扁蒴藤素调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态的影响

目的:探讨扁蒴藤素(Pris)调节Shh/Gli1信号通路对宫颈癌HeLa细胞增殖、凋亡和血管生成拟态(VM)的影响及其机制。方法:采用MTT法检测不同浓度Pris对宫颈癌HeLa细胞增殖的抑制作用,以选取合适的干预浓度。将HeLa细胞分为对照组、环巴胺组、Pris组、Pris+pc-NC组和Pris+pc-Shh组。采用MTT法、EdU法检测各组细胞的增殖能力,Transwell小室法、流式细胞术检测各组细胞的迁移及侵袭能力和细胞凋亡率,体外血管生成实验观察VM形成情况,qPCR法检测各组细胞中Shh和Gli1 mRNA表达水平,WB法检测细胞中血管内皮生长因子A(VEGF-A)、血管内皮钙黏素(VE-cadherin)、Ki-67、caspase-3及与Shh/Gli1信号通路相关蛋白表达水平。结果:0.25~2.5μmol/L的Pris对HeLa细胞增殖均有显著抑制作用,选择1.5μmol/L的Pris进行后续实验。对照组细胞形成良好的管腔结构,与对照组相比,环巴胺组、Pris组和Pris+pc-NC组HeLa细胞管腔结构被明显破坏,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数目、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著降低(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著升高(均P<0.05);环巴胺组与Pris组HeLa细胞各项检测指标比较差异均无统计学意义(均P>0.05);与Pris+pc-NC组相比,Pris+pc-Shh组细胞管腔结构形成明显改善,细胞增殖活力和增殖率、迁移及侵袭细胞数、Shh和Gli1 mRNA、VEGF-A、VE-cadherin、Ki-67、Shh、Gli1蛋白表达均显著升高(均P<0.05),细胞凋亡率和caspase-3表达均显著降低(均P<0.05)。结论:Pris抑制宫颈癌HeLa细胞的增殖、迁移与侵袭和VM的形成并促进细胞凋亡,可能与阻断Shh/Gli1信号通路有关。

针刺调节Shh/Ptch1信号通路对帕金森认知障碍模型大鼠的神经保护作用研究

目的:探讨针刺治疗是否可通过调节Shh/Ptch1信号通路进而改善帕金森(PD)大鼠认知功能。方法:将SD大鼠随机分为对照组、模型组、针刺组、针刺+环巴胺(Shh抑制剂)组、西药组(盐酸多奈哌齐)及针刺+西药组。采用Morris水迷宫检测空间学习记忆能力;ELISA法检测大鼠脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素(IL-6、IL-10及IL-1β)水平;商品化试剂盒检测脑组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)水平;HE染色观察大鼠海马组织形态变化;蛋白质印迹法检测大鼠海马组织活化半胱氨酸蛋白酶(Cleaved-caspase-3)、B淋巴细胞瘤(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、音猬因子(Shh)及补缀同源物1(Ptch1)蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组大鼠神经元有明显损伤,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著升高,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,针刺组、西药组和针刺+西药组大鼠神经元损伤显著减轻,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著降低,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著升高(P<0.05);与针刺组相比,针刺+环巴胺组大鼠神经元损伤显著加重,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著升高,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著降低(P<0.05);针刺组和西药组各检测指标差异均无统计学意义(P>0.05);与针刺组和西药组相比,针刺西药组大鼠神经元损伤显著减轻,Morris水迷宫潜伏期时间、海马组织中TNF-α、IL-6、IL-1β、MDA水平、Cleaved-caspase-3及Bax蛋白表达水平显著降低,滞留时间和穿越平台次数、IL-10水平、SOD、CAT活性、Bcl-2、Shh及Ptch1蛋白表达水平显著升高(P<0.05)。结论:针刺治疗可降低PD认知障碍大鼠炎症反应和氧化应激,减轻神经元损伤,进而改善其认知功能,可能是通过激活Shh/Ptch1信号通路实现的。

柚皮素激活SHH-GLI1信号通路对OGD/R诱导的神经元损伤的影响

目的探究柚皮素(NAR)对氧糖剥夺/复氧复糖(OGD/R)诱导神经元损伤的改善作用及机制。方法将大鼠皮层神经元分为正常组、OGD/R组、NAR组和NAR+环巴胺组,给予相应处理。CCK-8法测定神经元活性;试剂盒测定神经元活性氧(ROS)、8-羟脱氧鸟苷(OHdG)、丙二醛(MDA)水平;TUNEL染色观察神经元凋亡;Western印迹检测声波刺猬(SHH)-胶质瘤相关癌基因同源物(GLI)1通路及脑源性神经营养因子(BDNF)、c-AMP反应元件结合蛋白(CREB)水平;免疫荧光染色观察GLI1的核移位。结果CCK-8法分析显示,40 mg/L NAR为最佳作用浓度。相较于正常组,OGD/R组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量、SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于OGD/R组,NAR组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1、BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显增加(P<0.05);相较于NAR组,NAR+环巴胺组神经元ROS相对荧光强度、8-OHdG、MDA水平、TUNEL+神经元数量明显增加(P<0.05),BDNF、CREB蛋白及核/质GLI1水平明显降低(P<0.05),SHH、GLI1、Ptch1蛋白无明显变化(P>0.05)。结论NAR可以减轻OGD/R诱导的神经元氧化损伤,其作用机制与激活SHH-GLI1通路有关。

