糖尿病大鼠肾小管上皮细胞转化与肝细胞生长因子和Smad7蛋白的表达

目的探讨糖尿病肾病(DN)时肾小管上皮细胞转化以及肝细胞生长因子(HGF)、Smad7蛋白在其中可能发挥的作用。方法60只Wistar大鼠均行右肾切除术,伤口愈合后随机分为右肾切除对照组和糖尿病组。腹腔注射链脲佐菌素诱发大鼠糖尿病模型。采用免疫组化法检测角蛋白18(CK18)、α平滑肌肌动蛋白(αSMA)、HGF和Smad7蛋白的表达;流式细胞术检测αSMA和HGF的表达;蛋白质免疫印迹法检测Smad7蛋白的表达。结果糖尿病组较对照组CK18的表达降低,αSMA的表达上升,HGF和Smad7蛋白的表达表现为先上升后下降。结论糖尿病时,肾小管上皮细胞可发生表型转化,转化为肌成纤维细胞。HGF和Smad7蛋白表达下降可能与该模型中肾小管上皮细胞转化有关。

哮喘大鼠肺组织TGF-β1与Smad3、Smad7蛋白的变化及不同中医治法对其的影响

目的探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)和Smads蛋白在哮喘大鼠肺组织中的变化及宣肺、固本、宣肺固本三种中医治法(宣肺方、固本方、宣肺固本方)对其的影响。方法以卵蛋白复制大鼠哮喘模型,并用不同中医治法(宣肺方、固本方、宣肺固本方)对其进行干预。在激发哮喘并治疗4周后处死,观察各组大鼠肺系数的变化,并用免疫组化法检测大鼠支气管肺组织中TGF-β1和Smad3、Smad7蛋白的表达。结果经治疗后,(1)哮喘大鼠的肺系数有不同程度的升高,中药治疗组与地塞米松组间的差异有统计学意义;(2)哮喘大鼠支气管肺组织TGF-β1、Smad3蛋白的表达水平升高,而Smad7蛋白的表达下降,三种中医治法对其均有影响,宣肺固本治法优于其他治法,有统计学意义。结论哮喘大鼠气道重建模型中TGF-β1、Smad3蛋白与气道重塑呈正相关,而Smad7蛋白则与气道重塑呈负相关;中医宣肺固本法治疗哮喘气道重建可能与调节TGF-β1和Smad3、Smad7蛋白的表达水平有关。

TGF-βⅡ型受体、Smad4与Smad7蛋白在胃癌中的表达

目的通过检测转化生长因子TGF-βⅡ型受体(TβR-Ⅱ)、Smad4与Smad7蛋白在胃癌组织中的表达,研究它们与胃癌发生、发展的关系。方法应用S-P免疫组化检测方法,对10例正常胃黏膜、10例早期胃癌与45例进展期胃癌组织的TβR-Ⅱ、Smad4与Smad7蛋白的表达进行检测。结果TβR-Ⅱ与Smad4蛋白在正常胃黏膜和早期胃癌中的表达明显高于进展期胃癌,且胃癌分化程度越低,阳性表达率越低(P<0.05)。Smad7蛋白在进展期胃癌中的表达明显高于正常胃黏膜和早期胃癌(P<0.05)。TβR-Ⅱ、Smad4及Smad7蛋白的表达均与淋巴结转移相关。结论TβR-Ⅱ、Smad4与Smad7蛋白三者表达的异常可能与胃癌的发生、发展和转移相关,可能成为研究胃癌分化与转移的生物学标记物。

转化生长因子-β_1、Smad4与Smad7蛋白在肾癌组织中的表达及意义

目的:通过检测转化生长因子(TGF)-β1、Smad4与Smad7蛋白在肾癌组织中的表达,研究它们与肾癌发生、发展的关系。方法:应用S-P免疫组化检测方法,对10例正常肾组织、45例未转移的肾癌与10例已有转移的肾癌组织的TGF-β1、Smad4与Smad7蛋白的表达进行检测。结果:Smad4蛋白在正常肾组织和未转移组肾癌组织中的表达明显高于转移组肾癌组织,且肾癌分化程度越低,阳性表达率越低(P<0.05)。TGF-β1、Smad7蛋白在转移组肾癌组织中的表达明显高于正常肾组织和未转移组肾癌组织(P<0.05)。TGF-β1、Smad4及Smad7蛋白的表达均与淋巴结转移相关。结论:TGF-β1、Smad4与Smad7蛋白三者表达的异常可能与肾癌的发生、发展和转移相关,可能成为研究肾癌分化与转移的生物学标记物。

