姜黄素干预肾上腺皮质癌SW-13细胞的miRNA调控机制

目的 探讨姜黄素干预肾上腺皮质癌SW-13细胞的miRNA调控机制。方法 将肾上腺皮质癌SW-13细胞分为对照组和姜黄素干预组,分别加入基础培养基2 mL、50μmol/L姜黄素溶液2 mL,干预24 h后提取总RNA用于小RNA文库构建和测序。将获得的序列进行miRNA注释和新miRNA预测后,筛选差异性表达的miRNA;对差异性表达的miRNA进行靶基因预测,对靶基因进行功能和通路富集分析。使用实时荧光定量PCR鉴定部分差异性表达miRNA的表达量。结果 共筛选出44个差异性表达的miRNA,包括21个表达上调的miRNA和23个表达下调的miRNA,其中预测有靶基因且有功能的miRNA共9个。功能富集分析结果显示,靶基因主要富集在细胞增殖、细胞迁移、细胞分化和凋亡等生物学过程;通路富集分析结果显示,靶基因主要富集在癌症途径、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、内质网应激信号通路、细胞周期和凋亡途径等。实时荧光定量PCR结果提示,miR-184、miR-490-3p、miR-766-3p、miR-200b-3p、miR-200c-3p和miR-3622a-5p的表达量与小RNA测序数据结果基本一致。结论 姜黄素可能通过miR-184、miR-490-3p、miR-766-3p、miR-200c-3p、miR-3622a-5p等miRNA参与调控癌症途径、丝裂原活化蛋白激酶信号通路、内质网应激信号通路、细胞周期和凋亡途径等信号通路,以抑制细胞增殖、迁移、分化和凋亡,从而发挥抗肾上腺皮质癌的作用。

羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞凋亡的影响

目的:研究羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长抑制和凋亡作用的影响。方法:采用CCK8检测不同浓度羟喜树碱对SW-13细胞增殖的影响;流式细胞仪测定药物作用前后的细胞凋亡情况。结果:不同浓度的羟喜树碱分别作用24,48,72h后,SW-13细胞的生长增殖均受到明显抑制(P<0.01),并呈时间和浓度依赖性;流式细胞术显示SW-13细胞凋亡率随羟喜树碱浓度的增加而升高。结论:羟喜树碱可以显著抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长,促进其凋亡。

羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长增殖的影响

目的观察羟喜树碱对人肾上腺皮质癌SW-13细胞生长增殖的影响。方法体外培养人肾上腺皮质癌SW-13细胞,随机分为干预组和对照组,干预组加入羟喜树碱使其终浓度为0.8μg/ml,对照组不加羟喜树碱,分别培养48 h后,采用台盼蓝拒染法观察羟喜树碱对SW-13细胞生长增殖的影响。结果光镜下可见干预组SW-13细胞数减少,死亡细胞数较多,干预组活细胞率明显低于对照组(P<0.05)。结论羟喜树碱可能具有抑制人肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖并促进其死亡的作用。

miR-205对肾上腺皮质癌SW-13细胞转移潜能影响的研究

目的:通过调控miR-205在肾上腺皮质癌(ACC)细胞株SW-13中的表达,探讨miR-205对SW-13细胞生物学行为的影响。方法:通过基因重组技术构建pcDNA3.1(+)-miR-205重组质粒并合成miR-205的反义寡核苷酸作为反向对照,调控miR-205在肾上腺皮质癌SW-13细胞中表达,实时荧光定量PCR法验证miR-205表达情况;分别采用MTS、EdU、TUNNEL及Transwell小室法,检测过表达及抑制miR-205对增殖、凋亡及侵袭的影响。结果:在转染pcDNA3.1(+)-miR-205及miR-205反义寡核苷酸后,SW-13细胞中miR-205分别上调了63.2倍(P=0.001)及下调了86.3%(P=0.002)。MTS结果显示,在24、48、72和96h时,miR-205上调后SW-13细胞增殖率下降了(10.50±1.80)%、(23.67±4.80)%、(30.9±5.40)%和(38.34±6.20)%,P值分别为0.041、0.014、0.016和0.032;miR-205下调后增殖率提高了(25.31±3.20)%、(32.51±4.60)%、(40.15±4.10)%和(38.34±6.20)%,P值分别为0.032、0.026、0.022和0.013。TUNNEL结果显示,pcDNA3.1(+)-miR-205组SW-13细胞凋亡数为(46±4)个,pcDNA3.1(+)组为(25±3)个,P=0.001 9;anti-miR-205转染组为(11±2)个,空白组为(25±3)个,P=0.002 5。Transwell侵袭实验显示,pcDNA3.1(+)-miR-205组穿过小室膜细胞数为(43±8)个,pcDNA3.1(+)组为(120±15)个,P=0.001 4;anti-miR-205转染组为(118±14)个,空白组为(220±20)个,P=0.001 9。结论:miR-205通过抑制细胞增殖、侵袭并促进凋亡在ACC SW-13细胞中起抑癌作用;成功构建pcD-NA3.1(+)-miR-205真核表达质粒,为进一步研究miR-205在SW-13细胞中的基因调控机制奠定基础。

