低氧环境下生长的卵巢癌细胞株SKOV3的转录组分析

目的 探讨卵巢癌细胞在常氧与低氧环境培养下mRNA表达谱的差异。方法 将卵巢癌细胞株SKOV3置于低氧(2%)与常氧(21%)环境下培养,应用氧探针进行细胞乏氧状态检测,应用高通量测序对细胞内整体的mRNA进行测序,应用生物信息学分析工具对测序结果进行基因表达差异分析与功能富集分析,应用逆转录实时荧光定量PCR进行相关差异基因表达的进一步验证。结果 与常氧培养的细胞相比,在低氧环境下培养的细胞共有999个基因表达显著上调,646个基因表达显著下调。这些表达差异基因参与细胞外基质形成、细胞黏附、糖酵解、纤毛组装等生物学过程以及癌症信号、PI3K-AKT信号、RNA转运以及肿瘤胆碱代谢等信号通路。逆转录实时荧光定量PCR结果验证了低氧组的HILPDA、MT1B、CA9、MT1X与LOX-L2基因表达明显高于常氧组,而低氧组的WARS1、CHAC1、PSAT1、UPP1与DDX5基因表达明显低于常氧组。结论 本研究揭示了在不同浓度氧环境下卵巢癌细胞mRNA转录水平差异表达的相关基因及分子通路,为进一步探讨低氧环境对卵巢癌细胞生长影响的潜在分子机制提供实验基础。

CIRBP对人卵巢癌细胞SKOV3的促癌功能研究

目的探索冷诱导RNA结合蛋白(CIRBP)对人卵巢癌细胞SKOV3的促癌作用。方法采用生物信息学分析CIRBP在卵巢癌中的表达情况,建立CIRBP基因沉默和过表达的慢病毒稳转SKOV3细胞株,采用CCK-8法、流式细胞法、细胞划痕法分别检测细胞的增殖、凋亡、周期和迁移,采用细胞免疫荧光法检测β-catenin核转位,采用RT-qPCR检测CIRBP mRNA表达水平,采用Western blot检测CIRBP、β-连环蛋白(β-catenin)和磷酸化β-连环蛋白(p-β-catenin)的表达水平。结果CIRBP在卵巢癌中的表达下调(P<0.05),成功构建CIRBP沉默和过表达细胞模型,CIRBP沉默导致细胞增殖、迁移能力下降(P<0.05),细胞凋亡率、G0/G1期比例上升(P<0.05),β-catenin蛋白核转位水平下降(P<0.05),β-catenin蛋白水平下调(P<0.05),而p-β-catenin蛋白水平上调(P<0.05),CIRBP的过表达则相反。结论CIRBP促进β-catenin的表达和核转位,从而影响卵巢癌的进展。

蒽醌修饰物KA-4s抑制SKOV3/DDP细胞增殖并诱导铁死亡

目的:探讨蒽醌修饰物KA-4s在体外对人顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖的影响和诱导细胞铁死亡的机制。方法:将SKOV3/DDP细胞分为对照组和不同浓度(2μmol/L、5μmol/L和7μmol/L)的蒽醌修饰物KA-4s组。采用MTT法检测单药KA-4s和顺铂(DDP)对SKOV3/DDP细胞活力的影响,划痕实验检测细胞的迁移能力,线粒体绿色荧光探针(Mito-Tracker Green)检测线粒体形态改变,透射电镜观察线粒体超微结构。以铁死亡诱导剂RSL3为阳性对照组,用DCFA-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS)水平,比色法检测细胞内总铁蛋白含量,western blotting检测铁死亡相关蛋白GPX4、FSP1的表达情况。结果:KA-4s和顺铂作用48 h后,卵巢癌SKOV3/DDP细胞增殖均明显受到抑制,相比顺铂,KA-4s的抑制作用更强(P<0.001),并能抑制细胞迁移。经KA-4s处理后线粒体受损,线粒体结构改变,膜密度增大,嵴减少甚至消失。与空白对照组相比,阳性RSL3组和KA-4s组SKOV3/DDP细胞内ROS水平升高(均P<0.001),5μmol/L KA-4s组总铁离子含量显著升高(P<0.001),卵巢癌SKOV3/DDP细胞中GPX4、FSP1蛋白的表达均降低(P<0.01),但正常卵巢IOSE80细胞中GPX4表达均无改变。结论:KA-4s能抑制SKOV3/DDP细胞增殖、迁移并诱导细胞铁死亡。