丹参酮ⅡA对肝癌细胞MHCC97-HSmad3/Smad7蛋白及上皮间质转化的影响

目的:探讨丹参酮ⅡA对肝癌细胞MHCC97-H Smad3、Smad7蛋白及上皮间质转移标志蛋白Ecadherin/N-cadherin表达水平及侵袭转移能力的影响。方法:10μM丹参酮ⅡA处理MHCC97-H细胞,实时定量PCR检测细检测Smad3、Smad7和snail的m RNA表达;用不同浓度丹参酮ⅡA及10%小牛血清对照组培养肝癌细胞MHCC97-H,48 h后,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平。划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力。结果:10μM丹参酮ⅡA处理MHCC97-H细胞,不同时间点检测Smad3、Smad7和snail的m RNA表达:结果显示,与0 h相比,48 h及72 h Smad7的表达量明显升高,差异有统计学意义(P<0.05);Smad3及snail的差异无统计学意义。不同浓度丹参酮ⅡA处理MHCC97-H细胞48 h,Western blot检测Smad3、p-Smad3、Smad7、snail、E-cadherin、Ep CAm、N-cadherin和Vimentin蛋白表达:结果显示,与对照组相比,高浓度丹参酮ⅡA组(20μM)48 h的p-Smad3、Snail和N-cadherin、Vimentin明显降低,Smad7、E-cadherin和Ep CAM明显升高(P<0.05)。中浓度丹参酮ⅡA组(10μM)48 h的Smad7、E-cadherin和Ep CAM升高;p-Smad3、snail、Ncadherin和Vimentin降低(P<0.05)。低浓度丹参酮ⅡA组(5μM)48 h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P<0.05);而Smad3、p-Smad3及snail的结果与对照组无明显差异(P>0.05)。不同浓度的丹参酮ⅡA组和对照组(DMSO)Smad3的蛋白表达无影响。不同浓度的丹参酮ⅡA组均可以减少p-Smad3和增加E-cadherin的表达,且随着丹参酮ⅡA浓度增高p-Smad3的表达逐渐减少,E-cadherin的表达逐渐增加。划痕法结果显示,与对照组比较,24 h后中浓度和高浓度丹参酮ⅡA组肝癌细胞的划痕愈合较慢,差异均有统计学意义(P<0.05);48 h后中浓度和高浓度丹参酮ⅡA组与对照组相比,肝癌细胞的划痕愈合明显减慢,差异有统计学意义(P<0.01);且同等浓度丹参酮ⅡA组肝癌细胞的划痕愈合与24 h相比较,48 h肝癌细胞的划痕愈合减慢。transwell显示,与对照组相比,中浓度和高浓度丹参酮ⅡA处理细胞48 h可明显减少细胞的侵袭,差异有统计学意义(P<0.05)。而低浓度丹参酮ⅡA无明显影响,差异无统计学意义。结论:丹参酮ⅡA能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与与抑制Smad3蛋白磷酸化、上调Smad7蛋白,并抑制上皮间质转化有关。

复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠心肌Smad7蛋白表达的影响

目的探讨复荣通脉胶囊对糖尿病大鼠心肌Smad7蛋白表达的影响。方法采用随机数字表法将60只大鼠分为正常组(10只)、造模组(50只)。成模后,将40只糖尿病大鼠随机分为糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组,每组各10只。复荣通脉低、中、高剂量组分别给予复荣通脉胶囊0.7、1.4、2.8 g/kg灌胃,正常组和糖尿病组给予等量纯净水灌胃。8周后,留取大鼠心肌制备病理切片,观察各组血糖、血脂及Smad7蛋白的阳性表达。结果治疗前、治疗8周后,糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组血糖水平均明显高于正常组(P<0.05),各组大鼠组内治疗前后血糖差异无统计学意义(P>0.05)。治疗8周后,糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组总胆固醇、三酰甘油水平均明显高于正常组(P<0.05)。正常组Smad7蛋白表达呈强阳性,糖尿病组和复荣通脉低、中、高剂量组Smad7蛋白表达均明显下降(P<0.05﹚;与糖尿病组、复荣通脉低剂量组比较,复荣通脉中、高剂量组Smad7蛋白高表达(P<0.05﹚。结论复荣通脉胶囊具有上调糖尿病大鼠心肌Smad7蛋白表达、抑制糖尿病心肌细胞损伤的作用。

