干细胞标志物SALL4在宫颈癌中的表达研究

目的研究SALL4基因在宫颈癌组织中的表达情况及其临床意义。方法利用RT-PCR和免疫组化方法检测56例宫颈癌组织和35例正常宫颈组织中SALL4的表达,并分析SALL4在宫颈癌中的表达与临床病理特征的关系。结果宫颈癌组织中SALL4mRNA表达水平(2.56±0.22)高于正常宫颈组织(0.38±0.03),二者比较差异有统计学意义(t=58.1,P<0.01);SALL4蛋白在宫颈癌组织中阳性表达率(80.4%,45/56)高于宫颈正常组织(11.4%,4/35),二者比较差异有统计学意义(χ2=41.177,P<0.01)。宫颈癌组织中SALL4的阳性表达与肿瘤分化状态相关,中、高分化组低于低分化组(χ2=4.226,P=0.039),与年龄、国际妇产科学联盟(FIGO)分期、肿瘤大小、病理类型、淋巴结是否转移无关(χ2=0.004、3.403、1.223、0.827、0.011,P>0.05)。结论 SALL4在宫颈癌组织中高表达,与宫颈癌的分化相关,SALL4的表达可能对宫颈癌的发生发展有重要作用。

SALL4及BMI-1在急性白血病中的表达

本研究旨在探讨SALL4及BMI-1基因在急性白血病患者中的表达及其临床意义。运用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测62例急性白血病患者和10例对照者(非恶性血液病患者)骨髓细胞中SALL4及BMI-1的mRNA的表达水平。结果表明:①SALL4mRNA在除M3及T-ALL外的急性白血病中均高表达,在髓系白血病中表达显著高于B淋巴细胞白血病(p=0.022,<0.05);在对照者中9例不表达,1例低表达;②SALL4mRNA在初治AL中表达较对照组明显增高,完全缓解组的表达明显下降,与初治组有显著差异(p<0.05);复发组的表达也明显增高,且略高于初治组患者(p=0.414);③BMI-1除在M3型中也高表达外与SALL4的表达规律一致,两者表达呈显著正相关(r=0.684,p<0.01)。结论:SALL4及BMI-1在急性白血病中异常高表达,影响白血病的发生和发展,它可作为急性白血病的发病、复发及预后判断的可能指标。

芹菜素对U937细胞增殖凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨芹菜素对人U937细胞株增殖和凋亡,以及对该细胞株SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因c-Myc和CCND1表达的影响。方法以不同浓度芹菜素处理对数生长期的U937细胞,倒置显微镜观察细胞形态;CCK-8法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞周期和凋亡;实时荧光定量PCR检测SALL4、c-Myc、和CCND1 mRNA表达水平;Western blot检测SALL4、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,芹菜素处理组细胞碎片增多;细胞增殖受抑制,呈时间和剂量依赖性(P<0.05);G2/M期细胞比例增加(P<0.05);凋亡率增加(P<0.05)。芹菜素处理36 h后,U937细胞的SALL4、c-Myc、和CCND1 mRNA表达下调,SALL4和Bcl-2蛋白表达降低,Caspase-3蛋白表达增加,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论芹菜素对U937细胞有抑制增殖诱导凋亡的作用,其机制可能与下调SALL4和Bcl-2,活化Caspase-3,阻断Wnt/β-catenin信号通路有关。

SALL4在肝癌中的表达及其对预后的影响

目的 检测人类婆罗双树样基因4（SALL4）在肝癌中的表达情况,探讨SALL4表达与原发性肝细胞癌（HCC）患者预后的相关性。方法 应用免疫组织化学法检测60例石蜡HCC标本及其中32例癌旁组织标本SALL4蛋白的表达,分析其与HCC患者临床病理学资料及预后的关系;采用荧光定量RT-PCR、Western blot法,分别检测23例新鲜HCC及癌旁肝组织中SALL4mRNA和蛋白的相对含量。结果 HCC组织中SALL4蛋白的表达率（81.67%,49/60）显著高于癌旁组织（6.25%,2/32）,差异有统计学意义（χ~2=48.047,P〈0.01）;SALL4蛋白在HCC中的表达与甲胎蛋白水平有关（P〈0.05）;SALL4高表达和低表达组患者的平均生存时间分别为（26.20±2.37、34.05±1.26）个月,SALL4高表达组患者的1、3年生存率（75.9%、55.2%）显著低于SALL4低表达组1、3年生存率（95.0%、85.0%,χ~2=5.044,P〈0.05）。肝癌及癌旁组织的SALL4mRNA的相对量分别为14.80±8.62、0.17±0.13,两组比较差异有统计学意义（t=8.14,P〈0.01）。Western blot检测结果显示,SALL4蛋白在HCC中的相对量为0.354±0.103。癌旁组织中几乎不表达。结论 SALL4表达与肝癌患者预后密切相关,可作为肝癌患者判断预后的预测指标。