去甲斑蝥素干预Wnt/β-catenin信号通路诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:讨论去甲斑蝥素对人卵巢癌SKOV3细胞凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:体外培养人卵巢癌SKOV3细胞,将浓度为52μmol/L去甲斑蝥素作用于人卵巢癌SKOV3细胞后,将卵巢癌SKOV3细胞分为对照组、去甲斑蝥素组(52μmol/L),等待卵巢癌细胞贴壁药物作用6 h后,在倒置显微镜下观察卵巢癌SKOV3细胞的形态学变化,荧光显微镜观察细胞核的变化;药物作用24 h后,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化情况,采用Western blot法检测药物作用后对卵巢癌SKOV3细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2以及Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin表达水平的影响。结果:与对照组比较,去甲斑蝥素抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖,降低线粒体膜电位,诱导人卵巢癌SKOV3细胞凋亡,升高Bax的表达水平,抑制Bcl-2蛋白表达水平,降低Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白β-catenin的表达水平。结论:去甲斑蝥素诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡的机制可能与调控Wnt/β-catenin信号通路相关。

NDUFA4通过增强线粒体活化水平促进卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移及侵袭

目的:探讨NDUFA4介导线粒体活化水平对卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移及侵袭的影响。方法:以慢病毒技术建立SKOV3细胞的NDUFA4过表达和沉默模型;CCK-8检测细胞增殖,细胞划痕检测细胞迁移,Transwell检测细胞侵袭,流式细胞术检测线粒体膜电位和凋亡;Real-time PCR检测线粒体DNA(mtDNA)拷贝数,MT-ND1、MT-ND5、MT-CYB、SDHA、PGC-1α、NRF1和mTFA mRNA的表达;电镜观察线粒体形态,分光光度法检测Complex IV活性水平;Western blot检测PGC-1α、NRF1、mTFA蛋白的表达。结果:SKOV3细胞中实现NDUFA4的过表达和沉默;NDUFA4的过表达提高细胞增殖、侵袭和迁移能力(P<0.05),上调mtDNA拷贝数,上调MT-ND1、MT-ND5、MT-CYB、SDHA、PGC-1α、NRF1和mTFA mRNA水平(P<0.05),上调PGC-1α、NRF1和mTFA蛋白水平(P<0.05),上调线粒体膜电位水平以及Complex IV活性水平(P<0.05),线粒体变多形态正常。而NDUFA4的沉默则相反,线粒体出现空泡化。结论:NDUFA4可能通过加强线粒体的活化和氧化磷酸化的水平在SKOV3细胞中发挥促癌功能。

人参皂甙Rg3抑制卵巢癌SKOV3细胞生长的机制研究

目的探讨人参皂甙Rg3抑制卵巢癌细胞生长可能存在的分子机制。方法采用细胞克隆实验检测人参皂甙Rg3对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制效果;四氮唑蓝(MTT)比色法、流式凋亡、划痕实验、Transwell实验分别检测人参皂甙Rg3对SKOV3细胞凋亡、侵袭、迁移的影响;qRT-PCR法和Western blot法分别检测Rg3不同浓度作用下卵巢癌细胞中Zeste基因增强子同源物2(EZH2)基因和蛋白的表达。结果人参皂甙Rg3对SKOV3细胞增殖抑制率升高(P<0.05),凋亡率显著上升(P<0.01),侵袭、迁移能力均显著下降(P<0.01),SKOV3细胞中EZH2的基因和蛋白随着Rg3浓度的增加表达量呈现明显的下降(P<0.01)。结论人参皂甙Rg3可能通过抑制EZH2的表达,促进卵巢癌细胞的凋亡,抑制卵巢癌SKOV3细胞增殖、侵袭以及迁移的能力,为卵巢癌的临床治疗提供新思路。

