SLC9A3-AS1调控miR-148a-3p/ROCK1信号轴影响肾癌细胞生物学功能

目的检测lncRNA SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌(clear cell renal cell carcinoma,ccRCC)组织与肾癌细胞中的表达水平,探讨其促进肾癌细胞恶性生物学行为的机制。方法应用GEPIA2在线软件(http://gepia2.cancer-pku.cn/)分析TCGA数据库中SLC9A3-AS1在ccRCC组织中的表达水平;采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测SLC9A3-AS1在不同肾癌细胞系、24例ccRCC组织与癌旁正常肾脏组织中的表达水平;应用细胞增殖/毒性检测试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)和Transwell小室迁移实验检测敲低SLC9A3-AS1表达对肾癌细胞增殖与迁移的影响;应用蛋白质免疫印迹法检测增殖与迁移相关信号通路蛋白的表达水平;采用双荧光素酶报告基因实验验证SLC9A3-AS1与miR-148a-3p/ROCK1轴的靶向调控关系。结果GEPIA2软件分析结果显示,相较正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在肾透明细胞癌组织中表达显著上调(P<0.01)。qRT-PCR结果显示,相较癌旁正常肾脏组织,SLC9A3-AS1在24例ccRCC组织中表达显著上调(P<0.01);相较永生化肾小管上皮细胞,SLC9A3-AS1在4种肾癌细胞系中表达均显著上调,以786-O细胞最为显著(P<0.01)。干扰SLC9A3-AS1表达,可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力,上调E-cadherin的蛋白表达水平,而下调N-cadherin、MMP2的蛋白表达水平(均P<0.05);过表达miR-148a-3p可显著抑制786-O细胞的增殖与迁移能力(P<0.01)。双荧光素酶报告基因检测结果表明,SLC9A3-AS1可特异性结合miR-148a-3p,后者进一步靶向结合ROCK1 mRNA的3′UTR区域;过表达miR-148a-3p可明显下调ROCK1 mRNA的表达水平,敲低miR-148a-3p表达则产生相反的效应;敲低SLC9A3-AS1表达可显著下调786-O细胞中ROCK1 mRNA与蛋白的表达水平(P<0.01);下调miR-148a-3p表达可部分逆转SLC9A3-AS1沉默对786-O细胞增殖与迁移的抑制作用(P<0.05)。结论SLC9A3-AS1在ccRCC中通过调控miR-148a-3p/ROCK1轴发挥促癌作用,有望成为ccRCC的一个新的分子标志物。

胱氨酸尿症相关基因SLC3A1与SLC7A9突变与药物研究进展

胱氨酸尿症(cystinuria,CSNU)是临床少见遗传病,由溶质载体家族3成员1(solute carrier family3 member 1,SLC3A1)和溶质载体家族7成员9(solute carrier family 7 member 9,SLC7A9)两个基因突变导致。CSNU患者基因突变及基因分型一直备受临床关注,本文针对CSNU相关基因SLC3A1和SLC7A9的遗传突变情况、基因型-表型相关性及近期新药研究进展作一综述。

lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能分析

目的探讨lncRNA SLC9A3-AS1在肝细胞癌(HCC)中的表达意义和其参与HCC发生发展的潜在作用机制。方法收集37例HCC组织及其配对癌旁组织,以及HCC细胞RNA,利用qRT-PCR检测lncRNA SLC9A3-AS1在组织和细胞中的表达水平,并分析其与患者临床病理特征的关系。绘制lncRNA SLC9A3-AS1的受试者工作特征(ROC)曲线,分析其对HCC的诊断效能。通过生物信息学方法筛选与lncRNA SLC9A3-AS1结合的RNA结合蛋白,并绘制韦恩图,分析lncRNA SLC9A3-AS1与结合蛋白表达的相关性,以及蛋白表达与HCC病理分期和患者生存预后的关系。结果lncRNA SLC9A3-AS1在HCC组织和细胞中表达下调,其表达水平与患者血清甲胎蛋白(AFP)水平明显相关(P<0.05)。lncRNA SLC9A3-AS1的ROC曲线下面积(AUC)为0.849(95%CI:0.796~0.886)。韦恩图显示5个与lncRNA SLC9A3-AS1潜在结合的蛋白:hnRNPA1、YTHDC1、RBM4、NONO和RBMx,其表达与lncRNA SLC9A3-AS1表达呈明显正相关(P<0.05)。随着HCC分期的进展,不同分期的RNA结合蛋白表达量差异有统计学意义(P<0.05);RBM4、NONO和RBMx低表达患者总体生存期明显长于高表达患者(P<0.05)。结论lncRNA SLC9A3-AS1在HCC中下调,有望作为HCC诊断的生物标志物,并且可能通过与RNA结合蛋白互作调控HCC进展。

银屑病患者骨髓CD34^+细胞RUNX1及其靶基因SLC9A3R1的研究

目的:研究转录调节因子RUNX1及其靶基因SLC9A3R1在银屑病患者骨髓CD34+细胞中的表达及SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1的连接位点,以揭示银屑病患者造血干细胞的活性,为深入阐明银屑病患者免疫异常的根源及造血细胞在其中的作用提供理论依据。方法:采用免疫磁珠法分离CD34+细胞,RT-PCR法分别检测RUNX1和SLC9A3R1的mRNA表达,直接测序法检测PCR产物中SLC9A3R1与NAT9之间RUNX1连接位点DNA序列。结果:银屑病患者骨髓CD34+细胞RUNX1表达阳性率低于正常对照组(P<0.05);银屑病患者骨髓CD34+细胞SLC9A3R1表达水平明显高于正常对照组(P<0.05),且与PASI评分正相关(r=0.48,P<0.05);在SLC9A3R1与NAT9之间未发现RUNX1连接位点的突变。结论:决定银屑病患者骨髓CD34+细胞分化的关键基因RUNX1存在异常;银屑病患者骨髓RUNX1和SLC9A3R1可能通过对骨髓造血微环镜和造血干细胞的异常调节参与银屑病的发病。