HNSCC患者肿瘤组织Smad7蛋白、CXCR4蛋白的表达变化及其意义

目的探讨头颈部鳞状细胞癌(HNSCC)组织中的Smad7蛋白、趋化因子4(CXCR4)蛋白的表达变化及其意义。方法选取我院2016年1月-2017年1月病理科收集的80例HNSCC组织(HNSCC组)、对应部位的正常头颈部组织80例(对照组),采用免疫组化染色检测两组标本中的Smad7蛋白、CXCR4蛋白阳性表达率,并分析二者与HNSCC组织中的病理学分化程度、TNM分期、淋巴结转移、病灶直径之间的关系。结果HNSCC组标本中的Smad7蛋白、CXCR4蛋白阳性表达率分别为72.50%、68.75%,对照组的Smad7蛋白、CXCR4蛋白阳性表达率分别为7.50%、10.00%,差异具有统计学意义(P<0.05);低分化、TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的HNSCC组织中的Smad7蛋白、阳性率显著的高于高中分化、TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移的HNSCC组织(P<0.05);TNM分期(Ⅲ期+Ⅳ期)、发生淋巴结转移的HNSCC组织中的Smad7蛋白、阳性率显著的高于TNM分期(Ⅰ期+Ⅱ期)、未发生淋巴结转移的HNSCC组织(P<0.05)。结论HNSCC组织中的Smad7蛋白、CXCR4蛋白的表达水平升高,并且与肿瘤的病理学特征具有一定的相关性。

IgA肾病病理与临床指标及转化生长因子β_1和Smad7蛋白的相关因素分析

目的对Ig A肾病进行病理学分型及其临床指标之间的关系进行探讨和分析,并观察转化生长因子β1和Smad7蛋白的不同表达,旨在对发病机制等因素进行探讨。方法选取该院收治的100例原发性Ig A肾病患者,收集并研究患者临床资料,参照Ig A肾病分型对所有患者的肾活检标本进行评分并比较各病理及分型见常见指标的差异。通过使用免疫荧光双套染法并结合激光共聚焦显微镜检测Ig A免疫复合物在不同肾病肾小球的沉积量,比较并分析其相关因素。此外,采用化学二步法检测转化生长因子β1和Smad7蛋白的表达,并比较不同表达情况与肾小球沉积量的关系。结果 Ig A肾病肾组织除E0/1外,其余临床指标之间差异有统计学意义(P<0.05);血清Ig A浓度组间差异无统计学意义(P>0.05),肾组织Ig A沉积量差异有统计学意义(P<0.05);转化生长因子β1和Smad7蛋白表达差异有统计学意义(P<0.05)。结论 Ig A肾病病理可以反映病变指标;血清浓度高低并不一定能决定Ig A肾病是否发作,但沉积的Ig A复合物可能过量聚积造成肾小球硬化;转化生长因子β1和Smad7蛋白很可能是过量聚积的重要原因并造成肾小球硬化。

Smad7蛋白在口腔鳞癌组织中的表达及其对口腔鳞癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的:检测Smad7蛋白在口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)中的表达及临床意义,探讨其在口腔鳞癌细胞增殖和迁移中的作用。方法:利用免疫组织化学染色,检测31例原发性口腔鳞癌患者肿瘤组织及癌旁标本中Smad7的表达,并分析其与淋巴结转移之间的关系;利用CCK-8及细胞划痕实验检测Smad7基因沉默对肿瘤细胞增殖及迁移能力的影响;通过Smad7 si RNA干扰HN4细胞,影响Smad7蛋白的表达,利用免疫印迹及q RT-PCR检测其对上皮-间充质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关指标蛋白及RNA表达的影响。采用SPSS18.0软件包对数据进行统计学分析。结果:在口腔鳞癌肿瘤组织中,Smad7蛋白在细胞核和细胞质的表达均显著高于对应的癌旁组织。Smad7的表达与患者颈淋巴结转移显著相关。Smad7 si RNA干扰HN4细胞后,细胞的增殖能力减弱,迁移能力增强。Smad7 si RNA干扰使得HN4细胞神经钙黏附素(N-cadherin)蛋白的表达量升高,而上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达量下降,N-cadherin蛋白及波形蛋白(Vimentin)RNA表达量显著升高,与对照组相比有显著差异。结论:Smad7的表达与口腔鳞癌患者颈淋巴结转移相关,且Smad7在口腔鳞癌肿瘤细胞的增殖及侵袭转移中发挥重要作用。