美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)诱导SKOV3细胞衰老

目的探讨美洲大蠊提取物CⅡ-3调控p16^(INK4a)蛋白诱导卵巢癌细胞SKOV3衰老的作用。方法通过CCK-8法测定不同浓度和时间美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖的作用;运用细胞集落形成实验测定美洲大蠊提取物CⅡ-3对SKOV3细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞周期的变化;衰老相关-β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老变化;Western Blotting检测CⅡ-3作用后SKOV3细胞衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达的变化。结果美洲大蠊提取物CⅡ-3可有效抑制SKOV3细胞增殖,最佳作用浓度为80μg/mL,作用时间为48 h;CⅡ-3作用后,SKOV3细胞集落形成能力下降;阻滞于G_(0)/G_(1)期细胞比例增高,S期细胞比例减少;SA-β-Gal阳性细胞百分比增加;衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达上调。结论美洲大蠊提取物CⅡ-3通过调控衰老调控分子p16^(INK4a)蛋白表达诱导SKOV3细胞衰老。

circSKA3/miR-3163/ADAM9基因轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及免疫因子表达的机制研究

目的:探讨circSKA3/miR-3163/去整合素-金属蛋白酶9(ADAM9)基因轴调控卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭及免疫因子表达的机制。方法:qRT-PCR检测卵巢癌组织、癌旁组织circSKA3、miR-3163表达;Western blot检测组织ADAM9蛋白水平。选用SKOV3细胞进行体外实验,分为sh-NC组、sh-circSKA3组、miR-NC组、miR-3163组、sh-circSKA3+antimiR-3163组、sh-circSKA3+pcDNA-ADAM9组。qRT-PCR检测SKOV3细胞circSKA3、miR-3163表达;CCK-8、划痕实验、Transwell检测细胞增殖活性、迁移及侵袭能力;ELISA检测细胞上清中TNF-α、IL-6、IL-10表达;双荧光素酶报告实验验证circSKA3与miR-3163、miR-3163与ADAM9的靶向关系;Western blot检测SKOV3细胞ADAM9、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)、MMP-9蛋白水平。结果:与癌旁组织比较,卵巢癌组织circSKA3、ADAM9表达升高,miR-3163表达降低(P<0.05);与sh-NC组/miR-NC组比较,sh-circSKA3组/miR-3163组细胞增殖活性、划痕愈合率降低,侵袭细胞数减少,MMP-2、MMP-9蛋白及TNF-α、IL-6表达降低,IL-10表达升高(P<0.05);circSKA3可靶向调控miR-3163表达,miR-3163可靶向结合ADAM9(P<0.05);与sh-circSKA3组比较,sh-circSKA3+anti-miR-3163组、sh-circSKA3+pcDNA-ADAM9组细胞增殖活性、划痕愈合率升高,侵袭细胞数增多,MMP-2、MMP-9蛋白及TNF-α、IL-6表达升高,IL-10表达降低(P<0.05)。结论:沉默circSKA3表达可通过上调miR-3163表达而降低ADAM9表达,抑制卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭,调控免疫因子表达。

洛铂诱导顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞的凋亡

目的探讨洛铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡及其机制。方法采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度和时间洛铂对SKOV3/DDP细胞的生长抑制作用,并与其亲本细胞SKOV3(敏感株)相比较;进一步通过光镜及透射电镜观察SKOV3/DDP细胞的形态学改变;并采用流式细胞仪检测细胞周期变化。结果洛铂作用SKOV3/DDP细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制,与SKOV3细胞相比,差异无统计学意义(P>0.05);一定浓度的SKOV3/DDP作用一定时间,可诱导SKOV3/DDP细胞发生凋亡;光镜和透射电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞技术分析发现洛铂作用首先引起细胞周期分布的改变,随用药时间的延长,凋亡率逐渐升高。结论洛铂通过诱导凋亡而抑制体外培养的SKOV3/DDP细胞生长,其机制可能与细胞G0/G1期阻滞有关。

