基于黏膜sIgA抗体的非洲猪瘟病毒感染早期血清学检测方法的建立

目前的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学检测方法存在因采血引起交叉感染风险、抗体转阳滞后影响检测敏感性等问题,因此建立一种无创采样且可实现早期诊断的血清学方法对于在临床上ASFV感染的诊断与监测有重要意义。本研究以人工合成的方式构建了pFastbac1-P30-His重组表达载体,利用杆状病毒-昆虫细胞真核表达系统表达ASFV重组P30蛋白(SUMO-P30),用Ni柱亲和纯化后作为包被抗原,经过一系列条件优化,建立一种以猪口腔液中黏膜sIgA抗体为靶标的ASFV抗体间接ELISA方法。结果显示,真核重组表达的P30蛋白(SUMO-P30)约为47 ku,Western blot鉴定显示其具有良好的反应原性;经优化确定了ELISA最佳反应条件:包被量为1.0μg·mL^(-1),5%脱脂乳为最佳样品稀释液,与待检口腔液的最佳混合比例为2∶8,样品反应时间为120 min,鼠抗猪IgA-HRP最佳稀释度为1∶5000,反应时间为60 min,最佳显色时间为15 min。该方法检测ASFV感染口腔液抗体效价可达1∶32,与猪瘟病毒、猪伪狂犬病病毒、猪繁殖与呼吸综合征病毒黏膜抗体阳性口腔液均无交叉反应,具有良好的敏感性和特异性。利用该方法和ASFV商品化ELISA血清抗体检测试剂盒,分别检测感染ASFV强毒株或人工致弱株后同一头猪不同时间点的口腔液和血清样品,口腔液中黏膜sIgA抗体在感染后3~5 d S/P值就显著提升,而血清抗体在监测期内未检测到转阳。检测人工感染或同圈感染自然变异株后不同时间点的口腔液和血清样品,本研究建立的方法与商品化非洲猪瘟病毒血清抗体检测试剂盒检测的阳性符合率为100%,阴性符合率为37.5%,总符合率为61.5%。综上,本研究建立了一种无需采血,以口腔液为样品的ASFV黏膜sIgA抗体ELSIA检测方法,可实现ASFV感染的无创、早期、敏感诊断,为ASFV的监测和防控提供新的技术支持和补充。

四君子汤总多糖对免疫抑制小鼠肠道sIgA的影响及其机制研究

目的初步探讨四君子汤总多糖对小鼠肠道黏膜体液免疫功能的影响。方法取NIH小鼠随机分为正常对照组、模型组、四君子汤总多糖(SJZPS)组和四君子汤去蛋白多糖(SJZFP)组,采用ELISA法检测小鼠小肠sIgA浓度,流式细胞(FCM)技术检测Peyer's结细胞表型,免疫组化法检测小鼠肠道TLR4的表达。结果模型组sIgA浓度小于正常对照组、SJZPS和SJZFP组,差异具有显著性(P<0.01);模型组CD19+细胞比例下降,与正常对照组比较,具有非常显著性差异(P<0.01),SJZPS和SJZFP组CD19+细胞比例上升,与模型组比较,具有非常显著性差异(P<0.01);模型组肠黏膜TLR4蛋白表达明显低于正常对照组,SJZPS和SJZFP组,具有非常显著性差异(P<0.01)。结论SJZPS和SJZFP可提高环磷酰胺抑制的体液免疫功能,具有肠道黏膜免疫调节作用。

良性前列腺增生合并慢性前列腺炎组织中SIgA、α1-AR的表达与意义

目的:了解良性前列腺增生(BPH)合并慢性前列腺炎(CP)组织中SIgA、α1-AR的表达及意义。方法:将62例行经尿道前列腺等离子电切组织标本,根据术前前列腺按摩液(EPS)常规、经直肠前列腺B超、血清前列腺特异抗原(PSA)、国际前列腺症状评分(IPSS)、临床症状以及有无慢性骨盆疼痛综合征以及术后组织病理检查结果分为单纯BPH、BPH合并慢性前列腺炎两组。采用免疫组化、RT-PCR等实验方法研究两组前列腺组织中SIgA、α1-AR的表达。结果:62例患者中30例为BPH合并慢性前列腺炎,32例为单纯BPH,通过对患者一般资料对比和对实验结果进行统计学分析,合并慢性前列腺炎的BPH患者SIgA、α1-AR表达显著高于单纯BPH患者(0.380 8±0.144 3 vs 0.295 4±0.008 4;0.440 5±0.104 1 vs 0.383 2±0.013 6),差异有统计学意义(P<0.05)。结论:SIgA、α1-AR在BPH合并慢性前列腺炎患者中的表达上调,提示慢性前列腺炎与BPH可能有一定的内在联系,炎症反应可能是BPH的一个致病因素,与BPH的病理发展过程有关。