肉桂醛调节Shh/Gli1信号通路对幽门螺旋杆菌胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响

目的 探讨肉桂醛调节音猬因子(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对幽门螺旋杆菌(Hp)胃炎大鼠胃黏膜损伤的影响。方法 将大鼠随机分为对照组、模型组、肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组、肉桂醛高剂量+Shh激活剂Purmorphamine(PUR)组,每组18只。通过灌胃Hp的方法构建胃炎大鼠模型。建模成功后,肉桂醛低、中、高剂量组大鼠分别灌胃12.5 mg/kg、25 mg/kg、50 mg/kg肉桂醛,替普瑞酮组大鼠灌胃0.13 g/kg替普瑞酮,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠给予50 mg/kg肉桂醛灌胃和6.67 mg/kg PUR腹腔注射,每天给药1次,持续2周。HE染色检测大鼠胃黏膜组织病理变化;透射电镜观察大鼠胃黏膜细胞形态。将GES-1细胞分为vitro-对照组、vitro-模型组、vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组、vitro-肉桂醛高剂量+PUR组。除vitro-对照组外,其他组GES-1细胞均需被Hp感染,感染结束后,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组分别用5μmol/L、10μmol/L、20μmol/L肉桂醛处理24 h;vitro-替普瑞酮组用1μmol/L替普瑞酮处理24 h;vitro-肉桂醛高剂量+PUR组用20μmol/L肉桂醛和1μmol/L PUR共同处理24 h,CCK-8法检测GES-1细胞增殖抑制率;ELISA法检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞上清中白细胞介素1β (IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平;Western blot检测大鼠胃黏膜组织及GES-1细胞中Shh、Gli1蛋白表达。结果 与对照组比较,模型组大鼠胃黏膜组织病理损伤严重,胃黏膜表面上皮细胞固缩,细胞膜破损,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与模型组比较,肉桂醛低剂量组、肉桂醛中剂量组、肉桂醛高剂量组、替普瑞酮组大鼠胃黏膜组织病理损伤、胃黏膜表面上皮细胞结构及形态有所改善,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与肉桂醛高剂量组比较,肉桂醛高剂量+PUR组大鼠胃黏膜组织病理损伤加剧,胃黏膜表面上皮细胞结构及形态破环严重,IL-1β、TNF-α水平及Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。与vitro-对照组比较,vitro-模型组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05);与vitro-模型组比较,vitro-肉桂醛低剂量组、vitro-肉桂醛中剂量组、vitro-肉桂醛高剂量组、vitro-替普瑞酮组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达降低(P<0.05);与vitro-肉桂醛高剂量组比较,vitro-肉桂醛高剂量+PUR组GES-1细胞增殖抑制率、细胞上清中IL-1β、TNF-α水平及细胞中Shh、Gli1蛋白表达升高(P<0.05)。结论 肉桂醛可能通过抑制Shh/Gli1通路减轻Hp诱导的胃炎大鼠胃黏膜损伤。

鳜Shh基因分子特征和时空表达规律及其对肌肉生长的调控

研究从鳜(Siniperca chuatsi)基因组中获得Shh(Sonic hedgehog)基因序列,对该基因编码的蛋白质和同源进化特征进行了分析。鳜Shh基因的开放阅读框(ORF)为1242 bp,编码413个氨基酸,分子量为46.01 kD,等电点(pI)为6.57,脂溶系数为82.83,亲水性平均系数为−0.292,拥有一个跨膜区,被推定为亲水性膜结合蛋白。Shh蛋白具有两个结构域,即Hh-N和Hh-C结构域。鳜Shh蛋白与自身所属的鲈形目鱼类Shh蛋白同源性较高。通过实时荧光定量PCR技术检测了鳜Shh基因的时空表达水平。结果显示:Shh的表达量在神经胚期表达显著上调,并在胚胎发育中后阶段保持较高水平。Shh在鳜不同组织中存在一定的表达差异,在脑、肠道中表达量较高,而在红肌、白肌等组织中表达量相对较低。通过环巴胺(Cyclopamine)处理鳜胚胎来抑制Shh信号通路的实验表明,Shh信号通路被抑制后,Pax3、Pax7、Myomaker、生肌调节因子及肌球蛋白重、轻链等基因的表达均显著降低,推测Shh参与调控鳜肌细胞的早期分化和发育过程。研究将有助于从分子水平了解Shh信号调控鱼类发育的分子机理,为鱼类发育生物学以及健康养殖提供参考依据。