RNA干扰Survivin基因沉默对卵巢癌SKOV3及SKOV3/ADM细胞凋亡的影响

背景与目的:RNA干扰技术被广泛应用于肿瘤基因治疗、抗病毒感染、基因药物筛选等许多领域。Survivin基因在卵巢癌细胞株SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM中高表达,是进行卵巢癌基因治疗理想的靶点。本研究探讨Survivin基因沉默后对卵巢癌细胞SKOV3及其耐药株SKOV3/ADM凋亡的影响。方法:将重组质粒pshRNA鄄Survivin以脂质体转染至SKOV3、SKOV3/ADM细胞。分别用半定量RT鄄PCR、Westernblot检测细胞内SurvivinmRNA和蛋白表达的变化,吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法、TUNEL及流式细胞仪检测重组质粒诱导细胞凋亡的情况。结果:转染pshRNA鄄Survivin后,SKOV3、SKOV3/ADM细胞中SurvivinmRNA拷贝数明显减少,抑制率分别为83.79%和91.56%,蛋白质的表达水平显著降低;干扰组细胞凋亡率显著高于对照组(P<0.01)。流式细胞仪检测结果显示,Survivin沉默后48h,SKOV3、SKOV3/ADM的细胞凋亡率分别为14.05%和21.02%,而在对照组未检测到明显凋亡。结论:重组质粒pshRNA鄄Survivin可明显抑制SKOV3、SKOV3/ADM细胞内SurvivinmRNA和蛋白的表达,介导卵巢癌细胞凋亡。

雷帕霉素联合紫杉醇诱导卵巢癌细胞A2780和SKOV3凋亡及其分子机制

背景与目的:研究表明,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)在恶性肿瘤发生发展中起重要作用,本研究观察特异性mTOR抑制剂雷帕霉素联合紫杉醇对卵巢癌细胞A2780和SKOV3的作用,并探讨其内在的分子机制。方法:A2780、SKOV3细胞经雷帕霉素和紫杉醇处理后,以MTT法检测细胞的增殖情况,金正均法计算q值判断两药的相互作用。以流式细胞仪检测细胞凋亡,逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)检测survivin的表达。结果:雷帕霉素联合紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖,且随时间延长抑制作用越显著,当两药合用72h时抑制率分别达到34.9%(A2780)和37.1%(SKOV3),与单独用药组相比差异有显著性(P<0.01),金正均法显示各时间点q值均>1.15,显示二者有协同作用。雷帕霉素和紫杉醇可使A2780和SKOV3细胞发生凋亡,并且在两者联用时凋亡率达到最高。经雷帕霉素和紫杉醇作用后的A2780和SKOV3细胞表达survivin较处理前明显下降。结论:体外雷帕霉素和紫杉醇可抑制A2780和SKOV3细胞增殖并诱导其发生凋亡,并可使survivin基因的表达下调,且两者联合应用时可显著增加其抑制作用,具有协同作用。

去甲斑蝥素衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3增殖的作用及机制初步探讨

背景与目的:去甲斑蝥素(norcantharidin,NCTD)是斑蝥素(cantharidin)的衍生物,对多种肿瘤细胞的生长均有抑制作用,但其药效较同类化疗药物小。本研究探讨NCTD衍生物Nd3对人卵巢癌细胞SKOV3的体外抗增殖作用,同时与NCTD的作用进行比较,并初步探讨Nd3的作用机制。方法:采用增殖抑制实验分别测定Nd3和NCTD对SKOV3细胞增殖的抑制作用,流式细胞术分析Nd3对SKOV3细胞周期和细胞凋亡的改变。Westernblot方法检测Nd3对SKOV3细胞周期和凋亡相关蛋白Cdc2、CyclinB1、Bax和Bcl-2表达的影响。结果:2.5、5、10、20、30和40μmol/L的Nd3作用SKOV3细胞48h后,细胞抑制率依次为27.3%、34.1%、53.3%、64.3%、83.3%和96.7%,与阴性对照组比较差异有显著性(P<0.001)。Nd3作用24h、36h和48h的IC50分别为(25.1±2.3)!mol/L、(21.8±2.8)!mol/L和(20.4±3.3)!mol/L。细胞周期分析证实,10、20、30、40μmol/LNd3作用48h后,G2/M期细胞百分数为14.3%、20.2%、26.2%和27.9%;同时30μmol/L的Nd3作用12、24、36、48h后,G2/M期的细胞比例分别为19.8%、26.6%、27.8%和32.0%,呈现G2/M期阻滞。此外Nd3可以诱导SKOV3细胞凋亡,40μmol/L的Nd3作用48h后细胞凋亡率高于对照组30%以上。Westernblot结果表明,Nd3可使Bax蛋白的表达增高,而Cdc2、CyclinB1和Bcl-2的表达则相应减少。结论:Nd3能明显抑制SKOV3细胞的增殖,其作用比NCTD强,且可阻断SKOV3细胞周期于G2/M期并诱导细胞凋亡,其作用机制与Cdc2、CyclinB1、Bcl-2和Bax蛋白的表达变化有关。