板蓝根多糖对无初乳仔鼠十二指肠IgG^+和SIgA^+细胞表达的影响

目的研究不同浓度板蓝根多糖(Indigowoad Root Polysaccharide,IRP)对SD系无初乳仔鼠十二指肠IgG+和SIgA+细胞表达的影响。方法 40窝0 d仔鼠随机分为A～E组:(A)初乳组,(B)常乳组,(C)常乳+高IRP组,(D)常乳+中IRP组,(E)常乳+低IRP组。各组分别灌胃生理盐水,生理盐水,低、中、高剂量的IRP,于0、7、14、21、28 d随机取6只进行取材,运用免疫组织化学技术,通过Moticam 2306图像处理系统对各实验组仔鼠十二指肠中IgG+和SIgA+细胞及分泌物的分布和面积进行统计分析。结果 IgG+和SIgA+细胞首先出现于腺体周围固有层,然后在绒毛固有层、上皮细胞之间和肌层也有分布。IgG+和SIgA+细胞数量随日龄增大而增加,且C、D、E组的IgG+和SIgA+细胞数量在7～28 d高于B组。在7～14 d、14～21 d、21～28 d发挥最佳效果的组别依次为E、D、C组。结论 IRP可以促进无初乳仔鼠十二指肠黏膜IgG+和SIgA+细胞的表达。随着日龄增大,发挥最佳免疫效应的IRP浓度逐渐减小。

黄芪注射液穴位注射对慢性盆腔炎大鼠局部SIgA及病理形态学改变的影响

目的:观察黄芪注射液穴位注射对慢性盆腔炎大鼠模型局部分泌型IgA(SIgA)及病理形态学改变的影响。方法:50只Wistar大鼠随机分成6组,除正常组和假手术组外,其余造成慢性盆腔炎模型;黄芪注射液穴注组和生理盐水穴注组选用关元、足三里进行穴位注射;阳性药对照组用妇科千金片灌胃;模型组、正常组和假手术组常规饲养,不予处理。观察各组大鼠子宫的组织形态学变化,检测阴道冲洗液中SIgA的含量。结果:模型组病理形态学检查显示慢性炎症改变,黄芪组和妇科千金片组改变不明显;黄芪组局部SIgA含量显著高于其他5组,模型组SIgA含量最低。结论:慢性盆腔炎反复发作与局部SIgA分泌不足、局部免疫力下降有关;黄芪针穴位注射治疗慢性盆腔炎可以刺激局部黏膜分泌SIgA,提高黏膜的局部免疫功能,防止炎症复发。

饲喂乳酸菌对小白鼠血清中IgG及肠道中SIgA影响的研究

本试验以2株乳杆菌MG2-1、L.casei.zhang按不同剂量分别饲喂小鼠,在5、10、15、20、25、30d测定其血清中IgG及肠道内SIgA含量,结果表明饲喂不同剂量的2株菌的乳悬液均能极显著提高IgG、SIgA含量(P<0.01)。对提高IgG含量方面两菌株均表现出低、中剂量饲喂组随着饲喂时间不断增加,有超过高剂量组的趋势。在第25d时,菌株MG2-1组,中剂量组极显著的高于高剂量组,L.casei.zhang组低剂量极显著的高于中、高剂量组。而SIgA水平高剂量组比低、中剂量组高。

正常儿童粪便中sIgA含量分析

目的 了解正常儿童粪便中sIgA的含量及其与肠道菌群和摄入营养素的关系。方法采取随机整群抽样的方法对农村 3 91名出生至 1 8个月婴幼儿进行调查 ,并对其中 5 5名婴幼儿采用ELISA方法检测粪便中sIgA含量。调查结果采用EPI和SPSS软件进行统计分析。结果儿童粪便中sIgA的含量随着儿童年龄的增长有下降的趋势 ,但无显著性差异 (P >0 0 5 ) ,1岁后趋于平稳 ;母乳喂养量、维生素C的摄入量及双歧杆菌与粪便sIgA含量呈正相关 ;儿童体重、身长与粪便中sIgA含量呈正相关。结论 应加强母乳喂养宣传力度 ,加强乳母的营养 ,保证母乳喂养的质量 ;婴儿出生后要逐渐增加维生素C的摄入 ;在辅食添加时强化双歧杆菌活菌等 。