百事乐胶囊调控SHH/Gli1信号通路对抑郁模型大鼠海马神经再生的影响

目的 观察百事乐胶囊调控SHH/Gli1信号通路对抑郁模型大鼠海马神经再生的影响及作用机制。方法 32只SD大鼠随机分为空白组、模型组、氟西汀组(5.4 mg/kg)和百事乐胶囊组(2.88 g/kg),每组8只。采用慢性不可预见性温和应激加单笼饲养法建立抑郁大鼠模型,于造模同时给药,连续21 d。糖水偏好实验、旷场实验评价大鼠抑郁样行为,ELISA检测大鼠血清和海马组织脑源性神经营养因子(BDNF)含量,免疫荧光染色观察海马齿状回5-溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)、BrdU/双皮质素(DCX)、BrdU/神经元特异性核蛋白(NeuN)阳性细胞数,免疫荧光、Western blot检测大鼠海马组织SHH、Gli1及跨膜转导蛋白Smo、Ptch荧光强度和蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠糖水偏好度明显降低,水平和垂直运动次数明显减少(P<0.01),血清、海马组织BDNF含量明显下降(P<0.05),海马齿状回BrdU、BrdU/DCX、BrdU/NeuN阳性细胞数明显减少(P<0.01),海马组织SHH、Gli1、Smo、Ptch荧光强度及蛋白表达均明显降低(P<0.01,P<0.05);与模型组比较,氟西汀组和百事乐胶囊组大鼠糖水偏好度明显升高,水平和垂直活动次数显著增加(P<0.05,P<0.01),血清、海马组织BDNF含量明显上升(P<0.05,P<0.01),海马齿状回BrdU、BrdU/DCX、BrdU/NeuN阳性细胞数明显增加(P<0.01,P<0.05),海马组织SHH、Gli1、Smo、Ptch荧光强度和蛋白表达显著升高(P<0.01,P<0.05)。结论 百事乐胶囊可通过调控SHH/Gli1信号通路促进抑郁模型大鼠海马神经再生,进而发挥抗抑郁作用。

山姜素调节Shh/Gli1信号通路对缺血性脑卒中大鼠的神经保护作用研究

目的:探究山姜素调节Shh/Gli1信号通路对缺血性脑卒中(IS)大鼠的神经保护作用。方法:随机选择15只大鼠作为对照组,其余大鼠构建IS模型,造模成功的大鼠随机分为模型组、山姜素组(5 mg/kg)、Shh/Gli1信号通路抑制剂环巴胺组(15 mg/kg)、山姜素+环巴胺组(5 mg/kg山姜素+15 mg/kg环巴胺),每组15只,给药1次/d,连续2周,对照组和模型组给予等量生理盐水。Zea-Longa评分法评估神经功能;ELISA检测炎症因子水平;称量脑组织质量,计算脑组织含水量;TTC染色测定脑梗死体积;HE染色观察神经细胞损伤;TUNEL染色检测神经细胞凋亡;qRT-PCR、Western blot检测Shh和Gli1 mRNA和蛋白表达。结果:对照组海马组织无任何异常现象,模型组大鼠海马组织结构异常,细胞排列紊乱,神经细胞出现核固缩现象,模型组较对照组细胞损伤率、Zea-Longa评分、梗死体积、IL-1β、IL-6、TNF-α、脑组织含水量、细胞凋亡率均显著升高(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA和蛋白水平显著降低(P<0.05);与模型组相比,山姜素组细胞排列较为整齐,神经细胞核固缩现象改善,细胞损伤率、Zea-Longa评分、梗死体积、IL-1β、IL-6、TNF-α、脑组织含水量、细胞凋亡率均显著降低(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA和蛋白水平显著升高(P<0.05),环巴胺组以上指标趋势相反,环巴胺逆转了山姜素对IS大鼠的神经保护作用。结论:山姜素可能通过激活Shh/Gli1信号通路对IS大鼠起神经保护作用。