SALL4基因表达与急性髓细胞白血病细胞系KG1a耐药相关性研究

目的探讨SALL4基因与急性髓细胞白血病耐药的相关性。方法通过RNA干扰技术将表达SALL4干扰序列的质粒载体转染至急性髓细胞白血病细胞系KG1A中,建立抑制SALL4基因的表达体系。在此条件下,通过MTS细胞增殖检测法检测SALL4基因抑制前后对阿霉素和柔红霉素的耐药情况。结果实时荧光定量PCR结果显示,SALL4的干扰效率良好。在此干扰体系下,不同浓度化疗药物阿霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)作用时,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(62.80±1.64)%、(26.80±2.68)%、(18.00±2.00)%]显著低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(85.40±4.03)%、(56.80±5.06)%、(26.50±4.50)%],差异有统计学意义(t=-22.6、-30.4、-8.6,均P<0.05)。不同浓度化疗药物柔红霉素(0.1、0.5、1.0μg/mL)的作用下,SALL4基因抑制表达后的细胞相对增殖率[(42.00±1.87)%、(28.00±1.22)%、(21.60±2.51)%]也显著低于SALL4基因抑制表达前的细胞相对增殖率[(61.00±1.87)%、(40.20±2.68)%、(27.00±1.22)%],差异有统计学意义(t=-18.8、-12.2、-5.4,均P<0.05)。结论SALL4基因的表达是急性髓细胞白血病产生耐药的正性调节因素。

硼替佐米诱导TF-1细胞凋亡及其对SALL4基因表达的影响

目的:探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(Bortezomib)诱导人红系白血病细胞株TF-1凋亡的作用,及其对Sall4基因表达水平的影响。方法:(1)MTT法检测细胞增殖抑制率。(2)光学显微镜观察细胞的形态学改变。(3)电镜观察超微结构变化。(4)流式细胞仪检测Annexin V-FITC细胞凋亡率。(5)流式细胞仪分析细胞周期。(6)RT-PCR检测Sall4 mRNA的表达水平。结果:(1)硼替佐米呈时间和剂量依赖性抑制TF-1细胞生长,与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。24 h和48 h的药物半数抑制浓度(Halfmaximal inhibitory concentration of a substance,IC50)分别为52 nmol/L和27 nmol/L。(2)显微镜下观察细胞皱缩变小,细胞密度明显下降。(3)电镜下观察可见凋亡小体。(4)Annexin V-FITC检测显示随着硼替佐米作用浓度的增加,凋亡率增加,呈剂量依赖关系(P<0.05)。(5)流式细胞仪分析细胞周期,随着硼替佐米作用时间的增加,G2/M期细胞比例逐渐增高,而G0/G1和S期细胞比例则逐渐减少,呈时间依赖关系(P<0.05)。(6)RT-PCR结果示Sall4基因在TF-1细胞上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加,Sall4 mRNA与β-actin mRNA表达量的积分光密度比值(Integral optical density ratio,V/B)水平下降(P<0.05)。结论:硼替佐米能抑制TF-1细胞增殖,诱导其凋亡,呈时间-剂量依赖关系。Sall4基因在TF-1细胞株上高表达,并随着硼替佐米作用浓度和时间的增加表达水平下降,呈时间-剂量依赖关系。

口腔鳞状细胞癌中SALL4调控相关miRNAs的鉴定及其抑制肿瘤转移的机制

目的 探讨口腔鳞状细胞癌(OSCC)中人婆罗双树样基因4(SALL4)调控相关mi RNAs的鉴定及其抑制肿瘤转移的机制。方法 取对数期生长期的人OSCC Tca8113细胞构建负载mi RNAs前体序列的慢病毒重组体转染Tca8113细胞,将上、下调Tca8113细胞内mi RNA表达丰度的细胞设为上调组与下调组、单纯Tca8113细胞作为对照组;采用半定量逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western blot)方法检测各组细胞转染前后SALL4 m RNA和蛋白表达,采用双荧光素酶报告系统验证mi RNA对SALL4的靶向调控,并鉴定mi RNA-S,检测SALL4调控相关的mi RNA对Tca8113细胞侵袭、转移能力的影响。结果 上调组Tca8113细胞中SALL4 m RNA表达分别高于下调组和对照组,下调组低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);上调组和下调组Tca8113细胞SALL4蛋白水平差异无统计学意义(P>0.05),但均高于对照组,且差异均有统计学意义(P<0.05);双荧光素酶报告系统结果表明,经过鉴定的mi RNA为mi RNA-S;上调组和下调组Tca8113细胞干预后迁移及侵袭细胞数差异均无统计学意义(P>0.05),但均少于对照组,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论SALL4调控相关mi RNAs在人OSCC中呈低表达,能抑制肿瘤细胞的侵袭、转移,有望成为口腔鳞状细胞癌治疗新靶点。

