网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡后病毒在各器官内的分布

以间接免疫荧光抗体技术研究了１ 日龄ＳＰＦ 雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒（ ＲＥＶ） 后，病毒在机体各器官内的分布。结果表明，雏鸡感染ＲＥＶ 后病毒可在腔上囊、脾、肝和胸腺内大量存在，其它器官分布少。这与ＲＥＶ 造成机体各免疫器官和肝的严重变性、导致机体免疫功能降低密切相关。

鹅源H5N1亚型禽流感病毒对SPF雏鸡血液免疫功能的影响

以21日龄SPF雏鸡为实验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过外周血液免疫球蛋白(Igs)含量、T和B淋巴细胞数量及其增殖功能的检测,较全面系统的研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其外周血液上述被检指标的动态变化。结果表明,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后,其血清IgG和IgA含量在1～4 d显著或极显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),并分别于8～21 d和5～8 d显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01);而IgM在病毒感染后4 d开始升高,5～8 d明显高于对照雏鸡。血液T淋巴细胞数量于病毒感染后1～14 d显著低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01),B淋巴细胞在3～14 d明显降低(P<0.05或P<0.01);T、B淋巴细胞对ConA或PMA的增殖反应分别于3～14 d、3～8 d明显低于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明AIV感染21日龄SPF雏鸡后的早期,其外周血液无论是细胞免疫还是体液免疫功能均降低。

SPF雏鸡感染REV后免疫器官免疫功能的动态变化

试验通过对 1日龄 SPF雏鸡人工感染网状内皮组织增殖病病毒 ( REV) ,观察了免疫器官胸腺、法氏囊和脾脏 T、B淋巴细胞增殖反应的动态变化。结果表明 ,雏鸡感染 REV后胸腺 T淋巴细胞的增殖反应于7、2 1、4 2和 4 9日龄明显降低 ( P<0 .0 5) ,于感染后 1 4、2 8和 3 5日龄极显著减弱 ( P<0 .0 1 ) ;脾脏 T淋巴细胞的增殖反应分别于感染后 1 4～ 2 8d和 3 5～ 4 9d较对照组雏鸡明显或极明显降低 ( P<0 .0 5,P<0 .0 1 )。法氏囊和脾脏 B淋巴细胞增殖反应分别在感染后 7～ 4 9d和 1 4～ 4 9d极显著减弱 ( P<0 .0 1 )。免疫器官胸腺重量和脾脏重量与体重比值及体重分别于感染后 7～ 4 9、7～ 3 5、7～ 4 9d明显降低 ( P<0 .0 5,P<0 .0 1 )。说明SPF雏鸡感染 REV后 ,免疫器官 (胸腺、法氏囊和脾脏 )淋巴细胞发生变性坏死、数量减少和功能降低 。

鸭源鸡杆菌对SPF雏鸡的感染特性研究

为研究鸭源鸡杆菌的流行病学特性,本研究采用从自然病例分离得到的鸭源鸡杆菌人工感染4日龄SPF雏鸡,通过形态学、PCR、荧光定量PCR和组织学等方法分别对感染后SPF雏鸡的组织脏器进行了细菌分离、检测和鉴定,用ELISA对其血清抗体水平进行检测。结果表明,人工感染鸡无临床症状,组织学检查感染鸡的肝脏、气管和肺脏组织均有损伤。人工感染后第3 d和同居感染第2 d鸡体内可分离出鸭源鸡杆菌,人工感染后第96 d仍能够分离到鸡杆菌。ELISA方法证实人工感染后47 d和同居后32 d出现抗体高峰,持续2～3周,人工感染组和同居组抗体水平均高于对照组(p<0.05);荧光定量PCR检测病料结果显示人工感染组和同居组的气管组织中细菌含量最高。本研究表明雏鸡在4日龄即可感染鸭源鸡杆菌,并能通过同居传播,长期带菌、排菌;感染后抗体产生缓慢、持续期短。本研究为鸭源鸡杆菌的流行病学、致病机理研究及防治措施的制定等提供了参考依据。