吴茱萸碱调节Shh/Gli1信号通路对弥漫性大B细胞淋巴瘤细胞利妥昔单抗耐药性的影响

目的:研究吴茱萸碱调节超音刺猬蛋白(Shh)/Gli家族锌指蛋白1(Gli1)信号通路对弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)细胞利妥昔单抗(RIT)耐药性的影响。方法:体外培养OCI-LY10细胞采用梯度加药法构建其RIT耐药细胞系OCI-LY10/RIT,均以0、1、5、10、20、30μmoL/L的吴茱萸碱处理,采用CCK-8法测定各组OCI-LY10及OCI-LY10/RIT细胞活力并筛选出吴茱萸碱最佳作用浓度。将OCI-LY10/RIT细胞随机分为对照组、RIT组、RIT+吴茱萸碱组、RIT+空载组、RIT+吴茱萸碱+Shh过表达组,分组处理后以实时荧光定量PCR和免疫印迹实验检测各组细胞Shh/Gli1通路相关mRNA和蛋白表达;以CCK-8法和Edu染色检测各组细胞增殖;以流式细胞实验检测各组细胞凋亡;以免疫印迹实验检测各组细胞凋亡蛋白(Cleaved Caspase-3、Bax)与耐药蛋白{多药耐药相关蛋白5(MRP5)、P-糖蛋白(P-gp)}表达。体外培养OCI-LY10/RIT细胞并随机分为对照组、吴茱萸碱组、空载组、吴茱萸碱+Shh过表达组,分组处理后以CCK-8法检测0、16、32、64、128、256、384μg/mL的RIT处理下各组OCI-LY10/RIT细胞存活率,算出其耐药指数。结果:与对照组相比,RIT+吴茱萸碱组细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3与Bax蛋白表达升高(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA与蛋白表达、存活率、Edu阳性率、MRP5与P-gp蛋白表达降低(P<0.05);RIT组、RIT+空载组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与RIT组相比,RIT+吴茱萸碱组细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3与Bax蛋白表达升高(P<0.05),Shh、Gli1 mR-NA与蛋白表达、存活率、Edu阳性率、MRP5与P-gp表达降低(P<0.05);RIT+空载组细胞各指标无明显变化(P>0.05)。与RIT+吴茱萸碱组相比,RIT+吴茱萸碱+Shh过表达组细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3与Bax蛋白表达降低(P<0.05),Shh、Gli1 mRNA与蛋白表达、存活率、Edu阳性率、MRP5与P-gp表达升高(P<0.05)。与对照组相比,吴茱萸碱组细胞耐药指数降低(P<0.05),空载组细胞耐药指数无明显变化(P>0.05);与吴茱萸碱组相比,吴茱萸碱+Shh过表达组细胞耐药指数升高(P<0.05)。结论:吴茱萸碱可下调Shh/Gli1通路相关蛋白表达,从而减轻DLBCL细胞的RIT耐药性,诱导RIT处理下的RIT耐药DLBCL细胞凋亡并抑制其增殖。

外源性Shh因子补充对骨质疏松症模型小鼠骨吸收和骨形成能力的影响

目的探讨外源性音猬(Sonic Hedgehog,Shh)因子补充对骨质疏松症模型小鼠骨吸收和骨形成能力的影响。方法取健康雌性小鼠48只,随机分为空白对照组、模型组、Shh组,建模和干预后最终分别入组16、8、7只。模型组、Shh组小鼠采取手术切除双侧卵巢构建骨质疏松症模型,Shh组小鼠尾静脉注射2μL Shh液,空白组及模型组尾静脉注射等体积生理盐水,三组均持续干预7 d。观察小鼠组织病理学,比较骨密度值、Shh基因水平、雌二醇(estradiol,E2)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨吸收指标[Ⅰ型胶原交联C-末端肽(C-telopeptide of typeⅠcollagen,CTX-Ⅰ)、抗酒石酸酸性磷酸酶5b(tartrate-resistant acid phosphatase 5b,TPACP5b)、骨钙素N端中分子片段(N-terminal mid-fragment of osteocalcin,N-MID)水平]、骨形成能力[骨保护素(osteoprotegerin,OPG)、骨钙素(bone gla protein,BGP)、骨特异性碱性磷酸酶(bone specific alkaline phosphatase,BALP)]及破骨细胞分化因子[核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-kappaB ligand,RANKL)]、自噬相关蛋白1(autophagy related protein 1,Beclin-1)、微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(microtubule associated-protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ)蛋白相对表达量。结果模型组见大量脂肪细胞增生,部分胞核消失或破碎或空骨陷窝;空白对照组髓腔脂肪细胞结构完整、大小及形态均匀;Shh组脂肪细胞形态基本正常、结构完整。空白对照组、Shh组、模型组Shh因子、骨密度值、E2、N-MID、BV/TV、Tb.Th、Tb.N依次明显降低,ALP、CTX-Ⅰ、TPACP5b、Tb.Sp依次明显增高,组间两两比较差异有统计学意义(P<0.05)。模型组OPG、BGP、BALP较空白对照组、Shh组明显低,Shh组也明显低于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。模型组RANKL、Beclin-1、LC3-Ⅱ蛋白相对表达量较空白对照组、Shh组明显高,Shh组也明显高于空白对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论外源性Shh因子的补充可减弱去势对小鼠骨密度、骨吸收和骨形成能力等的影响,有效调控RANKL、Beclin1、LC3-Ⅱ蛋白表达,促进骨质疏松症小鼠骨形态的恢复。

