猪SENP1基因克隆、生物信息学分析与表达研究

试验旨在对猪SUMO特异性蛋白酶1(sentrin-specific protease 1,SENP1)基因CDS区进行克隆和生物信息学分析,并探讨SENP1基因在乙脑病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)感染PK15细胞后的表达情况。根据GenBank中公布的猪SENP1基因预测序列(登录号:XM_013997974.2)设计特异性引物,通过RT-PCR和T/A克隆技术对猪SENP1基因CDS区序列进行克隆测序,并进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR分析猪SENP1基因在JEV感染PK15细胞不同时间点(0、12、24、36、48 h)的表达情况。结果显示,猪SENP1基因CDS序列全长2034 bp,共编码677个氨基酸。序列比对和系统进化树分析结果表明,猪SENP1蛋白序列和山羊、犬、人、牛的相似性分别为94.8%、94.2%、93.9%和93.8%,说明在这些物种中SENP1的保守性较强;猪与犬的SENP1分子亲缘关系较近。生物信息学分析结果显示,猪SENP1蛋白相对分子质量为76825.76,等电点为8.53,体外半衰期为30 h,不稳定系数为53.59,总平均亲水指数为-0.622。SENP1蛋白不含信号肽序列,无跨膜结构域。二级结构分析结果显示,SENP1蛋白中α-螺旋、无规则卷曲、延伸链和β-转角分别占31.31%、46.68%、16.25%和5.76%。三级结构分析结果显示,猪SENP1蛋白中存在8个α-螺旋区和7个β-转角区。实时荧光定量PCR结果显示,猪SENP1基因在JEV感染的PK15细胞中呈现上调表达趋势,其中在感染后48 h SENP1基因表达量显著高于对照组(P<0.05)。本试验结果为后续深入研究SENP1基因功能提供了参考。

miR-145调控靶基因SENP1对前列腺癌骨转移PC-3细胞的作用

背景：前期的研究表明，miR-145在前列腺癌骨转移组织中低表达，并与肿瘤细胞增殖和侵袭相关，SENP1一直被认为是一个重要的癌基因，在前列腺癌中高表达。目的：观察miR-145调控靶基因SENPl对前列腺癌骨转移PC-3细胞的作用。方法：荧光素酶报告基因和Westernblot实验验证SENPl是否是miR-145的靶基因。通过转染，实验分为高表达miR-145组，高表达SENPl组，高表达miR-145＋SENPl组和空白对照组。结果与结论：荧光素酶报告基金和Westernblot实验证实SENPl是miR-145靶基因。外源表达miR-145能显著下调SENPl表达水平，并抑制PC．3细胞的增殖、黏附、侵袭能力和VEGF分泌能力，且这种miR-145诱导的PC-3细胞功能缺陷能被SENP1过表达修复。结果表明，miR-145高表达能通过靶向调控SENPl而抑制前列腺癌PC-3细胞的骨转移。