SALL4基因在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变组织和血浆中表达的研究

目的：研究SALL4基因在宫颈癌、宫颈上皮内瘤变（cervical intraepithelial neoplasia,CIN）组织和血浆中的表达情况并探讨其意义。方法：采用实时定量PCR方法检测56例宫颈癌患者、120例CIN患者组织和血浆中SALL4 mRNA的表达,以35例正常宫颈及慢性宫颈炎组织和血浆作为对照,分析宫颈癌组织和血浆中SALL4 mRNA相对表达量的相关性。并用ELISA方法检测各组血浆中SALL4水平。结果：对照组、CINⅠ组、CINⅡ~Ⅲ组、宫颈癌组组织中SALL4 mRNA相对表达水平分别为（4.58±0.64）×10-4、（6.86±0.72）×10-4、（27.03±2.85）×10-4、（40.8±5.50）×10-4,血浆中SALL4 mRNA相对表达水平分别为（0.14±0.05）×10-4、（0.16±0.07）×10-4、（0.49±0.08）×10-4、（2.18±0.22）×10-4,血浆中SALL4的浓度分别为（237±45）μg/L、（256±59）μg/L、（713±62）μg/L、（1 135±107）μg/L,随着病变的逐步进展,SALL4的表达逐渐增强,其中SALL4在宫颈癌组中的表达显著增强,与其他各组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）.宫颈癌组组织和血浆中SALL4 mRNA的相对表达水平正相关（r=0.684,P〈0.01）。结论：SALL4基因在CIN、宫颈癌组织和血浆中表达上调,可能在宫颈癌发生、发展中起一定作用。

2个汉族Okihiro综合征家系的SALL4基因新移码变异

本研究收集2个汉族Okihiro综合征家系患者的临床表现,应用外显子组测序对2个家系的先证者进行检测,Sanger测序对家系成员进行基因型分析,以确定生物学发病机制,并为家系中的3个高危胎儿提供产前诊断。2个家系的患者表现出广泛的表型,尤其是家系1的先证者在胎儿期就发现超声异常(桡骨畸形、姿势异常、永存动脉干和室间隔缺损等心脏畸形),其余患者表现从严重表型(前臂严重缩短和变形、杜安异常、听力障碍),到不太明显的情况(仅有大鱼际发育不良、桡骨茎突较短小)。外显子组测序在2个家系的先证者中分别发现SALL4基因变异:c.844delC p(.Q282Kfs*8)和c.2210delG p(.G737Vfs*23),其中c.2210delG p(.G737Vfs*23)为新变异。家系验证发现患者成员均携带变异,正常成员中均未检测到。同时,3个高危胎儿中共检出1例正常基因型胎儿,2例携带杂合变异胎儿并终止妊娠。本研究通过外显子组测序和Sanger测序明确了2个Okihiro综合征家系的分子病理学原因,丰富了Okihiro综合征在围产期的临床表现和SALL4基因突变图谱,同时为3个高危胎儿提供产前诊断,有效降低生育患儿的风险。

SALL4基因在苦参碱诱导白血病THP-1细胞凋亡过程中的表达

目的探讨癌基因SALL4在苦参碱诱导人急性单核细胞白血病M5型THP-1细胞株凋亡过程中的表达及其意义。方法分别以1.0、1.5及2.0 g/L的苦参碱处理THP-1细胞,于24、48及72 h后,电镜观察细胞形态学改变;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;RT-PCR检测细胞SALL4基因mRNA的表达。结果经1.0 g/L苦参碱作用24 h的THP-1细胞呈不同程度的凋亡形态改变;与对照组相比,各浓度苦参碱组均能显著抑制THP-1细胞增殖及促进细胞凋亡,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05);各浓度苦参碱组SALL4基因mRNA的表达水平较对照组均显著下降,且呈浓度和时间依赖性(P<0.05)。结论 SALL4基因表达下降在苦参碱诱导白血病THP-1细胞凋亡过程中可能可能起重要作用。

