SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

lncRNA ITGA9-AS1、miR-670-3p在肝细胞癌组织中表达及与患者预后的关系

目的探究长链非编码RNA(lncRNA ITGA9-AS1)和miR-670-3p在肝细胞癌(HCC)组织中的表达及预后评估价值。方法以2016年6月至2018年6月邯郸市中心医院收治的76例肝细胞癌患者为研究对象,取其癌组织和相应癌旁组织,分别为HCC组和癌旁组。lncRNA ITGA9-AS1和miR-670-3p水平检测采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR);Pearson相关性分析lncRNA ITGA9-AS1和miR-670-3p的关系;Kaplan-Meier法分析生存曲线;COX回归分析影响因素。结果HCC组lncRNA ITGA9-AS1水平低表达,miR-670-3p水平高表达(P<0.05)。lncRAN ITGA9-AS1与miR-670-3p呈负相关关系(r=-0.310,P=0.006)。lncRNA ITGA9-AS1、miR-670-3p表达水平与TNM分期、淋巴结转移、肿瘤分化、肿瘤大小、肿瘤数目有关(P<0.05)。随访3年发现lncRNA ITGA9-AS1高表达组患者累积生存率高于低表达组;miR-670-3p高表达组患者累积生存率低于低表达组(P<0.05)。多因素COX回归分析表明肿瘤分化(HR=1.842)、淋巴结转移(HR=3.882)、miR-670-3p(HR=3.786)、lncRNA ITGA9-AS1(HR=3.366)是影响HCC患者预后的因素(P<0.05)。结论HCC组织中lncRNA ITGA9-AS1呈低表达,miR-670-3p呈高表达,二者表达水平与临床病理特征存在密切关系,且对HCC患者预后有一定的评估价值。

LncRNA KIF9-AS1靶向miR-152-3p调控肺癌细胞的顺铂敏感性

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)驱动蛋白家族成员9反义RNA1(KIF9-AS1)对肺癌细胞的顺铂(DDP)敏感性的影响和作用机制。方法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白质印记(western blot)检测检测A549、A549/DDP中KIF9-AS1、miR-152-3p和多药耐药相关蛋白1(MRP1)的表达水平。将KIF9-AS1小干扰RNA、miR-152-3p模拟物分别转染A549/DDP细胞,流式细胞术、Western blot分别检测下调KIF9-AS1或上调miR-152-3p对A549/DDP细胞凋亡和MRP1、细胞周期素D1(CyclinD1)和裂解的半胱氨酸蛋白酶3(cleaved-caspase-3)蛋白表达的影响。细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力和A549/DDP细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)值。双荧光素酶报告基因实验和RT-qPCR确定KIF9-AS1对miR-152-3p的靶向调控作用。结果与A549细胞比较,A549/DDP细胞中KIF9-AS1、MRP1蛋白表达显著升高,miR-152-3p表达显著降低(P<0.05)。下调KIF9-AS1表达或上调miR-152-3p表达后,A549/DDP细胞活力、CyclinD1蛋白表达显著降低,凋亡率、Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高,MRP1蛋白表达和IC50显著降低(P<0.05)。KIF9-AS1靶向负调控miR-152-3p表达。下调miR-152-3p表达可逆转下调KIF9-AS1对A549/DDP细胞活力、凋亡率、CyclinD1、Cleaved-caspase-3和MRP1蛋白表达以及IC50的影响(P<0.05)。结论下调KIF9-AS1表达可显著抑制A549/DDP细胞的增殖,促进细胞凋亡,增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,其机制与靶向调控miR-152-3p表达有关。

胱氨酸尿症相关基因SLC3A1与SLC7A9突变与药物研究进展

胱氨酸尿症(cystinuria,CSNU)是临床少见遗传病,由溶质载体家族3成员1(solute carrier family3 member 1,SLC3A1)和溶质载体家族7成员9(solute carrier family 7 member 9,SLC7A9)两个基因突变导致。CSNU患者基因突变及基因分型一直备受临床关注,本文针对CSNU相关基因SLC3A1和SLC7A9的遗传突变情况、基因型-表型相关性及近期新药研究进展作一综述。

山萘酚调控VPS9D1-AS1/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系SiHa增殖和凋亡的影响

