑这一病理变化中起一定作用,地塞米松对COPD大鼠的气道重塑具有抑制作用。

基于RhoA/ROCK信号通路探讨中药干预缺血性脑卒中的研究进展

基于Ras同源基因家族成员A/Rho相关卷曲螺旋激酶(RhoA/ROCK)信号通路综述中药干预缺血性脑卒中的研究进展。RhoA/ROCK信号通路在缺血性脑卒中的病理过程中发挥着重要作用,主要涉及细胞凋亡、兴奋性毒性、神经炎症、血脑屏障和神经功能等方面。部分中药复方及其活性成分可以通过调控RhoA/ROCK信号通路及上下游靶基因的表达,起到减少神经元凋亡、减轻炎症反应、减小脑梗死面积、保护血脑屏障、促进突触修复和再生等作用,为中药治疗缺血性脑卒中后续作用机制的研究及治疗新靶点的开发提供新思路。

桃叶珊瑚苷调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化和血管生成拟态的影响

目的:探究桃叶珊瑚苷(AU)调控RhoA/ROCK信号通路对胃癌MGC803细胞上皮间质转化(EMT)进程和血管生成拟态(VM)形成的影响。方法:常规培养人胃癌MGC803细胞,将其随机分为对照组、AU-L组(20μmol/L AU)、AU-M组(40μmol/L AU)、AU-H组(80μmol/L AU)、AU-H+RhoA激活剂水仙环素(Nar)组(AU-H+Nar组,80μmol/L AU+30μmol/L Nar)。采用CCK-8法、Transwell实验、细胞划痕实验分别检测不同浓度AU对细胞增殖、迁移和侵袭的影响,三维细胞培养法观察不同浓度AU对细胞体外VM管腔结构形成的影响,WB法检测AU对各组细胞RhoA、ROCK、VM与EMT相关蛋白表达的影响。结果:与对照组相比,AU-M组、AU-H组MGC803细胞增殖率(48、72 h时)、细胞迁移率、细胞侵袭数目、VM管腔结构数,以及RhoA、ROCK1、N-cadherin、vimentin、VE-cadherin的蛋白表达均显著降低(均P<0.05),E-cadherin表达显著升高(P<0.05);同时,使用Nar处理显著减弱了AU对MGC803细胞EMT和VM形成的抑制作用(均P<0.05)。结论:AU通过下调RhoA/ROCK信号通路抑制胃癌MGC803细胞的增殖、迁移、侵袭、EMT和VM形成过程。

藁本内酯通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善脂多糖诱导小鼠肾足细胞损伤

【目的】探讨藁本内酯对脂多糖(LPS)诱导小鼠肾足细胞损伤的改善作用及机制。【方法】(1)体内实验:将小鼠随机分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组及藁本内酯高剂量+pcDNA-NC(RhoA阴性对照)组、藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA(RhoA过表达)组。除空白对照组,其他各组小鼠采用LPS诱导法构建急性肾损伤(AKI)模型。干预结束后,检测小鼠血清中尿素氮(BUN)和肌酐(Cr)水平,高碘酸-希夫(PAS)染色法观察小鼠肾脏组织的病理变化,Western Blot法检测肾脏组织中RhoA、Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)蛋白的表达。(2)体外实验:将培养的小鼠足细胞MPC5分为空白对照组,LPS诱导组,藁本内酯低、高剂量组,藁本内酯高剂量+pcDNA-NC组,藁本内酯高剂量+pcDNA-RhoA组,细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测足细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡,鬼笔环肽染色法分析细胞骨架,Western Blot法检测细胞RhoA、ROCK蛋白的表达。【结果】与空白对照组比较,LPS诱导组小鼠血清中BUN和Cr的水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK蛋白表达水平升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组小鼠血清中BUN和Cr水平、肾小管损伤评分、RhoA和ROCK表达水平降低(P<0.05)。与空白对照组比较,LPS诱导组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达降低(P<0.05),凋亡率升高(P<0.05);与LPS诱导组比较,藁本内酯低、高剂量组MPC5细胞增殖活性、F-肌动蛋白荧光强度、RhoA和ROCK的表达升高(P<0.05),凋亡率降低(P<0.05)。利用过表达RhoA进行回补实验发现,RhoA过表达逆转了藁本内酯对LPS诱导小鼠肾组织和足细胞损伤的缓解作用(P<0.01)。【结论】藁本内酯可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路改善LPS诱导小鼠肾足细胞损伤。