鸡空肠弯曲菌对SPF雏鸡致病性研究

用鸡空肠弯曲菌（Ｃａｍｐｙｔｏｂａｃｅｃｒｉｅｊｕｎ：）对１日龄ＳＰＦ（Ｓｐｃｉｉｃ－ｐａｔｈｏｇｅｎｆｒｃｅ）雏鸡进行感染实验。随机将６０只１日龄ＳＰＦ雏鸡分为４组，那和对照组，每组１５只。分别用含菌７．５Ｘ１０８ＣＦＵ／ｍｌ、７．５ｘ１０４ＣＦＵ／ｍｌ，７．５×１０２ＣＦＵ／ｍｌ布氏肉汤菌液经口时ｔ、Ｊ、Ｉ组接种。接种后分别于２、４、６，８、１０日踏踏机取３只／组、经剖构观察病理变化；从心血、肝、胆汁、脾、肠内容物分离病原菌，测量肠道内物空肠弯曲菌菌数。得出以下结论；经口接种３．７５ｘ１０２ＣＦＵ空场弯曲菌即可造成１日龄ＳＰＦ雏鸡感染发病；感染鸡的主要病理变化为肝脏表面有点状，条索状或片状出血，同时伴有形状不规则大小不等的黄白色坏死灶，盲肠膨大充满气泡，十二指肠、空肠、直肠粘膜有散在的小出血点，首选检苗材料为胆汁、其次是脾、肝等器宫。

IBDV感染SPF雏鸡法氏囊中TLR3表达的动态变化

为了研究鸡Toll样受体3(ch TLR3)基因在传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染的雏鸡法氏囊内的表达情况,试验用IBDV感染14日龄SPF雏鸡,采用荧光定量PCR技术及间接免疫荧光技术检测法氏囊中TLR3基因及蛋白的表达情况。结果表明:感染组雏鸡法氏囊中TLR3 mRNA及蛋白表达均呈先升高后降低的趋势。说明TLR3参与雏鸡抵抗IBDV入侵的过程。

SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒后肿瘤坏死因子的动态变化

采用微量细胞病变法和四甲基偶氮唑盐 (MTT)法研究了 1日龄SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒 (REV)后 ,免疫器官脾脏肿瘤坏死因子 (TNF)诱生活性动态变化。结果表明 ,雏鸡感染REV后脾脏细胞TNF诱生活性极明显增高 (P <0 .0 1 ) ,TNF诱生活性明显增高与REV在机体各器官内长期大量繁殖紧密相关 ,并引起各免疫器官严重的变质性变化 ,以及由于TNF高含量的免疫损伤作用而降低机体各免疫器官的机能。

SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒后白细胞介素2和干扰素诱生活性的变化

对 1日龄SPF雏鸡人工感染网状内皮组织增殖病病毒 (REV)后 ,胸腺T淋巴细胞白细胞介素 2 (IL 2 )诱生活性于 14 4 9d极显著低于对照组 (P <0 .0 1) ;脾T淋巴细胞IL 2诱生活性于 14d明显低于对照组 (P <0 .0 5 ) ,感染后 2 14 9d极显著降低 (P <0 .0 1) ;脾淋巴细胞干扰素 (IFN )的诱生活性于感染后 749d极显著降低 (P <0 .0 1)。提示SPF雏鸡受REV感染后机体免疫器官的分子免疫调节机能明显降低或发生障碍。