针灸对过敏性哮喘患者粘膜SIgA免疫功能调整作用的研究

本文从唾液、鼻分泌液、疾液中SIgA和外周血淋巴细胞PWM（Pokeweeklmitogen）刺激培养上清液中IgA含量测定两个方面，对针灸调整过敏性哮喘患者粘膜SIgA免疫功能进行了研究。结果表明，针灸能明显降低患者唾液、鼻分泌液中SIgA（P＜0．01，＜0．02）和总IgA（P＜0．02，＜0．02）含量，有效控制患者的迟发哮喘反应。针灸对患者外周血淋巴细胞PWM刺激培养上清液中IgA含量的影响无显著性，与细胞免疫在其中的调节作用有关。

机械通气患者胃液SIgA含量、pH值与胃内细菌定植的关系

目的 探讨机械通气患者胃液SIgA含量和 pH值与胃内细菌定植的关系。 方法 用 pH精密试纸测定 4 5例机械通气患者胃液pH值每日至少 1次 ,并留取胃液做细菌培养隔日 1次 ,直到患者可疑发生呼吸机相关性肺炎、脱机或死亡 ;在患者使用呼吸机 2 4h内留取胃液测定SIgA含量 ;比较胃内细菌定植者和胃内无细菌定植者胃液pH值和胃液SIgA的差异。 结果 胃内细菌定植者胃液pH值为 4 .5 5± 0 .78,显著高于胃内无细菌定植者2 .82± 1.0 9(P <0 .0 0 1) ;胃内细菌定植者胃液SIgA含量为8.81± 8.74 μg/mL,显著低于胃内无细菌定植者 90 .3±10 0 .2 μg/mL(P =0 .0 0 5 )。结论 机械通气患者胃液pH值增高和SIgA含量降低是胃内细菌定植的潜在危险因素。

肠道SIgA含量的变化与溃疡性结肠炎相关性的分析研究

目的:在建立Wistar大鼠溃疡性结肠炎(UC)模型基础上,探讨肠道SIgA含量的变化与溃疡性结肠炎发病的相关性。方法:采用饮用DSS(Dextran sulfacte sodium)水溶液,建立UC动物模型,随机分为3组,即奥沙拉嗪治疗组(A组):2次/d奥沙拉嗪(Olsalazing)150 mg/kg灌胃;模型组(B组):UC模型大鼠每天饮用生理盐水;另设正常对照组(C组):每天饮用生理盐水。采用放射免疫分析法检测肠内容物分泌型IgA(SIgA)含量。结果:DSS所致大鼠UC模型简单易行与人类病变相类似。模型组SIgA含量较正常对照组明显降低(P<0.05),经奥沙拉嗪治疗后有明显回升,与模型组比较有显著差异(P<0.05),治疗组与正常对照组比较无差异(P>0.05)。结论:SIgA含量的变化与溃疡性结肠炎的发生有相关性的关系。

GABA对热应激雏鸡小肠黏膜中IL-IL-7和sIgA含量的影响

为探究Y-氨基丁酸（GABA）对热应激雏鸡小肠黏膜中IL-7和slgA含量的影响，选择体重相近的1日龄文昌雏公鸡，随机分为对照（CK）组、热应激（HS）组、50mg／kgGABA（G50＋HS）组和100mg／kgGABA（G100＋HS）组，每组36只，每天13：00～15：00将HS组、（G50＋HS）组和（G100＋HS）组置于（40＋0．5）℃人工气候箱中进行热处理，利用ELISA法测定不同周龄雏鸡小肠黏膜液中IL-7和sIgA含量。结果：HS组的十二指肠、空肠及回肠中1L-7和sIn含量显著低于CK组（P〈0．05）；（G50＋HS）组和（G100＋HS）组十二指肠、空肠及回肠中IL-7和sIgA含量显著高于HS组（P〈0．05）；（G100＋HS）组部分肠段中的IL-7和slgA含量与（G50＋HS）组比较有显著差异（P〈0．05）。研究结果表明GABA对热应激造成的肠道损伤具有一定修复作用，能够有效提高热应激状态下雏鸡小肠黏膜的免疫功能，但其保护作用并不与浓度呈正比。