吴茱萸碱调节Shh/Gli1信号通路对膝骨关节炎大鼠软骨损伤的影响

目的探讨吴茱萸碱(Evo)对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨损伤的影响及其作用机制。方法将60只大鼠随机分为对照组、模型组、Evo低剂量组、Evo中剂量组、Evo高剂量组、激活剂(Shh/Gli1信号通路激活剂Purmorphamine)+Evo高剂量组,每组10只。构建大鼠KOA模型,并对各组给予相应药物干预。对各组大鼠进行行为学观察及Lequesne MG评分,苏木素伊红(HE)染色和番红O-固绿染色观察大鼠软骨组织病理变化及Mankin评分,酶联免疫吸附法(ELISA)检测白细胞介素(IL)-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平,dUTP缺口末端标记(TUNEL)法检测软骨细胞凋亡,免疫组织化学检测Ⅱ型胶原蛋白(CⅡ)、基质金属蛋白酶13(MMP13)蛋白表达,Western blotting检测Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白表达。结果与对照组相比,模型组大鼠出现活动障碍、软骨组织损伤严重,Lequesne MG评分、Mankin评分、IL-1β、IL-18、TNF-α水平、软骨细胞凋亡率、MMP13蛋白表达及Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白水平显著升高,CⅡ蛋白表达降低(P<0.05);与模型组相比,Evo低、中、高剂量组大鼠活动障碍、软骨组织受损减轻,Lequesne MG评分、Mankin评分、IL-1β、IL-18、TNF-α水平、软骨细胞凋亡率、MMP13蛋白表达及Shh、Smo、Ptch1、Gli1蛋白水平显著下降,CⅡ蛋白表达升高(P<0.05);Shh/Gli1信号通路激活剂逆转Evo高剂量对KOA大鼠软骨损伤的改善作用。结论Evo可能通过抑制Shh/Gli1信号通路减轻KOA大鼠炎症反应和软骨细胞凋亡,改善软骨损伤。

基于Shh途径分析山药提取物对老龄慢性萎缩性胃炎大鼠的干预作用

目的基于音猬因子(Shh)途径分析山药提取物对老龄慢性萎缩性胃炎大鼠的干预作用。方法选取12月龄的雄性SD老龄大鼠50只,随机分为空白对照组(A组)、慢性萎缩性胃炎模型组(B组)、低剂量山药提取物组(C组)、中剂量山药提取物组(D组)、高剂量山药提取物组(E组),每组10只。第2周至12周对B、C、D组进行造模,造模成功14 w时,给予B、C、D组山药提取物灌胃治疗,各组灌胃浓度依次为0.25、0.50、0.75 g/ml,剂量为10 ml/kg,连续灌胃5 w。A组不做处理,B组灌胃等体积生理盐水。第20周,收集、分析各组一氧化氮(NO)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)、胃分泌功能及微循环胃血流量、Shh通路蛋白表达。结果与A组相比,B组胃液分泌量、胃液酸度、胃蛋白酶活性明显降低(P<0.05);与B组相比,C、D、E组以上指标明显升高,且E组升高水平最优(P<0.05)。与A组相比,B组胃体部与幽门部血流量、胃血流量明显减少(P<0.05);与B组相比,C、D、E组以上指标明显增加,且E组增加水平最优(P<0.05);与A组相比,B组NO、MDA表达明显升高,SOD、GSH-Px表达明显降低(P<0.05);与B组相比,C、D、E组NO、MDA表达明显降低,SOD、GSH-Px表达明显升高(P<0.05)。与A组相比,B组Shh、蛋白质调控基因(Ptch)1、平滑受体蛋白(Smo)、神经胶质瘤相关癌基因同源蛋白(Gli)1蛋白表达明显降低,Gli2、Gli3蛋白表达明显升高(P<0.05);与B组相比,C、D、E组Shh、Ptch1、Smo、Gli1蛋白表达明显升高,Gli2、Gli3蛋白表达明显降低,且E组变化幅度最优(P<0.05)。结论山药提取物可通过重新激活抑制状态Shh信号通路,改善老龄慢性萎缩性大鼠的胃黏膜病理改变,改善大鼠胃微循环血流量及氧化应激反应,同时调节胃液、胃酸、胃蛋白的分泌,抑制病情进展。