目的探讨山萘酚调控长链非编码RNAVPS9D1反义RNA 1(VPS9D1-AS1)/miR-377-3p对人宫颈癌细胞系增殖和凋亡的影响。方法将人宫颈癌细胞系SiHa分为对照组、山萘酚低、中和高剂量组(5、10和20μmol/L山萘酚)、si-NC组(转染si-NC)、si-VPS9D1-AS1组(转染si-VPS9D1-AS1)、山萘酚+pcDNA-VPS9D1-AS1组(20 mg/L山萘酚+转染pcDNA-VPS9D1-AS1)、山萘酚+anti-miR-377-3p组(20 mg/L山萘酚+转染anti-miR-377-3p)。RT-qPCR、MTT法和集落形成实验分别测定VPS9D1-AS1、miR-377-3p表达、细胞活性和集落形成;流式细胞测量术、划痕试验、Transwell小室法和Western blot分别测定细胞凋亡、迁移、侵袭和Bax及Bcl-2表达;荧光素酶活性检测分析VPS9D1-AS1对miR-377-3p的靶向作用。结果与对照相比,低、中和高剂量山萘酚降低SiHa细胞中VPS9D1-AS1表达水平,集落形成数、细胞活性、Bcl-2蛋白表达水平、迁移距离和侵袭细胞数,且提高了miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平;作用均呈浓度依赖性(P<0.05)。SiHa细胞中沉默VPS9D1-AS1后,miR-377-3p表达水平、凋亡率和Bax蛋白表达水平高于si-NC组,且集落形成数、Bcl-2蛋白表达水平、细胞活性、迁移距离和侵袭细胞数低于si-NC组(P<0.05)。VPS9D1-AS1能靶向miR-377-3p。山萘酚处理的SiHa增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响能被过表达VPS9D1-AS1或抑制miR-377-3p所逆转。结论山萘酚通过靶向miR-377-3p下调VPS9D1-AS1,减轻宫颈癌细胞系增殖、迁移和侵袭,以及加速凋亡。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞RUNX1及其靶基因SLC9A3R1的研究

目的:研究转录调节因子RUNX1及其靶基因SLC9A3R1在银屑病患者骨髓CD34+细胞中的表达及SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1的连接位点,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性,为深入阐明银屑病患者免疫异常的根源及造血细胞在其中的作用提供理论依据。方法:采用免疫磁珠法分离CD34+细胞,RT-PCR法分别检测RUNX1和SLC9A3R1的mRNA表达,直接测序法检测PCR产物中SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1连接位点DNA序列。结果:银屑病患者骨髓CD34+细胞RUNX1表达阳性率低于正常对照组(P<0.05);银屑病患者骨髓CD34+细胞SLC9A3R1表达水平明显高于正常对照组(P<0.05),且与PASI评分正相关(r=0.48,P<0.05);在SLC9A3R1与NAT9之间未发现RUNX1连接位点的突变。结论:决定银屑病患者骨髓CD34+细胞分化的关键基因RUNX1存在异常;银屑病患者骨髓RUNX1和SLC9A3R1可能通过对骨髓造血微环镜和造血干细胞的异常调节参与银屑病的发病。

过表达SLC9A3R1对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨SLC9A3R1在MDA-MB-231乳腺癌细胞中过表达后,对其恶性表型是否具有逆转作用。方法将pBK-CMV-HA和pBK-CMV-HA-SLC9A3R1wt质粒转染不表达SLC9A3R1的人MDA-MB-231乳腺癌细胞,经G418筛选,建立稳定高表达SLC9A3R1的MDA-MB-231细胞系。经Western blot法验证后,采用CCK-8试剂盒检测肿瘤细胞增殖活性,采用软琼脂集落形成方法检测SLC9A3R1对MDA-MB-231细胞形成集落能力的影响,并采用流式细胞仪检测SLC9A3R1对MDAMB-231细胞凋亡的影响。结果 SLC9A3R1可使MDA-MB-231细胞的增殖能力明显减弱,达50%以上(第5天P=0.0016,第6天P=0.002,第7天P=0.006)。相比MDA-MB-231细胞和整合了空载体的细胞,SLC9A3R1过表达可使MDA-MB-231细胞系锚定无关的增殖能力明显减弱[(2.9±0.47)%、(2.52±0.08)%和(1.33±0.33)%],达47%(P=0.007)。相比整合了空载体的MDA-MB-231细胞,SLC9A3R1过表达可使MDA-MB-231细胞系凋亡百分比明显增多[(2.23±1.41)%和(9.23±2.97)%],达4倍以上(P=0.018)。结论SLC9A3R1可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。