水蛭素调节RhoA/ROCK信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响

目的:探讨水蛭素(HRD)调节Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对脑梗死大鼠神经元细胞凋亡和炎症反应的影响。方法:将SD大鼠分为Ct组、Model组、低剂量HRD组(HRD-L组,13.33 mg/kg)、高剂量HRD组(HRD-H组,26.66 mg/kg)、阳性对照尼莫地平组(NMDP组,40 mg/kg)、U-46619(RhoA激动剂,0.03 mg/kg)组、HRD-H+U-46619组(26.66 mg/kg+0.03 mg/kg),每组24只。除Ct组外,其他组大鼠均利用改良线栓法构建脑梗死模型,Ct组大鼠仅暴露血管,不进行切口和插线栓。建模成功1 h后,进行给药处理。给药1次/d,持续4周。Zea-Longa法评估大鼠神经功能;干湿重法检测大鼠脑组织含水量;2,3,5-三苯基四唑氯化物(TTC)染色测定大鼠脑梗死体积;TUNEL染色检测大鼠海马CA1区神经元凋亡;ELISA检测大鼠海马组织中TNF-α、IL-1β、IL-6水平;Western blot检测大鼠海马组织中裂解的天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Cleaved-Caspase-3)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达。结果:与Ct组比较,Model组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05);与Model组比较,HRD-L组、HRD-H组、NMDP组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达降低,而U-46619组对应指标变化呈相反趋势(P<0.05);与HRD-H组比较,HRD-H+U-46619组大鼠神经功能评分、脑组织含水量、脑梗死体积百分比、神经元凋亡率、TNF-α、IL-1β、IL-6水平、Cleaved-Caspase-3、Bax、RhoA、ROCK1、ROCK2蛋白表达升高(P<0.05)。结论:HRD可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路抑制脑梗死大鼠神经元凋亡及炎症反应。

飞燕草素调控RhoA/ROCK信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响

目的:探讨飞燕草素调控Ras同源基因家族成员A(RhoA)/Rho相关卷曲螺旋形成蛋白激酶(ROCK)信号通路对结肠癌细胞生物学行为及血管生成拟态形成的影响。方法:将人结肠癌细胞SW620随机分为对照组、飞燕草素低浓度组(含45μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素中浓度组(含90μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度组(含180μmol/L飞燕草素培养基培养)、飞燕草素高浓度+RhoA过表达组(转染RhoA过表达质粒+含180μmol/L飞燕草素培养基培养)。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法、Transwell及划痕实验分别检测SW620细胞增殖、侵袭及迁移能力。采用流式细胞术检测SW620细胞凋亡情况。血管生成实验检测SW620细胞血管生成拟态形成情况。采用RT-qPCR检测SW620细胞RhoA、ROCK mRNA表达。采用Western blot检测SW620细胞RhoA、ROCK、血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达。结果:与对照组比较,飞燕草素低、中、高浓度组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平呈浓度依赖性降低,凋亡率呈浓度依赖性升高(均P<0.05)。与飞燕草素高浓度组比较,飞燕草素高浓度+RhoA过表达组SW620细胞存活率、侵袭细胞数、迁移率、血管生成拟态管状结构数、RhoA和ROCK mRNA及蛋白表达水平、VEGF蛋白表达水平升高,凋亡率降低(均P<0.05)。结论:飞燕草素可能通过抑制RhoA/ROCK信号通路减弱结肠癌细胞恶性生物学行为及血管生成拟态形成,并促进细胞凋亡。