B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌组织中的表达及临床意义

目的探讨B7-H3和Smad7蛋白在食管鳞状细胞癌(ESCC)组织中的表达水平及临床意义。方法收集82例ESCC组织标本及其癌旁正常组织石蜡标本,运用免疫组织化学方法检测B7-H3及Smad7蛋白的表达。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测组织中B7-H3 mRNA的表达水平。结果 B7-H3在ESCC组织中的表达阳性率高于癌旁正常组织,Smad7蛋白表达阳性率低于癌旁正常组织(P<0.05)。ESCC组织中B7-H3和Smad7蛋白的表达呈负相关(rs=-0.294,P=0.005)。ESCC组织中B7-H3蛋白表达与临床分期、分化程度有关(P<0.05),Smad7蛋白表达与分化程度有关(P<0.05)。结论 ESCC组织中B7-H3蛋白表达上调,Smad7蛋白表达下调。B7-H3和Smad7蛋白的异常表达可能参与了ESCC的发生发展过程。

健脾化瘀法方药对肝癌细胞Smad7蛋白及上皮间质转化的影响

目的:探讨健脾化瘀方对肝癌细胞Smad7蛋白及上皮间质转移标志蛋白E-cadherin/N-cadherin表达水平及侵袭转移能力的影响。方法:分别以不同浓度(20%,高浓度组;10%,低浓度组)健脾化瘀法中药含药血清及空白对照血清(空白对照组)培养肝癌细胞MHCC97-H,q PCR检测细胞Smad7、Snail、Zeb1、Zeb2 m RNA水平,Western blot检测Smad7、Snail、E-cadherin和N-cadherin蛋白表达水平。划痕法和Transwell小室检测肝癌细胞侵袭/迁移能力。结果:高浓度组Smad7 m RNA水平高于空白对照组(P<0.05),Snail、Zeb2 m RNA水平低于空白对照组(P<0.05)。与空白对照组比较,高浓度组48h的Snail、N-cadherin蛋白表达量明显降低,Smad7、E-cadherin蛋白表达量明显升高(P<0.05)。低浓度组48h的E-cadherin升高,N-cadherin降低(P<0.05)。划痕法结果显示,与空白对照组比较,高、低浓度组肝癌细胞的划痕愈合较慢(P<0.05,P<0.01)。Transwell显示,与空白对照组比较,高、低浓度组MHCC97-H细胞的迁移受抑制(P<0.05)。结论:健脾化瘀法中药能抑制肝癌细胞侵袭转移,可能与上调Smad7蛋白含量及抑制上皮间质转化有关。