基质金属蛋白酶抑制剂LY52对人卵巢上皮癌细胞SKOV3中MMP-2,MMP-9表达及其侵袭转移能力的抑制作用

背景与目的:研究表明,肿瘤细胞MMP-2,MMP-9表达升高与其侵袭和转移能力有密切关系。因而,研究设计新的MMPs特异性抑制剂得到广泛重视。根据MMP-2,MMP-9结构特点,本实验设计合成全新结构的N1-取代咖啡酰吡咯烷类MMPs抑制剂——LY52,并观察该化合物对MMP-2,MMP-9表达的抑制作用及对人卵巢粘液囊腺上皮癌细胞SKOV3侵袭转移能力的影响。方法:MTT和细胞克隆法检测LY52对细胞生长抑制作用;明胶酶直接降解琥珀酰明胶法测定LY52抑酶作用活性;SDS-PAGEzymography分析对SKOV3细胞MMP-2,MMP-9表达的抑制作用;MTT法测定细胞与FN,LN和matrigel的粘附能力;Transwell小室法观察化合物对SKOV3细胞侵袭人工基底膜的抑制作用。结果:直接与细胞接触,LY52具有较弱的肿瘤细胞生长抑制作用。LY52直接抑制明胶酶活性,抑制作用IC50为11.9!g/ml。同时,LY52抑制SKOV3细胞MMP-2,MMP-9表达。以0.1、1、10、100、1000μg/ml剂量与SKOV3细胞孵育24h,对培养上清液MMP-2表达的抑制率为10.66%～31.47%;对MMP-9表达的抑制率为22.56%～56.71%。按上述剂量孵育1h,对SKOV3细胞与FN,LN和matrigel粘附能力的最大抑制率分别为29.79%,48.94%,50.92%。LY52显著抑制SKOV3细胞穿过人工基底膜能力,按上述剂量,LY52与细胞孵育24h,抑制率分别为7.5%,42.07%,66.54%,72.15%,82.84%。结论:LY52通过抑制SKOV3细胞MMP-2,MMP-9的表达,降低癌细胞侵袭转移能力。

原花青素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨葡萄籽提取物原花青素对卵巢癌SKOV3细胞增殖和凋亡的影响和机制。方法体外培养的SKOV3细胞与25、50、100、200、400μg/ml的葡萄籽提取物原花青素共孵育,分别在24、48、72h时观察细胞形态学变化,MTT检测细胞增殖抑制率,流式细胞和TUNEL分析细胞凋亡,RT-PCR检测survivin在mRNA的表达情况,Western blot检测SKOV3细胞survivin在蛋白水平的表达。结果不同浓度(25、50、100、200、400μg/ml)原花青素对SKOV3细胞作用48h的细胞增殖抑制率分别为48.67%、53.85%、67.03%、73.78%、77.39%。流式细胞和TUNEL检测经25μg/ml原花青素处理24、48h后SKOV3细胞凋亡率分别为31.98%、45.78%。葡萄籽原花青素还可以明显降低survivin的mRNA和蛋白水平的表达。这些作用均随原花青素浓度和作用时间的延长而增强。结论原花青素可能通过降低survivin的表达,在体外抑制SKOV3细胞增殖,并促进其凋亡。