H5N1亚型禽流感病毒感染SPF雏鸡的外周血液免疫病理变化

以7日龄SPF雏鸡为试验动物,应用细胞培养和免疫酶技术,通过对外周血液免疫球蛋白含量、T和B淋巴细胞数量及其功能的检测,较全面系统地研究了鹅源H5N1亚型中强毒禽流感病毒（AIV）感染SPF雏鸡后,其外周血液上述指标的动态变化。结果发现,SPF雏鸡感染鹅源H5N1亚型AIV后,血清IgG和IgA含量在1~4d显著或极显著低于对照雏鸡（P〈0.05或P〈0.01）,而IgM在病毒感染早期未见显著性差异,随后3种免疫球蛋白含量逐渐回升;血液T淋巴细胞数量显著低于对照雏鸡（P〈0.05或P〈0.01）,而B淋巴细胞在1~5d明显降低（P〈0.05或P〈0.01）;T、B淋巴细胞对ConA或PMA的增殖反应分别于1~8d、1~4d明显低于对照雏鸡（P〈0.05或P〈0.01）。上述结果表明,AIV感染SPF雏鸡外周血液无论是细胞免疫还是体液免疫功能均呈现一定抑制。

SPF雏鸡感染禽脑脊髓炎病毒内蒙株早期IgM与IgG变化规律的研究

本研究采用了病毒接种技术、普通病理学方法、酶联免疫吸附试验等方法,研究了不同日龄SPF雏鸡人工感染AEV-NH937株后的血清IgM、IgG的动态变化规律。实验结果显示IgM在攻毒后第3天达到峰值(0.57mg/m l),说明已有一部分B淋巴细胞分化为浆细胞并产生IgM;IgG从第10天开始呈上升趋势,在第20天达到峰值(5.05mg/m l);感染鸡外周血清中先出现IgM,后出现IgG,说明IgM为初级反应最早出现的免疫球蛋白,在感染早期起着先锋免疫作用。当IgG出现后,IgM的合成即受到抑制。抗AEV的血清IgM和IgG在时间上和强度上出现双峰现象。

IBD疫苗免疫SPF雏鸡局部黏膜组织的免疫学变化

应用组织化学染色法和免疫酶组织化学法,研究IBD疫苗免疫SPF雏鸡后,雏鸡哈德氏腺和盲肠扁桃体的T细胞及IgA、IgM和IgG抗体生成细胞数量的动态变化。结果发现,免疫雏鸡上述局部免疫组织的各项免疫指标较对照雏鸡均不同程度地增高,表明疫苗免疫能显著提高雏鸡眼部、消化道局部黏膜免疫功能;IBD强毒攻击后,对照雏鸡上述指标明显低于疫苗免疫雏鸡,且发生典型IBD全部死亡,而疫苗免疫雏鸡免疫保护率达60%。

SPF雏鸡饲养技术

SPF是specific pathogen ree的缩写，意指无特定病原体。SPF鸡即指生长在屏障系统或隔离系统中，无国内、外流行的主要传染性病病原，具有良好的生长和繁殖性能的鸡群，其所产蛋即为SPF蛋。SPF鸡蛋作为生物制品的原材料，对生物制品的质量影响是不言而喻的。20世纪80年代，山东省农业科学院家禽研究所进行了SPF鸡技术的开发研究，20多年来，SPF鸡、SPF鸡蛋已在兽用生物制品企业推广使用，并取得了较好的经济效益。

SPF雏鸡血清中IgG含量的研究

为了研究不同日龄SPF雏鸡血清中IgG的含量,利用兔抗鸡IgG作为第一抗体(Ab1)包被,辣根过氧化物酶——兔抗鸡IgG为第二抗体(Ab2),应用双抗体夹心酶联免疫吸附法定量测定SPF雏鸡血清中IgG的含量。试验结果显示,所应用的双抗体夹心法灵敏度为100ng/mL,测得SPF雏鸡血清中IgG为4.827～1.822μg/mL。该法特异性强、敏感性高,可检测最低含量为100ng/mL的含量。