IgA肾病中转化生长因子β1和Smad7蛋白的表达及其与临床病理特征的相关性分析

目的对IgA肾病肾组织进行转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad7的检测,并分析其与临床指标、血清IgA浓度及肾组织IgA沉积量之间的关系。方法按照IgA肾病牛津分型评分标准对139例患者的肾活检组织进行光镜下评分;应用免疫组织化学二步法检测肾组织TGF-β1和Smad7蛋白;应用免疫荧光双重染色法配合激光共聚焦显微镜检测IgA免疫复合物在IgA肾病肾小球的沉积量;分析各病理参数与临床指标、血清IgA浓度及肾组织IgA沉积量之间的关系。结果单变量分析结果显示,不同系膜细胞增生评分组间(M0/1)24h蛋白定量(24hnp)高低差异有统计学意义(P=0.043);不同肾小球节段硬化/球囊黏连积分组间(S0/1)eGFR差异有统计学意义(P=0.038),不同程度肾小管萎缩/间质纤维化组间(T0/1/2)24h蛋白定量、eGFR和MAP差异有统计学意义(P=0.025,P<0.001,P<0.001)。TGF-β1蛋白在肾组织的表达与肾小球节段硬化/球囊黏连、肾小管萎缩/间质纤维化呈正相关(r=0.349,P<0.001;r=0.325,P=0.001);Smad7蛋白与系膜细胞增生评分的表达呈正相关(r=0.213,P=0.013)。TGF-β1蛋白在肾组织的表达与Smad7的表达呈正相关(r=0.279,P=0.001),与IgA免疫复合物的沉积量正相关(r=0.322,P=0.014),而Smad7蛋白在肾组织的表达与后者无相关性(r=0.269,P=0.094)。血清IgA浓度与肾组织IgA免疫复合物沉积量之间无相关性;两者与各临床指标之间也均无相关性(P>0.05)。血清IgA浓度与肾小球节段硬化/球囊黏连评分呈负相关(r=-0.027,P=0.042);肾组织IgA免疫复合物沉积量与肾小球节段硬化/球囊黏连评分呈正相关(r=0.200,P=0.018)。结论 IgA肾病牛津分型的4个病理参数能较客观的反映肾活检时肾病的状态。血清IgA浓度的高低可能不是IgA肾病发生的决定性因素,但肾组织沉积的IgA免疫复合物可能在肾小球系膜区细胞外基质的过量积聚和在肾小球硬化过程中起重要作用。IgA肾病肾小球沉积的IgA免疫复合物可能会提高肾小球TGF-β1蛋白的表达,TGF-β1及其信号转导分子Smad7很可能参与了病变肾小球细胞外基质的过量积聚,并在肾小球硬化过程中起重要作用。

TAT-Smad7-HA融合蛋白的表达及其转导活性验证

目的构建、表达、纯化、鉴定并标记TAT-Smad7-HA融合蛋白,验证其在体外培养的人原代瘢痕疙瘩成纤维细胞(keloid fibroblast cell,KFB)中的转导活性。方法分别将TAT-PTD、Smad7基因和HA片段依次连接入pET32a(+)质粒构建成pTAT-Smad7-HA重组原核表达载体,IPTG诱导表达后经亲和纯化、Western blot验证、肠激酶切割、目的片段回收和FITC标记后,将FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白作用于体外培养的人原代KFB以观察其转导活性。结果成功构建了TAT-Smad7-HA融合蛋白的原核表达载体pTAT-Smad7-HA,目的蛋白在诱导后获得了高效表达(占菌体总蛋白的25%以上),并成功进行了纯化(纯度达95%以上)、脱盐柱脱盐、Western blot验证、硫氧环蛋白切除及FITC标记,得到相对分子质量约为50×103的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并进一步在体外培养的人KFB细胞中证实了其高转导活性。结论本实验获得了高纯度的FITC-TAT-Smad7-HA融合蛋白,并验证了其在KFB中的高转导活性。

不同剂量阿托伐他汀对肺纤维化小鼠Smad3/7蛋白表达的影响

目的研究不同剂量阿托伐他汀对肺纤维化小鼠肺组织中smad3,smad7蛋白表达影响。方法小鼠随机分为对照组,模型组,阿托伐他汀(10 mg/kg,20 mg/kg,40 mg/kg)治疗组。对照组小鼠气管内灌注生理盐水,其余小鼠气管内灌注博来霉素制备肺纤维化模型。给药后第2天开始阿托伐他汀组给予不同剂量阿托伐他汀灌胃,其余两组给予等量生理盐水灌胃,于第7,14,28天分别处死各组小鼠4只,取肺组织进行HE染色观察病理变化,免疫组化法测定肺组织smad3,smad7蛋白表达情况。结果与模型组比较,阿托伐他汀治疗组smad3蛋白表达均降低,smad7蛋白表达升高,且降低及升高程度均与阿托伐他汀剂量呈正相关。结论阿托伐他汀可减轻小鼠肺纤维化程度,其减轻与Smad3/7通路密切相关,且具有剂量依赖性。