中药及雷氏大疣蛛毒干预小鼠皮下移植肝肿瘤细胞后RhoA/ROCK信号通路蛋白表达的变化

目的探讨Rhoa/Rock信号通路相关细胞因子在昆明小鼠H22皮下移植肝肿瘤中的差异表达和机制。方法以昆明小鼠颈部皮下移植H22肝肿瘤细胞建立肿瘤模型,采用雷氏大疣蛛毒及抗癌中药作为干预手段,将小鼠随机均分为模型对照(M)组,雷氏大疣蛛毒素(R)组和抗癌中药(A)组,每组10只。测量肿瘤体积并绘制肿瘤生长曲线。6周后禁食过夜,进行肿瘤组织取材。做病理切片,观察肿瘤细胞形态结构;检测肿瘤组织中RhoA/ROCK信号通路及相关细胞因子蛋白水平的差异表达。结果通过观察肿瘤的生长速度发现,在三组中,雷氏大疣蛛毒素组生长速度最慢。肿瘤细胞形态结构显示模型对照组小鼠肿瘤细胞排列紧密、规整。雷氏大疣蛛毒素小鼠:细胞排列稀疏、片状空泡样变性、坏死。抗癌中药组:肿瘤细胞排列松散、出现坏死区。抗癌中药组小鼠肿瘤组织p21阳性表达均高于模型非干预组,而RhoA、ROCK阳性表达较模型组低(P<0.01)。结论本研究发现雷氏大疣蛛毒及中药通过有效改变RhoA/ROCK信号通路及相关细胞因子的表达水平,从而抑制或减慢肝肿瘤增殖与侵袭速度。

RhoA-ROCK信号通路介导缺氧所致乳腺癌细胞肌动蛋白细胞骨架重构

目的:探讨缺氧对乳腺癌细胞(MDA-MB-435细胞)肌动蛋白细胞骨架重构和细胞形态改变与RhoA-ROCK信号通路的关系。方法:对体外培养的MDA-MB-435细胞进行缺氧16h处理,或在缺氧前用ROCK的特异性抑制剂Y-2763(210μmol/L)预处理细胞1h,再进行缺氧处理。用共聚焦激光扫描显微镜研究缺氧或使用Y-27632对MDA-MB-435细胞肌动蛋白细胞骨架重构的影响和细胞形态的改变。结果:乳腺癌细胞经16h缺氧处理,肌动蛋白细胞骨架发生解聚,应力纤维的排列和分布以及细胞形态明显改变;事先使用Y-27632再进行缺氧处理,可防止缺氧所致乳腺癌细胞内肌动蛋白细胞骨架解聚,同时应力纤维在细胞内排列和分布恢复正常。结论:RhoA-ROCK信号通路可能参与缺氧所致乳腺癌细胞内肌动蛋白细胞骨架的重构和细胞形态的改变。

OSBPL2介导RhoA/ROCK2信号通路调控听觉细胞肌动蛋白细胞骨架

目的:探索氧化固醇结合蛋白样蛋白2(oxysterol binding protein-like 2,OSBPL2)对听觉细胞肌动蛋白骨架形态和功能的影响及其相关分子机制。方法:采用OSBPL2基因敲除(Osbpl2-KO)HEI-OC1细胞探讨OSBPL2缺陷对听觉细胞肌动蛋白细胞骨架形态和功能的影响;扫描电镜观察Osbpl2-KO小鼠毛细胞静纤毛形态;Western blot实验检测HEI-OC1细胞和耳蜗内Rho/ROCK信号通路关键效应因子Rho激酶2(Rho-associated coiled-coil-containing protein kinase 2,ROCK2)、Lim激酶1(LIM domain kinase 1,LIMK1)、肌动蛋白解聚因子/丝切蛋白1(actin depolymerizing factor/cofilin 1,ADF/CFL-1)的表达水平。结果:Osbpl2-KO HEI-OC1细胞微丝骨架中纤维肌动蛋白(F-actin)的分布明显减少,细胞外周微刺突和丝状伪足明显减少,细胞迁移能力明显减弱;扫描电镜下观察发现Osbpl2敲除导致小鼠耳蜗内毛细胞静纤毛变短且排列紊乱;Western blot检测结果表明,在HEI-OC1细胞和小鼠耳蜗中OSBPL2-KO均导致RhoA/ROCK2信号通路的抑制。结论:在听觉细胞中OSBPL2介导的RhoA/ROCK2信号通路在维持肌动蛋白细胞骨架形态和功能的过程中发挥重要的调控作用。