猪初乳中SIgA纯化及其单抗制备

为制备猪SIgA的特异性单克隆抗体,该研究采用饱和硫酸铵盐析法从猪初乳中提取猪SIgA蛋白,分别经Sephadex G-200凝胶层析、DEAE52纤维柱离子层析及Protein A柱亲合层析纯化。以纯化的猪SIgA蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠制备抗猪SIgA的单克隆抗体。结果显示:已获得6株特异的抗猪SIgA的单克隆抗体,分别命名为2D9E6、2D9E9、3E1G2、3E1H5、4H5B7和4H5B10,6株单抗均为IgG1,κ型。将其中1株2D9E6制备腹水,经纯化后ELISA效价可达1∶81 000以上。表明以猪SIgA天然蛋白为免疫原,成功制备了6株高特异性的单克隆抗体,可为猪黏膜免疫研究提供基础材料。

健脾益气摄血方对ITP模型小鼠血清SIgA和β-EP影响研究

目的:研究健脾益气摄血方对ITP小鼠血清中SIg A(分泌型免疫球蛋白A)、β-EP(β-内啡肽)的影响。方法:免疫造模法建立ITP小鼠模型,以强的松和健脾益气摄血方(颗粒)为干预药物,酶联免疫吸附法(ELISA)检测小鼠血清SIg A和β-EP含量。结果:与空白对照组比较,模型小鼠血清SIg A、β-EP含量升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。与模型对照组比较,经强的松干预治疗后SIg A含量下调,差异具有统计学意义(P<0.05);经健脾益气摄血方干预后,β-EP含量下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。结果提示,强的松对SIg A、β-EP均有调节效应;健脾益气摄血方虽然不能调控SIg A,但对β-EP具有调控作用。结论:健脾益气摄血方治疗ITP效应机制与调控β-EP含量,影响免疫问答有一定关系。

黄芪多糖对雏鸡黏膜sIgA含量的影响研究

为研究黄芪多糖(APS)对雏鸡黏膜分泌型Ig A(s Ig A)分泌的影响,将240只7日龄雏鸡随机分为4组:Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和C组,其中,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组雏鸡于7日龄以灌服方式分别给予80 mg/m L、40 mg/m L、20 mg/m L APS液各0.2 m L,1次/d,连续5 d,C组雏鸡以相同方式给予相同剂量的生理盐水,于14日龄采取滴口方式进行鸡传染性法氏囊病活疫苗免疫,在首次给药后1、3、5、7 d以及疫苗免疫后7、14、21、28、35、42、49 d,每组随机抽取5只雏鸡,收集泪液后,心脏采血处死,快速收集气管液、肠液,采用间接ELISA检测s Ig A含量。结果显示,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ组雏鸡s Ig A含量与C组差异显著(P<0.05或P<0.01),泪液中s Ig A含量Ⅰ组雏鸡相对较高,气管液、肠液中s Ig A含量Ⅲ组雏鸡相对较高,提示APS对雏鸡黏膜s Ig A分泌有显著的促进作用。

“通利大肠”对慢性阻塞性肺疾病模型大鼠SIgA含量的影响

目的:观察"通利大肠"对COPD模型大鼠分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的影响,从黏膜免疫角度探讨COPD"从肠论治"的效应机制。方法:采用气管注脂多糖加熏香烟联合造模方法建立COPD大鼠模型,随机分为正常组、模型组、治肺组、治肠组及肺肠同治组。正常组、模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应中药,连续14天。放射免疫法检测肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量减少(P<0.05)。与模型组比较,治肠组肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量增加(P<0.05)。与治肺组比较,肺肠同治组肺泡灌洗液、肠黏膜组织SIgA含量有所增加(P<0.01)。结论:通利大肠,或在治肺的基础上增加通利大肠,能提高COPD模型大鼠肺泡灌洗液和肠黏膜中SIgA含量,改善COPD大鼠呼吸道和肠道黏膜防御功能,这可能是COPD"从肠论治"效应产生的作用环节之一。

冰岛参对小鼠肠道粘膜SIgA分泌的影响

目的:探讨冰岛参(Cucumaria frondosa)对小鼠肠道粘膜SIgA分泌的影响。方法:将50只Balb/c小鼠随机分为5组:正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组。采用环磷酰胺诱导免疫低下模型,取小鼠肠道进行组织学观察、检测肠粘膜SIgA的含量,观察冰岛参对肠道粘膜免疫的保护作用。结果:与模型组相比,低剂量冰岛参摄入能促进肠粘膜SIgA的分泌,对小肠绒毛有一定的保护作用。结论:低剂量冰岛参摄入量能够明显保护小鼠肠粘膜,促进SIgA的分泌,对肠炎有一定的防治作用。