长链非编码RNA SLC25A25-AS1对喉癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制

目的探讨长链非编码RNA SLC25A25的反义RNA1(SLC25A25-AS1)对喉癌细胞侵袭和迁移的影响及其机制。方法采用实时荧光定量PCR检测人鼻咽上皮细胞NP69和喉癌细胞(TU-212、TU-177和Hep-2)的SLC25A25-AS1水平,分别采用MTT法、划痕实验和Transwell实验检测细胞的增殖活性、迁移能力和侵袭能力。采用Western blotting检测信号转导及转录激活因子3(STAT3)、磷酸化STAT3(p-STAT3)和血管内皮生长因子(VEGF)的蛋白表达水平。结果喉癌细胞的SLC25A25-AS1表达水平低于NP69细胞且差异有统计学意义(P<0.05)。过表达SLC25A25-AS1使Hep-2细胞增殖活性显著降低(P<0.05),并显著抑制Hep-2细胞的迁移和侵袭能力(P<0.05)。过表达SLC25A25-AS1的Hep-2细胞中,p-STAT3和VEGF的蛋白表达水平显著降低(P<0.05)。结论SLC25A25-AS1过表达可抑制喉癌Hep-2细胞的增殖、迁移和侵袭,其抑癌机制可能与STAT3/VEGF通路有关。

沉默lncRNA THAP9-AS1对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响

目的:探讨沉默长链非编码RNA THAP9反义RNA1(lncRNA THAP9-AS1)对乳腺癌细胞增殖、凋亡、迁移及侵袭的影响。方法:选取贵州省肿瘤医院2017年6月至2020年6月25例乳腺癌患者的癌组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p表达水平。将MDA-MB-231细胞随机分为s i-THAP9-AS1组、s i-NC组、miR-505-3p组、miR-NC组、s i-THAP9-AS1+ant i-miR-NC组、si-THAP9-AS1+miR-505-3p inhibitor组。采用四甲基偶氮唑盐比色(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞活性,平板克隆实验检测细胞集落形成数,流式细胞术实验检测细胞凋亡,划痕实验和Transwell检测细胞迁移及侵袭,双荧光素酶报告实验检测lncRNA THAP9-AS1和miR-505-3p的靶向关系。结果:与癌旁组织相比,乳腺癌组织中lncRNA THAP9-AS1的表达水平升高,miR-505-3p的表达水平降低(P<0.05)。沉默lncRNA THAP9-AS1或过表达miR-505-3p可降低细胞活性及迁移距离,减少集落形成数和侵袭细胞数,增加细胞凋亡率,增加E-cadherin蛋白表达水平升高,并降低N-cadherin蛋白表达水平(P<0.05)。LncRNA THAP9-AS1靶向调控miR-505-3p;抑制miR-505-3p逆转了沉默lncRNA THAP9-AS1对MDA-MB-231增殖、迁移及侵袭的影响。结论:沉默lncRNA THAP9-AS1可通过增加miR-505-3p抑制乳腺癌细胞增殖、迁移及侵袭,并抑制凋亡。