硼替佐米诱导急性髓性白血病细胞凋亡及对SALL4基因表达的影响

目的探讨蛋白酶体抑制剂硼替佐米(bortezomib、Bor)诱导急性红白血病细胞株(TF1)和急性早幼粒白血病细胞株(NB4)凋亡及其对SALL4基因表达的影响。方法 MTT法检测细胞的增殖情况;流式细胞术检测细胞凋亡;免疫细胞化学检测SALL4蛋白表达;实时荧光定量PCR检测SALL4 RNA的表达变化;Western Blotting检测SALL4蛋白的表达情况。结果 MTT结果显示,硼替佐米能够抑制两种细胞的增殖,呈时间和计量依赖性,TF1细胞和NB4细胞48 h IC50分别为(29.15±0.55)和(30.55±0.74)nmol.L-1;流式细胞术结果显示,细胞凋亡率随着硼替佐米浓度的增加而增加,呈剂量依赖性。免疫细胞化学显示两种细胞均表达SALL4蛋白,定位于细胞核;实时荧光定量PCR结果表明,经不同浓度Bor(10,30,50 nmol.L-1)处理24 h后,两种细胞的SALL4 RNA均出现了不同程度的下调,50 nmol.L-1 Bor作用后,SALL4基因表达下降为对照组的45.11%(TF1)和69.77%(NB4),差异均具有统计学意义(P<0.05);Western Blotting结果表明,Bor能够抑制两种细胞中SALL4B蛋白的表达,具有时间剂量依赖性。结论硼替佐米能够抑制TF1、NB4细胞的增殖并促进细胞凋亡,同时抑制SALL4基因表达。

SALL4基因在恶性血液肿瘤中的表达

目的分析不同类型恶性血液肿瘤患者体内SALL4基因的表达特点。方法以FQ-PCR测定32例恶性血液肿瘤患者和11例正常对照的单个核细胞上SALL4mRNA表达。结果急性淋巴细胞白血病(ALL)患者SALL4mRNA表达量为0.1055,其中4例T-ALL均为0.0000。非霍奇金淋巴瘤(NHL)患者SALL4 mRNA表达量为0.0965,且阳性表达均为B系淋巴瘤,T系淋巴瘤均未检测出SALL4mRNA。8例多发性骨髓瘤(MM)患者及11例正常对照者个别标本表达SALL4mRNA弱阳性,其表达量分别为0.0000和0.0000。ALL和NHL之间SALL4 mRNA的表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。ALL和NHL组与MM和对照组间SALL4mRNA的表达差异存在统计学差异(P<0.05),对照组与MM组组间无统计学意义(P>0.05)。结论 SALL4在部分恶性血液肿瘤的发生过程中可能起着十分重要的作用。

SALL4基因在恶性血液病中的研究

SALL4与造血系统恶性肿瘤的发生有密切关系。深入研究SALL4基因及蛋白的功能，将有助于阐明白血病的发病机制，为治疗白血病提供新靶点。

猪sall4b基因的克隆及表达分析

sall4基因是sall基因家族的一个成员,在胚胎发育、器官形成和干细胞多能性的维持以及重建中都起到重要作用,有sall4a和sall4b两种剪切突变体类型。目前猪的sall4基因序列尚未获得。鉴于其在多能性细胞调控中的作用,对猪的sall4基因进行了克隆测序,并对其在各组织及胚胎中的表达进行了初步研究。通过5和3 RACE克隆得到猪sall4基因cDNA全长序列(2 372 bp),序列分析证明此基因编码的蛋白结构更接近于小鼠和人Sall4B亚型,同源性可达70%～80%,而与其他物种的Sall4A相比则缺少一段含锌指结构域的片段,同源性降至30%～55%。Real-time PCR证明猪sall4b基因广泛表达于猪的各种器官,其中除卵巢组织呈高量表达之外,脾、肺、心和睾丸表达量也相对较高;在早期胚胎发育过程中除4-细胞阶段相对表达量较低,其他阶段呈高量表达。免疫荧光跟踪Sall4在猪早期胚胎中的表达情况发现Sall4在着床前胚胎中全程表达并定位于细胞核中,在囊胚阶段基因表达趋向于定位在内细胞团中。表达分析证明sall4b基因与多能性紧密相关,预示着猪sall4b基因将可能作为新的重编程因子用于诱导猪多能干细胞的体系中。