哮喘儿童焦虑情绪与唾液SIgA测定

【目的】 通过评定哮喘儿童焦虑情绪、观察焦虑与唾液SIgA的关系 ,探讨改善哮喘儿童免疫、减少哮喘发作的新方法。 【方法】 采用汉密顿焦虑量表 (HAMA)对 40例哮喘患儿进行评定、测量皮肤电阻和唾液SIgA ,并与 2 6例健康儿童对比。 【结果】 哮喘组HAMA分值明显高于对照组 (分别为 12 .0 3± 6.0 1,4.96± 3 .89,P<0 .0 1) ,SIgA明显低于对照组 [分别为 ( 169.14± 13 6.19)mg/L ,( 3 41.2 3± 182 .89)mg/L ,P <0 .0 1] ,皮肤电阻值明显高于对照组 (P <0 .0 1)。与哮喘无焦虑组比较 ,哮喘焦虑组SIgA明显降低而皮肤电阻明显增高 (P <0 .0 5 )。哮喘发作组HAMA分值明显高于哮喘缓解组 [分别为 ( 10 .71± 4.65 ) μΩ ,( 5 .5 3± 2 .2 4) μΩ ,P <0 .0 1]。 【结论】 哮喘儿童存在较明显的焦虑情绪障碍 ,其体液免疫功能减低 ,副交感神经功能亢进。与无焦虑的哮喘儿童比较 ,有焦虑的哮喘儿童体液免疫功能较低 ,副交感神经兴奋性较高。哮喘儿童发作期焦虑情绪多于缓解期。

全真一气汤总多糖对免疫抑制小鼠肠道sIgA的影响及其机制研究

目的初步探讨全真一气汤总多糖对小鼠肠道黏膜体液免疫功能的影响。方法取SPF级KM小鼠随机分为正常对照组、模型组、全真一气汤总多糖(QZYQPS)组,采用ELISA法检测小鼠小肠道sIgA浓度,流式细胞(FCM)技术检测Peyer's结细胞表型,免疫组化法检测小鼠肠道TLR4的表达。结果模型组sIgA浓度小于正常对照组、QZYQPS组,具有显著性差异(P<0.01);模型组CD19+细胞比例下降,与正常对照组比较,具有显著性差异(P<0.01),QZYQPS组CD19+细胞比例上升,与模型组比较,具有显著性差异(P<0.01);模型组肠黏膜TLR4蛋白表达明显低于正常对照组和QZYQPS组,具有显著性差异(P<0.01)。结论 QZYQPS可提高环磷酰胺抑制的体液免疫功能,具有肠道黏膜免疫调节作用。

Lantigen B(兰菌净)对于反复发生呼吸道感染患者血清和唾液SIgA水平影响的临床研究

目的：评价Ｌａｎｔｉｇｅｎ Ｂ（兰菌净）对于反复发作呼吸道感染患肯血清和唾液ＳＩｇＡ水平的影响。方法：选择慢性阻塞性肺病和支气管扩张稳定期（一个月内无急性发作）患者舌下滴入试验药（其中一半为Ｌａｎｔｉｇｅｎ Ｂ，另一半为安慰剂，分别在试验前、第二周和第四周末留取唾液，离心后冰冻保存，部分病人留取血标本。结果：经放免测定，第四周末，血清ＳＩｇＡ由试验前１５９±３５．５ｍｇ·Ｌ－１升至１６９±３６．５ ｍｇ·Ｌ－１（Ｐ＜０．０５），唾液ＳＩｇＡ由试验前２１５±２１１ｍｇ·Ｌ－１升至２８０±２２９ ｍｇ·Ｌ（Ｐ＜０．００１），第四周末，试验组唾液和血清 ＳＩｇＡ较对照组均有显著提高。结论：ＬａｎｔｉｇｅｎＢ可提高反复发作呼吸道感染患者血清和唾液 ＳＩｇＡ水平，加强对常见病原菌的抵抗力。

麦粒灸对脾虚泄泻证患者唾液淀粉酶活性及血清SIgA的影响

目的 :观察麦粒灸对脾虚泄泻患者唾液淀粉酶活性及粪便SIgA的影响。方法 :将患者随机分为治疗组和对照组 ,治疗组采用麦粒灸灸患者脾俞、胃俞、足三里 ,每穴 3壮 ,隔日 1次 ,连续3天 ;对照组用中药治疗。结果 :麦粒灸能显著改善患者脾虚泄泻症状 ,并显著提高唾液淀粉酶活性及降低血清SIgA ,其作用优于对照组。结论 :麦粒灸治疗脾虚泄泻的疗效是肯定的。