去甲斑蝥素诱导活性氧的产生介导SKOV3细胞凋亡和G2/M期周期阻滞

目的:研究去甲斑蝥素对人卵巢癌SKOV3细胞的细胞毒作用及作用机制。方法:MTT法检测去甲斑蝥素对细胞增殖的影响,倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞的形态学变化,流式细胞术检测细胞凋亡和活性氧(reactive oxygen species,ROS)的水平,蛋白印迹法检测相关蛋白的表达。结果:去甲斑蝥素能够时间和剂量依赖性地抑制SKOV3细胞生长。52μmol/L的去甲斑蝥素作用12~48 h后可使细胞核皱缩、染色质凝聚,形成明显的凋亡小体;还可时间依赖性地诱导细胞凋亡、G2/M期周期阻滞以及活性氧的产生。活性氧清除剂NAC可以显著降低去甲斑蝥素诱导的活性氧的产生,抑制细胞凋亡和G2/M期周期阻滞(P<0.05)。5 mmol/L NAC抑制去甲斑蝥素引起的Bax和p21表达上调,增加去甲斑蝥素引起的procaspase-3和Bcl-2的表达降低。结论:去甲斑蝥素通过升高活性氧的水平介导SKOV3细胞凋亡和G2/M期周期阻滞。

异甘草素诱导人卵巢癌细胞株SKOV3凋亡及自噬的研究

目的观察异甘草素(ISL)对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3体外增殖的抑制作用,并探讨其可能存在的分子机制。方法四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ISL对SKOV3细胞生长的抑制作用;吖啶橙/溴化乙锭双荧光染色后观察细胞形态变化;流式细胞术AnnexinⅤ-FITC/PI双染检测ISL对细胞凋亡的影响;Western blot检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax及自噬相关蛋白Beclin1、LC3的表达水平。结果 ISL能够抑制SKOV3细胞的增殖,呈时间、剂量依赖性;荧光染色后可见细胞核变圆,碎裂,染色质浓缩;流式细胞仪检测ISL(5、10、20μg/mL)作用于SKOV3细胞48h后,凋亡率明显高于ISL 0μg/mL组,差异具有统计学意义(P<0.05);Western blot结果显示ISL(5、10、20μg/mL)作用于SKOV3细胞48h后Bcl-2蛋白的表达下调,Bax、Beclin1、LC3蛋白的表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 ISL对人卵巢癌SKOV3细胞具有明显的抑制增殖和诱导凋亡的作用,其抗体外肿瘤机制可能与激活线粒体凋亡通路及自噬通路相关。

半枝莲黄酮类单体对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响

目的探讨半枝莲5个黄酮类单体(汉黄芩素、野黄芩苷、芹菜素、木犀草素和黄芩素)及与卡铂联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响。方法应用MTT法检测半枝莲5个黄酮类单体对SKOV3细胞增殖的抑制能力,根据IC50筛选抑制能力最强的单体;光学显微镜下观察梯次浓度的筛选单体和卡铂对SKOV3细胞的形态学影响;采用MTT、凋亡试剂检测筛选单体与卡铂联用对SKOV3细胞增殖的抑制和凋亡的影响。结果与阴性对照组比较,半枝莲5个黄酮类单体可明显抑制SKOV3细胞增殖,差异有统计学意义(P<0.05),除芹菜素呈拱形变化趋势外,其余单体抑制作用均呈浓度依赖性,其中汉黄芩素48h的IC50值最低。梯次浓度的汉黄芩素作用48h后细胞形态渐呈松针样改变,而卡铂渐呈圆形或碎片状。汉黄芩素与卡铂联用对SKOV3细胞增殖的抑制作用明显优于卡铂组(P<0.01),呈时间依赖性;且细胞凋亡较卡铂组明显增多。结论半枝莲5个黄酮类单体对SKOV3细胞增殖均具有明显抑制作用,其中汉黄芩素作用最强。汉黄芩素可增强卡铂的细胞毒作用。