过表达SLC9A3R1对MDA-MB-231乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨SLC9A3R1在MDA-MB-231乳腺癌细胞中过表达后,对其恶性表型是否具有逆转作用。方法将pBK-CMV-HA和pBK-CMV-HA-SLC9A3R1wt质粒转染不表达SLC9A3R1的人MDA-MB-231乳腺癌细胞,经G418筛选,建立稳定高表达SLC9A3R1的MDA-MB-231细胞系。经Western blot法验证后,采用CCK-8试剂盒检测肿瘤细胞增殖活性,采用软琼脂集落形成方法检测SLC9A3R1对MDA-MB-231细胞形成集落能力的影响,并采用流式细胞仪检测SLC9A3R1对MDAMB-231细胞凋亡的影响。结果 SLC9A3R1可使MDA-MB-231细胞的增殖能力明显减弱,达50%以上(第5天P=0.0016,第6天P=0.002,第7天P=0.006)。相比MDA-MB-231细胞和整合了空载体的细胞,SLC9A3R1过表达可使MDA-MB-231细胞系锚定无关的增殖能力明显减弱[(2.9±0.47)%、(2.52±0.08)%和(1.33±0.33)%],达47%(P=0.007)。相比整合了空载体的MDA-MB-231细胞,SLC9A3R1过表达可使MDA-MB-231细胞系凋亡百分比明显增多[(2.23±1.41)%和(9.23±2.97)%],达4倍以上(P=0.018)。结论SLC9A3R1可抑制MDA-MB-231乳腺癌细胞的增殖和迁移能力。

rno-miR-301b-3p靶向SLC26A4调控H9c2细胞肥大

[目的]探讨H9c2心肌细胞肥大的潜在机制。[方法]苯肾上腺素处理后,检测H9c2细胞肥大情况。RNA-Seq检测H9c2细胞肥大后的差异miRNA。过表达差异miRNA,鉴定调控H9c2细胞肥大的miRNA。通过miRDB在线分析miRNA的潜在底物。[结果]苯肾上腺素处理H9c2细胞后,细胞表面积明显增大(1 467±123 vs 3 764±312,P<0.05),并且通过RNA-Seq发现多种miRNA的表达水平下降。当过表达rno-miR-301b-3p时,H9c2细胞的表面积减少(3 427±252 vs 1 788±120,P<0.05)。敲低rno-miR-301b-3p时,H9c2细胞的表面积增加(1 542±243 vs 2 890±111,P<0.05)。过表达rno-miR-301b-3p后,发现FBXO48、SLC9A4、CHST1、UBL3基因的mRNA表达水平显著下降。敲低SLC9A4后,H9c2细胞的表面积减少(3 651±135 vs 1 777±124,P<0.05)。敲低rno-miR-301b-3p后,SLC26A4的蛋白表达水平上升。过表达rno-miR-301b-3p后,SLC9A4的蛋白表达水平下降。过表达SLC9A4后,H9c2细胞的表面积增加(1 456±111 vs 3 324±321,P<0.05)。此外,苯肾上腺素处理H9c2细胞后,SLC26A4的蛋白表达水平上升。[结论] rno-miR-301b-3p通过靶向SLC26A4 mRNA的3′端非编码区,降解了SLC26A4的mRNA,抑制了SLC26A4的蛋白表达,最后抑制了H9c2细胞肥大。

尿酸转运蛋白相关基因多态性与原发性痛风遗传易感性关系的荟萃分析

目的探讨尿酸转运蛋白相关基因单核苷酸多态性与原发性痛风的相关性。方法检索Pub Med数据库、EMBASE数据库、中国知网数据库和万方数据库的相关中英文文献,收集尿酸转运蛋白相关基因多态性与原发性痛风易感性的相关研究,按纳入与排除标准筛选文献,提取资料。使用Rev Man 5.3软件进行荟萃统计分析,敏感性分析及发表偏倚分析。结果共10 386例原发性痛风患者和21 076例对照者纳入分析,荟萃分析结果显示,SLC2A9 rs3733591[OR(95%CI)=0.76(0.66,0.89),P<0.05]、SLC2A9rs16890979[OR(95%CI)=0.33(0.18,0.58),P<0.05]、SLC2A9 rs6855911[OR(95%CI)=0.66(0.56,0.77),P<0.05]、SLC2A9rs13124007[OR(95%CI)=1.49(1.17,1.91),P<0.05]、SLC2A9 rs1014290[OR(95%CI)=0.69(0.53,0.89),P<0.05]和ABCG2rs2231142[OR(95%CI)=2.13(1.81,2.50),P<0.05]这六个位点的多态性与原发性痛风易感性相关。结论 SLC2A9(rs3733591、rs16890979、rs6855911、rs13124007和rs1014290)和ABCG2(rs2231142)的多态性与原发性痛风易感性相关。