隐丹参酮调节Shh/Gli1信号通路对急性心肌梗死大鼠心肌损伤的影响

目的:探讨隐丹参酮(CRY)调节Shh/Gli1信号通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌损伤的影响。方法:通过开胸及结扎左前降支建立AMI大鼠模型,并以仅开胸不结扎的大鼠为对照组,将AMI大鼠随机分为AMI组、不同剂量(5、15、45 mg/kg)的CRY组、CRY+环巴胺[Cyclopamine(20μg/kg)]组,各组按照相应剂量的药物进行干预,结束后检测左心室射血分数(LVEF)、左心室舒张末期内径(LVESD);ELISA检测心肌梗死指标-肌酸激酶同工酶(CK-MB)、N末端B型利钠肽前体(NT-pro-BNP)水平;TTC、HE、免疫组织化学、TUNEL染色法分别检测大鼠心肌梗死、组织病理学、血小板内皮细胞粘附分子(CD31)变化及细胞凋亡变化;Western blot检测心肌组织Shh/Gli1相关蛋白表达。结果:与对照组比较,AMI组LVESD、血清中NT-pro-BNP、CK-MB、心肌梗死面积、CD31表达、心肌细胞凋亡明显增加,LVEF、心肌组织中Shh、Gli1蛋白表达则降低(均P<0.05);与AMI组比较,加入不同剂量的CRY则降低了LVESD、血清中NT-pro-BNP、CK-MB、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡,提高了LVEF、心肌组织中CD31表达、Shh、Gli1蛋白表达,组间比较存在统计学差异(均P<0.05);与45 mg/kg CRY组比较,45 mg/kg CRY联合Cyclopamine则升高了LVESD、血清中NT-pro-BNP、CK-MB、心肌梗死面积、心肌细胞凋亡,降低了LVEF、心肌组织中CD31表达及Shh、Gli1蛋白表达(均P<0.05)。结论:CRY通过调节Shh/Gli1信号通路改善AMI大鼠心肌损伤。

基于SHH/GLI-1信号通路探讨齐墩果酸抑制结直肠癌小鼠移植瘤生长与炎症反应的作用机制

目的基于SHH/GLI-1信号通路探讨齐墩果酸(OA)对结直肠癌小鼠移植瘤生长与炎症反应的影响。方法选择SPF级6周龄雄性BALB/c裸鼠12只,采用皮下注射HT-29细胞构建结直肠癌移植瘤小鼠模型,随机分为对照组与干预组各6只。干预组按12.5 mg/(kg·d)予腹腔注射OA溶液,对照组按500μL/(kg·d)予腹腔注射生理盐水,给药6 d停止1 d,共干预16 d。干预期间每2 d测量小鼠体质量和肿瘤体积,干预结束后测量肿瘤重量;免疫组化法检测肿瘤组织增殖标志物Ki67、细胞周期相关蛋白[细胞周期素依赖性激酶抑制因子(p21)、周期蛋白依赖性激酶4(CDK4)、细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)]、细胞凋亡相关蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关X(Bax)、磷酸化-B淋巴细胞瘤-2死亡拮抗蛋白(p-Bad)、死亡因子(Fas)、死亡因子配体(FasL)]、炎症相关蛋白[环氧化酶-2(COX-2)、一氧化氮合酶(iNOS)]以及SHH/GLI-1信号通路相关蛋白[音猬因子(SHH)、补丁受体(PTCH)、光滑蛋白(SMO)、胶质瘤相关癌基因同源物1(GLI-1)]的表达;TUNEL法检测肿瘤细胞的凋亡情况;Bio plex检测2组小鼠血清炎症因子白介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达。结果2组不同时间段体质量比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,干预组干预7、9、11、13、15、17、19 d小鼠肿瘤体积均明显减小(P<0.05),干预后肿瘤重量明显降低(P<0.05)。与对照组比较,干预组肿瘤组织Ki67、CDK4、Cyclin D1、Bcl-2、COX-2、iNOS、SHH、PTCH、SMO、GLI-1和血清IL-1β、IL-6、TNF-α表达均明显降低(P<0.05),p21、Bax、p-Bad、Fas、FasL表达均明显升高(P<0.05);凋亡细胞比例明显增加(P<0.05)。结论OA可以抑制结直肠癌小鼠移植瘤的生长和炎症反应,可能与调控SHH/GLI-1信号通路相关。

左归降糖解郁方促进糖尿病并发抑郁症大鼠的海马齿状回神经干细胞的自我更新并激活Shh信号通路

目的研究左归降糖解郁方调节糖尿病并发抑郁症大鼠海马Shh信号通路,改善齿状回神经干细胞自我更新的机制。方法建立糖尿病并发抑郁症大鼠模型并随机分为5组,16只/组:模型组、阳性药(二甲双胍+氟西汀)组、左归降糖解郁方高、中、低剂量组;另设健康SD大鼠为正常组。其中,左归降糖解郁方高、中、低剂量组和阳性药组分别给予相应药物,对照组和模型组灌胃给予等体积蒸馏水。给药结束后,采用血糖试纸检测大鼠血糖,采用强迫游泳实验和水迷宫实验检测大鼠抑郁样行为和学习记忆功能,采用酶联免疫吸附法检测大鼠血清瘦素水平。采用双重免疫荧光法检测海马齿状回Nestin和Brdu蛋白表达;采用Western blot法检测海马神经干细胞自我更新标(P<0.01)志物及Shh信号蛋白的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血糖和瘦素水平显著升高(P<0.01),强迫游泳实验的不动时间显著延长(P<0.01),水迷宫实验中动物登台时间明显延长,寻台时间明显缩短,穿台次数明显减少(P<0.01);海马齿状回Nestin和Brdu表达显著减少(P<0.01),Cyclin D1、SOX2、Shh、Ptch1、Smo蛋白表达显著降低(P<0.01),Gli-3表达显著升高(P<0.01),细胞核内Gli-1蛋白表达显著减少(P<0.01)。与模型组比较,左归降糖解郁方高剂量可显著降低模型大鼠的血糖(P<0.01)和瘦素水平(P<0.05),缩短动物在强迫游泳实验中的不动时间(P<0.01)和在水迷宫实验中的登台时间(P<0.05),延长寻台时间并增加穿台次数(P<0.01)。同时,该方高剂量可显著增加齿状回Nestin和Brdu表达(P<0.01),增加海马Cyclin D1、SOX2、Shh、Ptch1、Smo蛋白表达(P<0.01),降低Gli-3表达(P<0.05),并增加Gli-1蛋白的核表达(P<0.01)。结论左归降糖解郁方可有效改善糖尿病并发抑郁症大鼠海马齿状回神经干细胞的自我更新能力,并激活干细胞Shh信号通路。