硼替佐米对急性髓性白血病细胞凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的探讨硼替佐米(Bortezomi,Bor)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株和急性红白血病TF1细胞株增殖、凋亡及SALL4基因和Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因C-myc、CCDN1表达的影响。方法分别用10、30、50 nmol/L的Bor处理NB4和TF1细胞12、24、48 h,并设对照组(不加Bor)。采用MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞凋亡率;RT-PCR和荧光定量PCR法检测细胞中SALL4、C-myc和CCDN1基因的表达。结果 Bor可抑制两种细胞的增殖,且呈时间和剂量依赖性,NB4和TF1细胞经Bor处理48 h的IC50值分别为23.97和25.36 nmol/L。Bor可诱导两种细胞凋亡,且呈剂量依赖性,经30和50 nmol/L Bor处理24 h的NB4细胞的凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05);经50 nmol/L Bor处理24 h的TF1细胞的凋亡率与对照组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。Bor可显著抑制两种细胞中SALL4基因及C-myc、CCDN1基因的表达。经50 nmol/L Bor作用24 h后,两种细胞中3种基因的表达与对照组相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。SALL4基因与C-myc和CCDN1基因的表达明显相关(rs值分别为0.857和0.929,P均<0.01)。结论 SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因C-myc和CCDN1基因表达的抑制在Bor诱导NB4和TF1细胞凋亡的过程可能起重要作用。

SALL4对白血病HL-60细胞放射敏感性影响研究

目的探讨下调SALL4对白血病细胞放射敏感性影响,为提高白血病患者放射敏感性提供新思路。方法人急性髓系白血病细胞株HL-60感染shRNA SALL4和shRNA control慢病毒记为Lv-shSALL4组和Lv-shNC组,用RT-PCR和蛋白印迹法检测细胞中SALL4水平,同时取感染后的细胞给予8 Gy剂量照射处理记为Lv-shSALL4+放射组、Lv-shNC+放射组,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白印迹法检测细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平。取Lv-shSALL4组和Lv-shNC组细胞,给予0、2、4、6、8 Gy照射,细胞克隆形成实验测定放射增敏比。结果Lv-shSALL4组细胞中SALL4水平低于Lv-shNC组(P<0.05)。细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高,与Lv-shNC组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。Lv-shSALL4+放射组细胞增殖能力降低,细胞凋亡率升高,细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9、Bax蛋白水平升高(P<0.05)。Lv-shSALL4组细胞放射增敏比为1.323。结论下调SALL4增加白血病细胞放射敏感性,抑制白血病细胞增殖并诱导凋亡。

苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响

目的探讨苦参碱对人急性红白血病细胞株TF-1 SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因表达的影响。方法用不同浓度的苦参碱(0.5、1.0、2.0 g/L)处理TF-1细胞,另设对照组(不加苦参碱)。苦参碱作用48 h后,采用实时荧光定量PCR法检测各组TF-1细胞中SALL4基因及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的表达水平,并分析SALL4基因与β-catenin、C-myc及Cyclin DI表达的相关性;Western blot法检测各组TF-1细胞中SALL4蛋白的表达水平。结果经不同浓度苦参碱处理48 h后,TF-1细胞中SALL4、β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达水平及SALL4蛋白的表达水平与对照组相比,均明显下降,且呈浓度依赖性(P<0.05);SALL4基因与β-catenin、C-myc、Cyclin DI基因的表达明显相关(r s值分别为0.912、0.818和0.832,P均<0.01)。结论苦参碱对TF-1细胞中SALL4基因和蛋白表达及Wnt/β-catenin信号通路下游靶基因β-catenin、C-myc、Cyclin DI的抑制可能在抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡过程中起重要作用。

SALL4基因在宫颈癌组织中的表达及意义

目的探讨SALL4基因在宫颈癌组织中的表达及意义。方法收集31例宫颈癌组织和17例正常宫颈组织,用RT-PCR检测SALL4mRNA的表达,用Western blot在蛋白水平上进行验证。分析SALL4在宫颈癌中的表达水平与临床病理因素的相关性。结果宫颈癌组织中SALL4表达高于正常宫颈组织(P<0.01);Western blot在蛋白水平上证实了这一点。宫颈癌组织中SALL4的表达与肿瘤分化状态密切相关(P<0.05),与年龄、FIGO分期、肿瘤大小、病理类型和淋巴结是否转移无明显关系。结论宫颈癌组织中SALL4mRNA的表达上调,且与宫颈癌的分化相关。SALL4的基因和蛋白水平检测可能成为宫颈癌诊断和预后监测的新指标。