过表达mi RNA-21对肾小管上皮细胞TGF-β/Smad信号通路Smad 7蛋白的影响

目的:探究mi RNA-21过表达对TGF-β/Smad信号通路Smad7蛋白的影响。方法:采用mi RNA-21过表达慢病毒载体和慢病毒空载体分别感染高糖和低糖培养的人肾近端小管上皮细胞HK-2细胞,根据培养基类型和是否感染病毒将细胞分组为高糖mi RNA-21过表达慢病毒组、低糖mi RNA-21过表达慢病毒组、高糖空载组、低糖空载组、高糖细胞组和低糖细胞组,用荧光倒置显微镜观察感染后表达绿色荧光蛋白(GFP)细胞数,通过流式细胞术检测转染率;采用实时荧光定量PCR检测感染后细胞mi RNA-21的表达量,采用Western blot检测Smad7蛋白的表达。结果:感染mi RNA-21过表达慢病毒后,荧光显微镜下HK-2细胞有明显绿色荧光(约为60%),感染率结果显示转染率>60%,实时荧光定量PCR结果显示感染mi RNA-21过表达慢病毒后,高糖转染组细胞mi RNA-21表达量高于高糖细胞组和高糖空载组(P<0.05);Weston blot结果显示高糖转染组Smad 7蛋白的表达低于高糖转染空载病毒组、低糖细胞组、高糖细胞组(P<0.05)。结论:mi RNA-21可以通过抑制Smad7蛋白的表达来调控TGF-β/Smad信号通路。

头颈部鳞状细胞癌组织中Smad7、Smad4蛋白的表达变化及意义

目的观察Smad7及Smad4蛋白在头颈部鳞状细胞癌组织中的表达变化,并探讨其意义。方法采用免疫组化SP法分别对头颈部鳞状细胞癌组织、癌旁组织、活检留取的正常头颈部组织中的Smad7蛋白、Smad4蛋白、TGF-β1表达进行检测,分析三者间表达及其与肿瘤临床病理参数的关系。结果 1 TGF-β1和Smad7蛋白在肿瘤组织中的表达水平明显高于癌旁组织和正常组织(F分别为5.71、7.31),而Smad4蛋白在肿瘤组织中的表达明显低于癌旁组织和正常组织(F为14.92),P均<0.05。2随肿瘤分化程度增高,TGF-β1及Smad7蛋白表达呈降低趋势(F分别为11.2、12.8)、Smad4蛋白呈升高趋势(F为7.91),P均<0.05;Smad4蛋白表达与肿瘤直径呈负相关、Smad7蛋白表达与肿瘤直径呈正相关(P均<0.05),TGF-β1表达与肿瘤直径无明显相关(P>0.05);Smad4蛋白表达在淋巴结转移者明显低于无转移者(P<0.05),有无淋巴结转移者Smad7蛋白及TGF-β1表达无显著差异(P>0.05)。3 Smad4蛋白表达与TGF-β1呈负相关(r=-0.32),与Smad7蛋白呈正相关(r=0.39),P均<0.05。结论头颈部鳞状细胞癌组织中Smad7、Smad4蛋白表达异常,且可能通过调控上皮—间质转化参与肿瘤的侵袭、分化;检测两者(尤其是Smad4蛋白)可为临床分期、预后评估提供依据。

化瘀理肺方对大鼠肺间质纤维化时Smad7和TGF-β表达的影响

目的探讨化瘀理肺方对博莱霉素致大鼠肺间质纤维化的治疗作用及机制。方法将大鼠随机分为对照组、模型组、中药组、激素组,采用博莱霉素经气管内插管注入方法(5 mg/kg)建立肺间质纤维化模型,对照组注入生理盐水(0.25 mL/只),从造模后的第2天起中药组给予化瘀理肺方药物灌胃(13410 mg/kg);对照组、模型组给予生理盐水灌胃(2 mL/只);激素组给予氢化可的松琥珀酸钠腹腔注射(25 mg/kg),于给药后的第14、28天分别处死,称取肺重计算肺系数;取肺组织行苏木素-伊红(HE)染色观察病理变化情况;免疫组化法测定肺组织中TGF-β、Smad7蛋白的表达情况。结果进入结果分析的大鼠44只:①大鼠纤维化程度比较:模型组肺泡炎和肺纤维化程度较重,且胶原纤维沉积较多;中药组可见炎性细胞较少,肺泡结构基本正常,肺泡炎与肺纤维化较轻;激素组肺泡炎及纤维化减轻不明显。②TGF-β、Smad7蛋白表达量比较:中药组TGF-β蛋白表达明显低于模型组和激素组;Smad7蛋白表达明显高于模型组和激素组。结论化瘀理肺方可明显减轻大鼠肺泡炎和肺纤维化的程度,可能通过促进Smad7蛋白的表达从而反馈抑制TGF-β蛋白的表达发挥作用。