禽网状内皮组织增生病病毒感染SPF雏鸡血液淋巴细胞增殖功能及其细胞周期相关因子变化

为探索禽网状内皮组织增生病病毒(REV)感染对SPF雏鸡外周血液的淋巴细胞增殖功能及其细胞周期素D1、p27表达的影响。将80只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,应用CCK-8、RT-qPCR、Western Blot等方法对雏鸡外周血液上述被检指标的动态变化进行检测。结果表明,REV感染SPF雏鸡后,其外周血液中T、B淋巴细胞增殖能力明显低于对照组雏鸡,且p27mRNA水平显著(P<0.05)高于对照组雏鸡;病毒感染后期Cyclin D1mRNA表达及其蛋白质含量均显著高于(P<0.05)对照组雏鸡,然而p27转录显著低于对照组雏鸡(P<0.05)。REV感染SPF雏鸡导致的血液T、B细胞增殖能力下降、Cyclin D1mRNA转录及其蛋白质含量的增加而p27mRNA转录下降与REV感染所致的雏鸡免疫机能下降密切相关。

传染性法氏囊病毒感染SPF雏鸡哈德尔腺和盲肠扁桃体TGF-β1 mRNA表达变化

为探索鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)感染对SPF雏鸡消化道和呼吸道局部黏膜免疫组织转化生长因子-β1(TGF-β1)mRNA表达的影响,以21日龄SPF雏鸡为研究对象,应用荧光定量PCR方法,对SPF雏鸡感染IBDV后,其哈德尔腺和盲肠扁桃体中TGF-β1 mRNA表达的动态变化进行检测。结果发现,21日龄SPF雏鸡感染IBDV强毒后1～28d,其上述局部黏膜免疫组织中TGF-β1mRNA表达均不同程度的高于对照雏鸡,其中哈德尔腺TGF-β1 mRNA表达于病毒感染后3～28d极显著高于对照雏鸡(P<0.01);而盲肠扁桃体的上述被检指标于病毒感染后3～14d极显著高于对照雏鸡(P<0.01)。表明IBDV感染所致的雏鸡免疫抑制与雏鸡消化道和呼吸道局部黏膜免疫组织TGF-β1 mRNA表达增加密切相关。本研究为进一步阐明IBDV的免疫致病机制提供了重要的参考依据。

网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡外周血液T、B淋巴细胞数量变化

应用ＳＰＡ菌体花环法检测网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ雏鸡外周血液Ｔ、Ｂ淋巴细胞数量动态变化。结果发现，１日龄ＳＰＦ雏鸡感染ＲＥＶ后７～４９ｄ外周血液Ｔ淋巴细胞数量，１４～４９ｄＢ淋巴细胞数量均明显低于对照组。表明感染ＲＥＶ的ＳＰＦ雏鸡外周血液的细胞免疫和体液免疫水平均下降。

禽网状内皮组织增生病病毒感染对SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc基因表达及凋亡的影响

【目的】探究禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)感染禽类后导致免疫器官发生细胞凋亡的机理。【方法】以1日龄SPF雏鸡为试验对象,将100只SPF雏鸡随机均分为REV感染组和未感染病毒的对照组,REV感染组雏鸡经腹腔感染500μL REV稀释液,对照组雏鸡经相同途径注射等量灭菌生理盐水,于病毒感染后第1、7、14、21、28和42天,2组雏鸡随机各抽取5只,心脏采血处死雏鸡后快速摘取法氏囊。分别应用HE染色和病理切片成像系统测定分析法氏囊细胞核浆比,TUNEL细胞凋亡原位检测试剂盒测定凋亡细胞数,免疫组化法测定Bcl-2和C-myc阳性细胞数量,实时荧光定量PCR和ELISA法分别检测法氏囊Bcl-2和C-myc基因mRNA表达和蛋白含量。【结果】①REV感染1日龄SPF雏鸡后21~42 d,其法氏囊淋巴细胞凋亡百分比显著或极显著高于对照组雏鸡(P<0.05;P<0.01);②SPF雏鸡感染REV后21和28 d,其法氏囊细胞核浆比显著低于对照组雏鸡(P<0.05);③REV感染SPF雏鸡法氏囊中Bcl-2和C-myc阳性细胞数在病毒感染后21和28 d显著高于对照组雏鸡(P<0.05);④REV感染SPF雏鸡后21 d,其法氏囊Bcl-2和C-myc基因mRNA表达极显著高于对照组雏鸡(P<0.01)。⑤SPF雏鸡感染REV后,其法氏囊中Bcl-2蛋白含量较对照组雏鸡有不同程度的增加,其中21和28 d分别差异极显著(P<0.01)和显著(P<0.05),病毒感染组雏鸡的C-myc蛋白含量也始终高于对照组雏鸡,且21和28 d极显著增高(P<0.01)。【结论】REV感染所致SPF雏鸡法氏囊细胞Bcl-2和C-myc的mRNA表达以及蛋白含量异常均与病毒感染导致的法氏囊细胞凋亡密切相关,而法氏囊细胞凋亡数量增加与REV感染引发的机体免疫机能抑制密切相关。