miR-205靶向E2F1对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖影响

目的探讨miR-205对肾上腺皮质癌SW-13细胞增殖的影响及机制。方法采用miR-205模拟物转染肾上腺皮质癌SW-13细胞,设置空白组(未进行转染)、miR-205阴性对照组(转染无义序列)、miR-205模拟物转染组(转染miR-205模拟物),采用CCK-8法检测各组SW-13细胞的增殖,实时定量PCR检测miR-205和E2F1表达,Western blot检测SW-13细胞E2F1蛋白表达,应用生物信息学网站预测E2F1是否为miR-205潜在的靶基因,应用双荧光素酶报告基因实验验证。结果 miR-205过表达抑制SW-13细胞增殖,下调SW-13细胞中E2F1mRNA和蛋白表达水平,生物信息学分析结果显示,E2F1是miR-205的靶基因之一,双荧光素酶实验证实E2F1为miR-205的靶基因。结论 miR-205通过靶向调控E2F1抑制肾上腺皮质癌SW-13细胞的增殖。

ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌细胞中的表达及意义

目的:探讨ABCG2在不同微环境下在肾上腺皮质癌细胞中的表达和意义。方法:利用SW-13细胞株建立体内及体外微环境模型,流式细胞技术检测ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌组织及细胞中的表达情况。结果:ABCG2在裸鼠转移淋巴结中的表达率[(5.41±2.57)%]明显高于标准培养基[(1.04±1.01)%]、干细胞培养基[(2.44±2.30)%]、裸鼠皮下移植瘤[(0.89±1.43)%]及腹腔转移瘤[(3.14±2.42)%]微环境的表达率,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:ABCG2在不同微环境下肾上腺皮质癌细胞中的表达有差异,ABCG2为骨髓侧群细胞(side population,SP)特异表型,肾上腺皮质癌组织中可能存在SP细胞。

miR-214在肾上腺皮质肿瘤组织中的表达及意义

目的探讨miR-214在肾上腺皮质肿瘤组织中的表达及意义。方法选择21例行肾上腺皮质肿瘤手术患者的术后切除组织,其中肾上腺皮质腺瘤组织8份,其瘤旁正常组织8份,肾上腺皮质癌组织5份;另选人肾上腺皮质癌SW-13细胞系(SW-13细胞系)和裸鼠皮下移植瘤组织6份。采用RT-PCR技术检测各组织中的miR-214表达。结果与肾上腺皮质腺瘤组织和瘤旁正常组织比较,肾上腺皮质癌组织、SW-13细胞系、裸鼠皮下移植瘤组织中的MiR-214表达明显降低(P均<0.01);与肾上腺皮质癌组织和SW-13细胞系比较,裸鼠皮下移植瘤组织中的MiR-214表达降低(P<0.05)。结论 miR-214表达下调可能参与肾上腺皮质癌的发生、发展,深入探讨其功能和作用机制有重要意义。

人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型的建立

目的建立人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型。方法采用人肾上腺皮质癌细胞株SW-13细胞接种于裸鼠腋下皮下,记录成瘤潜伏期,观察肿瘤生长情况,并绘制生长曲线,对移植瘤进行组织病理学鉴定。结果采用SW-13细胞皮下接种方式建立移植瘤的模型成瘤百分率为95%,成瘤平均潜伏期为(18±1.2)d,移植瘤体积倍增时间为(10±1.8)d天,移植瘤组织病理学形态与人肾上腺皮质腺癌相似。结论成功建立人肾上腺皮质癌裸鼠皮下移植瘤模型,为研究其发病机制及诊治方法提供实验依据。

阿司匹林对人肾上腺皮质癌细胞增殖和凋亡作用的研究

目的 观察阿司匹林对人肾上腺皮质癌细胞增殖抑制作用及诱导细胞凋亡的影响,探讨其相关机制.方法 体外培养人肾上腺皮质癌SW-13细胞和H295R细胞,实验组为含不同浓度阿司匹林（终浓度为0.125、0.25、0.5、1 mg/ml）的DMEM/F-12完全培养基,对照组为不加入阿司匹林的含1%无水乙醇的DMEM/F-12完全培养基.经过不同浓度阿司匹林作用不同时间后（24、48、72 h）,采用噻唑蓝（ MTT）法检测阿司匹林对两株细胞的增殖抑制情况;用药48 h后使用倒置显微镜观察细胞的形态学变化;通过Hoechst33258荧光染色观察和计数凋亡细胞,应用流式细胞术检测细胞凋亡率的改变,Western印迹法检测Bcl-2和Bax基因的表达.结果 MTT结果提示,SW-13细胞和H295R细胞经不同浓度阿司匹林处理后,生长抑制率均比对照组高（P＜0.05）,且当作用时间相同、药物浓度增大时,抑制率增高（P＜0.05）,呈剂量依赖性;当药物浓度相同时,随着作用时间的延长,细胞生长抑制率也升高（P＜0.05）,呈时间依赖性.不同浓度阿司匹林处理细胞48 h后,细胞凋亡数、细胞凋亡率均高于对照组（P＜0.01）;Western印迹结果经灰度值分析显示,阿司匹林处理细胞48 h后,各实验组与对照组相比,Bax的表达增加,差异有统计学意义（ P＜0.05）;相反,Bcl-2的相对表达量低于对照组（P＜0.05）.结论 阿司匹林能抑制肾上腺皮质癌细胞增殖并诱导其凋亡,呈剂量和时间依赖性,可能的机制是上调Bax表达并下调Bcl-2表达.