蝎毒组分Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的:观察蝎毒组分Ⅰ(SV-Ⅰ)对卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用。方法:卵巢癌细胞SKOV3分为空白对照组和SV-Ⅰ处理组(终浓度分别为200、400、800 mg.L-1),采用MTT法检测SV-Ⅰ对卵巢癌细胞SKOV3生长抑制率,集落形成法检测肿瘤细胞增殖,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡的变化。结果:200、400和800 mg.L-1组SKOV3细胞生长抑制率分别为29.87%、48.11%和67.77%,与对照组比较差异具有显著性(P<0.01);在400和800 mg.L-1组,SKOV3细胞集落数分别为57.00±6.16和48.00±4.11,明显低于对照组(84.00±5.29)(P<0.01);与空白对照组比较,400 mg.L-1组SKOV3细胞S期细胞数明显减少(P<0.01),G2+M期细胞明显增多(P<0.01),800 mg.L-1组SKOV3细胞G2+M期细胞数明显减少(P<0.01),G1期细胞数有增多趋势;与空白对照组比较,400和800 mg.L-1组SKOV3凋亡细胞数明显增加(P<0.01)。结论:在一定浓度范围内蝎SV-Ⅰ可明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的生长,其机制与SV-Ⅰ抑制SKOV3细胞DNA合成、诱导SKOV3细胞发生G2+M和G1期阻滞及诱导SKOV3细胞凋亡有关。

自噬基因Beclin1对上皮性卵巢癌细胞SKOV3生长的抑制作用

目的观察自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞株SKOV3中过表达对肿瘤细胞在体内、体外生长活性的影响。方法脂质体法将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染人卵巢癌细胞株SKOV3,MTT法分析外源性Beclin1过表达对SKOV3增殖的影响,流式细胞仪检测转染后肿瘤细胞的凋亡及自噬情况。将重组质粒pcDNA3.1/Beclin1转染SKOV3细胞后,接种到裸鼠皮下,观察体内致瘤活性及生长情况;免疫组化检测瘤组织Beclin1蛋白的表达。结果Beclin1在SKOV3中的过表达后抑制肿瘤细胞在体外的生长,抑制率为58.68%;pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3的凋亡率为(21.26±3.89)%,高于空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组,差异有显著性(P<0.05);流式细胞仪检测pcDNA3.1/Beclin1转染后SKOV3细胞MDC平均荧光强度高于pcDNA3.1转染组和未转染组。重组质粒pcDNA3.1/Beclin1使SKOV3细胞在裸鼠体内成瘤时间延长,瘤体体积及质量明显小于空质粒组和空白对照组,抑瘤率为50.27%。结论自噬基因Beclin1在人卵巢癌细胞SKOV3中过表达可抑制SKOV3在体内、体外的增殖,针对自噬基因Beclin1的卵巢癌基因治疗可能具有可行性。

桧木醇通过mTOR通路抑制自噬诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡

目的:探究桧木醇(Hinokitiol)对卵巢癌SKOV3细胞自噬的作用及机制。方法:将SKOV3细胞分为SKOV3组、Hinokitiol(5μmol/L)组、Hinokitiol(10μmol/L)组和Hinokitiol(20μmol/L)组,分别用0、5、10、20μmol/L的桧木醇处理各组细胞,CCK8检测培养不同时间细胞的增殖倍数,克隆实验检测细胞增殖,流式检测细胞凋亡,免疫印迹检测自噬相关蛋白Beclin1、P62、LC3及通路蛋白雷帕霉素靶蛋白(mTOR)和UNC-51样激酶1(Ulk1)的表达,免疫荧光检测LC3的表达。结果:桧木醇处理细胞4d后,与SKOV3组比较,Hinokitiol(5、10、20μmol/L)组细胞增殖倍数均显著降低,克隆形成细胞数均明显减少,细胞凋亡率明显升高;同时,Hinokitiol(5、10、20μmol/L)组细胞Beclin1表达水平和LC3Ⅱ/LC3Ⅰ的比值明显低于SKOV3组,P62表达水平与SKOV3组比较明显升高,细胞质LC3阳性表达也明显减少;此外,Hinokitiol(5、10、20μmol/L)还能显著升高SKOV3细胞mTOR的表达水平,并抑制Ulk1表达。结论:桧木醇可通过抑制自噬诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡,作用机制与激活mTOR信号通路有关。