垂盆草总黄酮对肝纤维化大鼠肝组织TGF-β 1和Smad7表达的影响

目的:观察垂盆草总黄酮(SSTF)对CCL_4诱导肝纤维化大鼠肝组织TGF-β1和Smad7蛋白及mRNA表达的影响。方法:60只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组,SSTF低剂量组(100 mg·kg^(-1))、SSTF中剂量组(200 mg·kg^(-1)),SSTF高剂量组(400 mg·kg^(-1))和秋水仙碱阳性药对照组,共6组,每组10只。CCl_4皮下注射诱导大鼠肝纤维化模型,同时SSTF灌胃干预,7周后处死大鼠。采用Masson染色法检测大鼠肝脏组织病理学改变,Western blotting法检测肝脏组织TGF-β1和Smad7蛋白表达实时定量RT-PCR检测肝脏组织TGF-β1和Smad7mRNA表达。结果:与模型组比较,SSTF各剂量均能显著降低CCL_4诱导的肝纤维化程度(P<0.05);中高剂量可以显著减少肝组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达(P<0.05),并且明显增加Smad7蛋白和mRNA表达(P<0.05)。结论:SSTF可有效地逆转实验性大鼠肝纤维化,其机制可能与下调肝组织中TGF-β1蛋白和mRNA表达及增加Smad7蛋白和mRNA表达有关。

苯那普利对糖尿病大鼠肾组织中TGF-β_1和Smad7表达的影响

目的:探讨苯那普利对糖尿病大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)和Smad7表达的影响。方法:将Wistar大鼠随机分为正常对照组、糖尿病非治疗组(模型组)和糖尿病苯那普利治疗组3组。用链脲佐菌素诱导造模。于给药8周后处死大鼠,检测各组大鼠的平均动脉压、血糖、肾功能指标、24h尿蛋白。采用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测TGF-β1及Smad7mRNA表达水平。采用免疫组化检测TGF-β1及Smad7蛋白定位的表达。结果:与正常组相比,糖尿病大鼠平均动脉压、血糖、肾功能指标、24h尿蛋白排出均增加;肾小球ECM明显增多、系膜区扩大(PAS染色);TGF-β1及Smad7mRNA表达上调;TGF-β1及Smad7蛋白的表达明显增加。苯那普利治疗后上述指标明显减轻。结论:TGF-β/Smad通路在糖尿病肾病时是激活的,苯那普利治疗可延缓肾脏损害。

黄芪注射液对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤中Smad3、Smad7表达的影响

目的探讨黄芪注射液对SD大鼠心肌缺血再灌注损伤(MIRI)中Smad3、Smad7表达的影响和机制。方法采用结扎左冠状动脉的方法制备心肌缺血再灌注损伤动物模型。32只健康成年SD大鼠,体质量(230±20)g,平均分为假手术组、缺血再灌注组、辛伐他汀组和黄芪预处理组。通过免疫组织化学和RT-PCR,分别测定Smad3蛋白、Smad7蛋白及Smad3mRNA、Smad7mRNA的表达。计算各组中心肌细胞的凋亡率。结果与假手术组相比,缺血再灌注组心肌细胞的凋亡率明显增加(P=0.000),并且Smad3蛋白和Smad3mRNA表达增加(P=0.000),Smad7蛋白和Smad7mRNA表达减少(P=0.000);与缺血再灌注组相比,黄芪注射液组(P=0.000)和辛伐他汀组(P=0.000)可明显降低心肌细胞的凋亡率;Smad3蛋白和Smad3mRNA表达减少(P=0.000);而Smad7蛋白和Smad7mRNA表达增加(P=0.000)。结论黄芪注射液可以上调SD大鼠缺血再灌注损伤时心肌细胞Smad7蛋白和Smad7mRNA表达,下调Smad3蛋白和Smad3mRNA表达。