水蛭素抑制RhoA/Rho激酶信号通路对慢性阻塞性肺疾病大鼠炎症反应和纤维化的影响

目的 探讨水蛭素抑制RhoA/Rho激酶(ROCK)信号通路对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠炎症反应和纤维化的影响。方法 2020年1—6月,将52只清洁级SD大鼠随机数字表法分为造模组(42只)和对照组(10只)。造模组大鼠通过气管内滴注脂多糖(LPS)溶液建立COPD模型,建模后的大鼠随机数字表法分为模型组、水蛭素组(50 U/kg)、ROCK激活剂组[溶血磷脂酸(LPA,40μg/kg)组、水蛭素+LPA组(50 U/kg水蛭素+40μg/kg LPA)],10只/组。药物组和激活剂组分别按照相应剂量进行干预;其余各组给予生理盐水干预。干预结束后,检测各组大鼠肺功能指标-呼气峰值流速(PEF)及0.3秒用力呼气容积(FEV0.3)、用力肺活量比值(FVC);颈总动脉取血,检测血清中炎性因子指标[白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)]水平;分离肺组织,观察肺组织形态学变化、肺纤维化程度以及RhoA/ROCK信号通路蛋白表达情况。结果 对照组大鼠无肺组织损伤;与对照组PEF(11.21±1.12)V/mL,FEV0.3(31.68±3.24)mL/s,FVC(8.56±0.85)V/mL,IL-1β(65.78±6.66)ng/L,TNF-α(100.32±10.02)ng/L相比,模型组大鼠肺组织损伤及纤维化较为严重,PEF(7.41±0.71)V/mL、FEV0.3(22.42±2.21)mL/s、FVC(4.61±0.46)V/mL较显著降低(P<0.05),而IL-1β(158.63±15.89)ng/L、TNF-α(545.37±54.56)ng/L显著增加,RhoA、Rho激酶1(ROCK1)蛋白表达也增加(P<0.05);与模型组相比,经水蛭素组大鼠肺组织损伤及纤维化程度得到改善,PEF(5.34±0.53)V/mL、FEV0.3(16.15±1.62)mL/s、FVC(8.21±0.82)V/mL较模型组显著增加(P<0.05),而IL-1β(68.72±6.88)ng/L、TNF-α(115.35±11.55)ng/L显著降低,RhoA、ROCK1蛋白表达均显著降低(P<0.05);LPA可减弱水蛭素对COPD大鼠炎症反应和肺纤维化的改善作用(P<0.05)。结论 水蛭素可以降低炎症细胞浸润,改善肺组织损伤和肺纤维化,可能与抑制RhoA/ROCK信号通路有关。

杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化作用研究

目的:分析杜仲醇提取物通过RhoA/ROCK信号通路调控骨质疏松症大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)成骨分化中的影响。方法:选取实验用纯系大鼠50只,随机数字表法分成5组:正常组(10只)、模型组(10只)、杜仲低剂量组(10只)、杜仲中剂量组(10只)与杜仲高剂量组(10只),模型组与杜仲低、中、高剂量组制备OP大鼠模型,杜仲低、中、高剂量组大鼠分别使用50、100、200 mg/kg杜仲醇提取物灌胃,正常组、模型组大鼠5 mL/kg生理盐水灌胃,末次给药后断颈处死大鼠,经过BMSCs培养并察看大鼠细胞成长及矿化状况,RT-PCR检测大鼠软骨细胞内ROCK1、RhoA表达状况及BMSCs成骨诱导后骨桥蛋白(OPN)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)mRNA表达。结果:模型组、杜仲低剂量组大鼠细胞矿化率较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组大鼠细胞矿化率较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、杜仲低剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中剂量组、杜仲高剂量组大鼠ROCK1、RhoA mRNA表达量较模型组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05);模型组、杜仲低剂量组OPN、Runx2及OCN mRNA表达量较正常组显著降低,杜仲中、高剂量组OPN、Run×2及OCN mRNA表达量较模型组、杜仲低剂量组显著升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:杜仲醇提取物可提升BMSCs内RhoA/ROCK信号路径ROCK1、RhoA mRNA表达量,促进成骨分化和BMSCs增殖,但其具体机制仍需行更深入研究。

RhoA/ROCK信号通路与PM2.5相关疾病的研究进展

PM2.5沉积在肺部,会导致不可逆的肺间质纤维化,目前尚无有效救治手段。RhoA/ROCK信号通路是调控细胞增殖和组织分化的重要信号通路,与多种细胞功能密切相关。已有研究表面,RhoA/ROCK信号通路的激活或表达上调,与PM2.5相关疾病的发生发展密切相关,且ROCK抑制剂能显著缓解PM2.5相关疾病。该文就RhoA/ROCK信号通路与PM2.5相关疾病的关系进行综述,以期梳理RhoA/ROCK信号通路在PM2.5相关疾病中的作用机制,为PM2.5相关疾病的干预治疗提供理论依据,并为ROCK抑制剂的临床应用奠定基础。