SHH与胃癌、EBV(+)胃癌患者临床病理特征和预后的相关性

目的探讨SHH蛋白表达在胃癌、EB病毒阳性[EBV(+)]胃癌及癌旁正常胃组织中表达及其与临床病理参数和预后的的相关性。方法免疫组化法检测SHH蛋白表达水平,分析其在胃癌、EB病毒阳性胃癌及癌旁正常组织芯片中的表达;原位杂交法检测胃癌组织芯片中EBV编码的小RNA(EBERs)。结果与正常胃组织相比胃癌组织中表达明显升高SHH蛋白(χ^(2)=20.012,P=0.000),且其表达与年龄、性别、肿瘤浸润深度、肿瘤分化程度、Lauren分型、血管侵犯、TNM分期均无关(P>0.05),与肿瘤淋巴结转移密切相关(P<0.05);Spearman等级相关分析显示:SHH蛋白表达与EBV(+)胃癌呈负相关(r=-0.129;P=0.012);Kaplan-Meier分析显示:SHH蛋白表达与EBV(+)、EBV(-)胃癌患者生存时间均无关。结论SHH蛋白在胃癌中表达上调且与EB病毒阳性胃癌相关,提示使用特定抑制剂阻断SHH通路可能是很有潜力的治疗靶点。

Shh信号通路在儿童急性淋巴细胞白血病中的活化及临床意义研究

目的 探讨Sonic Hedgehog(Shh)信号通路相关基因在急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿中的表达及意义。方法 采取RT-PCR法检测107例ALL患儿化疗前骨髓细胞Shh、Ptch1、Smo和Gli-1基因的表达情况,结合患儿危险度分级,探讨以上4个基因与疾病危险程度及早期疗效相关性,并以33例骨髓良性改变患儿作为对照组。结果 Shh、Smo和Gli-1基因在ALL初治组中的表达高于水平显著高于对照组(P<0.05),Ptch1在ALL初治组中的表达水平显著低于对照组(P<0.05);Smo和Gli-1基因表达水平与疾病危险程度正相关,且与早期治疗反应负相关;Shh和Ptch1基因表达水平与疾病危险程度及早期治疗反应均无相关性。结论 急性淋巴细胞白血病患儿Shh信号通路存在异常活化,靶向Shh信号通路的治疗有望成为新的方向。

基于绵羊角质形成细胞探究SHH通过Krox20调节IGFBP5的表达影响羊毛弯曲

本研究旨在探究音猬因子(Sonic hedgehog,SHH)与羊毛弯曲形成的关系及其调控机制。本研究通过培养原代绵羊角质形成细胞,构建过表达和沉默载体,利用细胞转染、免疫共沉淀、实时荧光定量PCR和Western blot等方法探究SHH与羊毛弯曲的关系,分析SHH是否通过早期生长应答基因2(early growth response 2,EGR2/Krox20)调控胰岛素样生长因子结合蛋白5(insulin-like growth factor binding proteins 5,IGFBP5)来影响羊毛弯曲。结果显示,体外成功分离培养绵羊原代角质形成细胞,显微镜下呈“铺路石”样,免疫荧光鉴定结果呈阳性表达,CCK-8结果表明细胞生长曲线呈“S”型,符合细胞增殖趋势;过表达和沉默SHH后,羊毛弯曲相关基因KRT71、β-catenin和TCHH的表达量显著升高和降低;过表达Krox20后,羊毛弯曲相关基因的表达量显著升高;免疫共沉淀试验表明,在绵羊角质形成细胞中SHH可以与Krox20相互作用且正调控Krox20;实时荧光定量PCR和Western blot结果显示,过表达SHH后显著上调IGFBP5的相对表达量,沉默SHH后显著下调IGFBP5的相对表达量;过表达Krox20后IGFBP5的相对表达量显著升高。本研究表明,在绵羊角质形成细胞中SHH通过Krox20调控IGFBP5来影响羊毛弯曲,结果为毛发弯曲性状形成的相关分子调控机制提供了理论依据。