鹅源H5N1亚型禽流感病毒感染SPF雏鸡免疫球蛋白含量的变化研究

以7日龄SPF雏鸡为试验动物,采用常规间接酶联免疫吸附试验(IELISA)法,对鹅源H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染SPF雏鸡后,其泪液、气管液、肠液、胆汁的IgA、IgG、IgM含量的动态变化进行了检测。结果发现,鹅源H5N1亚型中强毒AIV感染SPF雏鸡后,其泪液、气管液、肠液、胆汁的免疫球蛋白IgA、IgM含量均在1～3d或1～4d显著低于相应对照雏鸡(P<0.05),而感染后第5天,上述被检指标开始升高,并于5～8d或5～14d,病毒感染雏鸡的IgA和IgM显著高于对照雏鸡(P<0.05或P<0.01)。表明7日龄SPF雏鸡感染AIV后的早期,其消化道和呼吸道的体液免疫功能降低。

REV感染对SPF雏鸡外周血液B淋巴细胞功能和免疫球蛋白含量的影响

为了探索禽网状内皮组织增生病病毒(reticuloendotheliosis virus,REV)感染对SPF雏鸡外周血液B淋巴细胞功能和免疫球蛋白含量变化的影响,试验将100只1日龄SPF雏鸡随机分为REV感染组和对照组,REV感染组(50只)雏鸡通过腹腔注射REV稀释液(0.5 mL/只),对照组(50只)雏鸡相同途径给予等量灭菌生理盐水,于REV感染后第1,7,14,21,28,42天,每组随机抽取5只,心脏无菌采血,应用细胞培养技术结合MTT和免疫学等检测方法,检测REV感染对SPF雏鸡外周血液B淋巴细胞增殖能力和IgG、IgA、IgM含量的影响。结果表明:SPF雏鸡感染REV后1~42 d,外周血液中无论是B淋巴细胞对脂多糖(LPS)的增殖能力还是血清IgG、IgA、IgM含量均不同程度低于对照组雏鸡,其中REV感染组B淋巴细胞对LPS的增殖能力在REV感染后第7,14天显著或极显著低于对照组雏鸡(P<0.05或P<0.01);IgG含量在REV感染后第14,28天显著低于对照组雏鸡(P<0.05);IgA含量在REV感染后第21,28,42天显著或极显著低于对照组(P<0.05或P<0.01);IgM含量在REV感染后第42天极显著低于对照组(P<0.01)。说明REV感染可导致SPF雏鸡外周血液的B淋巴细胞功能下降和免疫球蛋白IgG、IgA、IgM含量下降。

网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡后局部体液免疫球蛋白含量变化

试验对ＳＰＦ雏鸡接种网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）后，应用间接酶联免疫吸附分析法检测了泪液、气管液、肠液和胆汁的免疫球蛋白ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量的动态变化。结果发现，感染ＳＰＦ雏鸡泪液、气管液、肠液和胆汁的ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ含量于感染后７～４２ｄ明显降低。