精炼渣组成对31CrMoV9钢夹杂物的影响

试验用31CrMoV9钢(/%:0.28~0.33C,0.30~0.35Si,0.49~0.60Mn,0.011~0.016P,0.027~0.031S,2.47~2.60Cr,0.16~0.23Mo,0.12~0.19V)由25 kg感应炉熔炼,采用正交试验研究了二元碱度2.5~3.5不同成分精炼渣(/%:46.43~59.89CaO,15.16~23.50SiO_2,10~20Al_2O_3,6~10MgO,2~5CaF_2)对31CrMoV9钢夹杂物数量、尺寸和成分的影响。结果表明,精炼渣二元碱度和氧化铝含量对该钢夹杂物含量的影响显著;当二元碱度从2.5增加到3.5时,每0.3 mm^2钢中夹杂物的平均面积从22.07μm^2增至25.67μm^2,增幅为16.31%;夹杂物的数量从316.67个/0.3 mm^2降至255.00个/0.3 mm^2,降幅为19.47%,且有利于形成复合型夹杂物。当氧化铝含量从10%增加到20%,每0.3 mm^2钢中夹杂物的面积由22.57μm^2增至24.28μm^2,增幅为7.55%,夹杂物的数量由292.67个/0.3 mm^2降至272.00个/0.3 mm^2,降幅为7.06%,并易形成镁铝尖晶石类夹杂物。综合分析,当精炼渣成分为10%Al_2O_3、10%MgO、5%CaF_2、二元碱度为3.5时精炼效果最佳。

lncRNA VPS9D1-AS1调节miR-331-3p/SERP1轴对宫颈癌细胞增殖、凋亡和侵袭的影响

目的 探讨lncRNAVPS9D1-AS1对宫颈癌细胞恶性生物学行为的影响及作用机制。方法 分析宫颈癌细胞和宫颈癌组织中lncRNAVPS9D1-AS1表达情况;将SiHa细胞分为si-NC组、si-VPS9D1-AS1组、si-VPS9D1-AS1+inhibitor-NC组、si-VPS9D1-AS1+miR-331-3p inhibitor组和control组,qRT-PCR检测转染效率;通过集落形成实验、流式细胞术、Transwell实验、宫颈癌细胞肿瘤异种移植生长等一系列功能实验研究lncRNAVPS9D1-AS1对宫颈癌的影响。采用荧光素酶报告基因法、蛋白质印迹法验证lncRNAVPS9D1-AS1与miR-331-3p、miR-331-3p与SERP1的靶向关系。结果 VPS9D1-AS1在宫颈癌组织和细胞中上调表达(P<0.05);与si-NC组比较,si-VPS9D1-AS1组SiHa细胞集落形成数、PCNA、SERP1表达、迁移与侵袭细胞数、MMP-2、MMP-9表达降低,细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3表达升高(P<0.05);下调miR-331-3p可逆转VPS9D1-AS1敲低对SiHa细胞恶性行为的抑制作用(P<0.05);双荧光素酶报告基因实验证实miR-331-3p与lncRNA VPS9D1-AS1、miR-331-3p与SERP1存在靶向调控关系(P<0.05);裸鼠实验表明,体内抑制VPS9D1-AS1表达可显著降低移植瘤质量、体积、SERP1表达,升高miR-331-3p表达(P<0.05)。结论 lncRNA VPS9D1-AS1在宫颈癌组织和细胞中上调表达,敲低VPS9D1-AS1通过调节miR-331-3p/SERP1轴,抑制宫颈癌细胞的恶性进展。

Improved microwave-assisted catalyst-free synthesis of9-aryl-5,9-dihydropyrimido[4,5-d][1,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidine-6,8(4H,7H)-dione derivatives

Agreen regioselective synthesis of some new and known 9-aryl-5,9-dihydropyrimido[4,5-d][l,2,4]triazolo[1,5-a]pyrimidine-6,8（4H,7H）-diones has been described via the microwave-assisted one-pot reaction of 3-amino-1H-1,2,4-triazoles,aromatic aldehydes and barbituric acids under solvent- and catalyst-free conditions.This operationally simple procedure is less laborious and provides a better scope than previously reported procedures.

吡嘧司特钾的合成

以氰乙酸乙酯为原料 ,与叠氮化钠环合得到四唑 5 乙酸乙酯 ,再与 2 氨基 3 甲基吡啶缩合得到 3 ( 3 甲基 2 吡啶氨基 ) 2 ( 1H 四唑 5 基 )丙烯酸乙酯 ,之后经环合成盐得到吡嘧司特钾 ,总收率 4 8%。

用改性的钕催化体系聚合丁二烯

使用以氧化丙烯甲基铝改性的Nd(OCOR)3-AlH(iso-C4H9)2-C6H4(CCl3)2催化体系聚合丁二烯。研究了聚合的动力学参数及聚丁二烯的分子特性。此种改性催化体系具有高活性,由此合成的聚丁二烯橡胶硫化胶的力学性能可满足工业上的需要。。