利多卡因通过SHH/GLI信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的探讨利多卡因(Lid)调节SHH/GLI信号通路对胶质瘤细胞恶性生物学行为的影响。方法将U87细胞分为U87组、L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组、PM组、H-Lid+PM组。U87组未做任何处理,L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组分别用5、10、15 mmol/L Lid处理U87细胞,PM组用1μmol/L的SHH/GLI信号通路激活剂PM处理U87细胞,H-Lid+PM组用15 mmol/L Lid和1μmol/L的PM共同处理U87细胞。CCK8检测U87细胞增殖;流式细胞术检测U87细胞凋亡;Transwell检测U87细胞迁移、侵袭能力;Western blot检测SHH/GLI蛋白、凋亡蛋白表达;荷瘤小鼠模型验证Lid对U87细胞移植瘤的影响。结果与U87组相比,L-Lid组、M-Lid组、H-Lid组的OD值、U87细胞迁移、侵袭数量、Bcl-2、SHH、GLI3蛋白水平、小鼠肿瘤体积依次显著下降(P<0.05),凋亡率、Bax蛋白水平依次显著升高(P<0.05);而PM组OD值、U87细胞迁移、侵袭数量、Bcl-2、SHH、GLI3蛋白水平、小鼠肿瘤体积显著升高(P<0.05),凋亡率、Bax蛋白水平显著下降(P<0.05);PM消除了H-Lid对U87细胞恶性生物学行为的抑制作用。Lid处理后移植瘤小鼠存活数量增加,而PM处理后移植瘤小鼠存活数量减少,H-Lid+PM组与L-Lid组数量相同。结论Lid可能通过下调SHH/GLI信号通路抑制U87细胞增殖,促进细胞凋亡,进而抑制胶质瘤的进展。

龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39与重度牙周炎患者治疗后预后的关系

目的研究龈沟液Shh蛋白、dickkopf相关蛋白1(DKK1)、人类软骨糖蛋白-39(HC-gp39)与前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后的关系。方法选取2019年1月至2022年1月核工业二一五医院收治的120例前牙区重度牙周炎患者作为研究对象。牙周基础治疗90 d后,将患者按照治疗后PD的差异分为预后不良组和预后良好组,比较两组患者龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39水平以及基线资料。通过多因素Logistic回归分析前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的影响因素,采用受试者工作特征(ROC)曲线分析龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39预测前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后的效能。结果预后不良组龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39水平均高于预后良好组(P<0.05)。经多因素Logistic回归分析发现:有吸烟史、治疗前PD>7.60 mm、治疗前临床附着丧失(CAL)>7.00 mm、Shh蛋白>4.00μg/L、DKK1>9.00μg/L及HC-gp39>60.00 ng/mL均是前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的危险因素(P<0.05)。龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39单项检测及3项联合检测预测前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后预后不良的曲线下面积(AUC)分别为0.755、0.783、0.721、0.845,3项联合检测预测的效能优于单项检测。结论龈沟液Shh蛋白、DKK1、HC-gp39与前牙区重度牙周炎患者牙周基础治疗后的预后不良密切相关,可作为临床辅助判断患者预后的生物学指标。

LncRNA HOTAIR通过靶向miR-126激活SHH信号通路促进结直肠癌的发生发展

目的:探究miR-126与lncRNA HOTAIR的靶向关系及其对SHH信号通路的调节作用,并研究结直肠癌发生发展的分子机制。方法:收集2018年2月至2019年2月于河北省沧州市人民医院进行手术治疗的患者的正常结直肠、结直肠息肉、不典型增生组织、癌前病变、结直肠癌组织及其癌旁正常组织标本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)、免疫组化分析HOTAIR、miR-126及SHH表达情况,starBase数据库、荧光素酶实验、RNA免疫共沉淀及RT-qPCR验证miR-126与HOTAIR、SHH的作用关系,MTT实验、集落形成实验、划痕实验、Transwell实验检测细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力。结果:结直肠癌组织中的HOTAIR和SHH、Glil、Smo蛋白表达上调,miR-126表达下调(P<0.05)。HOTAIR靶向抑制miR-126表达,miR-126靶向抑制SHH表达。与sh-NC组相比,sh-HOTAIR组SW480、HCT116细胞活力、增殖、迁移、侵袭能力下降,miR-126 inhibitor组增加(P<0.05);sh-HOTAIR+miR-126 inhibitor组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著高于sh-HOTAIR组,低于miR-126 inhibitor组(P<0.05);miR-126 inhibitor+sh-SHH组细胞的活力、增殖、迁移、侵袭能力显著低于miR-126 inhibitor组(P<0.05)。结论:HOTAIR靶向抑制miR-126表达,从而促进结直肠癌的发生发展,其机制可能与激活SHH信号通路的表达有关。